Name: generation of porcine testicular organoids with testis specific architecture using microwell culture
Uploaded: 2019-10-03T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of Porcine Testicular Organoids with Testis Specific Architecture using Microwell Culture at JoVE.com

Detta arbete stöddes av NIH/NICHD HD091068-01 till Dr Ina Dobrinski.

Anmärkning: testiklarna från 1-veckors gamla smågrisar erhölls från en kommersiell gris odling som biprodukt från kastrering av kommersiella svin. Inköp av testiklarna godkändes av Animal Care kommittén vid University of Calgary.
1. beredning av enzym lösningar för vävnadsnedbrytning
Anmärkning: tre olika enzymatiska lösningar behövs, som omfattar två olika kollagenaslösningar (lösning A, B) och en deoxyribonuclease I (DNase I) lösning.
<ol><li>...

<ol>
	<li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche.">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li><li>Barker, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lgr5(+ve)+stem+cells+drive+self-renewal+in+the+stomach+and+build+long-lived+gastric+units+in+vitro.">Lgr5(+ve) stem cells drive self-renewal in the stomach and build long-lived gastric units in vitro.</a> Cell Stem Cell. 6 (1), 25-36 (2010).</li><li>Huch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unlimited+in+vitro+expansion+of+adult+bi-potent+pancreas+progenitors+through+the+Lgr5/R-spondin+axis.">Unlimited in vitro expansion of adult bi-potent pancreas progenitors through the Lgr5/R-spondin axis.</a> Embo Journal. 32 (20), 2708-2721 (2013).</li><li>Boj, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+models+of+human+and+mouse+ductal+pancreatic+cancer.">Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer.</a> Cell. 160 (1-2), 324-338 (2015).</li><li>Takebe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascularized+and+functional+human+liver+from+an+iPSC-derived+organ+bud+transplant.">Vascularized and functional human liver from an iPSC-derived organ bud transplant.</a> Nature. 499 (7459), 481-484 (2013).</li><li>Quadrato, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+diversity+and+network+dynamics+in+photosensitive+human+brain+organoids.">Cell diversity and network dynamics in photosensitive human brain organoids.</a> Nature. 545 (7652), 48-53 (2017).</li><li>Abbott, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+culture:+biology's+new+dimension.">Cell culture: biology's new dimension.</a> Nature. 424 (6951), 870-872 (2003).</li><li>Pendergraft, S. S., Sadri-Ardekani, H., Atala, A., Bishop, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+testicular+organoid:+a+novel+tool+for+the+study+of+human+spermatogenesis+and+gonadotoxicity+in+vitrodagger.">Three-dimensional testicular organoid: a novel tool for the study of human spermatogenesis and gonadotoxicity in vitrodagger.</a> Biology of Reproduction. 96 (3), 720-732 (2017).</li><li>Strange, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+testicular+organoid+system+as+a+novel+tool+to+study+Zika+virus+pathogenesis.">Human testicular organoid system as a novel tool to study Zika virus pathogenesis.</a> Emerging Microbes &amp; Infections. 7 (1), 82-82 (2018).</li><li>Alves-Lopes, J. P., Soder, O., Stukenborg, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testicular+organoid+generation+by+a+novel+in+vitro+three-layer+gradient+system.">Testicular organoid generation by a novel in vitro three-layer gradient system.</a> Biomaterials. 130, 76-89 (2017).</li><li>Baert, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+Human+Testicular+Cells+Self-Organize+into+Organoids+with+Testicular+Properties.">Primary Human Testicular Cells Self-Organize into Organoids with Testicular Properties.</a> Stem Cell Reports. 8 (1), 30-38 (2017).</li><li>Sakib, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+organotypic+testicular+organoids+in+microwell+culture.">Formation of organotypic testicular organoids in microwell culture.</a> Biology of Reproduction. , (2019).</li><li>Razian, G., Yu, Y., Ungrin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+Large+Numbers+of+Size-controlled+Tumor+Spheroids+Using+Microwell+Plates.">Production of Large Numbers of Size-controlled Tumor Spheroids Using Microwell Plates.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), 50665 (2013).</li><li>Sakib, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+organotypic+testicular+organoids+in+microwell+culture.">Formation of organotypic testicular organoids in microwell culture.</a> Biology of Reproduction. 100 (6), 1648-1660 (2019).</li><li>Gonz&#225;lez, R., Dobrinski, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+the+Mouse+Monopoly:+Studying+the+Male+Germ+Line+in+Domestic+Animal+Models.">Beyond the Mouse Monopoly: Studying the Male Germ Line in Domestic Animal Models.</a> ILAR Journal. 56 (1), 83-98 (2015).</li><li>Oatley, J. M., Brinster, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+germline+stem+cell+niche+unit+in+mammalian+testes.">The germline stem cell niche unit in mammalian testes.</a> Physiological Reviews. 92 (2), 577-595 (2012).</li><li>Chen, L. Y., Willis, W. D., Eddy, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+the+Gdnf+Gene+in+peritubular+myoid+cells+disrupts+undifferentiated+spermatogonial+cell+development.">Targeting the Gdnf Gene in peritubular myoid cells disrupts undifferentiated spermatogonial cell development.</a> Proceedings of the National Academy of Science USA. 113 (7), 1829-1834 (2016).</li></ol>

