Name: analyzing mitochondrial transport and morphology in human induced pluripotent stem cell-derived neurons in hereditary spastic paraplegia
Uploaded: 2020-02-09T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analyzing Mitochondrial Transport and Morphology in Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Neurons in Hereditary Spastic Paraplegia at JoVE.com

وقد تم دعم هذا العمل من قبل مؤسسة الشلل النصفي التشنجي، ومؤسسة بليزر، والمعهد الوطني للصحة (R21NS109837).

1. توليد الخلايا العصبية الجلوتامات من iPSCs telencephalic
ملاحظة: البروتوكول التفصيلي للحفاظ على iPSCs وتمايزها إلى الخلايا العصبية الجلوتامية telencephalic مماثلة لتلك التي وصفت سابقا18. هنا ، يتم إدخال العملية الحرجة أثناء تمايز الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات وتسليط ?...

<ol>
	<li>Brown, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+transport+of+membranous+and+nonmembranous+cargoes:+a+unified+perspective.">Axonal transport of membranous and nonmembranous cargoes: a unified perspective.</a> Journal of Cell Biology. 160 (6), 817-821 (2003).</li><li>Morris, R. L., Hollenbeck, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+transport+of+mitochondria+along+microtubules+and+F-actin+in+living+vertebrate+neurons.">Axonal transport of mitochondria along microtubules and F-actin in living vertebrate neurons.</a> The Journal of Cell Biology. 131 (5), 1315-1326 (1995).</li><li>Schwarz, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+trafficking+in+neurons.">Mitochondrial trafficking in neurons.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 5 (6), (2013).</li><li>Magrane, J., Cortez, C., Gan, W. B., Manfredi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+mitochondrial+transport+and+morphology+are+common+pathological+denominators+in+SOD1+and+TDP43+ALS+mouse+models.">Abnormal mitochondrial transport and morphology are common pathological denominators in SOD1 and TDP43 ALS mouse models.</a> Human Molecular Genetics. 23 (6), 1413-1424 (2014).</li><li>Alami, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+transport+of+TDP-43+mRNA+granules+is+impaired+by+ALS-causing+mutations.">Axonal transport of TDP-43 mRNA granules is impaired by ALS-causing mutations.</a> Neuron. 81 (3), 536-543 (2014).</li><li>Wang, X., Schwarz, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+axonal+transport+of+mitochondria.">Imaging axonal transport of mitochondria.</a> Methods in Enzymology. 457, 319-333 (2009).</li><li>Course, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+Imaging+Mitochondrial+Transport+in+Neurons.">Live Imaging Mitochondrial Transport in Neurons.</a> Neuromethods. 123, 49-66 (2017).</li><li>Chazotte, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Labeling+mitochondria+with+fluorescent+dyes+for+imaging.">Labeling mitochondria with fluorescent dyes for imaging.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2009 (6), 4948 (2009).</li><li>Meijering, E., Dzyubachyk, O., Smal, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+cell+and+particle+tracking.">Methods for cell and particle tracking.</a> Methods in Enzymology. 504, 183-200 (2012).</li><li>Bros, H., Hauser, A., Paul, F., Niesner, R., Infante-Duarte, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+Mitochondrial+Movement+Within+Neurons:+Manual+Versus+Automated+Tracking+Methods.">Assessing Mitochondrial Movement Within Neurons: Manual Versus Automated Tracking Methods.</a> Traffic. 16 (8), 906-917 (2015).</li><li>Calkins, M. J., Manczak, M., Mao, P., Shirendeb, U., Reddy, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+mitochondrial+biogenesis,+defective+axonal+transport+of+mitochondria,+abnormal+mitochondrial+dynamics+and+synaptic+degeneration+in+a+mouse+model+of+Alzheimer's+disease.">Impaired mitochondrial biogenesis, defective axonal transport of mitochondria, abnormal mitochondrial dynamics and synaptic degeneration in a mouse model of Alzheimer's disease.</a> Human Molecular Genetics. 20 (23), 4515-4529 (2011).</li><li>Denton, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+mitochondrial+dynamics+underlie+axonal+defects+in+hereditary+spastic+paraplegias.">Impaired mitochondrial dynamics underlie axonal defects in hereditary spastic paraplegias.</a> Human Molecular Genetics. 27 (14), 2517-2530 (2018).</li><li>Kim-Han, J. S., Antenor-Dorsey, J. A., O'Malley, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+parkinsonian+mimetic,+MPP+,+specifically+impairs+mitochondrial+transport+in+dopamine+axons.">The parkinsonian mimetic, MPP+, specifically impairs mitochondrial transport in dopamine axons.</a> Journal of Neuroscience. 31 (19), 7212-7221 (2011).</li><li>Shirendeb, U. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutant+huntingtin's+interaction+with+mitochondrial+protein+Drp1+impairs+mitochondrial+biogenesis+and+causes+defective+axonal+transport+and+synaptic+degeneration+in+Huntington's+disease.">Mutant huntingtin's interaction with mitochondrial protein Drp1 impairs mitochondrial biogenesis and causes defective axonal transport and synaptic degeneration in Huntington's disease.</a> Human Molecular Genetics. 21 (2), 406-420 (2012).</li><li>Lo Giudice, T., Lombardi, F., Santorelli, F. M., Kawarai, T., Orlacchio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hereditary+spastic+paraplegia:+clinical-genetic+characteristics+and+evolving+molecular+mechanisms.">Hereditary spastic paraplegia: clinical-genetic characteristics and evolving molecular mechanisms.</a> Experimental Neurology. 261, 518-539 (2014).</li><li>Blackstone, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+pathways+of+hereditary+spastic+paraplegia.">Cellular pathways of hereditary spastic paraplegia.</a> Annual Review of Neuroscience. 35, 25-47 (2012).</li><li>Boisvert, E. M., Denton, K., Lei, L., Li, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+specification+of+telencephalic+glutamatergic+neurons+from+human+pluripotent+stem+cells.">The specification of telencephalic glutamatergic neurons from human pluripotent stem cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (74), e50321 (2013).</li><li>Zhu, P. P., Denton, K. R., Pierson, T. M., Li, X. J., Blackstone, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacologic+rescue+of+axon+growth+defects+in+a+human+iPSC+model+of+hereditary+spastic+paraplegia+SPG3A.">Pharmacologic rescue of axon growth defects in a human iPSC model of hereditary spastic paraplegia SPG3A.</a> Human Molecular Genetics. 23 (21), 5638-5648 (2014).