Name: quantitative measurement of intrathecally synthesized proteins in mice
Uploaded: 2019-11-29T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Measurement of Intrathecally Synthesized Proteins in Mice at JoVE.com

Авторы благодарят сотрудников Центра сравнительной медицины и исследований (CCMR) в Дартмуте за их экспертную заботу о мышах, используемых для этих исследований. Научно-исследовательский фонд Борнштейна финансировал это исследование.

Вся работа животных использует протоколы, рассмотренные и одобренные Институциональным комитетом по уходу за животными и использованию (IACUC) в Медицинской школе Гейзела в Дартмуте.
1. Сбор жидкостей
ПРИМЕЧАНИЕ: Требуется сыворотка и CSF. Для выживания и некро...

<ol>
	<li>Whedon, J. M., Glassey, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrospinal+fluid+stasis+and+its+clinical+significance.">Cerebrospinal fluid stasis and its clinical significance.</a> Alternative Therapies in Health and Medicine. 15 (3), 54-60 (2009).</li><li>Kang, J. H., Vanderstichele, H., Trojanowski, J. Q., Shaw, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+analysis+of+cerebrospinal+fluid+biomarkers+using+microsphere-based+xMAP+multiplex+technology+for+early+detection+of+Alzheimer's+disease.">Simultaneous analysis of cerebrospinal fluid biomarkers using microsphere-based xMAP multiplex technology for early detection of Alzheimer's disease.</a> Methods. 56 (4), 484-493 (2012).</li><li>Barro, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluid+biomarker+and+electrophysiological+outcome+measures+for+progressive+MS+trials.">Fluid biomarker and electrophysiological outcome measures for progressive MS trials.</a> Multiple Sclerosis. 23 (12), 1600-1613 (2017).</li><li>Tourtellotte, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+sclerosis:+measurement+and+validation+of+central+nervous+system+IgG+synthesis+rate.">Multiple sclerosis: measurement and validation of central nervous system IgG synthesis rate.</a> Neurology. 30 (3), 240-244 (1980).</li><li>Bonnan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrathecal+IgG+synthesis:+a+resistant+and+valuable+target+for+future+multiple+sclerosis+treatments.">Intrathecal IgG synthesis: a resistant and valuable target for future multiple sclerosis treatments.</a> Multiple Sclerosis International. 2015, 296184 (2015).</li><li>Reiber, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrospinal+fluid--physiology,+analysis+and+interpretation+of+protein+patterns+for+diagnosis+of+neurological+diseases.">Cerebrospinal fluid--physiology, analysis and interpretation of protein patterns for diagnosis of neurological diseases.</a> Multiple Sclerosis. 4 (3), 99-107 (1998).</li><li>DiSano, K. D., Linzey, M. R., Royce, D. B., Pachner, A. R., Gilli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+neuro-immune+patterns+in+two+clinically+relevant+murine+models+of+multiple+sclerosis.">Differential neuro-immune patterns in two clinically relevant murine models of multiple sclerosis.</a> Journal of Neuroinflammation. 16 (1), 109 (2019).</li><li>Pachner, A. R., Li, L., Lagunoff, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+cells+in+the+central+nervous+system+in+the+Theiler's+virus+model+of+multiple+sclerosis.">Plasma cells in the central nervous system in the Theiler's virus model of multiple sclerosis.</a> Journal of Neuroimmunology. 232 (1-2), 35-40 (2011).</li><li>Reiber, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+rate+of+cerebrospinal+fluid+(CSF)--a+concept+common+to+normal+blood-CSF+barrier+function+and+to+dysfunction+in+neurological+diseases.">Flow rate of cerebrospinal fluid (CSF)--a concept common to normal blood-CSF barrier function and to dysfunction in neurological diseases.</a> Journal of Neurological Sciences. 122 (2), 189-203 (1994).</li><li>Reiber, H., Zeman, D., Kusnierova, P., Mundwiler, E., Bernasconi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+relevance+of+free+light+chains+in+cerebrospinal+fluid+-+The+hyperbolic+reference+range+for+reliable+data+interpretation+in+quotient+diagrams.">Diagnostic relevance of free light chains in cerebrospinal fluid - The hyperbolic reference range for reliable data interpretation in quotient diagrams.</a> Clinica Chimica Acta. 497, 153-162 (2019).</li><li>Reiber, H., Felgenhauer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+transfer+at+the+blood+cerebrospinal+fluid+barrier+and+the+quantitation+of+the+humoral+immune+response+within+the+central+nervous+system.">Protein transfer at the blood cerebrospinal fluid barrier and the quantitation of the humoral immune response within the central nervous system.</a> Clinica Chimica Acta. 163 (3), 319-328 (1987).</li><li>Dorta-Contreras, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reibergrams:+essential+element+in+cerebrospinal+fluid+immunological+analysis.">Reibergrams: essential element in cerebrospinal fluid immunological analysis.</a> Revista de Neurologia. 28 (10), 996-998 (1999).</li><li>Metzger, F., Mischek, D., Stoffers, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Connected+Steady+State+Model+and+the+Interdependence+of+the+CSF+Proteome+and+CSF+Flow+Characteristics.">The Connected Steady State Model and the Interdependence of the CSF Proteome and CSF Flow Characteristics.</a> Frontiers Neuroscience. 11, 241 (2017).</li><li>Wolforth, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+of+blood+collection+in+the+mouse.">Methods of blood collection in the mouse.</a> Laboratory Animals. 29, 47-53 (2000).</li><li>Liu, L., Duff, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+serial+collection+of+cerebrospinal+fluid+from+the+cisterna+magna+in+mouse.">A technique for serial collection of cerebrospinal fluid from the cisterna magna in mouse.</a> Journal of Visualized Experiments. (21), e960 (2008).</li><li>Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manual+restraint+and+common+compound+administration+routes+in+mice+and+rats.">Manual restraint and common compound administration routes in mice and rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (67), e2771 (2012).</li><li>Johnston, S. A., Tobias, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Veterinary+Surgery:+Small+Animal+Expert+Consult+-+E-Book.">Veterinary Surgery: Small Animal Expert Consult - E-Book.