Name: dissection and lipid droplet staining of oenocytes in drosophila larvae
Uploaded: 2019-12-28T13:00:00
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इस काम को चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (31671422, 31529004, और 31601112), 111 परियोजना (D18010), गुआंगडोंग पर्ल नदी प्रतिभा कार्यक्रम (2017BT01S155) की स्थानीय अभिनव और अनुसंधान टीमों परियोजना से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था, और चाइना पोस्टडॉक्टोरल साइंस फाउंडेशन (2018M640767) ।

1. अंडा बिछाने
<ol><li>अंडा बिछाने के लिए मानक कॉर्नमील भोजन तैयार करें। नोट: यहां उपयोग किए जाने वाले मानक कॉर्नमील भोजन के लिए नुस्खा और खाना पकाने की प्रक्रिया के लिए, पहले प्रकाशित विवरण15</su...

<ol>
	<li>Liu, Z., Huang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+metabolism+in+Drosophila:+development+and+disease.">Lipid metabolism in Drosophila: development and disease.</a> Acta Biochimica et Biophysica Sinica (Shanghai). 45 (1), 44-50 (2013).</li><li>Cheng, Y., Chen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fruit+fly+research+in+China.">Fruit fly research in China.</a> Journal of Genetics and Genomics. 45 (11), 583-592 (2018).</li><li>Warr, C. G., Shaw, K. H., Azim, A., Piper, M. D. W., Parsons, L. 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Bloomington Drosophila Stock Center Available from: <a target="_blank" href="https://bdsc.indiana.edu/information/recipes/bloomfood.html">https://bdsc.indiana.edu/information/recipes/bloomfood.html</a> (2019)</li><li>Milon, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Do+estrogens+regulate+lipid+status+in+testicular+steroidogenic+Leydig+cell?.">Do estrogens regulate lipid status in testicular steroidogenic Leydig cell?.</a> Acta Histochemica. 121 (5), 611-618 (2019).</li><li>Farmer, B. C., Kluemper, J., Johnson, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apolipoprotein+E4+alters+astrocyte+fatty+acid+metabolism+and+lipid+droplet+formation.">Apolipoprotein E4 alters astrocyte fatty acid metabolism and lipid droplet formation.</a> Cells. 8 (2), (2019).</li></ol>

ऊपर उल्लिखित लोगों में से, इस प्रोटोकॉल में कई महत्वपूर्ण कदम हैं, अंडा बिछाने की समय अवधि इनमें से एक होने के साथ । लिपिड जुटाने वाले ऊतक के रूप में, ओनोसाइट पोषण स्थिति6,8के प्रति अ...