</li><li>Marra, M. H., Tobias, Z. J., Cohen, H. R., Glover, G., Weissman, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+Time-Lapse+Imaging+in+the+Zebrafish+Lateral+Line:+A+Flexible,+Open-Ended+Research+Project+for+an+Undergraduate+Neurobiology+Laboratory+Course.">In Vivo Time-Lapse Imaging in the Zebrafish Lateral Line: A Flexible, Open-Ended Research Project for an Undergraduate Neurobiology Laboratory Course.</a> Journal of Undergraduate Neuroscience Education. 13 (3), 215-224 (2015).</li><li>Kang, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Docking+of+axonal+mitochondria+by+syntaphilin+controls+their+mobility+and+affects+short-term+facilitation.">Docking of axonal mitochondria by syntaphilin controls their mobility and affects short-term facilitation.</a> Cell. 132 (1), 137-148 (2008).</li><li>Mou, Y., Li, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rescue+axonal+defects+by+targeting+mitochondrial+dynamics+in+hereditary+spastic+paraplegias.">Rescue axonal defects by targeting mitochondrial dynamics in hereditary spastic paraplegias.</a> Neural Regeneration Research. 14 (4), 574-577 (2019).</li><li>Huang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+photostable+naphthalimide-based+fluorescent+probe+for+mitochondrial+imaging+and+tracking.">New photostable naphthalimide-based fluorescent probe for mitochondrial imaging and tracking.</a> Biosensors &amp; Bioelectronics. 71, 313-321 (2015).</li><li>Carvalho, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designed+benzothiadiazole+fluorophores+for+selective+mitochondrial+imaging+and+dynamics.">Designed benzothiadiazole fluorophores for selective mitochondrial imaging and dynamics.</a> Chemistry. 20 (47), 15360-15374 (2014).</li><li>Yamakoshi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensitive+and+specific+Raman+probe+based+on+bisarylbutadiyne+for+live+cell+imaging+of+mitochondria.">A sensitive and specific Raman probe based on bisarylbutadiyne for live cell imaging of mitochondria.</a> Bioorganic &amp; Medicinal Chemistry Letters. 25 (3), 664-667 (2015).</li><li>Neumann, S., Chassefeyre, R., Campbell, G. E., Encalada, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KymoAnalyzer:+a+software+tool+for+the+quantitative+analysis+of+intracellular+transport+in+neurons.">KymoAnalyzer: a software tool for the quantitative analysis of intracellular transport in neurons.</a> Traffic. 18 (1), 71-88 (2017).</li><li>Chen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+for+quantifying+mitochondrial+axonal+transport.">A new method for quantifying mitochondrial axonal transport.</a> Protein &amp; Cell. 7 (11), 804-819 (2016).</li><li>De Vos, K. J., Sheetz, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+and+quantification+of+mitochondrial+dynamics+in+living+animal+cells.">Visualization and quantification of mitochondrial dynamics in living animal cells.</a> Methods in Cell Biology. 80, 627-682 (2007).</li><li>Denton, K. R., Xu, C. C., Li, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+Axonal+Phenotypes+with+Human+Pluripotent+Stem+Cells.">Modeling Axonal Phenotypes with Human Pluripotent Stem Cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1353, 309-321 (2016).</li><li>Andrews, S., Gilley, J., Coleman, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Difference+Tracker:+ImageJ+plugins+for+fully+automated+analysis+of+multiple+axonal+transport+parameters.">Difference Tracker: ImageJ plugins for fully automated analysis of multiple axonal transport parameters.</a> Journal of Neuroscience Methods. 193 (2), 281-287 (2010).</li><li>Reis, G. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+motor+function+in+axonal+transport+in+vivo+probed+by+genetic+and+computational+analysis+in+Drosophila.">Molecular motor function in axonal transport in vivo probed by genetic and computational analysis in Drosophila.</a> Molecular Biology of the Cell. 23 (9), 1700-1714 (2012).</li><li>Broeke, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+quantification+of+cellular+traffic+in+living+cells.">Automated quantification of cellular traffic in living cells.</a> Journal of Neuroscience Methods. 178 (2), 378-384 (2009).</li><li>Welzel, O., Knorr, J., Stroebel, A. M., Kornhuber, J., Groemer, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+fast+and+robust+method+for+automated+analysis+of+axonal+transport.">A fast and robust method for automated analysis of axonal transport.</a> European Biophysics Journal : EBJ. 40 (9), 1061-1069 (2011).</li><li>Mukherjee, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+kymograph+analysis+for+profiling+axonal+transport+of+secretory+granules.">Automated kymograph analysis for profiling axonal transport of secretory granules.</a> Medical Image Analysis. 15 (3), 354-367 (2011).</li><li>Klionsky, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+use+and+interpretation+of+assays+monitoring+autophagy.">Guidelines for the use and interpretation of assays monitoring autophagy.</a> Autophagy. 12, 1 (2016).</li><li>Metivier, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytofluorometric+detection+of+mitochondrial+alterations+in+early+CD95/Fas/APO-1-triggered+apoptosis+of+Jurkat+T+lymphoma+cells.+Comparison+of+seven+mitochondrion-specific+fluorochromes.">Cytofluorometric detection of mitochondrial alterations in early CD95/Fas/APO-1-triggered apoptosis of Jurkat T lymphoma cells. Comparison of seven mitochondrion-specific fluorochromes.</a> Immunology Letters. 61 (2-3), 157-163 (1998).</li><li>Scaduto, R. C., Grotyohann, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+mitochondrial+membrane+potential+using+fluorescent+rhodamine+derivatives.">Measurement of mitochondrial membrane potential using fluorescent rhodamine derivatives.</a> Biophysical Journal. 76, 469-477 (1999).</li><li>Liu, X., Yang, L., Long, Q., Weaver, D., Hajnoczky, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choosing+proper+fluorescent+dyes,+proteins,+and+imaging+techniques+to+study+mitochondrial+dynamics+in+mammalian+cells.">Choosing proper fluorescent dyes, proteins, and imaging techniques to study mitochondrial dynamics in mammalian cells.</a> Biophysics Reports. 3 (4), 64-72 (2017).</li><li>Zhou, B., Lin, M. Y., Sun, T., Knight, A. L., Sheng, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+mitochondrial+transport+in+neurons.">Characterization of mitochondrial transport in neurons.</a> Methods in Enzymology. 547, 75-96 (2014).</li></ol>

