Name: analyzing mitochondrial transport and morphology in human induced pluripotent stem cell-derived neurons in hereditary spastic paraplegia
Uploaded: 2020-02-09T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analyzing Mitochondrial Transport and Morphology in Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Neurons in Hereditary Spastic Paraplegia at JoVE.com

העבודה הזאת נתמכת על ידי הקרן הפרספסטית, קרן בלייזר ו-NIH (R21NS109837).

1. הדור של נוירונים telencephalic glutamatergic מ iPSCs
הערה: הפרוטוקול המפורט לשמירת iPSCs והבידול שלהם לתוך הנוירונים telencephalic glutamatergic דומים לאלה שתוארו בעבר18. כאן, התהליך הקריטי במהלך הבידול של תאי גזע האדם רב עוצמה מוצג ומודגש.
<ol><li>תרבות iPSCs על העכבר מעובריים מתחלקים (MEF) מזיני?...

<ol>
	<li>Brown, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+transport+of+membranous+and+nonmembranous+cargoes:+a+unified+perspective.">Axonal transport of membranous and nonmembranous cargoes: a unified perspective.</a> Journal of Cell Biology. 160 (6), 817-821 (2003).</li><li>Morris, R. L., Hollenbeck, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+transport+of+mitochondria+along+microtubules+and+F-actin+in+living+vertebrate+neurons.">Axonal transport of mitochondria along microtubules and F-actin in living vertebrate neurons.</a> The Journal of Cell Biology. 131 (5), 1315-1326 (1995).</li><li>Schwarz, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+trafficking+in+neurons.">Mitochondrial trafficking in neurons.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 5 (6), (2013).</li><li>Magrane, J., Cortez, C., Gan, W. B., Manfredi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+mitochondrial+transport+and+morphology+are+common+pathological+denominators+in+SOD1+and+TDP43+ALS+mouse+models.">Abnormal mitochondrial transport and morphology are common pathological denominators in SOD1 and TDP43 ALS mouse models.</a> Human Molecular Genetics. 23 (6), 1413-1424 (2014).</li><li>Alami, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+transport+of+TDP-43+mRNA+granules+is+impaired+by+ALS-causing+mutations.">Axonal transport of TDP-43 mRNA granules is impaired by ALS-causing mutations.</a> Neuron. 81 (3), 536-543 (2014).</li><li>Wang, X., Schwarz, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+axonal+transport+of+mitochondria.">Imaging axonal transport of mitochondria.</a> Methods in Enzymology. 457, 319-333 (2009).</li><li>Course, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+Imaging+Mitochondrial+Transport+in+Neurons.">Live Imaging Mitochondrial Transport in Neurons.</a> Neuromethods. 123, 49-66 (2017).</li><li>Chazotte, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Labeling+mitochondria+with+fluorescent+dyes+for+imaging.">Labeling mitochondria with fluorescent dyes for imaging.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2009 (6), 4948 (2009).</li><li>Meijering, E., Dzyubachyk, O., Smal, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+cell+and+particle+tracking.">Methods for cell and particle tracking.</a> Methods in Enzymology. 504, 183-200 (2012).</li><li>Bros, H., Hauser, A., Paul, F., Niesner, R., Infante-Duarte, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+Mitochondrial+Movement+Within+Neurons:+Manual+Versus+Automated+Tracking+Methods.">Assessing Mitochondrial Movement Within Neurons: Manual Versus Automated Tracking Methods.</a> Traffic. 16 (8), 906-917 (2015).</li><li>Calkins, M. J., Manczak, M., Mao, P., Shirendeb, U., Reddy, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+mitochondrial+biogenesis,+defective+axonal+transport+of+mitochondria,+abnormal+mitochondrial+dynamics+and+synaptic+degeneration+in+a+mouse+model+of+Alzheimer's+disease.">Impaired mitochondrial biogenesis, defective axonal transport of mitochondria, abnormal mitochondrial dynamics and synaptic degeneration in a mouse model of Alzheimer's disease.</a> Human Molecular Genetics. 20 (23), 4515-4529 (2011).</li><li>Denton, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+mitochondrial+dynamics+underlie+axonal+defects+in+hereditary+spastic+paraplegias.">Impaired mitochondrial dynamics underlie axonal defects in hereditary spastic paraplegias.</a> Human Molecular Genetics. 27 (14), 2517-2530 (2018).</li><li>Kim-Han, J. S., Antenor-Dorsey, J. A., O'Malley, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+parkinsonian+mimetic,+MPP+,+specifically+impairs+mitochondrial+transport+in+dopamine+axons.">The parkinsonian mimetic, MPP+, specifically impairs mitochondrial transport in dopamine axons.</a> Journal of Neuroscience. 31 (19), 7212-7221 (2011).</li><li>Shirendeb, U. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutant+huntingtin's+interaction+with+mitochondrial+protein+Drp1+impairs+mitochondrial+biogenesis+and+causes+defective+axonal+transport+and+synaptic+degeneration+in+Huntington's+disease.">Mutant huntingtin's interaction with mitochondrial protein Drp1 impairs mitochondrial biogenesis and causes defective axonal transport and synaptic degeneration in Huntington's disease.</a> Human Molecular Genetics. 21 (2), 406-420 (2012).</li><li>Lo Giudice, T., Lombardi, F., Santorelli, F. M., Kawarai, T., Orlacchio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hereditary+spastic+paraplegia:+clinical-genetic+characteristics+and+evolving+molecular+mechanisms.">Hereditary spastic paraplegia: clinical-genetic characteristics and evolving molecular mechanisms.</a> Experimental Neurology. 261, 518-539 (2014).</li><li>Blackstone, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+pathways+of+hereditary+spastic+paraplegia.">Cellular pathways of hereditary spastic paraplegia.</a> Annual Review of Neuroscience. 35, 25-47 (2012).</li><li>Boisvert, E. M., Denton, K., Lei, L., Li, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+specification+of+telencephalic+glutamatergic+neurons+from+human+pluripotent+stem+cells.">The specification of telencephalic glutamatergic neurons from human pluripotent stem cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (74), e50321 (2013).</li><li>Zhu, P. P., Denton, K. R., Pierson, T. M., Li, X. J., Blackstone, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacologic+rescue+of+axon+growth+defects+in+a+human+iPSC+model+of+hereditary+spastic+paraplegia+SPG3A.">Pharmacologic rescue of axon growth defects in a human iPSC model of hereditary spastic paraplegia SPG3A.</a> Human Molecular Genetics. 23 (21), 5638-5648 (2014).