Name: production of near-infrared sensitive, core-shell vaccine delivery platform
Uploaded: 2020-10-20T12:30:00
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Nous tenons à remercier le Dr Bryan E. Tomlin affilié au laboratoire d’analyse élémentaire du département de chimie de TAMU qui a participé à l’analyse de l’activation des neutrons (NAA).

1. Synthèse du triacrylate de polycaprolacyone (PCLTA)
<ol><li>Sécher 3,2 ml de 400 Da polycaprolacyone (PCL) triol toute la nuit à 50 °C dans une fiole ouverte de 200 mL de fond rond et K2CO3 dans un flacon en verre à 90 °C.</li>
	<li>Mélanger le triol avec 6,4 mL de dichlorométhane (DCM) et 4,246 g de carbonate de potassium (K2CO3)sous l’argon.</li>
	<li>Mélanger 2,72 ml de chlorure d’acryloyle dans 27,2 ml de DCM et ajouter le mélange de réaction dans la fio...

<ol>
	<li>. Global Immunization: Worldwide Disease Incidence Available from: <a target="_blank" href="https://www.chop.edu/centers-programs/vaccine-education-center/global-immunization/diseases-and-vaccines-world-view">https://www.chop.edu/centers-programs/vaccine-education-center/global-immunization/diseases-and-vaccines-world-view</a> (2018)</li><li>Paul, A., Bera, M., Gupta, P., Singh, N. D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=o-Hydroxycinnamate+for+sequential+photouncaging+of+two+different+functional+groups+and+its+application+in+releasing+cosmeceuticals.">o-Hydroxycinnamate for sequential photouncaging of two different functional groups and its application in releasing cosmeceuticals.</a> Organic and Biomolecular Chemistry. 17 (33), 7689-7693 (2019).</li><li>Kumari, A., Yadav, S. K., Yadav, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodegradable+polymeric+nanoparticles+based+drug+delivery+systems.">Biodegradable polymeric nanoparticles based drug delivery systems.</a> Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 75 (1), 1-18 (2010).</li><li>Dai, C., Wang, B., Zhao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microencapsulation+peptide+and+protein+drugs+delivery+system.">Microencapsulation peptide and protein drugs delivery system.</a> Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 41 (2-3), 117-120 (2005).</li><li>Souery, W. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlling+and+quantifying+the+stability+of+amino+acid-based+cargo+within+polymeric+delivery+systems.">Controlling and quantifying the stability of amino acid-based cargo within polymeric delivery systems.</a> Journal of Control Release. 300, 102-113 (2019).</li><li>Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+protein+formulations.">Advanced protein formulations.</a> Protein Science. 24 (7), 1031-1039 (2015).</li><li>Lee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ultraviolet-curable,+core-shell+vaccine+formed+via+phase+separation.">An ultraviolet-curable, core-shell vaccine formed via phase separation.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. , (2019).</li><li>Kittler, S., Hickey, S. G., Wolff, T., Eychm&#252;ller, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Easy+and+Fast+Phase+Transfer+of+CTAB+Stabilised+Gold+Nanoparticles+from+Water+to+Organic+Phase.">Easy and Fast Phase Transfer of CTAB Stabilised Gold Nanoparticles from Water to Organic Phase.</a> Zeitschrift f&#252;r Physikalische Chemie. 229, 235 (2015).