Vi har etablerat en enkel metod som möjliggör en konsekvent, repeterbar generation av stora mängder testikelorganoider med vävnads arkitektur som liknar testiklarna in vivo12. Medan tillvägagångssättet utvecklades med hjälp av svin testiklarna celler, det är mer allmänt tillämplig även på mus, icke-mänskliga primater och mänskliga testiklarna12. Ett antal olika metoder har rapporterats för framställning av testikelorganoider8,</...

Under de senaste åren har det varit ett återuppvaknande av intresset för tredimensionella (3D) organoider. Olika organ såsom tarmen1, mage2, bukspottkörteln3,4, lever5, och hjärna6 har framgångsrikt erhållits i 3D Organoid system. Dessa organoider har arkitektoniska och funktionella likheter med organen in vivo och är mer biologiskt relevanta för studier av vävnad mikromiljö än enskiktslager kultur system7. Som ett resultat, testikulär organoider har börjat Garner intresse också8,9,10,11,12. De flesta metoder som hittills rapporterats är komplexa, icke-hög genomströmning10 och kräver tillsats av ECM-proteiner8,10. Denna komplexitet leder också till problem med reproducerbarhet. En enkel och reproducerbar metod behövs som gör det möjligt för generering av testikulär organoider med cell-föreningar som är som testiklarna in vivo.
Vi har nyligen rapporterat ett system för att hantera dessa krav12. Med hjälp av grisen som modell använde vi en centrifugaltvingad aggregerings metod i mikrobrunn-systemet. I mikrobrunn-systemet innehåller varje brunn ett stort antal identiska mindre mikrobrunnar13. Detta möjliggör generering av många spheroids av enhetlig storlek. Mikrobrunn-systemet möjliggjorde generering av ett stort antal enhetliga organoider med en testis-specifik arkitektur. Systemet är enkelt och kräver inte tillsats av ECM-proteiner.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100 mm ultra low attachment tissue culture dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>#CLS3262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm tissue culture dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>#353803</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aggrwell 400</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>#34411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Adherence Rinsing Solution</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>#07010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase type IV from Clostridium histolyticum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#C5138</td>
			<td>referred as Collagenase IV S</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase type IV Worthington</td>
			<td>Worthington-Biochem</td>
			<td>#LS004189</td>
			<td>referred as Collagenase IV W</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deoxyribonuclease I from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#DN25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Modified Eagle&#8217;s Medium/F12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#11330-032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Modified Eagle&#8217;s Medium - high glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#D6429</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#D8537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epidermal Growth Factor</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>#236-EG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Cell Strainers 70 &#181;m</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>#352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Cell Strainers 40 &#181;m</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>#352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>#12483-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin-Transferrin-Selenium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#41400-045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#P4333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Porcine testicular tissue</td>
			<td>Sunterra Farms Ltd (Alberta, Canada)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steriflip-GP Sterile Centrifuge Tube Top Filter Unit</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>#SCGP00525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>#T4049</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of porcine testicular organoids with testis specific architecture using microwell culture

Organoider är tredimensionella strukturer som består av flera celltyper som kan rekapitulera vävnad arkitektur och funktioner av organ in vivo. Bildandet av organoider har öppnat upp olika vägar för grundläggande och translationell forskning. Under de senaste åren, testikulär organoider har samlat intresse inom området för manlig reproduktionsbiologi. Testikulär organoider möjliggöra studiet av cell-cell interaktioner, vävnad utveckling, och könsceller nisch mikromiljö och underlätta hög genomströmning Drug och toxicitet screening. En metod behövs för att tillförlitligt och reproducerbart generera testikelorganoider med testiklarna specifika vävnads arkitektur. Mikrobrunn kultur system innehåller ett tätt utbud av Pyramid-formade mikrobrunnar. Testikelceller som härrör från pre-pubertal testiklarna centrifugeras i dessa mikrobrunnar och odlas för att generera testikulär organoider med testis-specifik vävnad arkitektur och cell associationer. Tusentals homogena organoider kan genereras via denna process. Det protokoll som rapporteras här kommer att vara av stort intresse för forskare som studerar manlig reproduktion.

