Name: quantitative measurement of intrathecally synthesized proteins in mice
Uploaded: 2019-11-29T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Measurement of Intrathecally Synthesized Proteins in Mice at JoVE.com

המחברים מודים לצוות המרכז לרפואה השוואתית ומחקר (CCMR) ב דארטמאות עבור הטיפול המומחים שלהם העכברים המשמשים למחקרים אלה. קופת המחקר של בורנשטיין מימנה את המחקר הזה.

כל העבודה בעלי חיים מנצל פרוטוקולים שנבדקו ואושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים מוסדיים (IACUC) בבית הספר של גייזל לרפואה בדרתמות.
1. איסוף נוזלים
הערה: הסרום והשדרתי הינם נדרשים. שני פרוטוקולים עבור כל אוסף נוזלים נחוצים להישרדות ונקרופסי.
<ol><li>אוסף של נסיוב ?...

<ol>
	<li>Whedon, J. M., Glassey, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrospinal+fluid+stasis+and+its+clinical+significance.">Cerebrospinal fluid stasis and its clinical significance.</a> Alternative Therapies in Health and Medicine. 15 (3), 54-60 (2009).</li><li>Kang, J. H., Vanderstichele, H., Trojanowski, J. Q., Shaw, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+analysis+of+cerebrospinal+fluid+biomarkers+using+microsphere-based+xMAP+multiplex+technology+for+early+detection+of+Alzheimer's+disease.">Simultaneous analysis of cerebrospinal fluid biomarkers using microsphere-based xMAP multiplex technology for early detection of Alzheimer's disease.</a> Methods. 56 (4), 484-493 (2012).</li><li>Barro, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluid+biomarker+and+electrophysiological+outcome+measures+for+progressive+MS+trials.">Fluid biomarker and electrophysiological outcome measures for progressive MS trials.</a> Multiple Sclerosis. 23 (12), 1600-1613 (2017).</li><li>Tourtellotte, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+sclerosis:+measurement+and+validation+of+central+nervous+system+IgG+synthesis+rate.">Multiple sclerosis: measurement and validation of central nervous system IgG synthesis rate.</a> Neurology. 30 (3), 240-244 (1980).</li><li>Bonnan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrathecal+IgG+synthesis:+a+resistant+and+valuable+target+for+future+multiple+sclerosis+treatments.">Intrathecal IgG synthesis: a resistant and valuable target for future multiple sclerosis treatments.</a> Multiple Sclerosis International. 2015, 296184 (2015).</li><li>Reiber, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrospinal+fluid--physiology,+analysis+and+interpretation+of+protein+patterns+for+diagnosis+of+neurological+diseases.">Cerebrospinal fluid--physiology, analysis and interpretation of protein patterns for diagnosis of neurological diseases.</a> Multiple Sclerosis. 4 (3), 99-107 (1998).</li><li>DiSano, K. D., Linzey, M. R., Royce, D. B., Pachner, A. R., Gilli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+neuro-immune+patterns+in+two+clinically+relevant+murine+models+of+multiple+sclerosis.">Differential neuro-immune patterns in two clinically relevant murine models of multiple sclerosis.</a> Journal of Neuroinflammation. 16 (1), 109 (2019).</li><li>Pachner, A. R., Li, L., Lagunoff, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+cells+in+the+central+nervous+system+in+the+Theiler's+virus+model+of+multiple+sclerosis.">Plasma cells in the central nervous system in the Theiler's virus model of multiple sclerosis.</a> Journal of Neuroimmunology. 232 (1-2), 35-40 (2011).</li><li>Reiber, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+rate+of+cerebrospinal+fluid+(CSF)--a+concept+common+to+normal+blood-CSF+barrier+function+and+to+dysfunction+in+neurological+diseases.">Flow rate of cerebrospinal fluid (CSF)--a concept common to normal blood-CSF barrier function and to dysfunction in neurological diseases.</a> Journal of Neurological Sciences. 122 (2), 189-203 (1994).</li><li>Reiber, H., Zeman, D., Kusnierova, P., Mundwiler, E., Bernasconi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+relevance+of+free+light+chains+in+cerebrospinal+fluid+-+The+hyperbolic+reference+range+for+reliable+data+interpretation+in+quotient+diagrams.">Diagnostic relevance of free light chains in cerebrospinal fluid - The hyperbolic reference range for reliable data interpretation in quotient diagrams.</a> Clinica Chimica Acta. 497, 153-162 (2019).</li><li>Reiber, H., Felgenhauer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+transfer+at+the+blood+cerebrospinal+fluid+barrier+and+the+quantitation+of+the+humoral+immune+response+within+the+central+nervous+system.">Protein transfer at the blood cerebrospinal fluid barrier and the quantitation of the humoral immune response within the central nervous system.</a> Clinica Chimica Acta. 163 (3), 319-328 (1987).</li><li>Dorta-Contreras, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reibergrams:+essential+element+in+cerebrospinal+fluid+immunological+analysis.">Reibergrams: essential element in cerebrospinal fluid immunological analysis.</a> Revista de Neurologia. 28 (10), 996-998 (1999).</li><li>Metzger, F., Mischek, D., Stoffers, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Connected+Steady+State+Model+and+the+Interdependence+of+the+CSF+Proteome+and+CSF+Flow+Characteristics.">The Connected Steady State Model and the Interdependence of the CSF Proteome and CSF Flow Characteristics.</a> Frontiers Neuroscience. 11, 241 (2017).</li><li>Wolforth, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+of+blood+collection+in+the+mouse.">Methods of blood collection in the mouse.</a> Laboratory Animals. 29, 47-53 (2000).</li><li>Liu, L., Duff, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+serial+collection+of+cerebrospinal+fluid+from+the+cisterna+magna+in+mouse.">A technique for serial collection of cerebrospinal fluid from the cisterna magna in mouse.</a> Journal of Visualized Experiments. (21), e960 (2008).</li><li>Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manual+restraint+and+common+compound+administration+routes+in+mice+and+rats.">Manual restraint and common compound administration routes in mice and rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (67), e2771 (2012).</li><li>Johnston, S. A., Tobias, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Veterinary+Surgery:+Small+Animal+Expert+Consult+-+E-Book.">Veterinary Surgery: Small Animal Expert Consult - E-Book.