تصف هذه المقالة طريقة لتحليل نقل الميتوكوندريا ومورفولوجيا في محاور عصبية باستخدام صبغة الفلورسنت الحمراء وبرنامج ImageJ ، وكلاهما يوفر منصة فريدة لدراسة الضمور المحوري ومورفولوجيا الميتوكوندريا في الأمراض العصبية. هناك العديد من الخطوات الهامة في البروتوكول ، بما في ذلك تلطيخ الميتوكون?...

تلعب الحركة التوزيعية الميتوكوندريا دورًا حيويًا في تلبية المطالب النشطة المتغيرة والمتخصصة في الخلايا العصبية المستقطبة. الخلايا العصبية يمكن أن تمتد محاور طويلة للغاية للتواصل مع الأهداف من خلال تشكيل نقاط الاشتباك العصبي، والتي تتطلب مستويات عالية من الطاقة لكاليفورنيا2 + التخزين المؤقت والتيارات الأيون. نقل الميتوكوندريا من سوما إلى محور عصبي أمر بالغ الأهمية لدعم وظيفة المحاور العصبية ومتشابك من الخلايا العصبية. يتم إجراء حركة الميتوكوندريا الديناميكية مكانيًا وزمنيًا عن طريق النقل المحوري السريع بمعدلات عدة ميكرومترات في الثانية1.
على وجه التحديد، البروتينات الحركية أو المحولة، مثل kinesin وdynein، والمشاركة في النقل العضي السريع على طول microtubules للسيطرة على حركة الميتوكوندريا2،3. يتطلب النشاط العصبي العادي النقل السليم للميتوكوندريا المجمعة حديثًا من سوما الخلايا العصبية إلى محور عصبي بعيد (النقل المحوري الأنتري) والنقل العكسي للميتوكوندريا من محور عصبي بعيد إلى جسم الخلية (النقل الرجعي). وقد أشارت الدراسات الحديثة إلى أن تخصيص الميتوكوندريا غير لائق يرتبط بقوة مع عيوب الخلايا العصبية والأمراض التنكسية الخلايا العصبية الحركية4,5. لذلك ، لتشريح دور الميتوكوندريا في التنكس العصبي ، من المهم إنشاء طرق لفحص حركة الميتوكوندريا على طول المحاور في الثقافات الحية.
هناك تحديان رئيسيان في فحص وتحليل تتبع الميتوكوندريا: (1) تحديد الميتوكوندريا من الخلفية في كل إطار ، و (2) تحليل وتوليد الروابط بين كل إطار. في حل التحدي الأول ، يتم استخدام نهج وضع العلامات على نطاق واسع لتمييز الميتوكوندريا عن الخلفية ، مثل صبغة MitoTracker أو الترانفسيفان للميتوكوندريا المنصهر ة الفلورية التي تستهدف البروتين (على سبيل المثال ، mito-GFP)6،7،8. لتحليل الارتباط بين الإطارات ، تم وصف العديد من الخوارزميات وأدوات البرامج في الدراسات السابقة9. في ورقة حديثة، قارن الباحثون أربع أدوات آلية مختلفة (على سبيل المثال، Volocity، Imaris، wrMTrck، وتعقب الفرق) لتحديد النقل الميتوكوندريا. وأظهرت النتائج أنه على الرغم من التناقضات في طول المسار، وإزاحة الميتوكوندريا، ومدة الحركة، والسرعة، فإن هذه الأدوات الآلية مناسبة لتقييم فرق النقل بعد العلاج10. بالإضافة إلى هذه الأدوات ، تم استخدام البرنامج المساعد المتكامل "وحدات الماكرو" لImageJ (كتبه ريتدورف وSeitz) على نطاق واسع لتحليل نقل الميتوكوندريا11. تولد هذه الطريقة الكيموغرافيات التي يمكن استخدامها لتحليل حركة الميتوكوندريا، بما في ذلك السرعة في كل من الاتجاهات السابقة وإلى الوراء.
الميتوكوندريا هي العضيات ديناميكية للغاية التي تتغير باستمرار في العدد والمورفولوجيا استجابة لكل من الحالات الفسيولوجية والمرضية. الانشطار الميتوكوندريا والانصهار تنظيم بإحكام مورفولوجيا الميتوكوندريا والتوازن. يمكن أن يؤدي عدم التوازن بين الانشطار الميتوكوندريا والانصهار إلى شبكات الميتوكوندريا القصيرة أو الطويلة للغاية ، والتي يمكن أن تضعف وظيفة الميتوكوندريا وتؤدي إلى أنشطة عصبية غير طبيعية وانحطاط عصبي. ويشارك ضعف نقل الميتوكوندريا ومورفولوجيا في مختلف الأمراض العصبية التنكسية, مثل مرض الزهايمر, مرض باركنسون, مرض هنتنغتون, والشلل النصفي التشنجي الوراثي (HSP)12,13,14,15. HSP هي مجموعة غير متجانسة من الاضطرابات العصبية الموروثة التي تتميز بانحطاط الجهاز القشري والفشل اللاحق في السيطرة على عضلات الأطراف السفلية16،17. في هذه الدراسة, وتستخدم الخلايا العصبية الأمامية المستمدة من iPSC لتقييم نقل الميتوكوندريا ومورفولوجيا في HSP. توفر هذه الطريقة نموذجًا فريدًا لفحص ديناميكيات الميتوكوندريا من المحاور العصبية في الثقافات الحية.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Accutase Cell Detachment Solution</td>
			<td>Innovative Cell Technologies</td>
			<td>AT104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosafety hood</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>1300 SERIES A2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A-7906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain derived neurotrophic factor (BDNF)</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>450-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>Sorvall Legend X1R/ 75004261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td>Chemiglass Life Sciences</td>
			<td>1760-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyclic AMP (cAMP)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D0627</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17105-041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dorsomorphin</td>
			<td>Selleckchem</td>
			<td>S7146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified eagle medium with F12 nutrient mixture (DMEM/F12)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-092-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>16141-002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibroblast growth factor 2 (FGF2, bFGF)</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-18B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Geltrex LDEV-Free Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A1413201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gem21 NeuroPlex Serum-Free Supplement</td>