Isolerade celler från 1-veckors gamla svin testiklar som odlades i mikrobrunnarna själv organiserade i sfäooider (figur 1A, figur 2), med avgränsad och distinkt exteriör (seminiferiska epitel) och invändiga fack ( interstitium) (figur 1B, figur 2). De två avdelningarna var åtskilda av ett kollagen IV+ ve basalmembran. ...

Watch this Scientific Journal Video about Generation of Porcine Testicular Organoids with Testis Specific Architecture using Microwell Culture at JoVE.com

Generation of Porcine Testicular Organoids with Testis Specific Architecture using Microwell Culture

Här presenterar vi ett protokoll för reproducerbar generering av porcin testikulär organoider med testiklarna specifik vävnad arkitektur med hjälp av kommersiellt tillgängliga mikrobrunn kultur system.

Generering av porcin testikulär Organoider med testis specifik arkitektur med hjälp av Microwell kultur

Organoids are three dimensional structures composed of multiple cell types that are capable of recapitulating tissue architecture and functions of organs ...

Detta protokoll är betydande eftersom det möjliggör generering av testikel organoider, som kan användas som en plattform för att studera testikel morfogenes och för hög tropo läkemedel och toxicitet screenings. Den största fördelen med denna teknik är att den är mycket reproducerbar, kräver ett relativt lågt antal celler och kan användas för att generera ett stort antal testikelorganoider med testisspecifik arkitektur. Denna metod kan tillämpas för att studera andra system, såsom pluripotenta stamceller eller bukspottskörteln holme celler med de nödvändiga optimeringar.Demonstrera testikelvävnaden enzymatisk matsmältning förfarande kommer att Anna Voigt, en doktorand från mitt laboratorium. Samla in testisen i en steril bägare och tvätta med PBS innehållande 1%penicillin streptomycin. Efter tvätt överföra testis till en 100 millimeter vävnad kultur maträtt med PBS som innehåller 1%penicillin streptomycin.Använd autoklaverade saxar och tlyktor för att ta bort tunica vaginalis och epididymis. Överför den isolerade testisen till en ny 100 millimeters maträtt och tvätta noggrant med PBS innehållande 1%penicillin streptomycin. Skär testisen längs den längsgående axeln direkt under tunica.Skala sedan ut testisen ur tunica med hjälp av två tlykningar och placera den i en ny 100 millimeters fat som innehåller 1 milliliter DMEM med 1%penicillin streptomycin. Finhacka den skalade testisen med steril sax i en till två millimeters vävnadsbitar. Efter hugga använda sterila tång för att ta bort de vita fragment av bindväv.Överför den malet silkespapper bitar i lösning A i en 50 milliliter rör och toppa upp till 50 milliliter med DMEM att få en koncentration på 0,4 milligram per milliliter för colagenase 4S och en koncentration av 0,8 milligram per milliliter för colagenase 4W. Placera röret som innehåller vävnaden bitar i en 37 graders Celsius vattenbad i 30 minuter. Invertera röret försiktigt var femte minut.Efter 30 minuter centrifugera röret vid 90 gånger G med avbrott vid 25 grader Celsius i 1,5 minuter. Kassera supernatant, ad 40 milliliter lösning B, och fylla på upp till 50 milliliter med DMEM för att få en koncentration på 1,2 milligram per milliliter colagenase 4W. Placera röret i en 37 grader Celsius vattenbad i 30 minuter och försiktigt invertera röret var femte minut.Centrifugera röret vid 90 gånger G med raster vid 25 grader Celsius i 1,5 minuter. Efter det kassera supernatanten, och tvätta en gång med PBS med 1%penicillin streptomycin. Samla försiktigt tubulina uppifrån och placera i ett nytt 50 milliliter rör.Fylla på tuben med PBS upp till 50 milliliter. Centrifugera tubulina vid 90 gånger G med raster vid 25 grader Celsius i 1,5 minuter. Kasta supernatanten och tillsätt färsk PBS för att tvätta ytterligare två gånger.Efter den sista PBS tvätta bort supernatanten och åter upphäva seminiferous tubuli i fem milliliter PBS. Lägg sedan till 15 milliliter på 0,25%Trypsin EDTA till tubulina. Placera röret i en 37 grader Celsius vattenbad och försiktigt invert varannan minut.Efter fem minuter utvärdera enzymatisk matsmältningen av tubuli till enstaka celler under mikroskopet med 10 microliters av prov på en vävnad kultur tallrik. Varannan minut placera provet under mikroskopet för att observera. Om mestadels enstaka celler kan upptäckas stoppa reaktionen med fem milliliter av FBS och filtrera genom en 70 mikron mesh och sedan genom en 40 mikron mesh.Centrifugera de enstaka cellerna vid 500 gånger G med raster vid 25 grader Celsius i fem minuter. Re-suspend i 50 milliliter av anrikning medium, och räkna antalet livskraftiga celler med hjälp av en hemocytometer. Överför 