Name: quantitative measurement of intrathecally synthesized proteins in mice
Uploaded: 2019-11-29T13:00:00
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著者らは、ダートマスの比較医学研究センター(CCMR)のスタッフに、これらの研究に使用されるマウスの専門的なケアに感謝する。ボルンスタイン研究基金は、この研究に資金を提供しました。

すべての動物の仕事はダートマスのガイゼル医学部の制度動物ケアと使用委員会(IACUC)によってレビューされ、承認されたプロトコルを利用しています。
1. 流体の回収
メモ:血清とCSFの両方が必要です。生存と壊死には、流体回収ごとに2つのプロトコルが必要です。
<ol><li>生存手順を用いた血清及びCSF採取 注:生存液採取の場合、血清採取はCSF採?...

<ol>
	<li>Whedon, J. M., Glassey, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrospinal+fluid+stasis+and+its+clinical+significance.">Cerebrospinal fluid stasis and its clinical significance.</a> Alternative Therapies in Health and Medicine. 15 (3), 54-60 (2009).</li><li>Kang, J. H., Vanderstichele, H., Trojanowski, J. Q., Shaw, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+analysis+of+cerebrospinal+fluid+biomarkers+using+microsphere-based+xMAP+multiplex+technology+for+early+detection+of+Alzheimer's+disease.">Simultaneous analysis of cerebrospinal fluid biomarkers using microsphere-based xMAP multiplex technology for early detection of Alzheimer's disease.</a> Methods. 56 (4), 484-493 (2012).</li><li>Barro, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluid+biomarker+and+electrophysiological+outcome+measures+for+progressive+MS+trials.">Fluid biomarker and electrophysiological outcome measures for progressive MS trials.</a> Multiple Sclerosis. 23 (12), 1600-1613 (2017).</li><li>Tourtellotte, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+sclerosis:+measurement+and+validation+of+central+nervous+system+IgG+synthesis+rate.">Multiple sclerosis: measurement and validation of central nervous system IgG synthesis rate.</a> Neurology. 30 (3), 240-244 (1980).</li><li>Bonnan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrathecal+IgG+synthesis:+a+resistant+and+valuable+target+for+future+multiple+sclerosis+treatments.">Intrathecal IgG synthesis: a resistant and valuable target for future multiple sclerosis treatments.</a> Multiple Sclerosis International. 2015, 296184 (2015).</li><li>Reiber, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrospinal+fluid--physiology,+analysis+and+interpretation+of+protein+patterns+for+diagnosis+of+neurological+diseases.">Cerebrospinal fluid--physiology, analysis and interpretation of protein patterns for diagnosis of neurological diseases.</a> Multiple Sclerosis. 4 (3), 99-107 (1998).</li><li>DiSano, K. D., Linzey, M. R., Royce, D. B., Pachner, A. R., Gilli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+neuro-immune+patterns+in+two+clinically+relevant+murine+models+of+multiple+sclerosis.">Differential neuro-immune patterns in two clinically relevant murine models of multiple sclerosis.</a> Journal of Neuroinflammation. 16 (1), 109 (2019).</li><li>Pachner, A. R., Li, L., Lagunoff, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+cells+in+the+central+nervous+system+in+the+Theiler's+virus+model+of+multiple+sclerosis.">Plasma cells in the central nervous system in the Theiler's virus model of multiple sclerosis.</a> Journal of Neuroimmunology. 232 (1-2), 35-40 (2011).</li><li>Reiber, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+rate+of+cerebrospinal+fluid+(CSF)--a+concept+common+to+normal+blood-CSF+barrier+function+and+to+dysfunction+in+neurological+diseases.">Flow rate of cerebrospinal fluid (CSF)--a concept common to normal blood-CSF barrier function and to dysfunction in neurological diseases.</a> Journal of Neurological Sciences. 122 (2), 189-203 (1994).</li><li>Reiber, H., Zeman, D., Kusnierova, P., Mundwiler, E., Bernasconi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+relevance+of+free+light+chains+in+cerebrospinal+fluid+-+The+hyperbolic+reference+range+for+reliable+data+interpretation+in+quotient+diagrams.">Diagnostic relevance of free light chains in cerebrospinal fluid - The hyperbolic reference range for reliable data interpretation in quotient diagrams.</a> Clinica Chimica Acta. 497, 153-162 (2019).</li><li>Reiber, H., Felgenhauer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+transfer+at+the+blood+cerebrospinal+fluid+barrier+and+the+quantitation+of+the+humoral+immune+response+within+the+central+nervous+system.">Protein transfer at the blood cerebrospinal fluid barrier and the quantitation of the humoral immune response within the central nervous system.</a> Clinica Chimica Acta. 163 (3), 319-328 (1987).</li><li>Dorta-Contreras, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reibergrams:+essential+element+in+cerebrospinal+fluid+immunological+analysis.">Reibergrams: essential element in cerebrospinal fluid immunological analysis.</a> Revista de Neurologia. 28 (10), 996-998 (1999).</li><li>Metzger, F., Mischek, D., Stoffers, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Connected+Steady+State+Model+and+the+Interdependence+of+the+CSF+Proteome+and+CSF+Flow+Characteristics.">The Connected Steady State Model and the Interdependence of the CSF Proteome and CSF Flow Characteristics.</a> Frontiers Neuroscience. 11, 241 (2017).</li><li>Wolforth, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+of+blood+collection+in+the+mouse.">Methods of blood collection in the mouse.</a> Laboratory Animals. 29, 47-53 (2000).</li><li>Liu, L., Duff, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+serial+collection+of+cerebrospinal+fluid+from+the+cisterna+magna+in+mouse.">A technique for serial collection of cerebrospinal fluid from the cisterna magna in mouse.</a> Journal of Visualized Experiments. 