			<td>Gemini</td>
			<td>400-160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Bottom Dishes</td>
			<td>MatTek</td>
			<td>P35G-0.170-14-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9&#39;&#39; glass pipetes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>14673-043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glial derived neurotrophic factor (BDNF)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D0627</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMAX-I</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin growth factor 1 (IGF1)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>M7512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Knockout Serum Replacer</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A31815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L-6274</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M3148-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MitoTracker CMXRos</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>M7512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21103-049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non Essential Amino Acids</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 NeuroPle Serum-Free Supplement</td>
			<td>Gemini</td>
			<td>400-163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus microscope IX83</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX83-ZDC2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phase contrast microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>CKX41/ IX2-SLP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-ornithine hydrobromide (polyornithine))</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB431542</td>
			<td>Stemgent</td>
			<td>04-0010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile 50ml Disposable Vacuum Filtration System 0.22 &#956;m Millipore Express&#174; Plus Membrane</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCGP00525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stericup 500/1000 ml Durapore 0.22 &#956;M PVDF</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCGVU10RE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tbr1 antibody (1:2000)</td>
			<td>Chemicon</td>
			<td>AB9616</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin inhibitor</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17075029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml tubes</td>
			<td>Phenix</td>
			<td>SS-PH50R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml tubes</td>
			<td>Phenix</td>
			<td>SS-PH15R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T25 flasks (untreated)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10861-572</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plugins for softwares</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-formats Package</td>
			<td><a href="http://downloads.openmicroscopy.org/bio-formats/5.1.0/" target="_blank">http://downloads.openmicroscopy.org/bio-formats/5.1.0/</a></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji software</td>
			<td><a href="https://fiji.sc/" target="_blank">https://fiji.sc/</a></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kymograph Plugin</td>
			<td><a href="https://www.embl.de/eamnet/html/body_kymograph.html" target="_blank">https://www.embl.de/eamnet/html/body_kymograph.html</a></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MultipleKymograph.class</td>
			<td><a href="https://www.embl.de/eamnet/html/body_kymograph.html" target="_blank">https://www.embl.de/eamnet/html/body_kymograph.html</a></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MultipleOverlay.class</td>
			<td><a href="https://www.embl.de/eamnet/html/body_kymograph.html" target="_blank">https://www.embl.de/eamnet/html/body_kymograph.html</a></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WalkingAverage.class</td>
			<td><a href="https://www.embl.de/eamnet/html/body_kymograph.html" target="_blank">https://www.embl.de/eamnet/html/body_kymograph.html</a></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StackDifference.class</td>
			<td><a href="https://www.embl.de/eamnet/html/body_kymograph.html" target="_blank">https://www.embl.de/eamnet/html/body_kymograph.html</a></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straighten_.jar</td>
			<td><a href="https://imagej.nih.gov/ij/plugins/straighten.html" target="_blank">https://imagej.nih.gov/ij/plugins/straighten.html</a></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tsp050706.txt</td>
			<td><a href="https://www.embl.de/eamnet/html/body_kymograph.html" target="_blank">https://www.embl.de/eamnet/html/body_kymograph.html</a></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analyzing mitochondrial transport and morphology in human induced pluripotent stem cell-derived neurons in hereditary spastic paraplegia