</a> Elsevier Health Sciences. , (2017).</li><li>Nigrovic, L. E., Shah, S. S., Neuman, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correction+of+cerebrospinal+fluid+protein+for+the+presence+of+red+blood+cells+in+children+with+a+traumatic+lumbar+puncture.">Correction of cerebrospinal fluid protein for the presence of red blood cells in children with a traumatic lumbar puncture.</a> Journal of Pediatrics. 159 (1), 158-159 (2011).</li><li>McCarthy, D. P., Richards, M. H., Miller, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+multiple+sclerosis:+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+and+Theiler's+virus-induced+demyelinating+disease.">Mouse models of multiple sclerosis: experimental autoimmune encephalomyelitis and Theiler's virus-induced demyelinating disease.</a> Methods in Molecular Biology. 900, 381-401 (2012).</li><li>Link, H., Tibbling, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+albumin+and+IgG+analyses+in+neurological+disorders.+II.+Relation+of+the+concentration+of+the+proteins+in+serum+and+cerebrospinal+fluid.">Principles of albumin and IgG analyses in neurological disorders. II. Relation of the concentration of the proteins in serum and cerebrospinal fluid.</a> Scandinavian Journal of Clinical Laboratory Investigation. 37 (5), 391-396 (1977).</li><li>Tibbling, G., Link, H., Ohman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+albumin+and+IgG+analyses+in+neurological+disorders.+I.+Establishment+of+reference+values.">Principles of albumin and IgG analyses in neurological disorders. I. Establishment of reference values.</a> Scandinavian Journal of Clinical Laboratory Investigation. 37 (5), 385-390 (1977).</li><li>Deisenhammer, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+on+routine+cerebrospinal+fluid+analysis.+Report+from+an+EFNS+task+force.">Guidelines on routine cerebrospinal fluid analysis. Report from an EFNS task force.</a> European Journal of Neurology. 13 (9), 913-922 (2006).</li><li>Johanson, C. E., Stopa, E. G., McMillan, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blood-cerebrospinal+fluid+barrier:+structure+and+functional+significance.">The blood-cerebrospinal fluid barrier: structure and functional significance.</a> Methods in Molecular Biology. 686, 101-131 (2011).</li><li>Zaias, J., Mineau, M., Cray, C., Yoon, D., Altman, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reference+values+for+serum+proteins+of+common+laboratory+rodent+strains.">Reference values for serum proteins of common laboratory rodent strains.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 48 (4), 387-390 (2009).</li><li>Felgenhauer, K., Renner, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrodynamic+radii+versus+molecular+weights+in+clearance+studies+of+urine+and+cerebrospinal+fluid.">Hydrodynamic radii versus molecular weights in clearance studies of urine and cerebrospinal fluid.</a> Annals of Clinical Biochemistry. 14 (2), 100-104 (1977).</li><li>Pachner, A. R., DiSano, K., Royce, D. B., Gilli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+utility+of+a+molecular+signature+in+inflammatory+demyelinating+disease.">Clinical utility of a molecular signature in inflammatory demyelinating disease.</a> Neurology, Neuroimmunology &amp; Neuroinflammation. 6 (1), 520 (2019).</li><li>Pachner, A. R., Li, L., Gilli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokine+biomarkers+in+central+nervous+system+tissue+and+cerebrospinal+fluid+in+the+Theiler's+virus+model+mirror+those+in+multiple+sclerosis.">Chemokine biomarkers in central nervous system tissue and cerebrospinal fluid in the Theiler's virus model mirror those in multiple sclerosis.</a> Cytokine. 76 (2), 577-580 (2015).</li><li>Gerbi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+concentration+in+the+arterial+and+venous+renal+blood+serum+of+the+rabbit.">Protein concentration in the arterial and venous renal blood serum of the rabbit.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 31 (1), 49-61 (1951).</li><li>Abbott, N. J., Patabendige, A. A., Dolman, D. E., Yusof, S. R., Begley, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+the+blood-brain+barrier.">Structure and function of the blood-brain barrier.</a> Neurobiology of Disease. 37 (1), 13-25 (2010).</li><li>Reiber, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteins+in+cerebrospinal+fluid+and+blood:+barriers,+CSF+flow+rate+and+source-related+dynamics.">Proteins in cerebrospinal fluid and blood: barriers, CSF flow rate and source-related dynamics.</a> Restorative Neurology and Neuroscience. 21 (3-4), 79-96 (2003).</li><li>Reiber, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Knowledge-base+for+interpretation+of+cerebrospinal+fluid+data+patterns.+Essentials+in+neurology+and+psychiatry.">Knowledge-base for interpretation of cerebrospinal fluid data patterns. Essentials in neurology and psychiatry.</a> Arquivos de Neuropsiquiatria. 74 (6), 501-512 (2016).</li><li>Kuehne, L. K., Reiber, H., Bechter, K., Hagberg, L., Fuchs, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrospinal+fluid+neopterin+is+brain-derived+and+not+associated+with+blood-CSF+barrier+dysfunction+in+non-inflammatory+affective+and+schizophrenic+spectrum+disorders.">Cerebrospinal fluid neopterin is brain-derived and not associated with blood-CSF barrier dysfunction in non-inflammatory affective and schizophrenic spectrum disorders.</a> Journal of Psychiatric Research. 47 (10), 1417-1422 (2013).</li><li>Bromader, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+serum+and+cerebrospinal+fluif+cytokines+in+response+to+non-neurological+surgery:+an+observational+study.">Changes in serum and cerebrospinal fluif cytokines in response to non-neurological surgery: an observational study.</a> Journal of Neuroinflammation. 9, 242 (2012).</li><li>Starhof, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrospinal+fluid+pro-inflammatory+cytokines+differentiate+parkinsonian+syndromes.">Cerebrospinal fluid pro-inflammatory cytokines differentiate parkinsonian syndromes.</a> Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 305 (2018).</li></ol>