</li><li>Marra, M. H., Tobias, Z. J., Cohen, H. R., Glover, G., Weissman, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+Time-Lapse+Imaging+in+the+Zebrafish+Lateral+Line:+A+Flexible,+Open-Ended+Research+Project+for+an+Undergraduate+Neurobiology+Laboratory+Course.">In Vivo Time-Lapse Imaging in the Zebrafish Lateral Line: A Flexible, Open-Ended Research Project for an Undergraduate Neurobiology Laboratory Course.</a> Journal of Undergraduate Neuroscience Education. 13 (3), 215-224 (2015).</li><li>Kang, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Docking+of+axonal+mitochondria+by+syntaphilin+controls+their+mobility+and+affects+short-term+facilitation.">Docking of axonal mitochondria by syntaphilin controls their mobility and affects short-term facilitation.</a> Cell. 132 (1), 137-148 (2008).</li><li>Mou, Y., Li, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rescue+axonal+defects+by+targeting+mitochondrial+dynamics+in+hereditary+spastic+paraplegias.">Rescue axonal defects by targeting mitochondrial dynamics in hereditary spastic paraplegias.</a> Neural Regeneration Research. 14 (4), 574-577 (2019).</li><li>Huang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+photostable+naphthalimide-based+fluorescent+probe+for+mitochondrial+imaging+and+tracking.">New photostable naphthalimide-based fluorescent probe for mitochondrial imaging and tracking.</a> Biosensors &amp; Bioelectronics. 71, 313-321 (2015).</li><li>Carvalho, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designed+benzothiadiazole+fluorophores+for+selective+mitochondrial+imaging+and+dynamics.">Designed benzothiadiazole fluorophores for selective mitochondrial imaging and dynamics.</a> Chemistry. 20 (47), 15360-15374 (2014).</li><li>Yamakoshi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensitive+and+specific+Raman+probe+based+on+bisarylbutadiyne+for+live+cell+imaging+of+mitochondria.">A sensitive and specific Raman probe based on bisarylbutadiyne for live cell imaging of mitochondria.</a> Bioorganic &amp; Medicinal Chemistry Letters. 25 (3), 664-667 (2015).</li><li>Neumann, S., Chassefeyre, R., Campbell, G. E., Encalada, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KymoAnalyzer:+a+software+tool+for+the+quantitative+analysis+of+intracellular+transport+in+neurons.">KymoAnalyzer: a software tool for the quantitative analysis of intracellular transport in neurons.</a> Traffic. 18 (1), 71-88 (2017).</li><li>Chen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+for+quantifying+mitochondrial+axonal+transport.">A new method for quantifying mitochondrial axonal transport.</a> Protein &amp; Cell. 7 (11), 804-819 (2016).</li><li>De Vos, K. J., Sheetz, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+and+quantification+of+mitochondrial+dynamics+in+living+animal+cells.">Visualization and quantification of mitochondrial dynamics in living animal cells.</a> Methods in Cell Biology. 80, 627-682 (2007).</li><li>Denton, K. R., Xu, C. C., Li, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+Axonal+Phenotypes+with+Human+Pluripotent+Stem+Cells.">Modeling Axonal Phenotypes with Human Pluripotent Stem Cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1353, 309-321 (2016).</li><li>Andrews, S., Gilley, J., Coleman, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Difference+Tracker:+ImageJ+plugins+for+fully+automated+analysis+of+multiple+axonal+transport+parameters.">Difference Tracker: ImageJ plugins for fully automated analysis of multiple axonal transport parameters.</a> Journal of Neuroscience Methods. 193 (2), 281-287 (2010).</li><li>Reis, G. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+motor+function+in+axonal+transport+in+vivo+probed+by+genetic+and+computational+analysis+in+Drosophila.">Molecular motor function in axonal transport in vivo probed by genetic and computational analysis in Drosophila.</a> Molecular Biology of the Cell. 23 (9), 1700-1714 (2012).</li><li>Broeke, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+quantification+of+cellular+traffic+in+living+cells.">Automated quantification of cellular traffic in living cells.</a> Journal of Neuroscience Methods. 178 (2), 378-384 (2009).</li><li>Welzel, O., Knorr, J., Stroebel, A. M., Kornhuber, J., Groemer, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+fast+and+robust+method+for+automated+analysis+of+axonal+transport.">A fast and robust method for automated analysis of axonal transport.</a> European Biophysics Journal : EBJ. 40 (9), 1061-1069 (2011).</li><li>Mukherjee, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+kymograph+analysis+for+profiling+axonal+transport+of+secretory+granules.">Automated kymograph analysis for profiling axonal transport of secretory granules.</a> Medical Image Analysis. 15 (3), 354-367 (2011).</li><li>Klionsky, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+use+and+interpretation+of+assays+monitoring+autophagy.">Guidelines for the use and interpretation of assays monitoring autophagy.</a> Autophagy. 12, 1 (2016).</li><li>Metivier, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytofluorometric+detection+of+mitochondrial+alterations+in+early+CD95/Fas/APO-1-triggered+apoptosis+of+Jurkat+T+lymphoma+cells.+Comparison+of+seven+mitochondrion-specific+fluorochromes.">Cytofluorometric detection of mitochondrial alterations in early CD95/Fas/APO-1-triggered apoptosis of Jurkat T lymphoma cells. Comparison of seven mitochondrion-specific fluorochromes.</a> Immunology Letters. 61 (2-3), 157-163 (1998).</li><li>Scaduto, R. C., Grotyohann, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+mitochondrial+membrane+potential+using+fluorescent+rhodamine+derivatives.">Measurement of mitochondrial membrane potential using fluorescent rhodamine derivatives.</a> Biophysical Journal. 76, 469-477 (1999).</li><li>Liu, X., Yang, L., Long, Q., Weaver, D., Hajnoczky, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choosing+proper+fluorescent+dyes,+proteins,+and+imaging+techniques+to+study+mitochondrial+dynamics+in+mammalian+cells.">Choosing proper fluorescent dyes, proteins, and imaging techniques to study mitochondrial dynamics in mammalian cells.</a> Biophysics Reports. 3 (4), 64-72 (2017).</li><li>Zhou, B., Lin, M. Y., Sun, T., Knight, A. L., Sheng, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+mitochondrial+transport+in+neurons.">Characterization of mitochondrial transport in neurons.</a> Methods in Enzymology. 547, 75-96 (2014).</li></ol>