الخلايا العصبية لديها مطالب مكثفة للحصول على طاقة عالية من أجل دعم وظائفها. وقد لوحظ ضعف نقل الميتوكوندريا على طول محاور عصبية في الخلايا العصبية البشرية, التي قد تسهم في التنكس العصبي في مختلف الدول المرض. على الرغم من أنه من الصعب دراسة ديناميات الميتوكوندريا في الأعصاب البشرية الحية ، فإن مثل هذه النماذج حاسمة لدراسة دور الميتوكوندريا في التنكس العصبي. وصف هنا هو بروتوكول لتحليل نقل الميتوكوندريا ومورفولوجيا الميتوكوندريا في محاور عصبية الدماغ الأمامية المستمدة من الخلايا الجذعية المستحثة الإنسان (iPSCs). يتم تمييز iPSCs إلى الخلايا العصبية الجلوتامات telencephalic باستخدام أساليب راسخة. يتم تلطيخ الميتوكوندريا من الخلايا العصبية مع MITOTracker CMXRos، ويتم التقاط حركة الميتوكوندريا داخل محاور عصبية باستخدام مجهر التصوير الخلية الحية مجهزة حاضنة لثقافة الخلايا. يتم تحليل الصور الفاصلة الزمنية باستخدام البرامج مع "MultiKymograph" ، "المستورد Bioformat" ، والإضافات "وحدات الماكرو". يتم إنشاء Kymographs النقل الميتوكوندريا، ويتم قراءة متوسط سرعة الميتوكوندريا في الاتجاهات الانتريوية وإلى الوراء من الكيموغراف. فيما يتعلق بتحليل مورفولوجيا الميتوكوندريا ، يتم الحصول على طول الميتوكوندريا والمنطقة ونسبة العرض إلى الارتفاع باستخدام ImageJ. وباختصار، يسمح هذا البروتوكول بتوصيف الاتجار بالميتوكوندريا على طول محاور عصبية وتحليل مورفولوجيا ها لتسهيل دراسات الأمراض العصبية.