</a> Elsevier Health Sciences. , (2017).</li><li>Nigrovic, L. E., Shah, S. S., Neuman, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correction+of+cerebrospinal+fluid+protein+for+the+presence+of+red+blood+cells+in+children+with+a+traumatic+lumbar+puncture.">Correction of cerebrospinal fluid protein for the presence of red blood cells in children with a traumatic lumbar puncture.</a> Journal of Pediatrics. 159 (1), 158-159 (2011).</li><li>McCarthy, D. P., Richards, M. H., Miller, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+multiple+sclerosis:+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+and+Theiler's+virus-induced+demyelinating+disease.">Mouse models of multiple sclerosis: experimental autoimmune encephalomyelitis and Theiler's virus-induced demyelinating disease.</a> Methods in Molecular Biology. 900, 381-401 (2012).</li><li>Link, H., Tibbling, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+albumin+and+IgG+analyses+in+neurological+disorders.+II.+Relation+of+the+concentration+of+the+proteins+in+serum+and+cerebrospinal+fluid.">Principles of albumin and IgG analyses in neurological disorders. II. Relation of the concentration of the proteins in serum and cerebrospinal fluid.</a> Scandinavian Journal of Clinical Laboratory Investigation. 37 (5), 391-396 (1977).</li><li>Tibbling, G., Link, H., Ohman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+albumin+and+IgG+analyses+in+neurological+disorders.+I.+Establishment+of+reference+values.">Principles of albumin and IgG analyses in neurological disorders. I. Establishment of reference values.</a> Scandinavian Journal of Clinical Laboratory Investigation. 37 (5), 385-390 (1977).</li><li>Deisenhammer, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+on+routine+cerebrospinal+fluid+analysis.+Report+from+an+EFNS+task+force.">Guidelines on routine cerebrospinal fluid analysis. Report from an EFNS task force.</a> European Journal of Neurology. 13 (9), 913-922 (2006).</li><li>Johanson, C. E., Stopa, E. G., McMillan, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blood-cerebrospinal+fluid+barrier:+structure+and+functional+significance.">The blood-cerebrospinal fluid barrier: structure and functional significance.</a> Methods in Molecular Biology. 686, 101-131 (2011).</li><li>Zaias, J., Mineau, M., Cray, C., Yoon, D., Altman, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reference+values+for+serum+proteins+of+common+laboratory+rodent+strains.">Reference values for serum proteins of common laboratory rodent strains.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 48 (4), 387-390 (2009).</li><li>Felgenhauer, K., Renner, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrodynamic+radii+versus+molecular+weights+in+clearance+studies+of+urine+and+cerebrospinal+fluid.">Hydrodynamic radii versus molecular weights in clearance studies of urine and cerebrospinal fluid.</a> Annals of Clinical Biochemistry. 14 (2), 100-104 (1977).</li><li>Pachner, A. R., DiSano, K., Royce, D. B., Gilli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+utility+of+a+molecular+signature+in+inflammatory+demyelinating+disease.">Clinical utility of a molecular signature in inflammatory demyelinating disease.</a> Neurology, Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 6 (1), 520 (2019).</li><li>Pachner, A. R., Li, L., Gilli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokine+biomarkers+in+central+nervous+system+tissue+and+cerebrospinal+fluid+in+the+Theiler's+virus+model+mirror+those+in+multiple+sclerosis.">Chemokine biomarkers in central nervous system tissue and cerebrospinal fluid in the Theiler's virus model mirror those in multiple sclerosis.</a> Cytokine. 76 (2), 577-580 (2015).</li><li>Gerbi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+concentration+in+the+arterial+and+venous+renal+blood+serum+of+the+rabbit.">Protein concentration in the arterial and venous renal blood serum of the rabbit.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 31 (1), 49-61 (1951).</li><li>Abbott, N. J., Patabendige, A. A., Dolman, D. E., Yusof, S. R., Begley, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+the+blood-brain+barrier.">Structure and function of the blood-brain barrier.</a> Neurobiology of Disease. 37 (1), 13-25 (2010).</li><li>Reiber, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteins+in+cerebrospinal+fluid+and+blood:+barriers,+CSF+flow+rate+and+source-related+dynamics.">Proteins in cerebrospinal fluid and blood: barriers, CSF flow rate and source-related dynamics.</a> Restorative Neurology and Neuroscience. 21 (3-4), 79-96 (2003).</li><li>Reiber, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Knowledge-base+for+interpretation+of+cerebrospinal+fluid+data+patterns.+Essentials+in+neurology+and+psychiatry.">Knowledge-base for interpretation of cerebrospinal fluid data patterns. Essentials in neurology and psychiatry.</a> Arquivos de Neuropsiquiatria. 74 (6), 501-512 (2016).</li><li>Kuehne, L. K., Reiber, H., Bechter, K., Hagberg, L., Fuchs, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrospinal+fluid+neopterin+is+brain-derived+and+not+associated+with+blood-CSF+barrier+dysfunction+in+non-inflammatory+affective+and+schizophrenic+spectrum+disorders.">Cerebrospinal fluid neopterin is brain-derived and not associated with blood-CSF barrier dysfunction in non-inflammatory affective and schizophrenic spectrum disorders.</a> Journal of Psychiatric Research. 47 (10), 1417-1422 (2013).</li><li>Bromader, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+serum+and+cerebrospinal+fluif+cytokines+in+response+to+non-neurological+surgery:+an+observational+study.">Changes in serum and cerebrospinal fluif cytokines in response to non-neurological surgery: an observational study.</a> Journal of Neuroinflammation. 9, 242 (2012).</li><li>Starhof, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrospinal+fluid+pro-inflammatory+cytokines+differentiate+parkinsonian+syndromes.">Cerebrospinal fluid pro-inflammatory cytokines differentiate parkinsonian syndromes.</a> Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 305 (2018).</li></ol>