מאמר זה מתאר שיטה לניתוח הובלה מיטוכונדריאלי ומורפולוגיה בדפוס עצבי באמצעות צבע פלורסנט אדום ותוכנת imagej, שניהם מספקים פלטפורמה ייחודית לחקר ניוון אקסונים ומורפולוגיה מיטוכונדרילית במחלות ניווניות. קיימים מספר שלבים קריטיים בפרוטוקול, כולל כתמים של המיטו, הדמיה של תאים חיים וניתוח התמו?...

תנועתיות מיטוכונדריאלי והפצה ממלאים תפקיד חיוני במילוי הדרישות האנרגטיות המיוחדות בנוירונים מקוטטים. נוירונים יכולים להאריך אקסונים ארוכים מאוד כדי להתחבר עם מטרות דרך היווצרות של הסינפסות, אשר דורשים רמות גבוהות של אנרגיה עבור Ca2 + אגירה וזרמים יון. תחבורה של המיטו, מ סומה כדי אקסון הוא קריטי לתמיכה בתפקוד אקסון ו סינפטית של נוירונים. התנועה מיטוכונדריאלי דינמי באופן זמני מתנהל על ידי הובלה סיבי מהירה בשיעורי מיקרומטר מספר1לשנייה.
במיוחד, חלבונים מוטוריים או מתאם, כגון קינזין ו dynein, להשתתף בתחבורה ארגונית מהירה לאורך microtubules לשלוט על התנועה שלהמיטומטר 2,3. פעילות עצבית נורמלית דורשת העברה נאותה של המיטו, החדשים מתוך הנוירואליות החדשה (הובלה אקסון) והעברה הפוכה של המיטוטרים מן המרוחק בחזרה אל גוף התא (הובלה רטרוגרדית). מחקרים שנעשו לאחרונה ציינו כי הקצאת מיטוכונדריאלי לא ראויה קשורה בחוזקה עם פגמים עצביים ומחלות ניווניות תא מנוע4,5. לכן, כדי לנתח את התפקיד של המיטו, בניוון נוירולוגי, חשוב להקים שיטות לבדיקת תנועה מיטוכונדריאלי לאורך האקסונים בתרבויות חיות.
ישנם שני אתגרים עיקריים בבדיקת וניתוח מעקב אחר המיטו, (1) זיהוי המיטוטרים מהרקע בכל מסגרת, ו (2) ניתוח ויצירת הקשרים בין כל מסגרת. בפתרון האתגר הראשון, גישה תיוג פלואורסצנטית משמש באופן נרחב כדי להבחין המיטומטר מן הרקע, כגון מיטואו לצבוע או העברה של מיטוכונדריזה של התמזגו פלואורסצנטי (למשל, mito-gfp)6,7,8. לניתוח הקשר בין מסגרות, מספר אלגוריתמים וכלי תוכנה תוארו במחקרים קודמים9. בעיתון האחרון, החוקרים לעומת ארבעה כלים אוטומטיים שונים (למשל, Volocity, Imaris אריס, wrMTrck, וההבדל עוקב) כדי לכמת הובלה מיטוכונדריאלי. התוצאות הראו כי למרות אי-התאמות באורך המסלול, העקירה מיטוכונדריאלי, משך התנועה, ומהירות, אלה כלים אוטומטיים מתאימים להערכת הפרשי התחבורה לאחר הטיפול10. בנוסף לכלים אלה, תוסף משולב "מאקרו" עבור ImageJ (נכתב על ידי Rietdorf ו-Seitz) נעשה שימוש נרחב לניתוח הובלה מיטוכונדריאלי11. שיטה זו מייצרת קימוגרפים שניתן להשתמש בהם לניתוח תנועה מיטוכונדריאלי, כולל מהירות בכיוונים כוללים וכיווני נסיגה.
מיטוכונמיטוa הם אורגלות דינמיות ביותר, שמשתנים באופן קבוע במספר ובמבנה מתוך תגובה לתנאים פיזיולוגיים ופתולוגיים. ביקוע מיטוכונדריאלי והיתוך בחוזקה להסדיר מורפולוגיה והומאוסטזיס. חוסר האיזון בין ביקוע מיטוכונדריאלי ופיוז'ן יכול לגרום לרשתות מיטוכונדריאליות קצרות או ארוכות במיוחד, שיכולות לפגוע בתפקוד מיטוכונדריאלי ולגרום לפעילות עצבית חריגה וניוון עצבי. הובלה מיטוכונדריאלי לקויה ומורפולוגיה מעורבים במחלות ניווניות שונות, כגון מחלת אלצהיימר, מחלת פרקינסון, מחלת הנטינגטון, ו מצנח העיוותים תורשתי (hsp)12,13,14,15. Hsp היא קבוצה הטרוגנית של הפרעות נוירולוגיות תורשתית המאופיינת הניוון של corticospinal בדרכי והכשל הבאים לשלוט שרירי הגפיים התחתונות16,17. במחקר זה, הנוירונים הנגזרות iPSC מראש משמשים להערכת הובלה מיטוכונדריאלי מורפולוגיה ב HSP. שיטה זו מספקת פרדיגמה ייחודית לבדיקת דינמיקה מיטוכונדריאלי של האקאונים העצביים בתרבויות חיות.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Accutase Cell Detachment Solution</td>
			<td>Innovative Cell Technologies</td>
			<td>AT104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosafety hood</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>1300 SERIES A2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A-7906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain derived neurotrophic factor (BDNF)</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>450-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>Sorvall Legend X1R/ 75004261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td>Chemiglass Life Sciences</td>
			<td>1760-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyclic AMP (cAMP)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D0627</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17105-041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dorsomorphin</td>
			<td>Selleckchem</td>
			<td>S7146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified eagle medium with F12 nutrient mixture (DMEM/F12)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-092-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>16141-002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibroblast growth factor 2 (FGF2, bFGF)</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-18B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Geltrex LDEV-Free Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A1413201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gem21 NeuroPlex Serum-Free Supplement</td>
			<td>Gemini</td>
			<td>400-160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Bottom Dishes</td>
			<td>MatTek</td>
