Name: testing targeted therapies in cancer using structural dna alteration analysis and patient-derived xenografts
Uploaded: 2020-07-25T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Testing Targeted Therapies in Cancer using Structural DNA Alteration Analysis and Patient-Derived Xenografts at JoVE.com

Wir danken den Mitgliedern des Mayo Clinic Center for Individualized Medicine (CIM) Dr. Lin Yang und Faye R. Harris, MS, für die Hilfe bei der Durchführung von Experimenten. Diese Arbeit wurde unterstützt von Herrn und Frau Neil E. Eckles' Gift an das Mayo Clinic Center for Individualized Medicine (CIM).

Frisches Gewebe von einwilligenden Patienten mit Eierstockkrebs wurden zum Zeitpunkt der Entschärbungsoperation gemäß einem vom Mayo Clinic Institutional Review Board (IRB) genehmigten Protokoll gesammelt. Alle in diesem Protokoll verwendeten tierischen Verfahren und Behandlungen wurden vom Mayo Clinic Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) genehmigt und befolgten die Richtlinien für die Tierpflege.
1. Paarsequenzierung und Analysen
HINWEIS: Für die ...

Wir beschreiben den Ansatz und die Protokolle, die wir verwendet haben, um eine "klinische Studie" in PDX-Modellen durchzuführen, die die molekularen Eigenschaften des Tumors nutzt, wie sie durch genomisches Profiling gewonnen werden, um die beste Auswahl an Medikamenten für Tests zu bestimmen. Mehrere Sequenzierungsplattformen werden derzeit für die genomische Charakterisierung von Primärtumoren verwendet, einschließlich der gesamten Genomsequenzierung, RNAseq und kundenspezifischer Genpanels. Für hochgradige ser?...