लिपिड सेल अस्तित्व के लिए आवश्यक हैं। सेलुलर झिल्ली प्रणालियों के अभिन्न घटकों के रूप में उनकी पारंपरिक भूमिका के अलावा, लिपिड भी ऊर्जा की आपूर्ति में महत्वपूर्ण कार्य खेलते हैं और व्यक्तिगत जानवरों के जीवन चक्र में ट्रांसड्यूक्शन का संकेत देते हैं1। इस प्रकार, लिपिड चयापचय कोशिकाओं में शारीरिक हेमोस्सिस बनाए रखने के लिए सख्त नियमों के अनुरूप होना चाहिए। ज्ञात हो कि लिपिड मेटाबोलिज्म के डिस्रेगुलेशन के परिणामस्वरूप मधुमेह और फैटी लिवर जैसी विभिन्न बीमारियां होती हैं। पशु स्वास्थ्य में लिपिड चयापचय के बहुत महत्व के बावजूद, लिपिड चयापचय विनियमन अंतर्निहित तंत्र काफी हद तक अज्ञात रहते हैं ।
ड्रोसोफिला बड़े पैमाने पर वर्षों के लिए इस्तेमाल किया गया है के बाद से प्रोफेसर थॉमस एच मॉर्गन उंहें आनुवंशिकी और अंय बुनियादी जैविकसवालों सेजुड़े अध्ययन में उपयोग शुरू कर दिया 2 । पिछले कुछ दशकों में, उभरते सबूतों से पता चला है कि ड्रोसोफिला मोटापा1,3जैसे कई लिपिड मेटाबोलिज्म से जुड़े रोगों के अध्ययन में एक उत्कृष्ट मॉडल जीव है । विशेष रूप से, ड्रोसोफिला मनुष्यों के साथ अत्यधिक संरक्षित मेटाबोलिक जीन साझा करता है और लिपिड मेटाबोलिज्म के लिए समान प्रासंगिक ऊतकों/अंगों और कोशिका प्रकारों के अधिकारी हैं ।
उदाहरण के लिए, ड्रोसोफिलाका वसा शरीर, जो ट्राइसिलग्लिसराइड स्टोरेज के लिए जिम्मेदार है, मानव एडीपोस ऊतक के अनुरूप कार्य करता है। हाल ही में, विशेष हेपेटोसाइट जैसी कोशिकाओं (यानी, ओनोसाइट्स) का एक समूह, जिसे मानव यकृत के लिए एक कार्यात्मक एनालॉग बताया गया है, को फल मक्खियोंमेंफैटी एसिड और हाइड्रोकार्बन मेटाबोलिज्म में शामिल दिखाया गया है4,5। स्तनपायी यकृत में मामले के समान, ओनोसाइट्स लार्वा और वयस्क ड्रोसोफिलादोनों में लिपिड बूंद गठन को सक्रिय करके भुखमरी का जवाब देते हैं, जिसके परिणामस्वरूप ओनोसाइट्स4,6,7,8में लिपिड बूंद संचय होता है। शारीरिक रूप से, ओनोसाइट्स को पेट के हेमिसेगमेंट प्रति लगभग छह कोशिकाओं के समूहों में पार्श्व एपिडर्मिस की बेसल आंतरिक सतह से कसकर जुड़ा हुआ है, जो एपिडरमिस से ओनोसाइट समूहों को अलग करना अव्यवहारिक बनाता है। इस प्रकार, ओनोसाइट्स को विच्छेदन और धुंधला के दौरान एपिडर्मिस से जोड़ा जाना चाहिए।
लिपिड लिपिड बूंदों के रूप में संग्रहीत होते हैं, जो कोशिकाओं9में एकल परत झिल्ली के साथ ऑर्गेनेल्स होते हैं। लिपिड की बूंदें विभिन्न प्रजातियों में लगभग सभी कोशिका प्रकारों में मौजूद हैं10। लिपिड ड्रॉपलेट गतिशीलता, इसके आकार और संख्या सहित, पर्यावरण ीय तनाव के जवाब में बदल जाते हैं। इसे तनाव के जवाब में मेटाबोलिक स्थिति का प्रतिबिंब माना जाता है, जैसे कि उम्र बढ़ने और भुखमरी7,8। इसलिए, विकास के दौरान और तनावपूर्ण परिस्थितियों में ओएनोसाइट्स में लिपिड ड्रॉपलेट गतिशीलता को गुणात्मक रूप से निर्धारित करने के लिए एक व्यवहार्य और विश्वसनीय विधि विकसित करना बहुत महत्वपूर्ण है। विशेष रूप से, तीसरे इंस्टार लार्वा में, ओनोसाइट्स में खिलाया स्थितियों के तहत कुछ या कोई पता लगाने योग्य लिपिड बूंदें होती हैं, लेकिन उनमें पोषण अभाव4के बाद कई बड़ी लिपिड बूंदें होती हैं। इस विधि की प्रभावशीलता को सत्यापित करने के लिए, भूखे परिस्थितियों में ओनोसाइट्स में लिपिड बूंद धुंधला करने का सुझाव दिया जाता है।
वर्तमान में, कई लिपोफिलिक रंग लिपिड बूंदों के लिए उपलब्ध हैं, जैसे नॉनफ्लोरोसेंट रंग सूडान ब्लैक एंड ऑयल रेड ओ और फ्लोरोसेंट रंग नील लाल और बॉडीपी 493/50311। सूडान ब्लैक और ऑयल रेड ओ आमतौर पर ऊतक कोलेस्टेरिल एस्टर और ट्राइसिलग्लिसरोल के लिए उपयोग किए जाते हैं और हल्के माइक्रोस्कोपी द्वारा आसानी से पता लगाया जा सकता है। हालांकि, अपेक्षाकृत उच्च पृष्ठभूमि धुंधला और अपेक्षाकृत कम संकल्प लिपिड बूंद गतिशीलता के गुणात्मक विश्लेषण में अपने अनुप्रयोगों के लिए दो सीमित कारक हैं । नॉनफ्लोरोसेंट रंगों की सीमाओं को दूर करने के लिए, नील लाल और बॉडीपी 493/503 लिपिड ड्रॉपलेट धुंधला के लिए आदर्श विकल्प के रूप में उपयोग किया जाता है । यह बताया गया है कि नील लाल कुछ अप्रतिम कोलेस्ट्रॉल का भी पता लगा सकता है, जो बोप्पी 493/503 को सेलुलर लिपिड बूंदों के लिए अधिक विशिष्ट रंग बनाता है, कुछ हद तक12,13,14।