			<td>P35G-0.170-14-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9&#39;&#39; glass pipetes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>14673-043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glial derived neurotrophic factor (BDNF)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D0627</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMAX-I</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin growth factor 1 (IGF1)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>M7512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Knockout Serum Replacer</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A31815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L-6274</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M3148-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MitoTracker CMXRos</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>M7512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21103-049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non Essential Amino Acids</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 NeuroPle Serum-Free Supplement</td>
			<td>Gemini</td>
			<td>400-163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus microscope IX83</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX83-ZDC2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phase contrast microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>CKX41/ IX2-SLP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-ornithine hydrobromide (polyornithine))</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB431542</td>
			<td>Stemgent</td>
			<td>04-0010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile 50ml Disposable Vacuum Filtration System 0.22 &#956;m Millipore Express&#174; Plus Membrane</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCGP00525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stericup 500/1000 ml Durapore 0.22 &#956;M PVDF</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCGVU10RE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tbr1 antibody (1:2000)</td>
			<td>Chemicon</td>
			<td>AB9616</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin inhibitor</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17075029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml tubes</td>
			<td>Phenix</td>
			<td>SS-PH50R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml tubes</td>
			<td>Phenix</td>
			<td>SS-PH15R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T25 flasks (untreated)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10861-572</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plugins for softwares</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-formats Package</td>
			<td><a href="http://downloads.openmicroscopy.org/bio-formats/5.1.0/" target="_blank">http://downloads.openmicroscopy.org/bio-formats/5.1.0/</a></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji software</td>
			<td><a href="https://fiji.sc/" target="_blank">https://fiji.sc/</a></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kymograph Plugin</td>
			<td><a href="https://www.embl.de/eamnet/html/body_kymograph.html" target="_blank">https://www.embl.de/eamnet/html/body_kymograph.html</a></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MultipleKymograph.class</td>
			<td><a href="https://www.embl.de/eamnet/html/body_kymograph.html" target="_blank">https://www.embl.de/eamnet/html/body_kymograph.html</a></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MultipleOverlay.class</td>
			<td><a href="https://www.embl.de/eamnet/html/body_kymograph.html" target="_blank">https://www.embl.de/eamnet/html/body_kymograph.html</a></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WalkingAverage.class</td>
			<td><a href="https://www.embl.de/eamnet/html/body_kymograph.html" target="_blank">https://www.embl.de/eamnet/html/body_kymograph.html</a></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StackDifference.class</td>
			<td><a href="https://www.embl.de/eamnet/html/body_kymograph.html" target="_blank">https://www.embl.de/eamnet/html/body_kymograph.html</a></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straighten_.jar</td>
			<td><a href="https://imagej.nih.gov/ij/plugins/straighten.html" target="_blank">https://imagej.nih.gov/ij/plugins/straighten.html</a></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tsp050706.txt</td>
			<td><a href="https://www.embl.de/eamnet/html/body_kymograph.html" target="_blank">https://www.embl.de/eamnet/html/body_kymograph.html</a></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analyzing mitochondrial transport and morphology in human induced pluripotent stem cell-derived neurons in hereditary spastic paraplegia