שיטות כמותיים להערכת ריכוזי חלבון שדרתי מוגברת הם כלים שימושיים באפיון המצב הפיזיולוגי והפתולוגי של ה-CN. עם זאת, מעבר לקוונפיקציה אמין של רמות חלבון שדרתי, הזיהוי של חלבונים מתוך שדרתי מחייב ביטוי של תוצאות המפלה בין שברים דם ומערכת התחתית של שדרתי. עם זאת, עד כה, כימות החלבון הנפוץ בשימוש ?...

נוזל מוחי שדרתי, נוזל ברור וחסר צבע סביב המוח וחוט השדרה, מחזיק בחשיבות מדעית קלינית ובסיסית גדולה. המוח השדרתי משמר את הסביבה האלקטרוטית של מערכת העצבים המרכזית (CN), מאזנת את הסטטוס בסיס חומצה מערכתית, אספקת חומרים מזינים לתאי העצבי והגליאל, פונקציות כמו מערכת הלימפה עבור ה-CN, ו הובלות הורמונים, נוירוטרנסמיטורים, ציטוקינים ונוירופפטידים אחרים ברחבי ה-CN1 לפיכך, כאשר הרכב הנוזל הנוזלי משקף את הפעילות של ה-CN, החומר הזה מציע מגוון בעל ערך, אם כי עקיף, גישה לאפיון המצב הפיזיולוגי והפתולוגי של ה-CN.
שדרתי שימוש כדי לאבחן את התנאים המשפיעים על ה-CN למעלה ממאה שנים, ובמשך רוב הזמן הזה, הוא למד בעיקר על ידי מטפלים ככלי אבחון. עם זאת, בשנים האחרונות נוירוביולוגים הכירו את הפוטנציאל של שדרתי לחקר הפתופסולוגיה של ה-CN. בפרט, מספר כלי ניתוח חלבון בתפוקה גבוהה הוצגו בתחום מדעי המוח המאפשר מחקר מפורט של הרכב החלבון של שדרתי, עם הציפייה כי ניתוח זה עשוי לעזור לספק תובנה שינויים דינמיים תרחשות בתוך ה-CN.
התפתחויות טכנולוגיות בשיטות חיסוני מולטיפלקס כגון לומיקס וסימוע טכנולוגיות2,3, לספק לחוקרים היום עם היכולת לזהות מאות חלבונים בריכוזים נמוכים מאוד. כמו-כן, אותן טכנולוגיות מאפשרות שימוש באמצעי אחסון קטנים לדוגמה, ובכך לקדם מחקרים בבעלי חיים קטנים, כולל עכברים, בהם כמויות מוגבלות של מדגם שדרתי מנעה באופן מוגבל תווים מפורטים של הנוזל עד לאחרונה.
אף על פי כן, אזהרה אחת היא כי חלבונים הנמדדים בתוך שדרתי עשוי לנבוע סינתזה הפנימי ו/או ההמרה מן הנסיוב בשל ממשק דם פגום מוח (BBI). למרבה הצער, ניתוח חלבונים של שדרתי בלבד יכול רק לקבוע את הסכום של שני רכיבים אלה. כדי להפלות בין transudate ובין הייצור חלבונים, מדידות חלבון שדרתי באמצעות כל הכלי הזמין ניתוח חלבון חייב להיות מותאם לשונות בודדות ריכוזי סרום, כמו גם שלמות המכשול. עם זאת, למרות התאמה זו משמשת בדרך כלל בפרקטיקה קלינית, למשל, המדד igg שדרתי, אשר יש רגישות גבוהה לזיהוי הפנימי סינתזה igg4,5,6, עד תאריך מחקרים מעטים מאוד מתוקן ריכוזי חלבון שדרתי לריכוז סרום ושלמות המכשול7,8.
כיום, הגישה הרייברגרמה היא הדרך הטובה ביותר לקבוע את תפקוד המכשול וסינתזה של חלבונים. זהו הערכה גרפית בדיאגרמות שדרתי/סרום מנה אשר מנתחת, באופן משולב, הן המכשול (dys) פונקציה סינתזה חלבון הפנימי, המתייחס חלבון בלעדי דם נגזר9,10. אלבומין החלבון העשיר ביותר נבחר בדרך כלל חלבון התייחסות כי הוא מיוצר רק בכבד ובגלל גודלו, כ 70 kDa, הוא ביניים בין חלבונים קטנים וגדולים11. דיאגרמת הניתוח הוגדרה לראשונה על ידי "רייבר ופלינהאואר" ב-1987 לכיתות הגדולות של האימונוגלובונים11, המבוססות על התוצאות שהתקבלו מניתוח של אלפי דגימות אדם9. הגישה אושרה לאחר מכן על ידי יישום שני חוקי הדיפוזיה של Fick בתאוריה של דיפוזיה מולקולרית/שיעור זרימה12. תיאוריה מעין זו ממחישה את הדיפוזיה של חלבון דרך המכשול יש התפלגות היפרבולי יכול להסביר את הדינמיקה של חלבונים ב-cn9,13. בסך הכל, היתרון של שימוש ברייברגרמה לצורך הוכחת סינתזה החלבון הפנימי הוא שהוא במקביל מזהה את שבר החלבון הנכנס השדרתי מן הנסיוב, כמו גם את כמות החלבון שנמצא השדרתי בגלל הייצור המקומי.
המאמר הנוכחי והפרוטוקול הקשור מתארים את ההליך כולו, מתוך מתקן שדרתי ואיסוף דם לחישובים הסופיים לתיקון שדרתי את רמות החלבון, עבור המדידה הכמותית של סינתזת החלבון הפנימי במודלים של העכבר הנוירולוגי פרעות. הליך זה מספק תוכנית בסיסית שממנה יש להעריך (1) את המקור הפתופסולוגי של חלבון שדרתי כלשהו ו-(2) את היציבות והמשמעות הפונקציונלית של שלמות המכשול. הליך זה ופרוטוקול אינם שימושיים רק להערכת דגימות של העכבר, אבל הם גם שימושיים בניתוח שדרתי בהמון מודלים בעלי חיים של מחלות נוירולוגיות וחולים אנושיים.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1484px;" width="1482">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">1 mL insulin syringe</td>
			<td style="width:184px;">BD</td>
			<td style="width:127px;">329650</td>
			<td style="width:847px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1 mL syringe</td>
			<td style="width:184px;">BD</td>
			<td style="width:127px;">329622</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">25 gauge needle</td>
			<td style="width:184px;">BD</td>
			<td style="width:127px;">305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">3 mL syringe</td>
			<td style="width:184px;">BD</td>
			<td style="width:127px;">309582</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">30 gauge insulin needle</td>
			<td style="width:184px;">BD</td>
			<td style="width:127px;">305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Absorbent pads</td>
			<td style="width:184px;">Any suitable brand</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Acepromazine</td>
			<td style="width:184px;">Patterson Vet Supply Inc</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">BioPlex Handheld Magnetic Washer</td>
			<td style="width:184px;">BioRad</td>
			<td style="width:127px;">171020100</td>
			<td>Magnet</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">BioPlex MAGPIX Multiplex Reader</td>
			<td style="width:184px;">BioRad</td>
			<td style="width:127px;">171015001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">BioPlex Pro Flat Bottom Plates</td>
			<td style="width:184px;">BioRad</td>
			<td style="width:127px;">171025001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Biotinilated detection antibody</td>
			<td style="width:184px;">Any suitable source</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td>The antibody has to be directed against the species of the protein of interest.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td style="width:184px;">Sigma</td>
			<td>A4503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Buprenorphine hydrochloride</td>
			<td style="width:184px;">PAR Pharmaceutical</td>
			<td style="width:127px;">NDC 42023-179-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Capillary Tubes</td>
			<td style="width:184px;">Sutter Instrument</td>
			<td style="width:127px;">B100-75-10</td>
			<td>OD: 1.0 mm, ID: 0.75 mm Borosilicate glass 10 cm; drawn over Bunsen to make ID smaller.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Centrifuge tube, 0.2 mL</td>
			<td style="width:184px;">VWR</td>
			<td style="width:127px;">20170-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Centrifuge tube, 0.5 mL</td>
			<td style="width:184px;">VWR</td>
			<td style="width:127px;">87003-290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Centrifuge tube, 1.5 mL</td>
			<td style="width:184px;">VWR</td>
			<td style="width:127px;">87003-294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Chlorhexidine diacetate</td>
			<td style="width:184px;">Nolvasan</td>