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D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+multiple+sclerosis:+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+and+Theiler's+virus-induced+demyelinating+disease.">Mouse models of multiple sclerosis: experimental autoimmune encephalomyelitis and Theiler's virus-induced demyelinating disease.</a> Methods in Molecular Biology. 900, 381-401 (2012).</li><li>Link, H., Tibbling, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+albumin+and+IgG+analyses+in+neurological+disorders.+II.+Relation+of+the+concentration+of+the+proteins+in+serum+and+cerebrospinal+fluid.">Principles of albumin and IgG analyses in neurological disorders. II. Relation of the concentration of the proteins in serum and cerebrospinal fluid.</a> Scandinavian Journal of Clinical Laboratory Investigation. 37 (5), 391-396 (1977).</li><li>Tibbling, G., Link, H., Ohman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+albumin+and+IgG+analyses+in+neurological+disorders.+I.+Establishment+of+reference+values.">Principles of albumin and IgG analyses in neurological disorders. I. Establishment of reference values.</a> Scandinavian Journal of Clinical Laboratory Investigation. 37 (5), 385-390 (1977).</li><li>Deisenhammer, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+on+routine+cerebrospinal+fluid+analysis.+Report+from+an+EFNS+task+force.">Guidelines on routine cerebrospinal fluid analysis. Report from an EFNS task force.</a> European Journal of Neurology. 13 (9), 913-922 (2006).</li><li>Johanson, C. E., Stopa, E. G., McMillan, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blood-cerebrospinal+fluid+barrier:+structure+and+functional+significance.">The blood-cerebrospinal fluid barrier: structure and functional significance.</a> Methods in Molecular Biology. 686, 101-131 (2011).</li><li>Zaias, J., Mineau, M., Cray, C., Yoon, D., Altman, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reference+values+for+serum+proteins+of+common+laboratory+rodent+strains.">Reference values for serum proteins of common laboratory rodent strains.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 48 (4), 387-390 (2009).</li><li>Felgenhauer, K., Renner, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrodynamic+radii+versus+molecular+weights+in+clearance+studies+of+urine+and+cerebrospinal+fluid.">Hydrodynamic radii versus molecular weights in clearance studies of urine and cerebrospinal fluid.</a> Annals of Clinical Biochemistry. 14 (2), 100-104 (1977).</li><li>Pachner, A. R., DiSano, K., Royce, D. B., Gilli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+utility+of+a+molecular+signature+in+inflammatory+demyelinating+disease.">Clinical utility of a molecular signature in inflammatory demyelinating disease.</a> Neurology, Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 6 (1), 520 (2019).</li><li>Pachner, A. R., Li, L., Gilli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokine+biomarkers+in+central+nervous+system+tissue+and+cerebrospinal+fluid+in+the+Theiler's+virus+model+mirror+those+in+multiple+sclerosis.">Chemokine biomarkers in central nervous system tissue and cerebrospinal fluid in the Theiler's virus model mirror those in multiple sclerosis.</a> Cytokine. 76 (2), 577-580 (2015).</li><li>Gerbi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+concentration+in+the+arterial+and+venous+renal+blood+serum+of+the+rabbit.">Protein concentration in the arterial and venous renal blood serum of the rabbit.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 31 (1), 49-61 (1951).</li><li>Abbott, N. J., Patabendige, A. A., Dolman, D. E., Yusof, S. R., Begley, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+the+blood-brain+barrier.">Structure and function of the blood-brain barrier.</a> Neurobiology of Disease. 37 (1), 13-25 (2010).</li><li>Reiber, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteins+in+cerebrospinal+fluid+and+blood:+barriers,+CSF+flow+rate+and+source-related+dynamics.">Proteins in cerebrospinal fluid and blood: barriers, CSF flow rate and source-related dynamics.</a> Restorative Neurology and Neuroscience. 21 (3-4), 79-96 (2003).</li><li>Reiber, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Knowledge-base+for+interpretation+of+cerebrospinal+fluid+data+patterns.+Essentials+in+neurology+and+psychiatry.">Knowledge-base for interpretation of cerebrospinal fluid data patterns. Essentials in neurology and psychiatry.</a> Arquivos de Neuropsiquiatria. 74 (6), 501-512 (2016).</li><li>Kuehne, L. K., Reiber, H., Bechter, K., Hagberg, L., Fuchs, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrospinal+fluid+neopterin+is+brain-derived+and+not+associated+with+blood-CSF+barrier+dysfunction+in+non-inflammatory+affective+and+schizophrenic+spectrum+disorders.">Cerebrospinal fluid neopterin is brain-derived and not associated with blood-CSF barrier dysfunction in non-inflammatory affective and schizophrenic spectrum disorders.</a> Journal of Psychiatric Research. 47 (10), 1417-1422 (2013).</li><li>Bromader, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+serum+and+cerebrospinal+fluif+cytokines+in+response+to+non-neurological+surgery:+an+observational+study.">Changes in serum and cerebrospinal fluif cytokines in response to non-neurological surgery: an observational study.</a> Journal of Neuroinflammation. 9, 242 (2012).</li><li>Starhof, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrospinal+fluid+pro-inflammatory+cytokines+differentiate+parkinsonian+syndromes.">Cerebrospinal fluid pro-inflammatory cytokines differentiate parkinsonian syndromes.</a> Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 305 (2018).</li></ol>