נוירונים יש דרישות אינטנסיבי לאנרגיה גבוהה על מנת לתמוך בתפקודים שלהם. לקויי הובלה מיטוכונדריאלי לאורך אקסונים נצפתה בנוירונים אנושיים, אשר עשויים לתרום נוירוניוון במצבי מחלה שונים. למרות שהוא מאתגר לבחון דינמיקה מיטוכונדריאלי בעצבים אנושיים חיים, תפיסות כאלה הן קריטיות ללימוד התפקיד של המיטו, בניוון שחור. המתואר כאן הוא פרוטוקול לניתוח הובלה מיטוכונדריאלי ומורפולוגיה מיטוכונדריאלי בתאי המוח המוחזקים שמקורם האדם המושרה pluripotent תאים גזע (. IPSCs מובחנים לתוך הנוירונים telencephalic glutamatergic באמצעות שיטות מבוססות היטב. המיטוטור של הנוירונים מוכתם עם MitoTracker CMXRos, ותנועה מיטוכונדריאלי בתוך האקסונים נלכדים באמצעות מיקרוסקופ לחיות הדמיה מצויד בחממה לתרבות התא. תמונות בזמן קפיצה מנותח באמצעות תוכנה עם "MultiKymograph", "היבואן Bioformat", ו "מאקרו" תוספים. הקייגרפים של תחבורה מיטוכונדריאלי מופקים, ומהירות מיטוכונדריאלי ממוצעת בכיוונים המודרכים והנסיגה מקריאה מהקימוגרף. בנוגע לניתוח מורפולוגיה מיטוכונדריאלי, אורך מיטוכונדריאלי, אזור ויחס גובה-רוחב מתקבלים באמצעות ImageJ. לסיכום, פרוטוקול זה מאפשר אפיון של סחר מיטוכונדריאלי לאורך אקסונים וניתוח של המבנה שלהם כדי להקל על מחקרים של מחלות ניווניות.

