Name: identification of transcription factor regulators using medium-throughput screening of arrayed libraries and a dual-luciferase-based reporter
Uploaded: 2020-03-27T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter at JoVE.com

Vi vil gerne takke Emily Norton og Mikaelan Cucciarre-Stuligross for at hjælpe med udarbejdelsen af shRNA vektorer. Dette arbejde blev delvist støttet af en Susan G. Komen Career Catalyst Grant, der tildeles J.M.L. (#CCR17477184).

BEMÆRK: Et skematisk resumé af denne protokol er vist i figur 1.
1. Lentiviral vektor bibliotek forberedelse
BEMÆRK: Den demonstrerede skærm brugte et arrayed shRNA bibliotek købt som glycerol lagre i 96-brønd plader, men biblioteker kan også samles manuelt baseret på en liste over kandidater. Passende kontroller bør overvejes og indgå i ethvert bibliotek. Dette omfatter en ikke-målretning kontrol shRNA (shNTC), en kontrol shRN...

I denne undersøgelse demonstrerer vi en tilgang til medium-gennemløb screening af arrayed viral biblioteker i kombination med en dual-luciferase-baserede transskriptionsreporter assay, der kan bruges til at identificere og teste nye regulatorer af transskription faktorer. Det er vigtigt at karakterisere og optimere reportersystemet for hver cellelinje før enhver skærm. Der bør gøres forsøg for at bekræfte, at journalisten er lydhør over for ændret aktivitet af den transskriptionsfaktor, der undersøges, og omfa...