増加したCSFタンパク質濃度の評価のための定量的方法は、CNSの生理学的および病理学的状態の特徴付けに有用なツールである。しかし、CSFタンパク質レベルの信頼性の高い定量を超えて、CSFタンパク質の検出には、CSFにおける血液およびCNS由来画分を区別する結果の発現が必要です。しかし、現在までに、一般的に使用されるタンパク質定量アッセイは、ハイスループットツールの助けを借?...

脳と脊髄を取り巻く透明で無色の液体である脳脊髄液(CSF)は、臨床的かつ基本的な科学的重要性を有する。CSFは、中枢神経系(CNS)の電解環境を維持し、全身酸基在状態のバランスをとり、神経細胞およびグリア細胞に栄養を供給し、CNSのリンパ系として機能し、CNS1全体でホルモン、神経伝達物質、サイトカインおよび他の神経ペプチドを輸送する。したがって、CSF組成物はCNSの活性を反映するように、この流体は、CNSの生理学的および病理学的状態を特徴付けるために、間接的であるが、貴重なアクセスを提供する。
CSFは100年以上にわたりCNSに影響を与える状態を診断するために使用されており、この時間のほとんどは、主に診断ツールとして臨床医によって研究されました。しかしながら、近年、神経生物学者は、CNSの病態生理学を研究するためのCSFの可能性を認識している。特に、神経科学分野では、CSFのタンパク質組成の詳細な研究を可能にするいくつかのハイスループットタンパク質解析ツールが導入されており、この解析が動的変化に関する洞察を提供する可能性があることを期待しています。CNS 内で発生します。
ルミネックスやシモア技術2、3などの多重免疫測定技術の技術開発は、今日、研究者に非常に低濃度で何百ものタンパク質を検出する能力を提供します。さらに、これらの同じ技術は、小さなサンプル量の使用を可能にし、それによって、CSFの限られたサンプル量が最近まで流体の詳細な特徴を排除しているマウスを含む小動物の研究を促進する。
それにもかかわらず、CSFで測定されたタンパク質は、血液脳界面(BBI)の損傷による血清からの細胞内合成および/またはトランスデュースに由来する可能性が1つの注意点である。残念ながら、CSF単独のタンパク質分析は、これら2つの成分の合計のみを決定することができます。トランスデートとインテカリー生産タンパク質を区別するには、利用可能なタンパク質分析ツールを使用したCSFタンパク質測定は、血清濃度およびバリア完全性の個々の変動性に合わせて調整する必要があります。しかしながら、この調整は臨床現場で一般的に用いられているが、例えば、心内IgG合成を検出する感度が高いCSF IgG指数4、5、6、血清濃度およびバリア完全性に対するCSFタンパク質濃度を補正した研究はこれまでにほとんどない。
現在、ライバーグラムアプローチは、タンパク質のバリア機能と内体合成を決定する最良の方法です。これは、排他的に血液由来タンパク質9、10を指す、組み込み方法で、バリア(dys)機能と細胞内タンパク質合成の両方を分析するCSF/血清商量図におけるグラフィカル評価である。非常に豊富なタンパク質アルブミンは、通常、肝臓でのみ産生され、その大きさは約70kDaが小さいタンパク質と大きなタンパク質11の間の中間であるため、通常参照タンパク質として選択される。分析図は、1987年にライバーとフェルゲンハウアーによって最初に定義された免疫グロブリン(Igs)11の主要なクラスについて、何千ものヒトサンプル9の分析から得られた結果に基づいて経験的に示されている。このアプローチは、その後、分子拡散/流量12の理論における拡散の2つのフィックの法則の適用によって確認された。このような理論は、バリアを介したタンパク質の拡散が双曲線分布を有し、CNS9、13におけるタンパク質のダイナミクスを定量的に説明できることを示す。全体的に、皮内タンパク質合成を実証するためにライバーグラムを使用する利点は、血清からCSFに入るタンパク質画分と、局所生産のためにCSFに見られるタンパク質の量を同時に同定することである。
本稿及び関連プロトコルは、CSF及び血液採取からCSFタンパク質レベルを補正する最終計算まで、神経学的マウスモデルにおける細胞内タンパク質合成の定量的測定のための手順全体を記述する。障害。この手順は、(1)任意のCSFタンパク質の病態生理学的起源および(2)バリア完全性の安定性および機能的意義を評価するためのベースラインを提供する。この手順とプロトコルは、マウスCSFサンプルを評価するのに有用であるだけでなく、神経疾患およびヒト患者の多数の動物モデルにおけるCSFの分析にも有用である。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1484px;" width="1482">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">1 mL insulin syringe</td>
			<td style="width:184px;">BD</td>
			<td style="width:127px;">329650</td>
			<td style="width:847px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1 mL syringe</td>
			<td style="width:184px;">BD</td>
			<td style="width:127px;">329622</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">25 gauge needle</td>
			<td style="width:184px;">BD</td>
			<td style="width:127px;">305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">3 mL syringe</td>
			<td style="width:184px;">BD</td>
			<td style="width:127px;">309582</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">30 gauge insulin needle</td>
			<td style="width:184px;">BD</td>
			<td style="width:127px;">305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Absorbent pads</td>
			<td style="width:184px;">Any suitable brand</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Acepromazine</td>
			<td style="width:184px;">Patterson Vet Supply Inc</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">BioPlex Handheld Magnetic Washer</td>
			<td style="width:184px;">BioRad</td>
			<td style="width:127px;">171020100</td>
			<td>Magnet</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">BioPlex MAGPIX Multiplex Reader</td>
			<td style="width:184px;">BioRad</td>
			<td style="width:127px;">171015001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">BioPlex Pro Flat Bottom Plates</td>
			<td style="width:184px;">BioRad</td>
			<td style="width:127px;">171025001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Biotinilated detection antibody</td>
			<td style="width:184px;">Any suitable source</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td>The antibody has to be directed against the species of the protein of interest.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td style="width:184px;">Sigma</td>