Patienten-abgeleitete Xenografts (PDXs), die aus der Implantation von Tumorstücken von Patienten in immundefizienten Mäusen erzeugt werden, haben sich als ein leistungsfähiges präklinisches Modell zur Unterstützung einer personalisierten Krebsbehandlung herauskristallisiert. PDX-Modelle wurden erfolgreich für eine Vielzahl von menschlichen Malignitäten entwickelt. Dazu gehören Brust- und Eierstockkrebs, malignes Melanom, Dickdarmkrebs, Bauchspeicheldrüsenadenokarzinom und nicht-kleinzelliger Lungenkrebs1,2,3,4,5. Tumorgewebe kann orthotopisch oder heterotopisch implantiert werden. Erstere, die als genauer, aber technisch schwierig gelten, beinhaltet eine Transplantation direkt in das Tumororgan. Diese Arten von Modellen werden geglaubt, um genau imitieren Histologie des ursprünglichen Tumors aufgrund der "natürlichen" Mikroumgebung für den Tumor6,7. Zum Beispiel führte die orthotopische Transplantation in die Bursa des Maus-Ovarials zur Tumorverbreitung in die Peritonealhöhle und zur Herstellung von Aszites, typisch für Eierstockkrebs8. In ähnlicher Weise beeinflusste die Injektion von Brusttumoren in die Brust anstelle der Bauchbrustdrüse die PDX-Erfolgsrate und das Verhalten9. Orthotopmodelle erfordern jedoch ausgeklügelte Bildgebungssysteme, um das Tumorwachstum zu überwachen. Die heterotopische Implantation eines soliden Tumors erfolgt in der Regel durch Implantation von Gewebe in die subkutane Flanke einer Maus, was eine einfachere Überwachung des Tumorwachstums ermöglicht und weniger teuer und zeitaufwändigist 7. Allerdings wuchsen Tumore subkutan selten metastasierend, anders als bei der orthotopischen Implantationbeobachtet 10.
Die Erfolgsrate der Transplantation hat sich als variierend erwiesen und hängt stark vom Tumortyp ab. Aggressivere Tumoren und Gewebeproben, die einen höheren Prozentsatz der Tumorzellen enthalten, hatten den Berichten zufolge bessere Erfolgsraten12,13. In Übereinstimmung damit, Tumoren von metastasierenden Stellen abgeleitet wurden gezeigt, um mit Frequenzen von 50-80%, während diejenigen von primären Standorten engraft bei Frequenzen so niedrig wie 14%12. Im Gegensatz dazu, Gewebe mit nekrotischen Zellen und weniger lebensfähige Tumorzellen engraft schlecht. Das Tumorwachstum kann auch durch die Zugabe von Kellermembran-Matrixproteinen in den Gewebemix zum Zeitpunkt der Injektion in Mäuse14 gefördert werden, ohne die Eigenschaften des ursprünglichen Tumors zu beeinträchtigen. Die Größe und Anzahl der gewebeteile, die für die Implantation bestimmt sind, beeinflussen auch die Erfolgsrate der Engraftment. Größere Tumoraufnahmeraten wurden für die Implantation in der subrenalen Kapsel im Vergleich zur subkutanen Implantation aufgrund der Fähigkeit der subrenalen Kapsel berichtet, den ursprünglichen Tumor stroma zu erhalten und die Wirtsstromzellen sowie15zur Verfügung zu stellen.
Die meisten Studien verwenden NOD/SCID immundefizienten Mäusen, denen natürliche Killerzellen16 fehlen und die nachweislich die Tumorengraftment, das Wachstum und die Metastasierung im Vergleich zu anderen Stämmen erhöhen14. Eine zusätzliche Überwachung ist jedoch erforderlich, da sie thymische Lymphome bereits im Alter von3-4Monaten entwickeln können. Bei Eierstocktumortransplantationen, die in SCID-Mäusen angebaut wurden, wurde das Auswachsen von B-Zellen erfolgreich durch Rituximab gehemmt, was die Entwicklung von Lymphomen verhinderte, ohne jedoch die Engraftmentierung von Eierstocktumoren zu beeinträchtigen17.
In jüngerer Zeit, NSG (NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ) Mäuse, die eine Nullmutation im Gen tragen, die die Interleukin-2-Rezeptor-Gammakette18kodiert, wurden zu einem häufig verwendeten Stamm für die Erzeugung von PDX-Modellen. Tumore aus etablierten PDX-Modellen, die an zukünftige Generationen von Mäusen weitergegeben werden, behalten berichtend histologische und molekulare Eigenschaften für 3 bis 6 Generationen19,20. Zahlreiche Studien haben gezeigt, dass die Behandlungsergebnisse in PDX-Modellen die ihrer entsprechenden Patienten imitieren2,3,4,21,22,23. Die Ansprechrate auf Chemotherapie in PDX-Modellen bei nicht-kleinen Lungenkrebs und dickdarmen Karzinomen war ähnlich wie in klinischen Studien für die gleichen Medikamente24,25. Studien, die in PDX-Modellen durchgeführt wurden und für Patienten entwickelt wurden, die an klinischen Studien teilnahmen, zeigten Reaktionen auf getestete Medikamente, die denen ähnlich waren, die bei entsprechendenPatienten2,3,4klinisch beobachtet wurden.
Genomanalysen eines Patiententumors mit hohem Durchsatz in Verbindung mit PDX-Modellen bieten ein leistungsfähiges Werkzeug, um Korrelationen zwischen spezifischen genomischen Veränderungen und einer therapeutischen Reaktion zu untersuchen. Diese wurden in einigen Veröffentlichungen26,27beschrieben. Zum Beispiel therapeutische Reaktionen auf den EGFR-Hemmer Cetuximab in einer Reihe von kolorektalen PDX-Modellen, die EGFR-Amplifikation, parallele klinische Reaktionen auf Cetuximab bei Patienten28.