			<td style="width:127px;">E004272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Disposable pipettes tips</td>
			<td style="width:184px;">Any suitable brand</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Ear bars</td>
			<td style="width:184px;">KOPF Instruments</td>
			<td style="width:127px;">1921 or 1922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Ethanol</td>
			<td style="width:184px;">Kopter</td>
			<td style="width:127px;">V1001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Freezer</td>
			<td style="width:184px;">VWR</td>
			<td style="width:127px;">VWR32086A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Gauze</td>
			<td style="width:184px;">Medline</td>
			<td style="width:127px;">NON25212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Heating pad</td>
			<td style="width:184px;">Sunbeam</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td>XL King Size SoftTouch, 4 Heat Settings with Auto-Off, Teal, 12-Inch x 24-Inch</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Induction Chamber</td>
			<td style="width:184px;">VETEQUIP</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:327px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:184px;">Patterson Vet Supply Inc</td>
			<td style="width:127px;">NDC 14043-704-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Ketamine (KetaVed)</td>
			<td style="width:184px;">Patterson Vet Supply Inc</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MagPlex Microspheres (antibody-coupled)</td>
			<td style="width:184px;">BioRad</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:847px;">Antibody-coupled magnetic bead</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Microplate Shaker</td>
			<td style="width:184px;">Southwest Scientific</td>
			<td>SBT1500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Microretractors</td>
			<td style="width:184px;">Carfill Quality</td>
			<td style="width:127px;">ACD-010</td>
			<td>Blunt - 1 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Microsoft Office (Excel)</td>
			<td style="width:184px;">Microsoft</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:327px;">MilliPlex MAP Mouse Immunoglobulin Isotyping Magnetic Bead Panel</td>
			<td style="width:184px;">EMD Millipore</td>
			<td style="width:127px;">MGAMMAG-300K</td>
			<td>Commercial kit for the quantification through Luminex of a panel of immunoglobulin isotypes and subclasses in mouse fluids.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Mouse Albumin capture ELISA kit</td>
			<td style="width:184px;">Novus Biological</td>
			<td style="width:127px;">NBP2-60484</td>
			<td>Commercial kit for the quantification through ELISA of albumin in mouse fluids.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Multichannel pipette</td>
			<td style="width:184px;">Eppendorf</td>
			<td>3125000060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Non-Sterile swabs</td>
			<td style="width:184px;">MediChoice</td>
			<td style="width:127px;">WOD1002</td>
			<td>Need to be autoclaved for sterility</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Oxygen</td>
			<td style="width:184px;">AIRGAS</td>
			<td style="width:127px;">OX USPEA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Pasteur Pippettes</td>
			<td style="width:184px;">Fisher</td>
			<td style="width:127px;">13-678-20A</td>
			<td>5 &#38; 3/4&#34;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">PDS suture with disposable needle, 6-0 Prolen</td>
			<td style="width:184px;">Patterson Vet</td>
			<td style="width:127px;">8695G</td>
			<td>P-3 Reverse Cutting, 18&#34;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">PE-Streptavidin</td>
			<td style="width:184px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">554061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Pipetters</td>
			<td style="width:184px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:127px;">Research seriers</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene tubing</td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Refrigerated Centrifuge</td>
			<td style="width:184px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:127px;">ALLEGRA X-12R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Scale</td>
			<td style="width:184px;">Uline</td>
			<td style="width:127px;">H2716</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Scalpel</td>
			<td style="width:184px;">Feather</td>
			<td style="width:127px;">EF7281</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Shaver</td>
			<td style="width:184px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:127px;">52-5204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Standard proteins</td>
			<td>Any suitable source</td>
			<td></td>
			<td>The best choice for a reference standard is a purified, known concentration of the protein of interest.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Stereotaxic instrument</td>
			<td style="width:184px;">KOPF Instruments</td>
			<td style="width:127px;">Model 900LS</td>
			<td>Standard Accessories</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Sterile 1 x PBS</td>
			<td style="width:184px;">Corning Cellgro</td>
			<td style="width:127px;">21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Sterile saline</td>
			<td style="width:184px;">Baxter</td>
			<td style="width:127px;">0338-0048-02</td>
			<td>0.9 % Sodium Chloride Irrigation USP</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Surgical Forceps Curved, 7 (2)</td>
			<td style="width:184px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:127px;">11271-30</td>
			<td>Dumont</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Surgical Scissors</td>
			<td style="width:184px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:127px;">14094-11</td>
			<td>Stainless 25x</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:327px;">Vaporizer + Flow meter</td>
			<td style="width:184px;">Moduflex Anhestesia Instruments</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Vortex</td>
			<td style="width:184px;">Fisher</td>
			<td>02-215-414</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Warming pad</td>
			<td style="width:184px;">Kent Scientific Corporation</td>
			<td style="width:127px;">RT-JR-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Water Sonicator</td>
			<td style="width:184px;">Cole Parmer</td>
			<td>EW-08895-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Xylazine</td>
			<td style="width:184px;">Patterson Vet Supply Inc</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantitative measurement of intrathecally synthesized proteins in mice