כאן, האדם iPSCs היו מובחנים לתוך telencephalic glutamatergic נוירונים, אשר התאפיין בהכתמים חיסוני עם Tbr1 ו βIII טובולין סמנים (איור 1א). כדי לבחון את התחבורה האקונלית של המיטו, תאים אלה היו מוכתמים בצבע פלורסנט אדום, והדמיה זמן בוצע. מאז ImageJ הוא זמין וקל להשגה, הובלה מיטוכונדריאלי היה ...

Watch this Scientific Journal Video about Analyzing Mitochondrial Transport and Morphology in Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Neurons in Hereditary Spastic Paraplegia at JoVE.com

Analyzing Mitochondrial Transport and Morphology in Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Neurons in Hereditary Spastic Paraplegia

הובלה מיטוכונדריאלי לקויה ומורפולוגיה מעורבים במחלות ניווניות שונות. הפרוטוקול המוצג משתמש מושרה המושרה תא גזע הנגזרת הנוירונים המוח כדי להעריך הובלה מיטוכונדריאלי ומורפולוגיה ב מפרסטית תורשתית. פרוטוקול זה מאפשר אפיון של סחר מיטוכונדריאלי לאורך אקסונים וניתוח של מורפולוגיה שלהם, אשר להקל על המחקר של מחלות ניווניות.

ניתוח הובלה מיטוכונדריאלי ומורפולוגיה בתאי גזע בעלי השפעה של האדם המושרה בנוירונים

Neurons have intense demands for high energy in order to support their functions. Impaired mitochondrial transport along axons has been observed in human ...