Formålet med denne analyse er at bruge viralbiblioteker til at identificere regulatorer af transskriptionsfaktorer på en relativt hurtig og billig måde. Afvigende transskriptionsaktivitet er forbundet med kræft og metastase1,,2,3,4,5,6, så målretning transskription faktorer i kræftceller er en lovende terapeutisk tilgang. Transskriptionsfaktorer er imidlertid ofte vanskelige at målrette farmakologisk7 , og mange er nødvendige for normal cellefunktion i voksent væv8,9,10. Målretning af kræft-associerede veje, der afvigende aktivere transskription faktorer til at drive sygdom er en mere realistisk tilgang med potentiale til at have mindre alvorlige bivirkninger. Den kommercielle tilgængelighed af arrayed lentivirale og retrovirale RNAi, CRISPR/CAS9, cDNA eller ORF biblioteker giver forskerne mulighed for at teste betydningen af mange gener i et enkelt eksperiment. Der kræves dog en pålidelig udlæsning for ændret transskriptionsaktivitet.
Her beskriver vi brugen af en dobbelt-luciferase-baserede transskriptionel reporter assay og arrayed lentiviral biblioteker til at identificere proteiner, der regulerer transskription faktorer i kræftceller. I denne analyse, shRNAs at målrette kræft-associerede gener leveres til pattedyr kræftceller via lentiviral transduktion og celler er udvalgt til stabil integration ved hjælp af puromycin. Cellerne er næste transfected med en reporter konstruktion, der udtrykker firefly luciferase drevet af en promotor specifikt til transskription faktor, der er ved at blive undersøgt, og en kontrol konstruktion, der udtrykker Renilla luciferase fra en konstituerende aktiv promotor, der ikke er lydhør ekonnert over for transskription faktor, der undersøges. Vi demonstrerer denne tilgang med en proof-of-concept skærm for lovgivere af YAP og TAZ, de kritiske downstream effektorer af Hippo pathway8,10,11. Unormal aktivitet af YAP og TAZ fremmer flere trin i den metastatiske kaskade11 og er observeret i mange kræftformer11,12,13. Men, hvordan YAP og TAZ bliver afvigende aktiveret i nogle kræftceller er endnu ikke fuldt forstået. YAP og TAZ binder ikke DNA, men rekrutteres i stedet til initiativtagere af andre transskriptionsfaktorer. Medlemmer af TEA domæne (TEAD) familie af transskription faktorer er de vigtigste bindende partnere for YAP og TAZ, og er afgørende for de fleste YAP og TAZ-afhængige funktioner. Vores reporter konstruere udtrykker firefly luciferase fra en YAP / TAZ-TEAD-lydhør promotor og tidligere undersøgelser har vist, at det trofast registrerer ændringer i YAP-TEAD og TAZ-TEAD transskriptionelle aktivitet2,14,15.
Vores tilgang er hurtig, medium-throughput, og kræver ikke screening faciliteter, automatiserede robotter, eller dyb sekventering af pooled biblioteker. Omkostningerne er relativt lave, og der er mange kommercielt tilgængelige biblioteker at vælge imellem. Det nødvendige udstyr og de nødvendige reagenser er også relativt standard i de fleste laboratorier. Det kan bruges til at screene for lovgivere af stort set enhver transskription faktor, hvis en luciferase-baserede reporter eksisterer eller genereres. Vi bruger denne tilgang til at screene shRNAs i kræftceller, men enhver celle linje, der kan transfected med rimelig effektivitet kunne bruges med enhver form for arrayed bibliotek.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2.0 ml 96-well deep well polypropylene plate</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1896-2000</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin - 2.50%</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15090-046</td>
			<td>Component of trypsin-EDTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well flat bottom white assay plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3922</td>
			<td>For dual-luciferase assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin - 100 mg/ml</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>45-10835242001-EA</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto-tryptone - powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>95039</td>
			<td>Component of LB broth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual-luciferase reporter assay system, which include LAR II reagent (reagent A), Stop &#38; Glo substrate (reagent B substrate) and Stop &#38; Glo buffer (reagent B buffer) - Kit</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E1960</td>
			<td>For dual-luciferase assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate buffered saline w/o calcium, magnesium and phenol red - 9.6 g/L</td>
			<td>Himedia</td>
			<td>TS1006</td>
			<td>For PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA - 0.5 M</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97061-406</td>
			<td>Component of trypsin-EDTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol - 100%</td>
			<td>Pharmco-AAPER</td>
			<td>111000200</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal Bovine Serum - 100%</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97068-085</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexadimethrine bromide (Polybrene) - 8 mg/ml</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>45-H9268</td>
			<td>For virus infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HyClone DMEM/High glucose - 4 mM L-Glutamine; 4500 mg/L glucose; sodium pyruvate</td>
			<td>GE Healthcare life sciences</td>
			<td>SH30243.01</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>I3-P/i3 Multi-Mode Microplate/EA</td>
			<td>Molecular devices</td>
			<td></td>
			<td>For dual-luciferase assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine - 200 mM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030-081</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 3000 (Transfection Reagent 2) - 100%</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>L3000008</td>
			<td>For transfections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular Biology Water - 100%</td>
			<td>VWR</td>
			<td>02-0201-0500</td>
			<td>For dilution of shRNA vector for virus packaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl - powder</td>
			<td>BDH</td>
			<td>BDH9286</td>
			<td>Component of LB broth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop One Microvolume UV-Vis Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td></td>
			<td>For measuring vector DNA concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM (Transfection Buffer) - 100%</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31985-062</td>
			<td>For transfections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin Streptomycin - 10,000 Unit/ml (Penicillin); 10,000 &#181;g/ml (Streptomycin)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PureLink Quick Plasmid Miniprep Kit - Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>K210010</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puromycin - 2.5 mg/ml</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>45-P7255</td>
			<td>For antibiotic selection after infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC20 automated cell counter</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td></td>
			<td>For cell counting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-tremeGENE 9 DNA transfection reagent (Transfection Reagent 1) - 100%</td>
			<td>Roche</td>
			<td>6365787001</td>
			<td>For virus packaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract - powder</td>
			<td>VWR</td>
			<td>J850</td>
			<td>Component of LB broth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P3000 (Transfection Reagent 3) - 100%</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>L3000008</td>
			<td>For transfections</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification of transcription factor regulators using medium-throughput screening of arrayed libraries and a dual-luciferase-based reporter