هنا ، تم تمييز iPSCs الإنسان إلى الخلايا العصبية الجلوتاميتي ة الخلايا العصبية telencephalic ، والتي تميزت بتلطيخ المناعة مع علامات Tbr1 و αIII tubulin(الشكل 1A). لفحص النقل المحوري للميتوكوندريا ، كانت هذه الخلايا ملطخة بصبغة فلورية حمراء ، وتم إجراء التصوير بفارق زمني. نظرًا لأن...

Watch this Scientific Journal Video about Analyzing Mitochondrial Transport and Morphology in Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Neurons in Hereditary Spastic Paraplegia at JoVE.com

Analyzing Mitochondrial Transport and Morphology in Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Neurons in Hereditary Spastic Paraplegia

ويشارك ضعف نقل الميتوكوندريا ومورفولوجيا في مختلف الأمراض العصبية التنكسية. يستخدم البروتوكول المقدم الخلايا العصبية الجذعية المشتقة من الخلايا الجذعية المستحثة لتقييم نقل الميتوكوندريا والمورفولوجيا في الشلل النصفي التشنجي الوراثي. يسمح هذا البروتوكول بتوصيف الاتجار بالميتوكوندريا على طول المحاور وتحليل مورفولوجيا ها ، مما سيسهل دراسة الأمراض العصبية.

تحليل نقل الميتوكوندريا ومورفولوجيا في الخلايا العصبية الجذعية المستحثة البشرية متعددة القدرات المشتقة من الخلايا الجذعية في الشلل النصفي التشنجي الوراثي

Neurons have intense demands for high energy in order to support their functions. Impaired mitochondrial transport along axons has been observed in human ...