सबसे बड़ी बात यह है कि ओनोसाइट्स में लिपिड बूंदों के तेजी से और संवेदनशील विश्लेषण की आवश्यकता को पूरा करने के लिए, यह प्रोटोकॉल दाग रंगे के रूप में बॉडीपी 493/503 का उपयोग करके स्थिर-आधारित लिपिड बूंद-विशिष्ट धुंधला की एक व्यवहार्य और अत्यधिक प्रजनन विधि प्रस्तुत करता है। इस रिपोर्ट में, ओनोसाइट्स विच्छेदित होते हैं, और बॉडीपी 493/503 का उपयोग ओनोसाइट्स में लिपिड ड्रॉपलेट धुंधला करने के लिए किया जाता है, जिसमें लिपिड बूंदों का पता कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी द्वारा लगाया जाता है । इस प्रक्रिया की आसानी और सामर्थ्य इसे प्रवाह साइटोमेट्री जैसे अन्य अनुप्रयोगों में संशोधन और आगे के उपयोग के लिए आदर्श बनाती है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>50 mL centrifuge tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430829</td>
			<td>50 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 cm Petri dish</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>150326</td>
			<td>6 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For fly food</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminum foil</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Protect smaple from light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BODIPY 493/503</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D3922</td>
			<td>Lipid droplet staining dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica TSC SP5</td>
			<td>Confocal imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corn syrup</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For fly food</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cornmeal</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For fly food</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip</td>
			<td>Citoglas</td>
			<td>10212424C</td>
			<td>20 &#215; 20 mm, 0.13-0.17 thick</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection pin</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection plate</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Diameter: 11 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixation buffer</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>4% Paraformaldehyde (PFA) in 1xPBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>11252-30</td>
			<td>#5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Jiangnan</td>
			<td>SPX-380</td>
			<td>For fly culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tube</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td>1.5 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscopy slide</td>
			<td>Citoglas</td>
			<td>10127105P-G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium</td>
			<td>VECTASHIELDAntifade Mounting Medium</td>
			<td>H-1000</td>
			<td>Antifade mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nail polish</td>
			<td>PanEra</td>
			<td>AAPR419</td>
			<td>Seal the coverslip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paintbrush</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1xPBS (137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4,1.8 mM KH2PO4, pH 7.4)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotator</td>
			<td>Kylin-Bell Lab Instruments</td>
			<td>WH-986</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor</td>
			<td>Smartdata Medical</td>
			<td>SR81</td>
			<td>Vannas spring scissor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soy flour</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For fly food</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spatula</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard cornmeal food</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Accoding to Bloomington standard cornmeal food recipe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica S6E</td>
			<td>For tissue dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wipe paper</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For fly food</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>yw</td>
			<td>Kept as lab stock</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Drosophila</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dissection and lipid droplet staining of oenocytes in drosophila larvae