Transskription faktorer kan ændre udtrykket af mange mål gener, der påvirker en række downstream processer gør dem gode mål for anti-cancer behandlinger. Men, direkte målretning transskription faktorer er ofte vanskeligt og kan forårsage bivirkninger, hvis transskription faktor er nødvendig i en eller flere voksne væv. Identifikation upstream regulatorer, der afvigende aktivere transskription faktorer i kræftceller tilbyder et mere realistisk alternativ, især hvis disse proteiner er nemme at narkotika. Her beskriver vi en protokol, der kan bruges til at kombinere arrayed medium-skala lentiviral biblioteker og en dual-luciferase-baserede transskriptions-reporter assay at identificere nye regulatorer af transskription faktorer i kræftceller. Vores tilgang tilbyder en hurtig, nem og billig måde at teste hundredvis af gener på i et enkelt eksperiment. For at demonstrere brugen af denne tilgang, udførte vi en skærm af en arrayed lentiviral RNAi bibliotek, der indeholder flere regulatorer af Ja-associeret protein (YAP) og transskriptionelle co-aktivator med PDZ-bindende motiv (TAZ), to transskriptionelle co-aktivatorer, der er downstream effektorer af Hippo pathway. Denne fremgangsmåde kan dog ændres til at screene for regulatorer af stort set alle transskriptionsfaktorer eller co-faktor og kan også bruges til at screene CRISPR/CAS9-, cDNA- eller ORF-biblioteker.

Vores YAP / TAZ-TEAD reporter konstruktion (pGL3-5xMCAT (SV)-492,,14,,15) indeholder en minimal SV-49 promotor med 5 gentagelser af kanoniske TEAD bindende element (MCAT)15 køre firefly luciferase genet ( Figur1). Det er co-transficeret i celler sammen med PRL-TK kontrol vektor (Promega), som udtrykker Renilla luciferase fra konstitu...

Watch this Scientific Journal Video about Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter at JoVE.com

Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter

For at identificere nye regulatorer af transskription faktorer, vi udviklet en tilgang til at screene arrayed lentiviral eller retroviral RNAi biblioteker ved hjælp af en dual-luciferase-baserede transskriptions-reporter assay. Denne tilgang tilbyder en hurtig og relativt billig måde at screene hundredvis af kandidater i et enkelt eksperiment.

Identifikation af Transskription Factor Regulators ved hjælp af Medium-Throughput Screening af Arrayed Biblioteker og en Dual-Luciferase-baserede Reporter

Transcription factors can alter the expression of numerous target genes that influence a variety of downstream processes making them good targets for ...