الخلل في الميتوكوندريا يكمن وراء العديد من الأمراض العصبية. بروتوكولنا يوفر أداة هامة لدراسة ديناميات الميتوكوندريا في محاور عصبية، وتسهيل دراسة الأمراض العصبية التي تنطوي على انحطاط عصبي. من خلال الجمع بين وضع العلامات الميتوكوندريا، والتصوير الحي للخلايا وتكنولوجيا الخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات، يمكن استخدام بروتوكولنا لتوصيف الاتجار بالميتوكوندريا على طول المحاور البشرية وتحليل الصفات المورفورية الخاصة بها.ويمكن ملاحظة ضعف في نقل الميتوكوندريا ومورفولوجيا في ثقافات الخلايا الجذعية والنماذج الحيوانية للأمراض العصبية التي توفر أهدافا علاجية محتملة لعلاج هذه الأمراض. بعد يوم خمسة وثلاثين من الثقافة، وفصل الخلايا العصبية التي تم تمييزها من الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان إلى مجموعات صغيرة مع 1 ملغ/مل من محلول انفصال الخلايا لمدة دقيقتين عند 37 درجة مئوية. في نهاية الحضانة جمع مجموعات الخلية عن طريق الطرد المركزي وإعادة تعليق بيليه في ملليلتر واحد من NDM.لوحة حوالي خمس مجموعات من الخلايا في مائة ميكرولتردات من المتوسط في بوليورينيثين واللاكتوز dehydrogenase رفع الفيروس خالية من فيروس انخفاض عامل النمو غشاء الطابق السفلي مصفوفة المغلفة 35 ملليمتر الأطباق القاع الزجاجي. ثم إضافة ملليلتر واحد من NDM تكملها B27، دوري أدينوسين أحادي الفوسفات، عامل النمو مثل الأنسولين، عامل التغذية العصبية المشتقة من الدماغ البشري وعامل التغذية العصبية المستمدة من الخلايا الدبقية إلى كل ثقافة. لتصور الميتوكوندريا على طول محاور عصبية من الخلايا العصبية forebrain وصمة عار الخلايا العصبية مع 50 نانومولار صبغة فلورية حمراء في NDM لمدة ثلاث دقائق في 37 درجة مئوية تليها اثنين من يغسل في NDM الدافئة.بعد ذلك، ضع الثقافة على خشبة مسرح المجهر المفلور واختر الهدف 40X. في إطار حقل المرحلة تحديد محاور أساس خصائصها المورفولوجية. لتمييز اتجاه حركة الميتوكوندريا على طول المحاور تحديد بوضوح خلايا الخلايا العصبية.بعد التمييز بين الجسم الخلية ومحور عصبي ضبط وقت التعرض والتركيز من الميتوكوندريا في المحاور والتقاط النقل الميتوكوندريا داخل المحاور كل خمس ثوان لما مجموعه خمس دقائق. لتحليل النقل الميتوكوندريا في ImageJ فتح فيجي وحدد المساعد تنسيقات الحيوي. استخدم مستورد التنسيقات الحيوية لاستيراد الصور الفاصلة زمنيًا لسلسلة tiff وحدد ImageJ القياسي وفتح كل السلسلة.تحقق من تقسيم القنوات تلقائياً وانقر فوق موافق مع الحرص على ملاحظة رقم الإطار وحجم الصور بالبكسل. بعد ضبط السطوع والتباين لجميع الإطارات 60 استخدام خط مجزأة لرسم خط من جسم الخلية إلى محور عصبي المحطة الطرفية. لإنشاء Kymograph حدد البرنامج المساعد كيموغراف متعددة وحدد عرض الخط.لقياس المسافة، والقيم الزمنية والسرعة للميتوكوندريا المتحركة المفتوحة tsp050607. txt في البرنامج المساعد وحدات الماكرو. ورسم خط مجزأة على أثر حركة الميتوكوندريا على kymograph من أعلى إلى المنطقة الأدنى.بعد رسم خط فتح سرعات القراءة من ملعقة صغيرة في المساعد وحدات الماكرو لقراءة السرعات المجزأة المقابلة للخط. المقبل فتح الصورة الأصلية واستخدام أداة خط لرسم خط على طول شريط المقياس. حدد التحليل لقياس طول الخط وتحويل dx الآن ووحدات المسافة من وحدات البكسل إلى ميكرومتر.ثم قم بتغيير الوقت من البكسل إلى الثواني. لتحليل طول الميتوكوندريا والمساحة داخل المحاور في ImageJ تثبيت تثبيت سقسقة نقطة سفلية المساعد JAR وفتح صورة محور عصبي من الفائدة. تحويل صورة 32 بت إلى ثمانية بت واستخدام أداة خط مجزأة لتتبع محور عصبي.حدد البرنامج المساعد سفلي مستقيم JAR وتعيين عرض خط خيوط واسعة إلى 50 بكسل. تتبع محور عصبي مرة أخرى لتوليد محور عصبي مستقيم وضبط عتبة الصورة. حدد تحليل مجموعة القياسات التي تناسب حدود القطع الناقص وواصفات الشكل لتعيين القياس واستخدام وظيفة الخط لقياس شريط المقياس في الصورة الأصلية كما هو موضح.تحت تحليل وتعيين مقياس أدخل المسافة في المسافة بكسل المعروفة ووحدة الطول لتعيين مقياس. ثم حدد العمومية لتعيين إعداد مقياس إلى كافة الصور. وأخيراً حدد تحليل وتحليل الجسيمات لتحديد المنطقة وتحديد نتائج العرض لعرض القياس الناتج.بعد التمايز في الخلايا العصبية الغلوتاماتيرية التي لا الدماغ يمكن أن تتميز الخلايا من قبل بهم T-B-R واحد وبيتا ثلاثة تعبير علامة tubulin. يلطّخ مع أحمر صبغة فلورسنت ووقت الفاصل تصوير يسمح تقييم النقل المحوري للميتوكوندريا. يمكن أن يظل الميتوكوندريون الواحد ثابتًا أو يتحرك في اتجاه اظرون أو رجعي داخل محور عصبي.ويمكن تحديد سرعة حركة الميتوكوندريا على طول محور عصبي كما هو موضح. على سبيل المثال باستخدام برامج التحليل المتاحة تجارياً، يتم تخفيض النسبة المئوية للميتوكوندريا المتحركة بشكل كبير في الخلايا العصبية S-P-G-3-A مقارنة بالخلايا العصبية من النوع البري. لتحليل طول منطقة الميتوكوندريا ومحورات محور الارتفاع يمكن تقويمها في برنامج تحليل الصور وتحديدها عن طريق ضبط العتبة.ويمكن بعد ذلك الحصول على عرض طول محيط منطقة الميتوكوندريا ونسبة العرض إلى الارتفاع من محور الدوران المُستقيم. على سبيل المثال يتم تقليل طول الميتوكوندريا ونسبة العرض إلى الارتفاع بشكل كبير في المحاور العصبية S-P-G 15 مقارنة بـتحكم في المحاور من النوع البري. من المهم تدفئة الوسط وحاضنة المجهر لغسل الخلايا بلطف والسماح للخلايا بالستقر لمدة عشرين دقيقة قبل التصوير.بعد التصوير الخلية الحية يمكن إصلاح الثقافات واخضاعها للمناعة لفحص التعبير عن البروتينات الأخرى ذات الاهتمام. ومن الصعب دراسة ديناميات الميتوكوندريا في الأعصاب البشرية الحية. هذه التقنية توفر أداة فريدة لدراسة ديناميات الميتوكوندريا وانحطاط الأعصاب في الأمراض العصبية.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuromodulation and Mitochondrial Transport: Live Imaging in Hippocampal Neurons over Long Durations