Количественные методы оценки повышенной концентрации белка CSF являются полезными инструментами в характеристике физиологического и патологического состояния ЦНС. Однако, помимо надежной количественной оценки уровней белка CSF, обнаружение белков CSF требует выражения результатов, кот...

Цереброспинальная жидкость (CSF), прозрачная и бесцветная жидкость, окружающая мозг и спинной мозг, имеет большое клиническое и фундаментанное научное значение. CSF сохраняет электролитическую среду центральной нервной системы (ЦНС), уравновешивает системный кислотно-базовый статус, поставляет питательные вещества в нейрональные и глиальные клетки, функционирует как лимфатическая система для ЦНС, и транспортирует гормоны, нейротрансмиттеры, цитокины и другие нейропептиды по всей ЦНС1. Таким образом, поскольку состав CSF отражает активность ЦНС, эта жидкость предлагает ценный, хотя и косвенный, доступ к характеристике физиологического и патологического состояния ЦНС.
CSF был использован для диагностики заболеваний, которые влияют на ЦНС на протяжении более ста лет, и на протяжении большей части этого времени, он был в первую очередь изучался врачами в качестве диагностического инструмента. Однако в последние годы нейробиологи признали потенциал CSF для изучения патофизиологии ЦНС. В частности, несколько высокопроизводительных инструментов анализа белка были введены в области нейронауки, что позволяет детально изучить состав белка CSF, с расчетом на то, что этот анализ может помочь дать представление о динамических изменениях происходящих в ЦНС.
Технологические разработки в мультиплексных методах иммуноанализа, таких как Luminex и Simoa технологий2,3, предоставить исследователям сегодня возможность обнаружить сотни белков в очень низких концентрациях. Кроме того, эти же технологии позволяют использовать небольшие объемы выборки, тем самым способствуя исследованиям на мелких животных, в том числе мышах, в которых ограниченные объемы образцов CSF до недавнего времени исключали подробные характеристики жидкости.
Тем не менее, одно предостережение заключается в том, что белки, измеренные в CSF, могут вытекать из внутритебного синтеза и/или трансудаляции из сыворотки из-за поврежденного интерфейса кровеносного мозга (BBI). К сожалению, анализ белка CSF только может определить сумму этих двух компонентов. Чтобы различать трансудатии и интратеколли, измерения белка CSF с использованием любого доступного инструмента анализа белка должны быть скорректированы с учетом индивидуальной изменчивости концентраций в сыворотке крови, а также барьерной целостности. Однако, хотя эта корректировка широко используется в клинической практике, например, индекс CSF IgG, который имеет высокую чувствительность для обнаружения внутритекового синтеза IgG4,5,6, на сегодняшний день очень немногие исследования исправили концентрации белка CSF для концентрации сыворотки и барьерцелостности7,8.
В настоящее время подход Рейберграм является лучшим способом определения барьерной функции и внутритекового синтеза белков. Это графическая оценка в CSF / сыворотки фактор диаграммы, которая анализирует, в комплексном порядке, как барьер (дис) функции и синтез внутритебного белка, ссылаясь на исключительно кровеоток протеина9,10. Высоко обильный протеиновый альбумин обычно выбирается в качестве эталонного белка, потому что он производится только в печени и потому, что его размер, приблизительно 70 kDa, является промежуточным между малыми и большими белками11. Диаграмма анализа была впервые определена Рейбером и Фельгенгауэр в 1987 году для основных классов иммуноглобулинов (Igs)11, будучи эмпирически основана на результатах, полученных в результате анализа тысяч образцов человека9. Подход был впоследствии подтвержден применением двух законов Fick диффузии в теории молекулярной диффузии / скорости потока12. Такая теория демонстрирует диффузию белка через барьер имеет гиперболическое распределение и может количественно объяснить динамику белков в ЦНС9,13. В целом, преимущество использования Рейберграма для демонстрации синтеза внутритекового белка заключается в том, что он одновременно определяет белковую фракцию, которая попадает в CSF из сыворотки, а также количество белка, найденного в CSF из-за местного производства.
В настоящей статье и соответствующем протоколе описывается вся процедура, от CSF и сбора крови до окончательных расчетов коррекции уровней белка CSF, для количественного измерения синтеза внутритебного белка в моделях мыши неврологических Расстройств. Эта процедура обеспечивает базовый уклад, на основе которого для оценки (1) патофизиологического происхождения любого белка CSF и (2) стабильности и функциональной значимости барьерной целостности. Эта процедура и протокол не только полезны для оценки образцов мышь CSF, но также полезны в анализе CSF в множестве животных моделей неврологических заболеваний и человеческих пациентов.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1484px;" width="1482">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">1 mL insulin syringe</td>