Denne protokol kan bruges til at screene arrayed lentiviral eller retroviral analyse biblioteker til at identificere nye regulatorer af transskription faktorer i kræftceller. De vigtigste fordele ved denne teknik er, at det er hurtigt, medium gennemløb, og billig, og at det bruger udstyr og reagenser almindeligt tilgængelige for de fleste efterforskere. For at udvide og rense hver lentiviral vektor i biblioteket, først tilføje 1,3 milliliter Luria bouillon suppleret med 100 mikrogram pr milliliter ampicillin til hver brønd af en 96-godt dyb brønd plade.Inokuler hver brønd med to mikroliter af glycerol lager for en overnatning inkubation ved 37 grader Celsius og 225 omdrejninger i minuttet. Den næste dag, overføre hver bakterie kultur i individuelle 1,5 milliliter mikrocentrifuge rør til centrifugering. Rens hver vektor med en passende bakteriel miniprep kit i henhold til producentens anvisninger.For hver vektor i det forberedte bibliotek, frø en brønd af en 24-brønd plade med en gange 10 til den femte 293FT celler og inkubere cellerne ved 37 grader Celsius og 5% kuldioxid i 24 timer. For at forberede en transfektionsblanding, som vil blive oprettet for hver vektor i biblioteket, skal du først elute hver lentiviral vektor til en endelig koncentration på 50 nanogram pr. mikroliter med nukleasefrit vand. Overfør fem mikroliter af hver fortynding til individuelle brønde af en 96-brønd PCR plade.Lav en transfektion super mix ved at blande 1,25 mikroliter gange x transfektion reagens en med 23,75 mikroliters gange x af forvarmt transfektion buffer. Inkuber transfektion super mix ved stuetemperatur i fem minutter. Derefter tilsættes 125 nanogram gange x psPAX2 og 125 nanogram gange x VSVG til super mix med blid pipettering.Umiddelbart aliquot super mix i hvert rør af en PCR strimmel og bruge en multikanal pipette til at overføre 25 mikroliter af blandingen i hver brønd af fortyndet viral vektor. Efter en 20 minutters inkubation ved stuetemperatur, bruge en multikanal pipette til at overføre 30 mikroliter af hver transfektion blanding fra hver brønd i en tilsvarende brønd på 293FT celler i den tidligere forberedte 24-brønd plade. Inkuber cellerne i 24 timer, før mediet udskiftes i hver brønd med 500 mikroliter af frisk komplet vækstmedium til endnu en 24-timers inkubation i cellekulturkubvøsen.Den næste dag, bruge en multichannel pipette til at indsamle den virale supernatant fra hver brønd og aliquot 220 mikroliter af hver supernatant i to brønde i en ny 96-brønd plade til at generere en arrayed viral supernatant plade. For at forberede A375 celler til infektion, frø en gange 10 til den femte celler i en 24-brønd plade i 0,5 milliliter komplet vækstmedium pr brønd for hver viral vektor i biblioteket. Medtag en ekstra brønd, der ikke vil blive smittet til at tjene som en kontrol for valg af lægemidler.Efter en 24-timers inkubation i cellekulturinkubatoren optø den frosne arrayed lentiviral supernatant sat til stuetemperatur, før vækstmediet udskiftes fra hver brønd af den forberedte cellekulturplade med 200 mikroliter vækstmedium suppleret med 20 mikrogram pr. milliliter polybren. Ved hjælp af en multikanalpipette, overfør 200 mikroliter viral supernatant fra hver 96 brønd til hver brønd af 24-brøndpladen. Returner cellerne til cellekulturskuvøsen i 24 til 48 timer.Ved slutningen af inkubationen udskiftes mediet i hver brønd med 500 mikroliter vækstmedium suppleret med puromycin, og cellerne returneres til cellekulturkubvøsen i yderligere 48 timer. Efter 48-timers puromycin udvælgelse, sortere cellerne i tre eller fire grupper, således at alle brønde i en enkelt gruppe har en lignende celletæthed og tilføje 200 mikroliter trypsin-EDTA til en repræsentativ brønd fra hver gruppe for en fem-minutters inkubation ved 37 grader Celsius. Når cellerne har løsrevet, neutralisere trypsin med 400 mikroliter af vækstmedium suppleret med puromycin og tælle antallet af celler fra hver trypsinized godt.Fortynde hver celle suspension til en to gange 10 til den femte celler pr milliliter koncentration med vækstmedium suppleret med puromycin og frø 500 mikroliter af celler fra hver godt i samme godt position i en ny 24-brønd plade. Efter brug af tællingerne fra hver repræsentant godt til at estimere celletallet i hver resterende