लिपिड पशु विकास और शारीरिक होमोस्टोसिस के लिए आवश्यक हैं। लिपिड मेटाबोलिज्म के डिस्रेगुलेशन के परिणामस्वरूप मोटापा और फैटी लिवर जैसे विभिन्न विकासात्मक दोष और बीमारियां होती हैं। आमतौर पर लिपिड की बूंदों में संग्रहीत किया जाता है, जो कोशिकाओं में बहुआयामी लिपिड स्टोरेज ऑर्गेनेल्स होते हैं। लिपिड की बूंदें विभिन्न ऊतकों में और विभिन्न परिस्थितियों में आकार और संख्या में भिन्न होती हैं। यह बताया गया है कि लिपिड बूंदों को इसके बायोजेनेसिस और क्षरण के नियमन के माध्यम से कसकर नियंत्रित किया जाता है । ड्रोसोफिला मेलानोगास्टरमें, ओनोसाइट लिपिड मेटाबोलिज्म के लिए एक महत्वपूर्ण ऊतक है और हाल ही में तनाव के जवाब में लिपिड जुड़ाव के बारे में एक मानव यकृत एनालॉग के रूप में पहचाना गया है। हालांकि, ओनोसाइट्स में लिपिड ड्रॉपलेट मेटाबोलिज्म के नियमन में अंतर्निहित तंत्र मायावी बने हुए हैं। इस समस्या को हल करने के लिए, विकास के दौरान और तनावपूर्ण परिस्थितियों में ओनोसाइट्स में लिपिड ड्रॉपलेट गतिशील परिवर्तनों की सीधी कल्पना करने के लिए एक विश्वसनीय और संवेदनशील विधि विकसित करना अत्यंत महत्वपूर्ण है। लिपोफिलिक बॉडीपी 493/503 का लाभ उठाते हुए, एक लिपिड बूंद-विशिष्ट फ्लोरोसेंट रंग, यहां वर्णित है, भुखमरी के जवाब में ड्रोसोफिला लार्वा के ओनोसाइट्स में विच्छेदन और बाद में लिपिड ड्रॉपलेट धुंधला के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल है । यह कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी द्वारा विभिन्न परिस्थितियों में लिपिड ड्रॉपलेट गतिशीलता के गुणात्मक विश्लेषण के लिए अनुमति देता है। इसके अलावा, इस तेजी से और अत्यधिक प्रजनन विधि का उपयोग आनुवंशिक स्क्रीन में भी किया जा सकता है जिसमें ओनोसाइट्स और अन्य ऊतकों में लिपिड ड्रॉपलेट मेटाबोलिज्म शामिल है।