</li><li>Soliman, M. G., Pelaz, B., Parak, W. J., del Pino, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phase+Transfer+and+Polymer+Coating+Methods+toward+Improving+the+Stability+of+Metallic+Nanoparticles+for+Biological+Applications.">Phase Transfer and Polymer Coating Methods toward Improving the Stability of Metallic Nanoparticles for Biological Applications.</a> Chemistry of Materials. 27 (3), 990-997 (2015).</li><li>Arun Kumar, S., Good, J., Hendrix, D., Yoo, E., Kim, D., Deo, K. A., Jhan, Y. Y., Gaharwar, A. K., Bishop, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoengineered+Light-Activatable+Polybubbles+for+On?Demand+Therapeutic+Delivery.">Nanoengineered Light-Activatable Polybubbles for On?Demand Therapeutic Delivery.</a> Adv. Funct. Mater. , 2003579 (2020).</li><li>Wuthrich, P., Ng, S. Y., Fritzinger, B. K., Roskos, K. V., Heller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulsatile+and+delayed+release+of+lysozyme+from+ointment-like+poly(ortho+esters).">Pulsatile and delayed release of lysozyme from ointment-like poly(ortho esters).</a> Journal of Controlled Release. 21 (1), 191-200 (1992).</li><li>Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Instability,+stabilization,+and+formulation+of+liquid+protein+pharmaceuticals.">Instability, stabilization, and formulation of liquid protein pharmaceuticals.</a> International Journal of Pharmaceutics. 185 (2), 129-188 (1999).</li><li>Wong, D. Y., Hollister, S. J., Krebsbach, P. H., Nosrat, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly(epsilon-caprolactone)+and+poly+(L-lactic-co-glycolic+acid)+degradable+polymer+sponges+attenuate+astrocyte+response+and+lesion+growth+in+acute+traumatic+brain+injury.">Poly(epsilon-caprolactone) and poly (L-lactic-co-glycolic acid) degradable polymer sponges attenuate astrocyte response and lesion growth in acute traumatic brain injury.</a> Tissue Engineering. 13 (10), 2515-2523 (2007).</li><li>Davoodi, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+delivery+systems+for+programmed+and+on-demand+release.">Drug delivery systems for programmed and on-demand release.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 132, 104-138 (2018).</li><li>Huang, Y. C., Lei, K. F., Liaw, J. W., Tsai, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+laser+intensity+activated+plasmonic+gold+nanoparticle-generated+photothermal+effects+on+cellular+morphology+and+viability:+a+real-time,+long-term+tracking+and+monitoring+system.">The influence of laser intensity activated plasmonic gold nanoparticle-generated photothermal effects on cellular morphology and viability: a real-time, long-term tracking and monitoring system.</a> Photochemical and Photobiological Sciences. 18 (6), 1419-1429 (2019).</li><li>Link, S., Burda, C., Nikoobakht, B., El-Sayed, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser-Induced+Shape+Changes+of+Colloidal+Gold+Nanorods+Using+Femtosecond+and+Nanosecond+Laser+Pulses.">Laser-Induced Shape Changes of Colloidal Gold Nanorods Using Femtosecond and Nanosecond Laser Pulses.</a> The Journal of Physical Chemistry B. 104 (26), 6152-6163 (2000).</li><li>. Chlorine Available from: <a target="_blank" href="https://www.epa.gov/sites/production/files/2016-09/documents/chlorine.pdf">https://www.epa.gov/sites/production/files/2016-09/documents/chlorine.pdf</a> (2000)</li></ol>