			<td>A4503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Buprenorphine hydrochloride</td>
			<td style="width:184px;">PAR Pharmaceutical</td>
			<td style="width:127px;">NDC 42023-179-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Capillary Tubes</td>
			<td style="width:184px;">Sutter Instrument</td>
			<td style="width:127px;">B100-75-10</td>
			<td>OD: 1.0 mm, ID: 0.75 mm Borosilicate glass 10 cm; drawn over Bunsen to make ID smaller.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Centrifuge tube, 0.2 mL</td>
			<td style="width:184px;">VWR</td>
			<td style="width:127px;">20170-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Centrifuge tube, 0.5 mL</td>
			<td style="width:184px;">VWR</td>
			<td style="width:127px;">87003-290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Centrifuge tube, 1.5 mL</td>
			<td style="width:184px;">VWR</td>
			<td style="width:127px;">87003-294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Chlorhexidine diacetate</td>
			<td style="width:184px;">Nolvasan</td>
			<td style="width:127px;">E004272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Disposable pipettes tips</td>
			<td style="width:184px;">Any suitable brand</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Ear bars</td>
			<td style="width:184px;">KOPF Instruments</td>
			<td style="width:127px;">1921 or 1922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Ethanol</td>
			<td style="width:184px;">Kopter</td>
			<td style="width:127px;">V1001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Freezer</td>
			<td style="width:184px;">VWR</td>
			<td style="width:127px;">VWR32086A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Gauze</td>
			<td style="width:184px;">Medline</td>
			<td style="width:127px;">NON25212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Heating pad</td>
			<td style="width:184px;">Sunbeam</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td>XL King Size SoftTouch, 4 Heat Settings with Auto-Off, Teal, 12-Inch x 24-Inch</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Induction Chamber</td>
			<td style="width:184px;">VETEQUIP</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:327px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:184px;">Patterson Vet Supply Inc</td>
			<td style="width:127px;">NDC 14043-704-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Ketamine (KetaVed)</td>
			<td style="width:184px;">Patterson Vet Supply Inc</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MagPlex Microspheres (antibody-coupled)</td>
			<td style="width:184px;">BioRad</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:847px;">Antibody-coupled magnetic bead</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Microplate Shaker</td>
			<td style="width:184px;">Southwest Scientific</td>
			<td>SBT1500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Microretractors</td>
			<td style="width:184px;">Carfill Quality</td>
			<td style="width:127px;">ACD-010</td>
			<td>Blunt - 1 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Microsoft Office (Excel)</td>
			<td style="width:184px;">Microsoft</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:327px;">MilliPlex MAP Mouse Immunoglobulin Isotyping Magnetic Bead Panel</td>
			<td style="width:184px;">EMD Millipore</td>
			<td style="width:127px;">MGAMMAG-300K</td>
			<td>Commercial kit for the quantification through Luminex of a panel of immunoglobulin isotypes and subclasses in mouse fluids.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Mouse Albumin capture ELISA kit</td>
			<td style="width:184px;">Novus Biological</td>
			<td style="width:127px;">NBP2-60484</td>
			<td>Commercial kit for the quantification through ELISA of albumin in mouse fluids.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Multichannel pipette</td>