נוזל מוחי שדרתי, נוזל שנמצא במוח ואת חוט השדרה, הוא בעל חשיבות רבה למדע בסיסי וקליני. ניתוח הרכב חלבון שדרתי מספק מידע חיוני במחקר בסיסי במדעי המוח, כמו גם מחלות נוירולוגיות. אזהרה אחת היא כי חלבונים הנמדדים בתוך שדרתי עשוי לנבוע הן סינתזה הפנימי והטראנזפה מן הנסיוב, וניתוח חלבונים של שדרתי יכול רק לקבוע את הסכום של שני רכיבים אלה. על מנת להפלות בין החלבון המופק מהדם לבין החלבונים המיוצרים בדגמי בעלי חיים, כמו גם בבני אדם, מדידות חלבון שדרתי פרופיל באמצעות כלים קונבנציונליים ניתוח חלבון חייב לכלול את החישוב של המנה האלקטרוליציונלית/סרום (Qאלבומין), סמן של השלמות של הממשק בדם-מוח (bbi), ואת מדד החלבון (Qחלבון/qאלבומין), הערכה של סינתזה החלבון הפנימי. פרוטוקול זה ממחיש את ההליך כולו, מ שדרתי ואיסוף דם לחישובי quotients ואינדקסים, עבור המדידה הכמותית של סינתזה החלבון הפנימי וליקוי BBI בדגמי העכבר של הפרעות נוירולוגיות.