Technologies et défis actuels Les microparticules à base d’émulsion et les nanoparticules ont été couramment utilisées comme vecteurs de livraison de médicaments. Bien que la cinétique de libération de la cargaison de ces dispositifs ont été largement étudiées, le contrôle de la cinétique de libération d’éclatement a été un défi majeur11. La polyvalence et la fonctionnalité du fret sont également limitées dans les systèmes à base d’émulsion en ra...

Une couverture vaccinale limitée entraîne la mort de 3 millions de personnes causées spécifiquement par des maladies évitables par la vaccination1. Les conditions de stockage et de transport inadéquates entraînent le gaspillage de vaccins fonctionnels et contribuent ainsi à réduire la vaccination mondiale. En outre, la vaccination incomplète due au non-respect des calendriers vaccinaux requis entraîne également une couverture vaccinale limitée, en particulier dans les pays en développement2. Plusieurs visites au personnel médical sont nécessaires dans la période recommandée pour recevoir des vaccins de rappel, limitant ainsi le pourcentage de la population avec la vaccination complète. Par conséquent, il est nécessaire d’élaborer de nouvelles stratégies pour la livraison contrôlée de vaccins afin de contourner ces défis.
Les efforts actuels pour développer des technologies de livraison de vaccins comprennent des systèmes polymériques à base d’émulsion3,4. Toutefois, la cargaison est souvent exposée à une plus grande quantité de solvant organique qui peut potentiellement provoquer l’agrégation et la dénaturation, en particulier dans le contexte de la cargaison à base de protéines5,6. Nous avons mis au point une nouvelle plate-forme de livraison de vaccins, « polybulles », qui peut potentiellement abriter plusieurs compartiments de chargement tout en minimisant le volume de cargaison qui est exposé au solvant7. Par exemple, dans notre plate-forme en coquille de noyau polybulle, une poche cargo de diamètre 0,38 mm (SEM) est injectée au centre d’une polybulle de 1 mm. Dans ce cas, la surface de la cargaison exposée au solvant organique serait d’environ 0,453 mm2. Après avoir examiné la densité d’emballage des sphères (microparticules) dans une sphère (dépôt de cargaison), le volume réel de microparticules (10 μm de diamètre) pouvant tenir dans le dépôt est de 0,17 mm3. Le volume d’une microparticule est de 5,24x10-8 mm3 et donc le nombre de particules microparticules pouvant s’adapter au dépôt est de ~3,2x106 particules. Si chaque microparticule a 20 poches de cargaison (à la suite d’une double émulsion) de 0,25 μm de diamètre, alors la surface de la cargaison exposée au solvant organique est de 1274 mm2. Le dépôt de marchandises dans la polybulle aurait donc une surface inférieure d’environ 2 800 fois moins exposée au solvant organique que celle de la cargaison organique exposée aux solvants dans les microparticules. Notre plate-forme à base de polyester peut ainsi réduire potentiellement la quantité de marchandises exposées au solvant organique qui peut autrement causer l’agrégation et l’instabilité du fret.
Les polybulles sont formés sur la base du principe de séparation de phase où le polyester en phase organique est injecté dans une solution aqueuse résultant en une bulle sphérique. La cargaison dans la phase aqueuse peut alors être injectée au centre de la polybulle. Une autre soute peut potentiellement être réalisée dans le polybulbble en mélangeant une cargaison différente avec la coque en polymère. Le polybulle à ce stade sera malléable et sera ensuite guéri pour aboutir à une structure solide polybulle avec la cargaison au milieu. Les polybulles sphériques ont été choisis plutôt que d’autres formes géométriques pour augmenter la capacité de chargement dans le polybulbble tout en minimisant la taille globale du polybulle. Les polybulles avec la cargaison dans le centre ont été choisis pour démontrer la libération retardée d’éclatement. Les polybulles ont également été incorporés avec l’agent proche infrarouge (NIR) - sensible (c’est-à-dire l’onduler) agent, à savoir les nanorods d’or (AuNR), pour provoquer une augmentation de la température des polybulles. Cet effet pourrait potentiellement faciliter une dégradation plus rapide et pourrait être utilisé pour contrôler la cinétique dans les applications futures. Dans cet article, nous décrivons notre approche pour former et caractériser les polybulbbles, pour obtenir la libération retardée d’éclatement des polybulbulles, et pour incorporer AuNR dans les polybulles pour causer nir-activation.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1-Step Ultra Tetramethylbezidine (TMB)-Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) Substrate Solution</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>34028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Hydroxy-2-methylpropiophenone</td>
			<td>TCI AMERICA</td>
			<td>H0991</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>450 nm Stop Solution for TMB Substrate</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab17152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acryloyl chloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A24109-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acriflavine</td>
			<td>Chem-Impex International</td>
			<td>22916</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anhydrous ethyl ether</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>E138-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-HIV1 gp120 antibody conjugated to horseradish peroxidase (HRP)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP9700100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA-CF488 dye conjugates</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A13100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bromosalicylic acid</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>AC162142500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carboxymethylcellulose (CMC)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>80502-040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrimonium bromide (CTAB)</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>ICN19400480</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>C2984</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coating buffer</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab210899</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichloromethane (DCM)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>270997-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diethyl ether</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>E1384</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dodeacyl Amine</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>AC117665000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxorubicin hydrochloride</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP251610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-ascorbic acid</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>A61 100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Legato 100 Syringe Pump</td>
			<td>KD Scientific</td>
			<td>14 831 212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mPEG thiol</td>
			<td>Laysan Bio</td>
			<td>NC0702454</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nonfat dry milk</td>
			<td>Andwin Scientific</td>
			<td>NC9022655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium carbonate</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>AC424081000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate saline buffer</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP3991</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(Poly(caprolactone)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>440744-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(Poly(caprolactone) triol</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>AC190730250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly (lactic-co-glycolic acid) diacrylate</td>
			<td>CMTec</td>
			<td>280050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium carbonate</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>AC424081000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant HIV1 gp120 + gp41 protein</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab49054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver nitrate</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>S181 25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium borohydride</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S678 10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetrachloroauric acid</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>G54 1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trehalose</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>NC9022655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triethyl amine</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>AC157910010</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