इस प्रक्रिया के सफल निष्पादन के परिणामस्वरूप स्पष्ट लिपिड बूंदों का धुंधला होना चाहिए जो ओनोसाइट्स में लिपिड बूंदों की संख्या और आकार का पता चलता है। चित्र ा 1ए, ए ', ए'' से प?...

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Dissection and Lipid Droplet Staining of Oenocytes in Drosophila Larvae Video (Video) | JoVE

यहां प्रस्तुत डिसेक्शन और लिपिड बूंद के लिए विस्तृत तरीके हैं ड्रोसोफिला लार्वा में ओएनोसाइट्स के बोडिप्पी 493/503 का उपयोग करके, एक लिपिड ड्रॉपलेट-विशिष्ट फ्लोरोसेंट डाया।

ड्रोसोफिला लार्वा में ओएनोसाइट्स का विच्छेदन और लिपिड ड्रॉपलेट धुंधला

Lipids are essential for animal development and physiological homeostasis. Dysregulation of lipid metabolism results in various developmental defects and ...

एक ओनोसाइट विच्छेदन और लिपिड ड्रॉपलेट धुंधला की इस विधि का उपयोग सामान्य और तनावग्रस्त परिस्थितियों में ड्रोसोफिला लार्वा ओनोसाइट में लिपिड बूंद की उपस्थिति का एहसास करने के लिए किया जा सकता है। यह विधि न केवल कीड़ों में बल्कि स्तनधारियों में केवल कुछ मामूली संशोधनों के साथ लिपिड मेटाबोलिज्म का अध्ययन करने के लिए एक उपयोगी उपकरण प्रदान करती है। अंडा बिछाने के लिए प्रेरित करने के लिए, अंडे बिछाने वाली बोतल में वांछित जीनोटाइप के 150 कुंवारी मादा मक्खियों और 75 पुरुषों को रखें और बोतल को 60% आर्द्रता के साथ 25 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर में एक हल्के प्रूफ बॉक्स के नीचे रखें।एक घंटे के बाद, मक्खियों को एक नई बोतल में स्थानांतरित करें और मक्खियों को वयस्कों को हटाने से पहले एक घंटे के लिए नई बोतल में अंडे डालते हैं। फिर, अंडे को 12 घंटे के हल्के-अंधेरे चक्र के साथ 25 डिग्री सेल्शियस पर 84 घंटे के लिए तीसरे इंस्टार लार्वा में विकसित करने की अनुमति दें। भुखमरी उपचार शुरू करने से पहले, एक छह सेंटीमीटर पेट्री डिश में फिल्टर पेपर का एक उचित आकार टुकड़ा रखें और एक भुखमरी चैंबर बनाने के लिए कागज पर पीबीएस का एक मिलीलीटर जोड़ें।एक नियंत्रण उपचार कक्ष बनाने के लिए, ब्लूमिंगटन मानक कॉर्नमील भोजन के पांच मिलीलीटर को छह सेंटीमीटर पेट्री डिश में रखें। जब कक्ष तैयार हो जाते हैं, तो अंडे बिछाने वाली बोतल से उसी अनुमानित आकार के इंस्टार लार्वा को इकट्ठा करने के लिए एक छोटे पेंट ब्रश का उपयोग करें। और प्रत्येक भुखमरी और नियंत्रण कक्ष में बेतरतीब ढंग से 20 लार्वा।फिर कक्षों को 12, 24 या 36 घंटे के विकास और/या भुखमरी के लिए इनक्यूबेटर में रखें । उपचार अवधि के अंत में, प्रत्येक कक्ष से लार्वा को बर्फ के ठंडे पीबीएस युक्त विच्छेदन प्लेट में स्थानांतरित करने के लिए संदंश का उपयोग करें और प्लेट को स्टीरियो माइक्रोस्कोप के नीचे रखें। पहले लार्वा वेंट्रल साइड को ऊपर उन्मुख करें और लार्वा को धीरे-धीरे रखने के लिए संदंश का उपयोग करें।प्लेट में लार्वा को सुरक्षित करने के लिए एक पिन को फरीनेक्स के माध्यम से और एक अन्य पिन सर्पिल के माध्यम से रखें। पूर्वकाल से जानवर के पीछे के अंत तक एपिडर्मिस के माध्यम से एक देशांतर चीरा बनाने के लिए Vannas स्प्रिंग कैंची का प्रयोग करें। एपिडर्मिस के आंतरिक ऊतक को हटाने के लिए संदंश का उपयोग करें, एपिडर्मिस की आंतरिक सतह पर ओनोसाइट्स को नुकसान से बचने के लिए ध्यान रखते हुए।फिर विच्छेदन पिन को पुनः प्राप्त करने के लिए संदंश का उपयोग करें और एपिडर्मिस को बर्फ पर पीबीएस की 1.5 मिलीलीटर माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में स्थानांतरित करें। लिपिड बूंद धुंधला के लिए, एक रोटेटर पर कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए निर्धारण बफर में विच्छेदित एपिडर्मिस को इनक्यूबेट करें, इसके बाद पीबीएस के एक मिलीलीटर में त्वरित पुन: निलंबन होता है। फिर किसी भी अवशिष्ट निर्धारक को हटाने के लिए प्रति वॉश पीबीएस के एक मिलीलीटर में तीन पांच मिनट की धोता के साथ नमूनों को धोएं।अंतिम धोने के बाद, एक रोटेटर पर कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए एक उपयुक्त लिपोफिलिक जांच के साथ एपिडर्मल नमूनों को इनक्यूबेट करें। इनक्यूबेशन के दौरान, ऊतकों को प्रकाश से बचाने के लिए पन्नी में नमूना ट्यूबों को लपेटें और पीबीएस के एक मिलीलीटर में तीन बार नमूनों को 10 मिनट प्रति वॉश के लिए धोएं। ओनोसाइट्स की छवि के लिए, प्रत्येक एपिडर्मिस नमूने को एक साफ माइक्रोस्कोप स्लाइड पर बढ़ते माध्यम के छह माइक्रोलीटर में स्थानांतरित करें, ऊतक के अभिविन्यास को समायोजित करें, ताकि ओनोसाइट्स युक्त आंतरिक सतह स्लाइड के नीचे को छू सके।धीरे-धीरे एपिडर्मिस पर एक कवरलिप रखें और किनारों को स्पष्ट नेल पॉलिश के साथ सील करें। जब पॉलिश सूख गई है, तो एक कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप पर नमूनों की छवि, उचित उत्तेजन और उत्सर्जन तरंगदैर्ध्य के साथ 63 X आवर्धन रखें। विभिन्न विकासात्मक चरणों में सामान्य भोजन लार्वा के ओनोसाइट्स के भीतर कुछ पता लगाने योग्य लिपिड बूंदें हैं।जैसा कि इन प्रतिनिधि छवियों में देखा गया है, लिपिड बूंदों में 12, 24 और भुखमरी की 36 घंटे की अवधि के जवाब में ओनोसाइट्स के भीतर संख्या में वृद्धि होती है। यह विधि प्रासंगिक अनुसंधान क्षेत्रों में शोधकर्ताओं के लिए एक व्यवहार्य प्रोटोकॉल प्रदान करती है और यह जांच करने के लिए कि आनुवंशिक या पर्यावरणीय जोड़तोड़ कोशिकाओं में लिपिड बूंद परिवर्तन का कारण बनती है या नहीं।