			<td style="width:184px;">BD</td>
			<td style="width:127px;">329650</td>
			<td style="width:847px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1 mL syringe</td>
			<td style="width:184px;">BD</td>
			<td style="width:127px;">329622</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">25 gauge needle</td>
			<td style="width:184px;">BD</td>
			<td style="width:127px;">305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">3 mL syringe</td>
			<td style="width:184px;">BD</td>
			<td style="width:127px;">309582</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">30 gauge insulin needle</td>
			<td style="width:184px;">BD</td>
			<td style="width:127px;">305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Absorbent pads</td>
			<td style="width:184px;">Any suitable brand</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Acepromazine</td>
			<td style="width:184px;">Patterson Vet Supply Inc</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">BioPlex Handheld Magnetic Washer</td>
			<td style="width:184px;">BioRad</td>
			<td style="width:127px;">171020100</td>
			<td>Magnet</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">BioPlex MAGPIX Multiplex Reader</td>
			<td style="width:184px;">BioRad</td>
			<td style="width:127px;">171015001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">BioPlex Pro Flat Bottom Plates</td>
			<td style="width:184px;">BioRad</td>
			<td style="width:127px;">171025001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Biotinilated detection antibody</td>
			<td style="width:184px;">Any suitable source</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td>The antibody has to be directed against the species of the protein of interest.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td style="width:184px;">Sigma</td>
			<td>A4503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Buprenorphine hydrochloride</td>
			<td style="width:184px;">PAR Pharmaceutical</td>
			<td style="width:127px;">NDC 42023-179-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Capillary Tubes</td>
			<td style="width:184px;">Sutter Instrument</td>
			<td style="width:127px;">B100-75-10</td>
			<td>OD: 1.0 mm, ID: 0.75 mm Borosilicate glass 10 cm; drawn over Bunsen to make ID smaller.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Centrifuge tube, 0.2 mL</td>
			<td style="width:184px;">VWR</td>
			<td style="width:127px;">20170-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Centrifuge tube, 0.5 mL</td>
			<td style="width:184px;">VWR</td>
			<td style="width:127px;">87003-290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Centrifuge tube, 1.5 mL</td>
			<td style="width:184px;">VWR</td>
			<td style="width:127px;">87003-294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Chlorhexidine diacetate</td>
			<td style="width:184px;">Nolvasan</td>
			<td style="width:127px;">E004272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Disposable pipettes tips</td>
			<td style="width:184px;">Any suitable brand</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Ear bars</td>
			<td style="width:184px;">KOPF Instruments</td>
			<td style="width:127px;">1921 or 1922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Ethanol</td>
			<td style="width:184px;">Kopter</td>
			<td style="width:127px;">V1001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Freezer</td>
			<td style="width:184px;">VWR</td>
			<td style="width:127px;">VWR32086A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Gauze</td>
			<td style="width:184px;">Medline</td>
			<td style="width:127px;">NON25212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Heating pad</td>
			<td style="width:184px;">Sunbeam</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td>XL King Size SoftTouch, 4 Heat Settings with Auto-Off, Teal, 12-Inch x 24-Inch</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Induction Chamber</td>
			<td style="width:184px;">VETEQUIP</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:327px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:184px;">Patterson Vet Supply Inc</td>
			<td style="width:127px;">NDC 14043-704-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Ketamine (KetaVed)</td>
			<td style="width:184px;">Patterson Vet Supply Inc</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MagPlex Microspheres (antibody-coupled)</td>
			<td style="width:184px;">BioRad</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:847px;">Antibody-coupled magnetic bead</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Microplate Shaker</td>
			<td style="width:184px;">Southwest Scientific</td>