זה ניסוי מייצג שנועד להשוות את הסינתזה הפנימי של IgG בשני מודלים מכרסמים רלוונטיים קלינית של טרשת נפוצה (MS): המושרה PLP139-151הנגרמת אוטואימוניות Encephalomyelitis (R-השני) ואת כרונית מתקדמת, מורלין encephalomyelitis הנגרמת וירוס המושרה המחלה deמחלות (TMEV-IDD). R-הם מודל שימושי להבנת הישנות-MS, ואילו מודל TMEV-IDD תכו...

Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Measurement of Intrathecally Synthesized Proteins in Mice at JoVE.com

Quantitative Measurement of Intrathecally Synthesized Proteins in Mice

רמת החלבון של נוזל השדרה הגבוה יכול להיות תוצאה של דיפוזיה של חלבון פלזמה על פני מחסום דם-מוח שונה או סינתזה התוך. פרוטוקול בדיקה מיטבי מוצג במאמר זה, המסייע להפלות את שני המקרים ומספק מדידות כמותית של חלבונים מסונתז באופן פנימי.

מדידה כמותית של מתוך מסונתז חלבונים בעכברים

Cerebrospinal fluid (CSF), a fluid found in the brain and the spinal cord, is of great importance to both basic and clinical science. The analysis of the ...