20 miljoner av denna startcellpopulation till var och en av två ultralåga fastsättning 100 millimeters petriskålar och inkubera i en vävnadskulturinkubator vid 37 grader Celsius, 5 %-koldioxidutsläpp och 21 %syre i två dagar.Cede 20 till 25 miljoner celler av den återstående startcellpopulationen per 100 millimeter vävnadskultur skålen i en total volym av åtta milliliter anrikning medium. Placera skålen i en inkubator och efter 1,5 timmar se till att majoriteten av Sertoli celler är knutna till plattan. Något luta två plattor för att samla och kombinera supernatanterna till en ny 100 millimeters platta och placera tillbaka den i inkubatorn.Efter en timme, återigen kombinera supernatanterna av två plattor till en ny 100 millimeters platta. Placera tillbaka plattorna i inkubatorn över natten. Samla sedan de berikade könscellerna i två fraktioner, icke-vidhäftande fraktion och något vidhäftande fraktion.Samla upp supernatanten som den icke-vidhäftande fraktionen. För den lätt vidhäftande fraktionen tvätta plattorna försiktigt med PBS och behandla med två milliliter av en en till 20 utspädning av 0,25%Trypsin EDTA i fem minuter vid rumstemperatur. Stoppa reaktionen genom att tillsätta två milliliter av anrikningsmedium och samla i det icke-vidhäftande fraktionsröret.Kombinera startcellsberedningen och de berikade könscellerna i ett rör för att få en fungerande cellberedning som innehåller 25%-könsceller. Centrifugera vid 500 gånger G med raster vid 25 grader Celsius i fem minuter. Kassera supernatanten och åter upphäva cellerna i 20 milliliter av organoidbildningsmedium för att nå en koncentration på 2,4 miljoner celler per milliliter.I ett nytt rör tillsätt en milliliter av lösningen som innehåller celler. Tillsätt 0,5 milliliter ytaktiv sköljlösning till varje brunn i en mikro brunnsplatta. Se till att inga luftbubblor är instängda i brunnen.För att ta bort luftbubblor centrifugera plattan vid 2, 000 gånger G med raster vid 25 grader Celsius i två minuter. Observera plattan under ett inverterat mikroskop med låg förstoring för att kontrollera att bubblorna har avlägsnats från mikro brunnarna. Täck plattan med lock och inkubera i 30 minuter i rumstemperatur.Efter behandlingen är klar ta bort sköljningslösningen och omedelbart tvätta plattan med sterilt vatten eller PBS. Tillsätt 0,5 milliliter av organoidbildning medium till varje brunn och centrifug vid 2, 000 gånger G med pauser vid 25 grader Celsius i två minuter för att ta bort eventuella fångade luftbubblor. Observera brunnen under ett lågt förstorings inverterat mikroskop för att verifiera att luftbubblorna har avlägsnats.Tillsätt 0,5 milliliter av den arbetande cellupphängningen och blanda försiktigt genom att pipettera upp och ner. Centrifugera vid 500 gånger G med raster vid 25 grader Celsius i fem minuter. Använd ett inverterat mikroskop för att kontrollera att cellerna har klustrade i mikro brunnarna.Överför plattan till en cellkultur inkubator och kultur i fem dagar. Byt hälften av mediet varannan dag. För att återvinna organoiderna använda en bred mun pipetter för att försiktigt pipettera mediet upp och ner.Detta gör att organoiderna kan komma ut ur mikro brunnarna. Samla organoiderna, fixa och utför immuncytkemi för cellmarkör för könsceller, Sertoli-cellmarkör, peritubular myoidcellsmarkör och Leydig cellmarkör och visualisera under ett konfokalt mikroskop. I denna studie isolerade celler från en vecka gamla svin testis som odlades i mikro brunnar självorganiserade i sfäroider med avgränsade och distinkta yttre och inre fack.De två facken var åtskilda av en kollagen IV positiva källaren membran. GATA4 positiva Sertoli celler och UCHL1 positiva könsceller var i det yttre facket på källaren membranet. aSMA positiva peri-tubulär myoid celler var lokaliserade längs insidan av källaren membran medan CYP450 positiva Leydig celler var i mitten av interstitium.Denna struktur liknar In Situ-förhållanden, där Leydig-celler, peri-tubulära myoidceller, ligger i interstitiumet, i det interstitiella delutrymmet och könscellerna, sertoliceller ligger vid det seminiferösa epitelet. Det är viktigt att se till att celler som används för att generera organoider har optimal kvalitet. Noggrann uppmärksamhet bör betalas under trypsinization skede av den enzymatiska matsmältningen.Efter detta förfarande kan organoiderna odlas långsiktigt för att studera könsceller differentiering eller analysera för genuttryck och utsöndras proteiner eller hormoner. Förmågan att skapa organoider med testis-specifika cellföreningar ger ett nytt in vitro-system för att studera cell-cell interaktioner viktiga för testis utveckling och könsceller funktion.