			<td>SBT1500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Microretractors</td>
			<td style="width:184px;">Carfill Quality</td>
			<td style="width:127px;">ACD-010</td>
			<td>Blunt - 1 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Microsoft Office (Excel)</td>
			<td style="width:184px;">Microsoft</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:327px;">MilliPlex MAP Mouse Immunoglobulin Isotyping Magnetic Bead Panel</td>
			<td style="width:184px;">EMD Millipore</td>
			<td style="width:127px;">MGAMMAG-300K</td>
			<td>Commercial kit for the quantification through Luminex of a panel of immunoglobulin isotypes and subclasses in mouse fluids.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Mouse Albumin capture ELISA kit</td>
			<td style="width:184px;">Novus Biological</td>
			<td style="width:127px;">NBP2-60484</td>
			<td>Commercial kit for the quantification through ELISA of albumin in mouse fluids.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Multichannel pipette</td>
			<td style="width:184px;">Eppendorf</td>
			<td>3125000060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Non-Sterile swabs</td>
			<td style="width:184px;">MediChoice</td>
			<td style="width:127px;">WOD1002</td>
			<td>Need to be autoclaved for sterility</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Oxygen</td>
			<td style="width:184px;">AIRGAS</td>
			<td style="width:127px;">OX USPEA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Pasteur Pippettes</td>
			<td style="width:184px;">Fisher</td>
			<td style="width:127px;">13-678-20A</td>
			<td>5 &#38; 3/4&#34;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">PDS suture with disposable needle, 6-0 Prolen</td>
			<td style="width:184px;">Patterson Vet</td>
			<td style="width:127px;">8695G</td>
			<td>P-3 Reverse Cutting, 18&#34;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">PE-Streptavidin</td>
			<td style="width:184px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:127px;">554061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Pipetters</td>
			<td style="width:184px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:127px;">Research seriers</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene tubing</td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Refrigerated Centrifuge</td>
			<td style="width:184px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:127px;">ALLEGRA X-12R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Scale</td>
			<td style="width:184px;">Uline</td>
			<td style="width:127px;">H2716</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Scalpel</td>
			<td style="width:184px;">Feather</td>
			<td style="width:127px;">EF7281</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Shaver</td>
			<td style="width:184px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:127px;">52-5204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Standard proteins</td>
			<td>Any suitable source</td>
			<td></td>
			<td>The best choice for a reference standard is a purified, known concentration of the protein of interest.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Stereotaxic instrument</td>
			<td style="width:184px;">KOPF Instruments</td>
			<td style="width:127px;">Model 900LS</td>
			<td>Standard Accessories</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Sterile 1 x PBS</td>
			<td style="width:184px;">Corning Cellgro</td>
			<td style="width:127px;">21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Sterile saline</td>
			<td style="width:184px;">Baxter</td>
			<td style="width:127px;">0338-0048-02</td>
			<td>0.9 % Sodium Chloride Irrigation USP</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Surgical Forceps Curved, 7 (2)</td>
			<td style="width:184px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:127px;">11271-30</td>
			<td>Dumont</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Surgical Scissors</td>
			<td style="width:184px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:127px;">14094-11</td>
			<td>Stainless 25x</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:327px;">Vaporizer + Flow meter</td>
			<td style="width:184px;">Moduflex Anhestesia Instruments</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Vortex</td>
			<td style="width:184px;">Fisher</td>
			<td>02-215-414</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Warming pad</td>
			<td style="width:184px;">Kent Scientific Corporation</td>
			<td style="width:127px;">RT-JR-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Water Sonicator</td>
			<td style="width:184px;">Cole Parmer</td>
			<td>EW-08895-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:327px;">Xylazine</td>
			<td style="width:184px;">Patterson Vet Supply Inc</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantitative measurement of intrathecally synthesized proteins in mice