production of near-infrared sensitive, core-shell vaccine delivery platform

Les stratégies de livraison de vaccins qui peuvent limiter l’exposition de la cargaison au solvant organique tout en permettant de nouveaux profils de diffusion sont cruciales pour améliorer la couverture vaccinale dans le monde entier. Ici, une nouvelle plate-forme de livraison de vaccins injectables, ultraviolets et retardés, appelée polybulles. La cargaison a été injectée dans des polybulles à base de polyester qui ont été formés dans 10% de solution aqueuse à base de carboxyméthycellulose. Ce document comprend des protocoles pour maintenir la forme sphérique des polybulles et optimiser le placement et la rétention de la cargaison afin de maximiser la quantité de cargaison dans les polybulles. Pour assurer la sécurité, la teneur en solvants chlorés dans les polybulles a été analysée à l’aide d’une analyse d’activation des neutrons. Des études de libération ont été menées avec de petites molécules comme cargaison dans le polybulle pour confirmer la libération retardée d’éclatement. Pour montrer davantage le potentiel de livraison à la demande de la cargaison, les nanorods d’or ont été mélangés dans la coque polymère pour permettre l’activation laser proche infrarouge.

Les polybulles ont été largement caractérisés à l’aide de SEM et de NAA. Cargo a été centré avec succès pour entraîner un dégagement retardé. Les polybulles ont également été activés avec succès au laser en raison de la présence d’AuNRs dans les polybulles.
Caractérisation des polybulles Les polybulles injectées dans une solution aqueuse sans CMC ont donné lieu à une polybulille apla...

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Production of Near-Infrared Sensitive, Core-Shell Vaccine Delivery Platform

Cet article décrit les protocoles utilisés pour produire une nouvelle plate-forme de livraison de vaccins, « polybulles », pour permettre la libération retardée. Des polyesters, y compris le poly (acide lactique-co-glycolique) et la polycaprolactone, ont été utilisés pour former les polybulles et de petites molécules et antigènes ont été utilisés comme cargaison.

Production d’une plate-forme de livraison de vaccins sensibles et proches de la coquille centrale

Vaccine delivery strategies that can limit the exposure of cargo to organic solvent while enabling novel release profiles are crucial for improving ...