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection and Lipid Droplet Staining of Oenocytes in Drosophila Larvae

Dissection of Drosophila Ovaries

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ड्रोसोफिला अंडाशय के विच्छेदन

Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster

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ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर में लारवल सीएनएस के विच्छेदन

The central nervous system (CNS) of Drosophila larvae is complex and poorly understood.  One way to investigate the CNS is to use immunohistochemistry to ...

Dissection of Imaginal Discs from 3rd Instar Drosophila Larvae

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Imaginal डिस्क के 3 Instar ड्रोसोफिला लार्वा से विच्छेदन

High-resolution Measurement of Odor-Driven Behavior in Drosophila Larvae

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गंध ड्रोसोफिला लार्वा में संचालित व्यवहार की उच्च संकल्प मापन

Olfactory responses in Drosophila larvae have been traditionally studied in Petri dishes comprising a single peripheral odor source. In this behavioral ...

Live Dissection of Drosophila Embryos: Streamlined Methods for Screening Mutant Collections by Antibody Staining

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के लाइव विच्छेदन ड्रोसोफिला भ्रूण एंटीबॉडी धुंधला द्वारा उत्परिवर्ती संग्रह स्क्रीनिंग के लिए सुव्यवस्थित तरीके

Drosophila embryos between stages 14 and 17 of embryonic development can be readily dissected to generate "fillet" preparations.  In these preparations, ...

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

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वयस्क से Oenocytes के विच्छेदन ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर</em

In Drosophila melanogaster, as in other insects, a waxy layer on the outer surface of the cuticle, composed primarily of hydrocarbon compounds, provides ...

In vivo Imaging of Intact Drosophila Larvae at Sub-cellular Resolution

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उप सेलुलर संकल्प पर बरकरार ड्रोसोफिला लार्वा के vivo इमेजिंग में

Recent improvements in optical imaging, genetically encoded fluorophores and genetic tools allowing efficient establishment of desired transgenic animal ...

Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries

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के विच्छेदन और धुंधला ड्रोसोफिला लारवल अंडाशय

Many organs depend on stem cells for their development during embryogenesis and for maintenance or repair during adult life. Understanding how stem cells ...

Dissection and Mounting of Drosophila Pupal Eye Discs

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विच्छेदन और के बढ़ते<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; पोटा संबंधी नेत्र डिस्क

The Drosophila melanogaster eye disc is a powerful system that can be used to study many different biological processes.  It contains approximately 800 ...

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

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ठहराव लिपिड बहुतायत और लिपिड वितरण के मूल्यांकन में Caenorhabditis एलिगेंस द्वारा नील लाल और तेल लाल ओ धुंधला

Caenorhabditis elegans is an exceptional model organism in which to study lipid metabolism and energy homeostasis. Many of its lipid genes are conserved ...