Цереброспинальная жидкость (CSF), жидкость, найденная в головном и спинном мозге, имеет большое значение как для основных, так и для клинической науки. Анализ состава белка CSF предоставляет важную информацию в фундаментальных неврологических исследованиях, а также неврологических заболеваниях. Одно предостережение что протеины измеренные в CSF могут вытекать от обоих intrathecal синтеза и transudation от сыворотки, и анализ протеина CSF может только обусловить сумму этих 2 компонентов. Чтобы различать перенос протеина из крови и интратэколли, производимые белками в животных моделях, а также в организме человека, измерения профилирования белка CSF с использованием обычных инструментов анализа белка должны включать в себя расчет альбумина CSF/сыворотки коэффициента (qalbumin), маркер целостности интерфейса кровяного мозга (BBI), и индекс белка (qбелок/альбом) Этот протокол иллюстрирует всю процедуру, от CSF и сбора крови до расчетов коэффициентов и индексов, для количественного измерения синтеза внутриклеточного белка и нарушения BBI в моделях мыши неврологических расстройств.

Этот репрезентативный эксперимент был направлен на сравнение внутриклеточного синтеза IgG в двух клинически значимых моделях грызунов рассеянного склероза (МС): PLP139-151-индуцированныйрецидивирующий экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (R-EAE) и хронический прогрессивный,...

Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Measurement of Intrathecally Synthesized Proteins in Mice at JoVE.com

Quantitative Measurement of Intrathecally Synthesized Proteins in Mice

Повышенный уровень белка спинномозговой жидкости может быть результатом распространения белка плазмы через измененный гематоэнцефалический барьер или внутритекаальный синтез. В этой статье представлен оптимизированный протокол тестирования, который помогает дискриминировать оба случая и обеспечивает количественные измерения синтезированных белков интратеколли.

Количественное измерение интратекалливых синтезированных белков у мышей

Cerebrospinal fluid (CSF), a fluid found in the brain and the spinal cord, is of great importance to both basic and clinical science. The analysis of the ...