Es gibt einige Herausforderungen, die mit der Entwicklung und Anwendung von PDX-Modellen verbunden sind. Unter diesen ist Tumorheterogenität29,30, die die Genauigkeit der Behandlungsantwort Interpretation als ein einzelner Zellklon mit höherer proliferativer Kapazität innerhalb eines PDX beeinträchtigen kann die anderen31wachsen , was zu einem Verlust der Heterogenität. Darüber hinaus, wenn einzelne Tumorbiopsien verwendet werden, um PDX zu entwickeln, können einige der Zellpopulationen verpasst werden und werden nicht in der endgültigen Transplantation dargestellt werden. Mehrere Proben desselben Tumors werden für die Implantation empfohlen, um dieses Problem zu beheben. Obwohl PDX-Tumoren in der Regel alle Zelltypen des ursprünglichen Spendertumors enthalten, werden diese Zellen nach und nach durch solche murinen Ursprungsersetzt 3. Das Zusammenspiel zwischen muriner Stroma und menschlichen Tumorzellen in PDX-Modellen ist nicht gut verstanden. Dennoch wurde gezeigt, dass Stromalzellen die Tumormikroumgebung33rekapitulieren.
Trotz dieser Einschränkungen gehören PDX-Modelle nach wie vor zu den wertvollsten Werkzeugen für die translationale Forschung sowie zur personalisierten Medizin zur Auswahl von Patiententherapien. Zu den wichtigsten Anwendungen von PDXgehören gehören die Biomarker-Erkennung und Arzneimitteltests. PDX-Modelle werden auch erfolgreich verwendet, um Arzneimittelresistenzmechanismen zu studieren und Strategien zur Überwindung der Arzneimittelresistenz34,35zu identifizieren. Der in diesem Manuskript beschriebene Ansatz ermöglicht es dem Forscher, potenzielle therapeutische Ziele in menschlichen Tumoren zu identifizieren und die Wirksamkeit entsprechender Medikamente in vivo bei Mäusen zubewerten, die transplantierte Tumoren beherbergen, die zunächst genomisch charakterisiert waren. Das Protokoll verwendet Eierstocktumoren, die intraperitoneal transplantiert werden, ist aber auf jede Art von Tumor anwendbar, der ausreichend aggressiv ist, um bei Mäusen zu wachsen2,3,12.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>3M Vetbond</td>
			<td>3M, Co.</td>
			<td>1469SB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-AKT antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technologies, Inc.</td>
			<td>9272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GAPDH antibody(G-9)</td>
			<td>Santa Cruz Biotech. Inc.</td>
			<td>sc-365062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-MAPK antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technologies, Inc.</td>
			<td>9926</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-phospho-AKT antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technologies, Inc.</td>
			<td>9271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mTOR antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technologies, Inc.</td>
			<td>2972</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Phospho-mTOR antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technologies, Inc.</td>
			<td>2971</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Phospho-S6 antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technologies, Inc.</td>
			<td>4858</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Rictor antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technologies, Inc.</td>
			<td>2114</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-S6 antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technologies, Inc.</td>
			<td>2217</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Captisol</td>
			<td>ChemScene, Inc.</td>
			<td>cs-0731</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carboplatin</td>
			<td>NOVAPLUS, Inc.</td>
			<td>61703-360-18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Mediatech, Inc.</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Easy-A Hi-Fi PCR Cloning Enzyme</td>
			<td>Agilent, Inc.</td>
			<td>600404-51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lubricant</td>
			<td>Cardinal Healthcare</td>
			<td>82-280</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>Corning, Inc.</td>
			<td>356234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>McCoy&#39;s media</td>
			<td>Mediatech, Inc.</td>
			<td>10-050-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MK-2206</td>
			<td>ApexBio, Inc.</td>
			<td>A3010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MK-8669</td>
			<td>ARIAD Pharmaceuticals, Inc.</td>
			<td>AP23573</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair Sensitive Skin</td>
			<td>Church &#38; Dwight Co.</td>
			<td>Nair Hair Remover Shower Power Sensitive</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD/SCID mice</td>
			<td>Charles River, Inc.</td>
			<td>NOD.CB17-Prkdcscid/NCrCrl</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paclitaxel</td>
			<td>NOVAPLUS, Inc.</td>
			<td>55390-304-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEG400</td>
			<td>Millipore Sigma, Inc.</td>
			<td>88440-250ML-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perjeta</td>
			<td>Genetech, Co.</td>
			<td>Pertuzumab</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rituximab</td>
			<td>Genetech, Co.</td>
			<td>Rituxan</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI1640</td>
			<td>Mediatech, Inc.</td>
			<td>10-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SCID mice</td>
			<td>Harlan Laboratories, Inc.</td>
			<td>C.B.-17/IcrHsd-PrkdcscidLystbg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SLAx 13-6MHz linear transducer</td>
			<td>FUJIFILM SonoSite, Inc</td>
			<td>HFL38xp</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SonoSite S-series Ultrasound machine</td>
			<td>FUJIFILM SonoSite, Inc</td>
			<td>SonoSite SII</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 80</td>
			<td>Millipore Sigma, Inc.</td>
			<td>P4780-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