Research

JoVE Journal

Medicine

Teratoma Generation in the Testis Capsule

Teratom Generation i testiklarna Capsule

Pluripotent stem cells (PSCs) have the unique characteristic that they can differentiate into cells from all three germ layers.  This makes them a ...

Technique of Porcine Liver Procurement and Orthotopic Transplantation using an Active Porto-Caval Shunt

Teknik för grislever upphandling och Orthotopic Transplantation med hjälp av en aktiv Porto-Caval Shunt

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. Each year, a considerable number of patients on the liver transplantation ...

Isolation and Culture Expansion of Tumor-specific Endothelial Cells

Isolering och odling Expansion av Tumörspecifika endotelceller

Freshly isolated tumor-specific endothelial cells (TEC) can be used to explore molecular mechanisms of tumor angiogenesis and serve as an in vitro model ...

A Human Glioblastoma Organotypic Slice Culture Model for Study of Tumor Cell Migration and Patient-specific Effects of Anti-Invasive Drugs

En humant glioblastom organotypisk skivkulturmodell för studie av tumörcell migrering och patientspecifika effekter av antiinvasiva läkemedel

Glioblastoma (GBM) continues to carry an extremely poor clinical prognosis despite surgical, chemotherapeutic, and radiation therapy. Progressive tumor ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

Generation Microtumors Använda 3D Human Biogel odlingssystemet och patientgenererade glioblastomceller för Kinomic Profilering och läkemedelssvar Testing

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...

Generation of Organ-conditioned Media and Applications for Studying Organ-specific Influences on Breast Cancer Metastatic Behavior

Generering av organkonditionerade media och applikationer för att studera organspecifika influenser på bröstcancer Metastatisk Behavior

Breast cancer preferentially metastasizes to the lymph node, bone, lung, brain and liver in breast cancer patients. Previous research efforts have focused ...

Generation of a Humanized Mouse Liver Using Human Hepatic Stem Cells

Generering av en humaniserad muslever Använda Human lever stamceller

A novel animal model involving chimeric mice with humanized livers established via human hepatocyte transplantation has been developed. These mice, in ...

Drug Repurposing Hypothesis Generation Using the "RE:fine Drugs" System

Drug återanvända Hypotesen Generation Använda &quot;RE: fina Drugs&quot; System

The promise of drug repurposing is that existing drugs may be used for new disease indications in order to curb the high costs and time for approval. The ...

Muscle Imbalances: Testing and Training Functional Eccentric Hamstring Strength in Athletic Populations

Muskel obalans: Testning och utbildning funktionell excentrisk Hamstring styrka i atletisk populationer

Many hamstring injuries that occur during physical activity occur while the muscles are lengthening, during eccentric hamstring muscle actions. Opposite ...