תפקוד מיטוכונדריאלי ביסוד מחלות ניווניות רבות. הפרוטוקול שלנו מספק כלי חשוב לבחינת הדינמיקה המיטוכונדרית באקסונים, ומקל על חקר מחלות נוירולוגיות המערבות ניוון אקסונאלי. על ידי שילוב של תיוג מיטוכונדריאלי, הדמיית תאים חיים וטכנולוגיית תאי גזע פלוריפוטנטית המושרה הפרוטוקול שלנו יכול לשמש כדי לאפיין סחר מיטוכונדריאלי לאורך אקסונים אנושיים ולנתח את המטומטמים שלהם.תחבורה מיטוכונדרית לקויה ומורפולוגיה ניתן לראות בתרבויות תאי גזע ומודלים של בעלי חיים של מחלות ניווניות מתן מטרות טיפוליות פוטנציאליות לטיפול במחלות אלה. לאחר יום שלושים וחמש של תרבות, לנתק את הנוירוזפרות נבדל מתאי גזע פלוריפוטנטיים הנגרמים על ידי האדם לתוך אשכולות קטנים עם 1 מ"ג / מ"ל של פתרון ניתוק תאים במשך שתי דקות ב 37 מעלות צלזיוס. בסוף הדגירה לאסוף את אשכולות התא על ידי צנטריפוגה ו resuspend את גלולה במיליליטר אחד של NDM.צלחת על חמישה אשכולות של תאים במאה microliters של בינוני לכל פוליאורניתאין ו לקטוז דהידרוגנאז מרומם את מגרצת ממברנת מרתף מקף ללא וירוס מצופה 35 מילימטר זכוכית התחתון כלים. לאחר מכן הוסיפו מיליליטר אחד של NDM בתוספת B27, מונופוספט אדנוזין מחזורי, גורם גדילה דמוי אינסולין, גורם נוירוטרופי המופק על ידי המוח האנושי וגורם נוירוטרופי הנגזר מתא גליה לכל תרבות. כדי לדמיין מיטוכונדריה לאורך האקסונים של נוירונים forebrain הראשון להכתים את הנוירונים עם 50 צבע פלואורסצנטי אדום nanomolar ב NDM במשך שלוש דקות ב 37 מעלות צלזיוס ואחריו שתי שטיפות NDM חם.לאחר מכן, מקם את התרבות על הבמה של מיקרוסקופ פלואורסצנטי ובחר את המטרה 40X. תחת שדה הפאזה זהה את האקסונים בהתבסס על המאפיינים המורפולוגיים שלהם. כדי להבחין בכיוון התנועה המיטוכונדרית לאורך האקסונים לזהות בבירור את גופי התא של נוירונים.לאחר הבחנה גוף התא האקסון להתאים את זמן החשיפה ואת המוקד של המיטוכונדריה האקסונים וללכוד את התחבורה המיטוכונדרית בתוך האקסונים כל חמש שניות במשך חמש דקות בסך הכל. כדי לנתח הובלה מיטוכונדרית ב ImageJ לפתוח פיג'י ובחר את תוסף ביו פורמטים. השתמשו ביבואן Bio-Formats כדי לייבא את התמונות של סדרת tiff ולבחור ImageJ רגיל ולפתוח את כל הסדרות.בדקו ערוצים מפוצלים בקנה מידה אוטומטי ולחצו על הלחצן 'אשר' כדי לציין את מספר המסגרת ואת גודל התמונות בפיקסלים. לאחר התאמת הבהירות והניגודיות של כל 60 המסגרות, השתמש בקו מקובע כדי למתוח קו מגוף התא לאקסון המסוף. ליצירת הקימוגרף בחרו בתוסף Kymograph המרובים ובחרו ברוחב הקו.כדי למדוד את המרחק, ערכי הזמן והמהירות עבור המיטוכונדריה הנעה הפתוחה tsp050607. txt בתוסף פקודות המאקרו. ולצייר קו מקופל מעל עקבות התנועה המיטוכונדרית על הקימוגרף מהממונה על האזור הנחות.לאחר ציור הקו לפתוח מהירות קריאה מ- tsp בתוסף פקודות המאקרו כדי לקרוא את המהירויות מקולחות המתאימות לקו. לאחר מכן פתחו את התמונה המקורית ולהשתמש בכלי הקו כדי לצייר קו לאורך סרגל קנה המידה. בחר ניתוח כדי למדוד את אורך הקו ולהמיר את ה- dx כעת ואת יחידות המרחק מפיקסלים למיקרומטרים.לאחר מכן שנה את השעה מפיקסלים לשתיים. כדי לנתח את האורך המיטוכונדריאלי ואת האזור בתוך אקסונים ב ImageJ להתקין את תוסף מקף תחתון מקף תחתון ליישר JAR ולפתוח את תמונת האקסון של עניין. המירו את התמונה של 32 סיביות לשמונה סיביות ולהשתמש בכלי קו מקובע כדי לעקוב אחר האקסון.בחר את תוסף JAR מקף תחתון ישר ולהגדיר את רוחב קו רחב של תריס ל 50 פיקסלים. עקבו שוב אחר האקסון כדי ליצור אקסון מיישר ולהתאים את סף התמונה. בחרו 'ניתוח מדידות מוגדרות היקפיות מתאימות לאליפסה ולתארי צורה' כדי לקבוע את המדידה ולהשתמש בפונקציית הקו כדי למדוד את סרגל קנה המידה בתמונה המקורית כפי שהוכח.תחת ניתוח ולהגדרת קנה מידה הזן את המרחק במרחק הידוע של הפיקסלים ואת יחידת האורך כדי לקבוע את קנה המידה. לאחר מכן בחרו 'כללי' כדי להגדיר את הגדרת קנה המידה לכל התמונות. לבסוף בחר לנתח ולנתח חלקיקים כדי לקבוע את האזור ובחר תוצאות תצוגה כדי להציג את המדידה המתקבלת.לאחר בידול לתוך נוירונים גלוטמטרגיים telencephalic התאים יכולים להיות מאופיינים על ידי T-B-R שלהם אחד בטא שלוש ביטוי סמן tubulin. כתמים בצבע פלואורסצנטי אדום והדמיה לשגות בזמן מאפשר הערכה של התחבורה האקסונאלית של המיטוכונדריה. מיטוכונדריה אחת יכולה להישאר סטטית או לנוע בכיוון אנטרוגרדי או מדרדר בתוך אקסון.את מהירות התנועה המיטוכונדרית לאורך האקסון ניתן לכמת כפי שמודגם. לדוגמה באמצעות תוכנת ניתוח מסחרית זמינה אחוז המיטוכונדריה מוטיב מופחת באופן משמעותי נוירונים S-P-G-3-A בהשוואה נוירונים סוג הבר. כדי לנתח את אורך האזור המיטוכונדריאלי ואת יחס הגובה-רוחב אקסונים יכולים להתיישר בתוכנת ניתוח התמונה ונבחרים על-ידי התאמת הסף.לאחר מכן ניתן לקבל את רוחב אורך ההיקף של אזור המיטוכונדריה ויחס הגובה-רוחב מהאקסון המיישר. לדוגמה, הן אורך המיטוכונדריה והן יחס הגובה-רוחב מופחתים באופן משמעותי באקסונים של נוירונים מסוג S-P-G 15 בהשוואה לשליטה באקסונים מסוג בר. חשוב לחמם את המדיום ואת חממת המיקרוסקופ לשטוף את התאים בעדינות ולאפשר לתאים להתייצב במשך עשרים דקות לפני ההדמיה.לאחר הדמיה של תאים חיים ניתן לתקן את התרבויות ולהעפוף לכשל חיסוני כדי לבחון את הביטוי של חלבונים אחרים בעלי עניין. מאתגר לבחון את הדינמיקה המיטוכונדרית בעצבים אנושיים חיים. טכניקה זו מספקת את הכלי הייחודי לחקר הדינמיקה המיטוכונדרית והתנוונות העצבים במחלות נוירולוגיות.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuromodulation and Mitochondrial Transport: Live Imaging in Hippocampal Neurons over Long Durations