brønd i hver gruppe, tilsættes det relevante volumen af trypsin-EDTA til hver brønd for at opnå en gange 10 til den sjette celle pr. milliliterkoncentration. Under trypsinisering, bruge en multichannel pipette til at tilføje 400 mikroliter af vækstmedium suppleret med puromycin til de relevante tilsvarende brønde i den nye 24-brønd plade.Når cellerne er afmonteret, skal du forsigtigt blande indholdet af hver brønd og overføre 100 mikroliter af hver cellesuspension til den passende tilsvarende brønd i den nye 24-brøndplade. Vend derefter cellerne tilbage til cellekulturskuvøsen i 24 timer. At transfect cellerne med dobbelt-luciferase reporter konstruktioner, forberede transfection fortynding blandingen som angivet i tabellen.For at forberede reporterfortyndingsblandingen blandes mængderne af hvert reagens ganget med det samlede antal transfektioner plus flere ekstra volumener. Dernæst blandes transfektionfortyndingsblandingen med reporterfortyndingsblandingen og den resulterende opløsning ved stuetemperatur i 15 minutter for at fremstille transfection-blandingen. Under inkubationen skylles hver brønd af cellekulturpladen med 250 mikroliter PBS og tilsættes 447 mikroliter frisk komplet vækstmedium til hver brønd.Brug derefter en multikanalpipette til at distribuere 53 mikroliter transfektionsblanding til hver brønd af cellekulturpladen. Placer pladen ved 37 grader Celsius og 5% kuldioxid i 24 timer. Til måling af luciferaseaktiviteten fortyndes 5X passiv lysisbuffer fra luciferase-aktivitetssættet ved en en-til-fem fortynding med deioniseret vand og tø de nødvendige mængder reagens A og reagens B-buffer fra sættet.Når reagenserne er klar, udskiftes supernatanten i hver brønd med 75 mikroliter passiv lysisbuffer, og pladen inkuberes i 30 minutter ved stuetemperatur med lejlighedsvis omrystning. Under inkubationen fortyndes 50X reagens B-substratet fra sættet til en en-til-50 koncentration med optøet reagens B-buffer. Ved slutningen af inkubationen tilsættes 30 mikroliter passiv lysisbuffer til fire blanke kontrolblyde og overføres 30 mikroliter lysat fra hver brønd i dobbeltblys af en 96-godt flad bundhvid analyseplade.Når alt lysatet er blevet belagt, skal du bruge en multikanalpipette til at tilføje 50 mikroliter reagens A til hver brønd og læse firefly luciferase-signalet med en pladelæser. Brug derefter en multikanalpipette til at tilføje 50 mikroliter reagens B til hver brønd og læs Renilla luciferase signalet med en pladelæser. Som forventet, YAP2SA øger firefly luciferase aktivitet, men ikke Renilla luciferase aktivitet i forhold til kontrol vektor.I modsætning hertil øger YAP2SA S94A ikke brandfly luciferase aktivitet. Det er vigtigt, at YAP2SA ikke ændrer aktiviteten af en minimal promotor konstruktion, der mangler MCAT TEAD bindende elementer. I celler transficeret med YAP-TAZ-TEAD reporter konstruere, tandem YAP og TAZ korte hårnåle betydeligt reduceret firefly luciferase niveauer, men kontrollen kort hårnål ikke-målretning kontrol ikke.I modsætning hertil, i celler transficeret med den minimale reporter konstruere, YAP-TAZ korte hårnål RNA ændrer ikke væsentligt firefly luciferase niveauer. Den Renilla signal i hver brønd er heller ikke væsentligt ændret ved den korte hårnål ikke-målretning kontrol eller YAP-TAZ kort hårnål RNA. Som forventet reducerer korte hårnåle RNAs rettet mod YAP og TAZ, SARC eller PI3 kinase sig YAP-TAZ-TEAD-aktiviteten betydeligt.Korte hårnåle RNAs rettet mod ATM, CDH1, CSK, ERBB2 og gelsolin hver øget normaliseret firefly luciferase niveauer i overensstemmelse med offentliggjorte undersøgelser, der viser, at disse proteiner var YAP og / eller TAZ. På trods af etablerede roller for ATR, CCNE2 og ERBB4 i andre celletyper, ændrer korte hårnåle RNAs rettet mod disse gener ikke signifikant normaliserede firefly luciferase niveauer i A375 celler. Efter dette skærmbillede bør identificerende regulatorer valideres ved hjælp af andre udlæsninger for deres transskriptionsfaktoraktivitet.Effektiv knockdown af den identificerede regulator ved analysen bør også bekræftes. Husk at være forsigtig og følge sikkerhedsretningslinjerne, når du arbejder med infektiøse lentivirus, især hvis virus er menneskelige infektiøse.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification

Sektion Mammary Gland Hele Montage til Lesion Identifikation

Normal mammary gland development may be altered by exposure to environmental toxicants and pharmaceutical products, excessive exposure to hormones, and ...

Flow Cytometry-based Drug Screening System for the Identification of Small Molecules That Promote Cellular Differentiation of Glioblastoma Stem Cells

Flow flowcytometri-baserede stof Screening System til identifikation af små molekyler, der fremmer Celledifferentiering glioblastom stamceller

Glioblastoma (GBM) is the most common and most lethal primary brain tumor in adults, causing roughly 14,000 deaths each year in the U.S. alone. Median ...

Live Cell Imaging of the TGF-	&beta;/Smad3 Signaling Pathway In Vitro and In Vivo Using an Adenovirus Reporter System

Live Cell Imaging of the TGF-	ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²/Smad3 Signaling Pathway In Vitro and In Vivo Using an Adenovirus Reporter System

Live celle billeddannelse af den TGF-β/Smad3 Signaling Pathway In Vitro og In Vivo ved hjælp af en Adenovirus Reporter System

Transforming Growth Factor &#946; (TGF-&#946;) signaling regulates many important functions required for cellular homeostasis and is commonly found ...

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array (HMCA)-based Plates

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates

Analyse af kræft celle Invasion og anti-metastatisk stof Screening ved hjælp af Hydrogel mikro-kammer Array (HMCA)-baseret plader

Cancer metastasis is known to cause 90% of cancer lethality. Metastasis is a multistage process which initiates with the penetration/invasion of tumor ...

Isolation of Exosome-Enriched Extracellular Vesicles Carrying Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor from Embryonic Stem Cells

Isolering af exosome-beriget ekstracellulære vesikler Transporterer Granulocyte-Makrofag Colony-stimulerende faktor fra embryonale stamceller

Embryonic stem cells (ESCs) are pluripotent stem cells capable of self-renewal and differentiation into all types of embryonic cells. Like many other cell ...

Establishment and Characterization of Small Bowel Neuroendocrine Tumor Spheroids

Etablering og karakterisering af små tarm neuroendokrine tumor Sfæroider

Small bowel neuroendocrine tumors (SBNETs) are rare cancers originating from enterochromaffin cells of the gut. Research in this field has been limited ...

Mapping the Structure-Function Relationships of Disordered Oncogenic Transcription Factors Using Transcriptomic Analysis

Kortlægning af strukturfunktionsforhold for uordnede onkogene transskriptionsfaktorer ved hjælp af transskriptomisk analyse

Many cancers are characterized by chromosomal translocations which result in the expression of oncogenic fusion transcription factors. Typically, these ...

Identification of EGFR and RAS Inhibitors using Caenorhabditis elegans

Identification of EGFR and RAS Inhibitors using Caenorhabditis elegans

Identifikation af EGFR- og RAS-hæmmere ved hjælp af Caenorhabditis-eliminer

The changes in the plasma membrane localization of the epidermal growth factor receptor (EGFR) and its downstream effector RAS have been implicated in ...

Discovery of Metastatic Regulators using a Rapid and Quantitative Intravital Chick Chorioallantoic Membrane Model

Opdagelsen af metastatiske regulatorer ved hjælp af en hurtig og kvantitativ intravital Chick Chorioallantoic Membrane Model

Recent advances in cancer research has illustrated the highly complex nature of cancer metastasis. Multiple genes or genes networks have been found to be ...

A Rapid Screening Workflow to Identify Potential Combination Therapy for GBM using Patient-Derived Glioma Stem Cells

En hurtig screeningsarbejdsgang til identifikation af potentiel kombinationsbehandling for GBM ved hjælp af patientafledte gliomstamceller

The glioma stem cells (GSCs) are a small fraction of cancer cells which play essential roles in tumor initiation, angiogenesis, and drug resistance in ...