פרוטוקול זה מאפשר CSF ואיסוף דם בתיקון כמותי של רמות חלבון CSF למדוד לתוך סינתזת חלבון thecal במודלים העכבר של הפרעות נוירולוגיות. הליך זה מספק בסיס, שנגדו ניתן להעריך את המקור הפתופיזיולוגי של חלבוני CSF בעלי עניין, ואת היציבות והמשמעות התפקודית של שלמות העדפת CSF בדם. ניתוח סינתזת חלבונים בין-תת-חיים ושלמות מחסום יכול להיות מיושם על מודלים אחרים של בעלי חיים ועל מחקרים בבני אדם.לדוגמה, כדי לבדוק מחלות של מערכת העצבים המרכזית. איסוף כמויות משמעותיות של CSF נקי יכול להיות מאתגר מבחינה טכנית בעכברים, כך תרגול הטכניקה עד כמויות גדולות של מדגם לא מזהם ניתן להשיג מומלץ. הדגמת ההליכים תהיה מיכאל לינזי, סטודנטית לתואר שני מהתוכנית ברפואה ניסויית ומולקולרית בדארטמות', בקבוצת המחקר החדשה שלנו לאימונולוגיה.לאיסוף סרום באמצעות דימום מסלולי רטרו. לאחר אישור חוסר תגובה רפלקס הדוושה בעכבר הרדמה יותר מ 15 גרם, לתפוס את העור הרופף מאחורי האוזניים עם האגודל והאצבע המורה של היד הלא דומיננטית, ולהשתמש באצבע המורה כדי למשוך בחזרה את העור מעל העיניים. באמצעות האגודל כדי למשוך בחזרה את העור מתחת לעיניים, מניחים את הקצה של פיפטה פסטר, מוחזק בזווית של כ 45 מעלות, לתוך ארובת העין מתחת לעין, מכוון לכיוון אמצע ארובת העין, תוך סיבוב פיפטה בין האצבעות.לאחר מכן להחיל קצר, לחץ עדין ולשחרר כדי לאפשר לדם להיכנס פיפטה. כאשר דגימת הדם נאספה, בעדינות להסיר את נימי מבלי לפגוע בעין, ולהעביר את הדם לצינור צנטריפוגה 1.5 מיליליטר. לאחר סגירת העפעף, יש להפעיל לחץ קל עם גזה כדי למנוע דימום נוסף.אפשר לדם לקריש במשך 30 עד 60 דקות בטמפרטורת החדר לפני סיבוב המדגם על ידי צנטריפוגה. באמצעות טכניקת פיפטה נקייה, לאסוף את הסרום המופרד לתוך בקבוקון חדש, שכותרתו 500 microliter, ומיד להקפיא את הנסיוב ב 80 מעלות צלזיוס. לאחר אישור חוסר התגובה רפלקס הדוושה, להסיר שטח גדול מספיק של שיער כדי לאפשר איסוף של נוזל השדרה המוחי מיד בקצה caudal של הגולגולת של העכבר הרדמה.מקם את העכבר במצב נוטה בהתקן סטריאטוקסי בתנאים סטריליים, וייצב את הראש עם מוטות אוזניים. ספוגית באתר כירורגי עם 30% ניקוד chlorhexidine, ולעשות חתך בעור קשתית נחותה occiput לחשוף את השרירים overlying מגנה cisterna. באמצעות מדפים, קהה לנתח את הרקמה התת עורית והשרירים, ולהשתמש מפשקים מיקרו להחזיק את השרירים זה מזה כדי לחשוף את שכבת קרום המוח דורה מאטר מעל מגנה cisterna.לשטוף בעדינות את הרקמה עם PBS סטרילי כדי להסיר כל זיהום דם אפשרי, ולהשתמש ספוגית כותנה סטרילית כדי להניף את דורה מאטר יבש. מיקום הנקב הראשוני ב- cisterna magna חיוני להשגת CSF בשפע, לא מזוהם. באמצעות מחט 30 מד, בעדינות לנקב את הממברנה המכסה את מגנה cisterna, ובמהירות בעדינות להכניס צינור נימי זכוכית קטן לתוך הדקירה.כאשר נאספו חמישה עד 12 מיקרוליטרים של CSF, הסר בזהירות את הצינור מהממברנה ולהשתמש בחתיכת צינורות פוליאתילן כדי לחבר את הצינור למזרק שלושה מיליליטר. להזריק את CSF שנאסף לתוך צינור microliter שכותרתו 500 על קרח, ולהשתמש מחט חד פעמית ותפרים polydioxanone מגוונים כדי לסגור את החתך. נקו את האזור של כל דם או רקמה מיובשים, והם מניחים את העכבר בכלוב נקי וחם עם ניטור עד ל recumbency מלא.לאסוף את CSF על ידי צנטריפוגה, ולבדוק חזותית את גלולה ולנפח אותו עבור כל סימנים של זיהום דם. לאחר מכן, באמצעות טכניקת פיפטה נקייה, להעביר את supernate המכיל CSF לתוך צינור 200 microliter חדש, ולדלל את CSF ביחס אחד עד שלושה עם PBS לאחסון מיידי ב 80 מעלות צלזיוס. לאיסוף סרום על ידי ניקוב לב, מיד לאחר אוסף CSF, כפי שהודגם רק, מניחים את העכבר במצב supine.ספוגית את עור הבטן עם 70% אלכוהול. השתמש במספריים כדי לפתוח את חלל בית החזה, לחשוף את הלב, ולהכניס מחט מד 25 מחובר מזרק 3 מיליליטר לתוך החדר השמאלי. לאחר מכן בעדינות להחיל לחץ שלילי על הבוכנה מזרק, משיכת המחט לאחר הדם נאסף.לדכא את הבוכנה כדי להוציא את הדם שנאסף לתוך בקבוקון 1.5 מיליליטר. עכשיו, לאפשר לדם לקריש במשך 30 עד 60 דקות בטמפרטורת החדר לפני הפרדת הנסיוב על ידי צנטריפוגה. לאחר מכן, באמצעות טכניקת פיפטה נקייה, להעביר את הסרום לתוך בקבוקון חדש שכותרתו 500 microliter לאחסון מיידי ב 80 מעלות צלזיוס.כדי לכמת את חלבוני היעד ואת האלבום בדגימות תואמות של סרום ו- CSF, השתמשו בהסטת כימות חלבון סטנדרטית, תוך שימוש בחלבונים סטנדרטיים מוזכרים להכנת עקומה סטנדרטית לכל חלבון מעניין. לאחר הניתוח, לייצא את הנתונים הגולמיים לתוכנית גרפים תוכנה מתאימה, גרף עוצמת פלואורסצנטיות אות זיהוי לעומת ריכוזי החלבון הסטנדרטיים כדי ליצור עקומה סטנדרטית עבור כל חלבון של עניין. לאחר מכן, השתמש בעקומות הסטנדרטיות כדי לחשב את הריכוזים של כל אנליט של עניין בדגימות.לבסוף, השתמש בריכוזי אלבומן ואנליט יעד כדי לחשב ערכי Q ואינדקס תוך-תיאטרלי. הרמות בפועל של IgG הכולל גדלים באופן משמעותי ב- CSF של שני מודלים מכרסמים שנבדקו של טרשת נפוצה, לעומת הגיל המתאים פקדים מזויפים. עכברי R-EAE מציגים ערכי אלבום משופרים באופן משמעותי, המצביעים על חדירות מוגברת של מחסום מוח הדם בעכברים אלה.באופן לא הפוך, אין הבדלים במנה אלבומן קיים בין TMEV-IDD ועכברים מזויפים, מאשש ממצאים קודמים של מחסום שלם בעכברים TMEV-IDD. בנוסף, בבעלי חיים TMEV-IDD, ערכי מדד IgG גבוהים משמעותית ולכן, ייצור IgG תוך-פתאי נצפים. החישוב של אינדקס חלבונים מאפשר זיהוי של סמנים ביולוגיים חדשניים של חלבונים שימושיים לאבחון מוקדם, חיזוי תוצאות וניטור קורסי מחלות הן למחלות נוירו-פתיתיות והן למחלות נוירודגנרטיביות.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Vermicelli and Capellini Handling Tests: Simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice

אטריה ו בדיקות Capellini טיפול: מדדים כמותיים פשוט פונקציה של מיומנות בכפו אצל חולדות ועכברים

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

שיטה פשוטה וזולה לקביעה קרה רגישות והסתגלות בעכברים

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Quantitative Measurement of Relative Retinoic Acid Levels in E8.5 Embryos and Neurosphere Cultures Using the F9 RARE-Lacz Cell-based Reporter Assay

מדידה כמותית של רמות חומצה רטינואית יחסית ב E8.5 עוברים neurosphere תרבויות באמצעות assay Reporter F9 נדיר- lacZ מבוססי תאים

Retinoic acid (RA) is an important developmental morphogen that coordinates anteroposterior and dorsoventral axis patterning, somitic differentiation, ...

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

In vivo ג&#39;ין העברה בתאי שוואן בעצב מכרסמים Sciatic ידי Electroporation

The formation of the myelin sheath by Schwann cells (SCs) is essential for rapid conduction of nerve impulses along axons in the peripheral nervous ...

Quantitative Measurement of &#947;-Secretase-mediated Amyloid Precursor Protein and Notch Cleavage in Cell-based Luciferase Reporter Assay Platforms

מדידה כמותית של חלבונים וγ Secretase-בתיווך קודמן עמילואיד, המחשוף דרגה ב מבוססת תא לוציפראז כתב Assay פלטפורמות

We have developed a pair of cell-based reporter gene assays to quantitatively measure &#947;-secretase cleavage of distinct substrates. This manuscript ...

Quantitative Analysis of Neuronal Dendritic Arborization Complexity in Drosophila

Quantitative Analysis of Neuronal Dendritic Arborization Complexity in Drosophila

ניתוח כמותי של Arborization דנדריטים עצביים מורכבות בדרוזופילה

Dendrites are the branched projections of a neuron, and dendritic morphology reflects synaptic organization during the development of the nervous system. ...

Quantitative Cell Biology of Neurodegeneration in Drosophila Through Unbiased Analysis of Fluorescently Tagged Proteins Using ImageJ

Quantitative Cell Biology of Neurodegeneration in Drosophila Through Unbiased Analysis of Fluorescently Tagged Proteins Using ImageJ

ביולוגיה של התא כמותית של הקשורים ניוון מוחיים ב דרוזופילה דרך ניתוח לא משוחדת של חלבונים מתויגות Fluorescently באמצעות ImageJ

With the rising prevalence of neurodegenerative diseases, it is increasingly important to understand the underlying pathophysiology that leads to neuronal ...

Imaging and Analysis of Neurofilament Transport in Excised Mouse Tibial Nerve

הדמיה וניתוח של תעבורת Neurofilament בעצב שוקה עכבר excised

Neurofilament protein polymers move along axons in the slow component of axonal transport at average speeds of ~0.35-3.5 mm/day. Until recently the study ...

Electrocorticographic Recording of Cerebral Cortex Areas Manipulated Using an Adeno-Associated Virus Targeting Cofilin in Mice

הקלטה אלקטרוקורטיקוגרפית של אזורי קליפת המוח מניפולציה באמצעות וירוס הקשור אדנו מיקוד Cofilin בעכברים

The use of electrocorticographic (ECoG) recordings in rodents is relevant to sleep research and to the study of a wide range of neurological conditions. ...

Semi-Quantitative Determination of Dopaminergic Neuron Density in the Substantia Nigra of Rodent Models using Automated Image Analysis

קביעה כמותית למחצה של צפיפות נוירון דופאמין בסבסטנציה ניגרה של מודלים מכרסמים באמצעות ניתוח תמונה אוטומטי

Estimation of the number of dopaminergic neurons in the substantia nigra is a key method in pre-clinical Parkinson's disease research. Currently, unbiased ...