			<td style="width:184px;">Eppendorf</td>
			<td>3125000060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Non-Sterile swabs</td>
			<td style="width:184px;">MediChoice</td>
			<td style="width:127px;">WOD1002</td>
			<td>Need to be autoclaved for sterility</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Oxygen</td>
			<td style="width:184px;">AIRGAS</td>
			<td style="width:127px;">OX USPEA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Pasteur Pippettes</td>
			<td style="width:184px;">Fisher</td>
			<td style="width:127px;">13-678-20A</td>
			<td>5 &#38; 3/4&#34;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">PDS suture with disposable needle, 6-0 Prolen</td>
			<td style="width:184px;">Patterson Vet</td>
			<td style="width:127px;">8695G</td>
			<td>P-3 Reverse Cutting, 18&#34;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">PE-Streptavidin</td>
			<td style="width:184px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">554061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Pipetters</td>
			<td style="width:184px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:127px;">Research seriers</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene tubing</td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Refrigerated Centrifuge</td>
			<td style="width:184px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:127px;">ALLEGRA X-12R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Scale</td>
			<td style="width:184px;">Uline</td>
			<td style="width:127px;">H2716</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Scalpel</td>
			<td style="width:184px;">Feather</td>
			<td style="width:127px;">EF7281</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Shaver</td>
			<td style="width:184px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:127px;">52-5204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Standard proteins</td>
			<td>Any suitable source</td>
			<td></td>
			<td>The best choice for a reference standard is a purified, known concentration of the protein of interest.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Stereotaxic instrument</td>
			<td style="width:184px;">KOPF Instruments</td>
			<td style="width:127px;">Model 900LS</td>
			<td>Standard Accessories</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Sterile 1 x PBS</td>
			<td style="width:184px;">Corning Cellgro</td>
			<td style="width:127px;">21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Sterile saline</td>
			<td style="width:184px;">Baxter</td>
			<td style="width:127px;">0338-0048-02</td>
			<td>0.9 % Sodium Chloride Irrigation USP</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Surgical Forceps Curved, 7 (2)</td>
			<td style="width:184px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:127px;">11271-30</td>
			<td>Dumont</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Surgical Scissors</td>
			<td style="width:184px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:127px;">14094-11</td>
			<td>Stainless 25x</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:327px;">Vaporizer + Flow meter</td>
			<td style="width:184px;">Moduflex Anhestesia Instruments</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Vortex</td>
			<td style="width:184px;">Fisher</td>
			<td>02-215-414</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Warming pad</td>
			<td style="width:184px;">Kent Scientific Corporation</td>
			<td style="width:127px;">RT-JR-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Water Sonicator</td>
			<td style="width:184px;">Cole Parmer</td>
			<td>EW-08895-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Xylazine</td>
			<td style="width:184px;">Patterson Vet Supply Inc</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantitative measurement of intrathecally synthesized proteins in mice