تعديل العمليات العصبية والنقل الميتوكوندريا : تصوير مباشر في الخلايا العصبية الحصين خلال فترات طويلة

To understand the relationship between mitochondrial transport and neuronal function, it is critical to observe mitochondrial behavior in live cultured ...

Efficient Derivation of Human Neuronal Progenitors and Neurons from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

كفاءة اشتقاق أسلاف الإنسان متعلق بالخلايا العصبية والخلايا العصبية من افرة القوة الخلايا الجذعية الجنينية البشرية التعريفي مع جزيء صغير

There is a large unfulfilled need for a clinically-suitable human neuronal cell source for repair or regeneration of the damaged central nervous system ...

The Specification of Telencephalic Glutamatergic Neurons from Human Pluripotent Stem Cells

مواصفات من الخلايا العصبية الجلوتاميرجي الدماغ الانتهائي من خلايا الجذعية المحفزة

Here, a stepwise procedure for efficiently generating telencephalic glutamatergic neurons from human pluripotent stem cells (PSCs) has been described. The ...

Analyzing Dendritic Morphology in Columns and Layers

تحليل الجذعية الصرف في الأعمدة والطبقات

In many regions of the central nervous systems, such as the fly optic lobes and the vertebrate cortex, synaptic circuits are organized in layers and ...

Modelling Zika Virus Infection of the Developing Human Brain In Vitro Using Stem Cell Derived Cerebral Organoids

Modelling Zika Virus Infection of the Developing Human Brain In Vitro Using Stem Cell Derived Cerebral Organoids

نمذجة عدوى فيروس زكى من وضع الدماغ البشري في المختبر باستخدام الخلايا الجذعية المشتقة من أورجانويدس الدماغي

The recent emergence of Zika virus (ZIKV) in susceptible populations has led to an abrupt increase in microcephaly and other neurodevelopmental conditions ...

Method for High Speed Stretch Injury of Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Neurons in a 96-well Format

أسلوب لإصابة الإنسان تمتد عالية السرعة التي يسببها Pluripotent الخلايا الجذعية المشتقة من الخلايا العصبية في شكل جيد 96

Traumatic brain injury (TBI) is a major clinical challenge with high morbidity and mortality. Despite decades of pre-clinical research, no proven ...

Compartmentalization of Human Stem Cell-Derived Neurons within Pre-Assembled Plastic Microfluidic Chips

تقسيم الخلايا العصبية المشتقة من الخلايا الجذعية البشرية داخل رقائق Microfluidic البلاستيكية التي تم تجميعها مسبقًا

Use of microfluidic devices to compartmentalize cultured neurons has become a standard method in neuroscience. This protocol shows how to use a ...

Post-differentiation Replating of Human Pluripotent Stem Cell-derived Neurons for High-content Screening of Neuritogenesis and Synapse Maturation

إعادة طلاء الخلايا العصبية البشرية المتعددة القوى المستمدة من الخلايا الجذعية من أجل فحص المحتوى العالي من تكوين النيونيتوجينيووووووين ونضج المشبك

Neurons differentiated in two-dimensional culture from human pluripotent stem-cell-derived neural progenitor cells (NPCs) represent a powerful model ...

Conversion of Human Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) into Functional Spinal and Cranial Motor Neurons Using PiggyBac Vectors

Conversion of Human Induced Pluripotent Stem Cells iPSCs into Functional Spinal and Cranial Motor Neurons Using PiggyBac Vectors

تحويل الخلايا الجذعية مستحث البشرية المستحثة (iPSCs) في العمود الفقري الوظيفي الشوكي والجمجمة الحركية باستخدام متجات البكالوريا

We describe here a method to obtain functional spinal and cranial motor neurons from human induced pluripotent stem cells (iPSCs). Direct conversion into ...