Neuromodulation ותחבורה מיטוכונדריאלי: הדמיה חיה נוירונים בהיפוקמפוס פני משכי זמן ארוכים

To understand the relationship between mitochondrial transport and neuronal function, it is critical to observe mitochondrial behavior in live cultured ...

Efficient Derivation of Human Neuronal Progenitors and Neurons from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

גזירת יעיל של אבות עצב נוירונים האדם מן האדם תאים pluripotent גזע עובריים עם אינדוקציה מולקולה קטנה

There is a large unfulfilled need for a clinically-suitable human neuronal cell source for repair or regeneration of the damaged central nervous system ...

The Specification of Telencephalic Glutamatergic Neurons from Human Pluripotent Stem Cells

המפרט של נוירונים glutamatergic Telencephalic מתאי גזע pluripotent אדם

Here, a stepwise procedure for efficiently generating telencephalic glutamatergic neurons from human pluripotent stem cells (PSCs) has been described. The ...

Analyzing Dendritic Morphology in Columns and Layers

ניתוח מורפולוגיה דנדריטים ב עמודות שכבות

In many regions of the central nervous systems, such as the fly optic lobes and the vertebrate cortex, synaptic circuits are organized in layers and ...

Modelling Zika Virus Infection of the Developing Human Brain In Vitro Using Stem Cell Derived Cerebral Organoids

Modelling Zika Virus Infection of the Developing Human Brain In Vitro Using Stem Cell Derived Cerebral Organoids

דגמי Zika בנגיף של ה בפיתוח המוח האנושי במבחנה באמצעות תאי גזע נגזר Organoids מוחי

The recent emergence of Zika virus (ZIKV) in susceptible populations has led to an abrupt increase in microcephaly and other neurodevelopmental conditions ...

Method for High Speed Stretch Injury of Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Neurons in a 96-well Format

שיטת עבור מהירות גבוהה מתיחה פציעתו של האדם המושרה נוירונים נגזר תאי גזע Pluripotent בתבנית 96-ובכן

Traumatic brain injury (TBI) is a major clinical challenge with high morbidity and mortality. Despite decades of pre-clinical research, no proven ...

Compartmentalization of Human Stem Cell-Derived Neurons within Pre-Assembled Plastic Microfluidic Chips

מידור של תאי גזע האדם הנגזרים בתוך שבבי מיקרופלואידיג פלסטיק מורכבים מראש

Use of microfluidic devices to compartmentalize cultured neurons has become a standard method in neuroscience. This protocol shows how to use a ...

Post-differentiation Replating of Human Pluripotent Stem Cell-derived Neurons for High-content Screening of Neuritogenesis and Synapse Maturation

לאחר בידול מחדש של תא גזע האדם Pluriפוטנטי-הנוירונים הנגזרים עבור הקרנת תוכן גבוה של Neuritogenesis והתבגרות סינפסה

Neurons differentiated in two-dimensional culture from human pluripotent stem-cell-derived neural progenitor cells (NPCs) represent a powerful model ...

Conversion of Human Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) into Functional Spinal and Cranial Motor Neurons Using PiggyBac Vectors

Conversion of Human Induced Pluripotent Stem Cells iPSCs into Functional Spinal and Cranial Motor Neurons Using PiggyBac Vectors

המרה של האדם המושרה Pluripotent תאי גזע (iPSCs) לתוך השדרה פונקציונלי והגולגולת נוירונים מוטוריים באמצעות שימוש בווקטורים הגולגולתית

We describe here a method to obtain functional spinal and cranial motor neurons from human induced pluripotent stem cells (iPSCs). Direct conversion into ...