Ce protocole peut aider à maintenir la stabilité de la cargaison, qui peut être à la fois de petites molécules et des protéines, grâce à l’utilisation du polybubble, qui peut à son tour réduire les interactions de carbone avec le solvant. Cette nouvelle technique peut être utilisée pour améliorer la couverture vaccinale dans les pays en développement, car les fonctionnalités vaccinals peuvent souvent être compromises en raison de l’inefficacité des installations de transport et de stockage. Pour fabriquer les polybubbles, utilisez d’abord une pipette de transfert d’un millilitre pour ajouter 800 microlitres de 10% CMC dans un flacon de verre de 0,92 millilitre.Pour synthétiser pclta, mélanger 1000 grammes par millilitre de 14 kilodalton PCL dans 200 microlitres de DCM. Pour synthétiser plgada, mélanger 1000 grammes par millilitre de cinq kilodalton PLGADA en 200 microlitres de chloroforme. Mélanger le photoinitiateur avec le mélange de polymère d’intérêt à un rapport de 0,005 à 1 et charger 200 microlitres de la solution résultante en une seringue en verre d’un millilitre montée sur une pompe à seringues reliée à un tube d’acier inoxydable de distribution d’un diamètre intérieur de 0,016 pouce.À l’aide d’un micro moteur pour contrôler le mouvement avant et arrière du tube polymère, injecter le polymère dans le flacon de verre à 10 %CMC pour former les polybubbles et guérir les polybubbles sous la lumière ultraviolette à une longueur d’onde de 254 nanomètres pendant 60 secondes à deux watts par centimètre carré, puis congeler les polybubbles dans l’azote liquide pendant 30 secondes et lyophiliser les porteurs pendant la nuit à 0,01 millibar vide en moins 85 degrés Celsius. Pour le centrage de la cargaison d’intérêt dans un polybubble, mélanger la cargaison avec 5% CMC dans un rotateur pendant la nuit pour augmenter la viscosité de la cargaison avant d’injecter manuellement deux microlitres du mélange de cargaison dans le polybubble. Lorsque toute la cargaison a été injectée, re-guérir, gel flash, et lyophiliser le polybubble injecté comme vient de le démontrer.Le lendemain matin, utilisez des forceps pour séparer le polybubble du CMC séché et laver le polybubble avec de l’eau déionisée pour éliminer tout CMC résiduel. Ensuite, coupez le polybubble en deux et imagez les moitiés par microscopie confoccale pour s’assurer que la cargaison est centrée. Pour la libération de petites molécules, incuber les polybubbles avec de l’acriflavine centrée dans 400 microlitres de PBS à 37 degrés Celsius pour la longueur d’incubation appropriée.À chaque moment expérimental, recueillir le supernatant et ajouter 400 microlitres de PBS frais au flacon. Ensuite, utilisez un lecteur de plaque pour quantifier l’intensité de fluorescence du supernatant recueilli. Pour l’activation proche infrarouge, mélanger la solution polymère avec des nano tiges hydrophobes d’or à un rapport d’un à neuf et ajouter l’initiateur photo à un rapport de 0,005 à 1.Injecter le mélange résultant dans un flacon de verre de 0,92 millilitre contenant 800 microlitres de 10% CMC et guérir les polybobbles sous la lumière ultraviolette comme démontré. Après le gel flash et la lyophilisation comme démontré, laver les polybubbles avec de l’eau déionisée et incuber les porteurs dans 400 microlitres de PBS à 37 degrés Celsius pour la période d’incubation appropriée. À la fin de l’incubation, obtenir une image infrarouge prospective du polybubble avant et après l’activation des polybubbles avec un laser proche infrarouge de 801 nanomètres à huit amplis pendant cinq minutes trois fois par semaine pendant quatre semaines pour les polybobbles PLGADA et 14 semaines pour les polybobbles PCL-PCLTA.À chaque moment expérimental, recueillir le supernatant et ajouter 400 microlitres de PBS frais au flacon. Calculez ensuite les différences de température entre les polybubbles avant et après l’activation laser en fonction des valeurs de température des images infrarouges prospectives. L’ajout d’une solution aqueuse à base de 10 % de CMC entraîne une suspension complète en polybubble pour un entretien réussi de la sphérique polybubble.L’injection de cargaison dans le polybubble en l’absence de CMC entraîne une fuite et un manque conséquent de rétention de la cargaison dans le polybubble. Pour remédier à cette fuite, la viscosité de la PCLTA peut être augmentée à l’aide de carbonate de potassium isolé après le plafonnement final du polycaprolactone avec du triacrylate et la viscosité de la cargaison peut être augmentée en mélangeant la cargaison avec 5% CMC. La viscosité des polybobbles PLGADA est suffisante pour faciliter le centrage de la cargaison et ne nécessite pas de modulation par carbonate de potassium.Notez qu’aucune différence statistiquement significative dans l’efficacité contraignante de l’anticorps n’est observée après avoir mélangé l’antigène VIH gp120/41 avec et sans tréhalose avant l’injection de polybubble. Des rejets d’éclatement retardés sont observés dans les polybobbles PLGADA avec acriflavine au milieu le jour 19 pour les polybubbles incubés à 37 degrés Celsius et le cinquième jour pour les polybubbles incubés à 50 degrés Celsius. En outre, les polybobbles PLGADA et les polybobbles PCL et PCLTA contenant des nano tiges d’or peuvent être activés avec succès au laser plusieurs fois.Lors de la formation des polybubbles, s’il vous plaît prendre soin de protéger les reagents de la lumière et aussi d’utiliser les solutions immédiatement. Après avoir développé cette technologie, nous avons également voulu explorer l’automatisation de ce processus à l’échelle de la production de polybubble.

Research

JoVE Journal

Biology

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Recherche

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Enrichment of Extracellular Matrix Proteins from Tissues and Digestion into Peptides for Mass Spectrometry Analysis

Enrichissement de matrice extracellulaire de protéines à partir de tissus et la digestion en peptides pour l&#39;analyse de spectrométrie de masse

The extracellular matrix (ECM) is a complex meshwork of cross-linked proteins that provides biophysical and biochemical cues that are major regulators of ...