Этот протокол позволяет CSF и сбор крови в количественной коррекции уровней белка CSF для измерения в синтезе этиального белка в мышиных моделях неврологических расстройств. Эта процедура обеспечивает базовый уровень, на основе которого можно оценить патофизиологическое происхождение белков CSF, представляющих интерес, а также стабильность и функциональную значимость целостности пользу CSF крови. Анализ межтекального синтеза белка и барьерной целостности может быть применен к другим моделям животных и исследованиям человека.Например, проверить на наличие заболеваний центральной нервной системы. Сбор значительных объемов чистого CSF может быть технически сложным у мышей, поэтому практикует технику до тех пор, пока большие объемы незагрязнено образца могут быть получены рекомендуется. Демонстрация процедур будет Майкл Linzey, аспирант из программы в экспериментальной и молекулярной медицины в Дартмуте, в нашей новой исследовательской группы иммунологии.Для сбора сыворотки с помощью ретро орбитального кровотечения. После подтверждения отсутствия ответа на педаль рефлекс в более чем 15 грамм анестезированный мыши, схватить свободную кожу за ушами с большим и указательным пальцем не доминирующей рукой, и использовать указательный палец, чтобы оттянуть кожу над глазами. Используя большой палец, чтобы оттянуть кожу под глазами, поместите кончик пипетки Pasteur, удерживаемый под углом примерно 45 градусов, в глазницу под глазным яблоком, направленную к середине глазницы, вращая пипетку между пальцами.Затем нанесите краткое, мягкое давление и отпустите, чтобы кровь вошел в пипету. Когда образец крови был собран, осторожно удалить капилляр, не повреждая глаз, и передать кровь в 1,5 миллилитр центрифуги трубки. После закрытия век нанесите мягкое давление марлей, чтобы предотвратить дальнейшее кровотечение.Разрешить крови сгусток в течение 30 до 60 минут при комнатной температуре, прежде чем спиннинг вниз образца центрифугации. Используя чистую технику пипетки, соберите разделенную сыворотку в новый, помеченный 500 микролитровый флакон, и немедленно заморозить сыворотку при 80 градусах по Цельсию. После подтверждения отсутствия реакции на педаль рефлекс, удалить достаточно большой площади волос, чтобы сбор спинномозговой жидкости непосредственно на хвостовой части черепа обезболивающей мыши.Поместите мышь в положение, подверженное стереотаксису, в стерильных условиях и устоичивую голову ушными прутьями. Шваб хирургического сайта с 30%хлоргексидина диацетата, и сделать sagittal разрез кожи уступает occiput подвергать мышцы чрезмерно цистерна magna. Используя миппы, тупой вскрыть подкожной ткани и мышц, и использовать микро-ретракторы держать мышцы друг от друга, чтобы разоблачить dura mater менингеальный слой над цистерна magna.Аккуратно мыть ткани стерильными PBS, чтобы удалить любые возможные загрязнения крови, и использовать стерильный ватный тампон, чтобы смыть dura mater сухой. Позиционирование первоначального прокола на цистерна магна имеет важное значение для получения обильных, не загрязненных CSF. Используя 30-го калибра иглы, осторожно проколоть мембрану, покрывающую цистерна magna, и быстро и осторожно вставить небольшую стеклянную капиллярную трубку в прокол.Когда 5 до 12 микролитров CSF были собраны, тщательно удалить трубку из мембраны и использовать кусок полиэтиленовой трубки для подключения трубки к три миллилитров шприца. Введи собранный CSF в помеченную 500 микролитровую трубку на льду, и используйте одноразовую иглу и разнообразные шовы полидиоксанона, чтобы закрыть разрез. Очистите область любой высохшей крови или ткани, и поместите мышь в чистую, теплую клетку с мониторингом до полного лежачих.Соберите CSF путем центрифугации, и визуально проверить гранулы и загнеть его на наличие каких-либо признаков загрязнения крови. Затем с помощью чистой техники пипетки, передать CSF-содержащих супернат в новую трубку 200 микролитров, и разбавить CSF на один-три соотношения с PBS для немедленного хранения при 80 градусов по Цельсию. Для сбора сыворотки путем сердечного прокола, сразу после сбора CSF, как только что продемонстрировано, поместите мышь в положение на спине.Шваб брюшной кожи с 70% алкоголя. Используйте ножницы, чтобы открыть грудной полости, подвергая сердце, и вставить 25 калибровочных иглы прилагается к 3 миллилитров шприц в левый желудочек. Затем осторожно нанесите отрицательное давление на поршень шприца, снятия иглы после того, как кровь была собрана.Депрессия поршень, чтобы извлечь собранную кровь в 1,5 миллилитров флакона. Теперь, позвольте крови сгусток в течение 30 до 60 минут при комнатной температуре, прежде чем отделить сыворотку центрифугации. Затем, используя чистую технику пипетки, перенесите сыворотку в новый флакон с маркировкой 500 микролитров для немедленного хранения при 80 градусах Цельсия.Для количественной оценки целевых белков и альбумена в образцах сыворотки и CSF используйте стандартный анализ количественной оценки белка, используя эталонные стандартные белки для подготовки стандартной кривой для каждого интересного белка. После анализа экспорт необработанных данных в соответствующую программную программу графикирования и график интенсивности сигнала обнаружения по сравнению со стандартными концентрациями белка для создания стандартной кривой для каждого интересного белка. Затем используйте стандартные кривые для расчета концентраций каждого аналита, представляющих интерес в образцах.Наконец, используйте альбумен и целевые концентрации аналита для расчета значений и внутритекального индекса. Фактические уровни общего IgG значительно увеличены в CSF двух испытанных моделей грызунов рассеянного склероза, по сравнению с соответствующим возрастом соответствует фиктивный контроль. R-EAE мышей показывают значительно расширенные значения коэффициента альбумена, что свидетельствует о повышенной проницаемости геммоэнцефалический барьер у этих мышей.Но, на обратной стороне, между TMEV-IDD и фиктивными мышами нет различий в факторе альбумена, что подтверждает предыдущие выводы о нетронутом барьере у мышей TMEV-IDD. Кроме того, у животных ТМЭВ-IDD наблюдаются значительно более высокие значения индекса IgG и, следовательно, внутритекалионные igG-производства. Расчет белкового индекса облегчает выявление новых белковых биомаркеров, полезных для ранней диагностики, прогнозирования исходов и мониторинга курса заболеваний как для нейровоспламеняющихся, так и для нейродегенеративных заболеваний.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Vermicelli and Capellini Handling Tests: Simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice

Вермишель и тесты Capellini Обращение: Простые количественные показатели ловкие функции передней лапы у крыс и мышей

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended ...

Video-oculography in Mice

Видео-окулография у мышей

Eye movements are very important in order to track an object or to stabilize an image on the retina during movement. Animals without a fovea, such as the ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

Простой и недорогой метод для определения холодную чувствительность и адаптация в мышах

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Quantitative Measurement of Relative Retinoic Acid Levels in E8.5 Embryos and Neurosphere Cultures Using the F9 RARE-Lacz Cell-based Reporter Assay

Количественное измерение относительных уровней ретиноевой кислоты в E8.5 эмбрионы и нейросфера культур Использование F9 RARE-LacZ клеток на основе Reporter Assay

Retinoic acid (RA) is an important developmental morphogen that coordinates anteroposterior and dorsoventral axis patterning, somitic differentiation, ...

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

В естественных условиях переноса гена к шванновских клеток в нерве Грызун седалищного путем электропорации

The formation of the myelin sheath by Schwann cells (SCs) is essential for rapid conduction of nerve impulses along axons in the peripheral nervous ...

Quantitative Measurement of &#947;-Secretase-mediated Amyloid Precursor Protein and Notch Cleavage in Cell-based Luciferase Reporter Assay Platforms

Quantitative Measurement of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³-Secretase-mediated Amyloid Precursor Protein and Notch Cleavage in Cell-based Luciferase Reporter Assay Platforms

Количественное измерение γ-Secretase опосредованной амилоида прекурсоров протеина и вырез декольте в платформах Assay репортера Cell-based Люцифераза

We have developed a pair of cell-based reporter gene assays to quantitatively measure &#947;-secretase cleavage of distinct substrates. This manuscript ...

Quantitative Analysis of Neuronal Dendritic Arborization Complexity in Drosophila

Quantitative Analysis of Neuronal Dendritic Arborization Complexity in Drosophila

Количественный анализ сложности нейрональных дендритных арборизация у дрозофилы

Dendrites are the branched projections of a neuron, and dendritic morphology reflects synaptic organization during the development of the nervous system. ...

An Objective and Reproducible Test of Olfactory Learning and Discrimination in Mice

Объективный и воспроизводимые тест обонятельных обучения и дискриминации в мышей

Olfaction is the predominant sensory modality in mice and influences many important behaviors, including foraging, predator detection, mating, and ...

Quantitative Cell Biology of Neurodegeneration in Drosophila Through Unbiased Analysis of Fluorescently Tagged Proteins Using ImageJ

Quantitative Cell Biology of Neurodegeneration in Drosophila Through Unbiased Analysis of Fluorescently Tagged Proteins Using ImageJ

Количественные клеточной биологии нейродегенеративные у дрозофилы путем объективного анализа дневно тегами белков с помощью ImageJ

With the rising prevalence of neurodegenerative diseases, it is increasingly important to understand the underlying pathophysiology that leads to neuronal ...

Imaging and Analysis of Neurofilament Transport in Excised Mouse Tibial Nerve

Изображение и анализ нейрофиламента транспорта в акцизных мышь Tibial нерва

Neurofilament protein polymers move along axons in the slow component of axonal transport at average speeds of ~0.35-3.5 mm/day. Until recently the study ...