脳と脊髄に見られる液体である脳脊髄液(CSF)は、基礎科学と臨床科学の両方にとって非常に重要です。CSFタンパク質組成物の分析は、基本的な神経科学研究や神経疾患において重要な情報を提供します。1つの注意点は、CSFで測定されたタンパク質は、血清からの細胞内合成とトランスダクションの両方から得られ得ることであり、CSFのタンパク質分析は、これら2つの成分の合計のみを決定することができるということです。動物モデルおよびヒトにおける血液およびインテカリー産生タンパク質からのタンパク質のトランスレーションを区別するには、従来のタンパク質解析ツールを用いたCSFタンパク質プロファイリング測定には、アルブミンCSF/血清商法(Qアルブミン)、血液脳界面の完全性のマーカー(BBI)、およびタンパク質指数(Qタンパク質/Qアルブミン)の計算を含める必要があります。このプロトコルは、CSFおよび血液採取から商および指標計算まで、神経障害のマウスモデルにおける細胞内タンパク質合成およびBBI障害の定量的測定のための手順全体を示す。

この代表的な実験は、多発性硬化症(MS)の2つの臨床的に関連するげっ歯類モデルにおけるIgGの細胞内合成を比較することを目的とした:PLP139-151-誘発性再免疫性脳脊髄炎(R-EAE)と慢性進行性、テイラーのマウス脳脊髄炎ウイルス誘発性デミエリン症(TMED)。R-EAE は再発を制御する MS を理解するのに役立つモデルですが、TMEV-IDD モデルは慢性進行性 MS19を備えています。
...

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Quantitative Measurement of Intrathecally Synthesized Proteins in Mice

高い脊髄液タンパク質レベルは、変化した血液脳関門または細胞内合成を横切る血漿タンパク質の拡散の結果であり得る。この記事では、両方のケースを判別するのに役立ち、インテコール内合成タンパク質の定量的測定を提供する最適化されたテストプロトコルを紹介します。

マウスにおけるインテコール内合成タンパク質の定量測定

Cerebrospinal fluid (CSF), a fluid found in the brain and the spinal cord, is of great importance to both basic and clinical science. The analysis of the ...

このプロトコルは、CSFタンパク質レベルの定量的補正におけるCSFおよび血液採取を、神経疾患のマウスモデルにおける表層タンパク質合成に測定することを可能にする。この手順は、対象となるCSFタンパク質の病態生理学的起源に対するベースラインを提供し、血液CSFの安定性および機能的意義を評価することができる。インターテカルタンパク質合成とバリア完全性の解析は、他の動物モデルやヒト研究にも応用できます。例えば、中枢神経系の疾患をチェックする。大量のクリーンなCSFを採取することは、マウスでは技術的に困難な場合があるため、大量の汚染されていないサンプルが得られるまでこの技術を実践することをお勧めします。この手順のデモンストレーションは、ダートマスの実験および分子医学のプログラムの卒業生であるMicheal Linzeyが、新しい免疫学研究グループで行われます。レトロ眼窩出血による血清収集用。15グラム以上の麻酔マウスでペダル反射に対する応答の欠如を確認した後、非支配的な手の親指と人差し指で耳の後ろの緩い皮膚をつかみ、人差し指を使って目の上の皮膚を引き戻す。親指を使って目の下の皮膚を引き戻し、約45度の角度で保持されたパスツールピペットの先端を眼球の下の眼窩に置き、指の間でピペットを回転させながら眼窩の真ん中に向けます。その後、短い、穏やかな圧力を適用し、血液がピペットに入ることができるように解放します。血液サンプルを採取したら、眼を傷つけずに毛細血管を静かに取り出し、血液を1.5ミリリットルの遠心分離管に移します。まぶたを閉じた後、ガーゼで軽い圧力をかけて、さらなる出血を防ぎます。血液を室温で30〜60分間凝固させ、遠心分離によってサンプルを回転させます。きれいなピペット技術を使用して、分離した血清を新しい500マイクロリットルバイアルに集め、すぐに80°Cで血清を凍結します。ペダル反射への応答の欠如を確認した後、麻酔マウスの頭蓋骨の尾端ですぐに脳脊髄液の収集を可能にする十分な大きさの毛髪の領域を取り除く。無菌状態下で立体的なデバイス上の傾向のある位置にマウスを置き、耳の棒で頭を安定させます。30%クロルヘキシジンジアセテートで手術部位をスワブし、シスターナマグナの上にある筋肉を露出させるために咬合部に劣る矢状皮膚切開を行う。鉗子を使用して、皮下組織と筋肉を鈍く解剖し、マイクロリトラクターを使用して筋肉を離れて保持し、システルナマグナの上に硬膜メナーメニンゲアル層を露出させる。滅菌PBSで組織を静かに洗い、血液汚染の可能性を取り除き、滅菌綿棒を使用してデュラマーターを乾燥させます。システルナマグナでの最初の穿刺の位置を決めることは、豊富な非汚染CSFを得るために不可欠です。30ゲージの針を使用して、水槽マグナを覆う膜を軽く穿刺し、小さなガラス毛細管を穿刺に素早くそっと挿入します。5~12マイクロリットルのCSFを採取した場合は、膜からチューブを慎重に取り出し、ポリエチレンチューブを使用してチューブを3ミリリットルのシリンジに接続します。採取したCSFを氷上の標識された500マイクロリットルチューブに注入し、使い捨て針と様々なポリジオキサノン縫合糸を使用して切開を閉じます。乾燥した血液または組織の領域をきれいにし、完全な再発まで監視して清潔で暖かいケージにマウスを置きます。遠心分離によってCSFを収集し、目視でペレットを検査し、血液汚染の兆候のためにそれを上華。その後、クリーンピペット技術を使用して、CSF含有スーパーネイトを新しい200マイクロリットルチューブに移し、CSFをPBSと1〜3の比率で希釈し、摂氏80度で即時保存します。心臓穿刺による血清採取については、CSF採取直後に、ちょうど実証したように、マウスをsupineの位置に置く。70%アルコールで腹部の皮膚をスワブ。はさみを使用して胸腔を開き、心臓を露出させ、3ミリリットルの注射器に取り付けられた25ゲージの針を左心室に挿入する。その後、注射器プランジャーに優しく負圧を加え、血液が採取された後に針を引き出します。プランジャーを押し下げて、収集した血液を1.5ミリリットルのバイアルに排出します。今度は、遠心分離によって血清を分離する前に、室温で30〜60分間血液を凝固させる。次に、きれいなピペット技術を使用して、血清を新しいラベル付き500マイクロリットルバイアルに移し、摂氏80度で即時保管します。一致した血清およびCSF検体における標的タンパク質およびアルブミンを定量するには、標準タンパク質定量アッセイを使用し、参照された標準タンパク質を使用して、対象となる各タンパク質の標準曲線を調製する。分析後、生データを適切なソフトウェアグラフプログラムにエクスポートし、検出シグナル蛍光強度と標準タンパク質濃度をグラフ化し、目的の各タンパク質の標準曲線を作成します。次に、標準曲線を使用して、サンプル内の対象の各分析対象の濃度を計算します。最後に、アルブミンと標的検体濃度を使用して、Q値と内部のthecalインデックスを計算します。総IgGの実際のレベルは、対応する年齢と一致したシャムコントロールと比較して、多発性硬化症の2つの試験済げ歯類モデルのCSFで有意に増加している。R-EAEマウスは有意に増強されたアルブミン商値を示し、これらのマウスにおける血液脳関門の透過性の増加を示す。逆に、TMEV-IDDとシャムマウスの間にアルブミン商の違いはなく、TMEV-IDDマウスにおける無傷の障壁の以前の知見を裏付ける。また、TMEV-IDD動物では、著しく高いIgG指数値が、したがって、インテムカルIgG産生が観察される。タンパク質指標の計算は、神経炎症性疾患および神経変性疾患の両方の早期診断、結果予測、および疾患経過モニタリングに有用な新規タンパク質バイオマーカーの同定を促進する。

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Vermicelli and Capellini Handling Tests: Simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice

春雨とカッペリーニの処理試験：ラットとマウスの器用な前足の機能の簡単な定量的指標

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended ...

Video-oculography in Mice

マウスのビデオ眼球運動記録法

Eye movements are very important in order to track an object or to stabilize an image on the retina during movement. Animals without a fovea, such as the ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

マウスにおける低温感受性と適応を決定するためのシンプルで安価な方法

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Quantitative Measurement of Relative Retinoic Acid Levels in E8.5 Embryos and Neurosphere Cultures Using the F9 RARE-Lacz Cell-based Reporter Assay

F9 RARE-lacZをセルベースレポーターアッセイを使用したE8.5胚および神経球培養における相対的なレチノイン酸レベルの定量的測定

Retinoic acid (RA) is an important developmental morphogen that coordinates anteroposterior and dorsoventral axis patterning, somitic differentiation, ...

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

エレクトロポレーションによる齧歯類坐骨神経内のシュワン細胞へのインビボ遺伝子導入で

The formation of the myelin sheath by Schwann cells (SCs) is essential for rapid conduction of nerve impulses along axons in the peripheral nervous ...

Quantitative Measurement of &#947;-Secretase-mediated Amyloid Precursor Protein and Notch Cleavage in Cell-based Luciferase Reporter Assay Platforms

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Γ セクレターゼによるアミロイド前駆体タンパク質と細胞を用いたルシフェラーゼ レポーター アッセイ プラットフォーム ノッチ胸の谷間の定量的測定

We have developed a pair of cell-based reporter gene assays to quantitatively measure &#947;-secretase cleavage of distinct substrates. This manuscript ...

Quantitative Analysis of Neuronal Dendritic Arborization Complexity in Drosophila

Quantitative Analysis of Neuronal Dendritic Arborization Complexity in Drosophila

ショウジョウバエのニューロン樹状分枝複雑さの定量解析

Dendrites are the branched projections of a neuron, and dendritic morphology reflects synaptic organization during the development of the nervous system. ...

An Objective and Reproducible Test of Olfactory Learning and Discrimination in Mice

嗅覚学習とマウスにおける差別の客観的かつ再現性のあるテスト

Olfaction is the predominant sensory modality in mice and influences many important behaviors, including foraging, predator detection, mating, and ...

Quantitative Cell Biology of Neurodegeneration in Drosophila Through Unbiased Analysis of Fluorescently Tagged Proteins Using ImageJ

Quantitative Cell Biology of Neurodegeneration in Drosophila Through Unbiased Analysis of Fluorescently Tagged Proteins Using ImageJ

ImageJ を用いた蛍光タグ付きタンパク質の公平な分析によるショウジョウバエの神経変性の定量細胞生物学

With the rising prevalence of neurodegenerative diseases, it is increasingly important to understand the underlying pathophysiology that leads to neuronal ...

Imaging and Analysis of Neurofilament Transport in Excised Mouse Tibial Nerve

切除されたマウス脛骨神経におけるニューロフィラメント輸送のイメージングと解析

Neurofilament protein polymers move along axons in the slow component of axonal transport at average speeds of ~0.35-3.5 mm/day. Until recently the study ...