testing targeted therapies in cancer using structural dna alteration analysis and patient-derived xenografts

Wir präsentieren hier einen integrativen Ansatz zur Erprobung der Wirksamkeit gezielter Therapien, der die Next Generation der Sequenzierungstechnologien, therapeutische Zielanalysen und die Überwachung der Wirkstoffabhängigkeit mit patientenabgeleiteten Xenografts (PDX) kombiniert. Diese Strategie wurde am Beispiel von Eierstocktumoren validiert. Das Mate-Pair-Protokoll der nächsten Generation (MPseq) wurde verwendet, um strukturelle Änderungen zu identifizieren, und anschließend wurde eine Analyse potenziell zielbarer Änderungen durchgeführt. Menschliche Tumoren, die in immungeschwächten Mäusen angebaut wurden, wurden mit Medikamenten behandelt, die auf der Grundlage der genomischen Analysen ausgewählt wurden. Die Ergebnisse zeigten eine gute Korrelation zwischen den vorhergesagten und den beobachteten Antworten im PDX-Modell. Der vorgestellte Ansatz kann verwendet werden, um die Wirksamkeit von Kombinationsbehandlungen zu testen und personalisierte Behandlungen für Patienten mit wiederkehrendem Krebs zu unterstützen, insbesondere in Fällen, in denen die Standardtherapie fehlschlägt und es notwendig ist, Medikamente außerhalb des Etiketts zu verwenden.

Gewebe aus resezierten Eierstocktumoren zum Zeitpunkt der Entschärlung samten wurden gemäß IRB-Leitfaden gesammelt und für 1) genomische Charakterisierung und 2) Engraftment bei immungeschwächten Mäusen verwendet (Abbildung 1). Mate-pair-Sequenzierungsprotokoll36,37 wurde verwendet, um strukturelle Veränderungen in der DNA einschließlich Verluste, Gewinne und Verstärkungen zu identifizieren. Abbildung 2<...

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Testing Targeted Therapies in Cancer using Structural DNA Alteration Analysis and Patient-Derived Xenografts

Hier stellen wir ein Protokoll vor, um die Wirksamkeit gezielter Therapien zu testen, die auf der Grundlage der genomischen Zusammensetzung eines Tumors ausgewählt wurden. Das Protokoll beschreibt die Identifizierung und Validierung struktureller DNA-Umlagerungen, die Einplage von Patiententumoren in Mäuse und die Erprobung von Reaktionen auf entsprechende Medikamente.

Testen von gezielten Krebstherapien mit struktureller DNA-Alterationsanalyse und patientenabgeleiteten Xenografts

We present here an integrative approach for testing efficacy of targeted therapies that combines the next generation sequencing technolo-gies, therapeutic ...

Das hier beschriebene Protokoll soll einen Algorithmus zur Prüfung der Wirksamkeit der Behandlung mit In-vivo-Krebsmodellen demonstrieren. Das Protokoll besteht aus einer Kombination mehrerer Techniken. Die gesamte Genom-Biosequenzierung menschlicher Tumorproben wird verwendet, um genomische Veränderungen zu identifizieren.Dazu gehören sowohl Gen-Rearrangements als auch Änderungen der Anzahl der Genkopien. So wird die Analyse der identifizierten Veränderungen durchgeführt, um potenziell medikamentöse Veränderungen auszuwählen. Die auf der Grundlage der Genomanalyse ausgewählten Medikamente werden dann zur In-vivo-Behandlung entsprechender Tumoren verwendet, die in immungeschwächten Mäusen angebaut werden.Der entwickelte Algorithmus stellt einen vielversprechenden Ansatz zur Unterstützung von Behandlungsentscheidungen für die Versorgung von Krebspatienten dar. Verwenden Sie das Panda-Tool oder eine analoge Software, um zielfähige Änderungen zu identifizieren. Wir können die Gene auflisten, die durch Mikrosequenzierung identifiziert wurden, die als einfache Tab-delineated Datei mit Standard akzeptierten Gensymbolen resultierte.Fügen Sie das Pfundzeichen zur Kopfzeile der Liste hinzu, um sicherzustellen, dass der Tabellenkopf auf die Pfadebene U der Software übertragen wird. Laden Sie die Datei hoch, indem Sie auf die entsprechende Navigationsregisterkarte klicken. Weisen Sie ein einzelnes Symbol zur Darstellung der zugrunde liegenden Daten zu, indem Sie auf das Symbol ihrer Wahl und dann auf die Registerkarte "Abschließen" klicken.Sobald dann eine Patientendatei hochgeladen wird, zeigen Sie eine Vorschau der Seite an, um eine Spalte zu identifizieren, die die Anzahl der annotierten Gene pro Pfad anzeigt. Dies ist die letzte Spalte auf der rechten Seite. Verwenden Sie einen Pfadfilter in der oberen linken Seite des Hauptfensters, um die Anzahl der angezeigten Pfade auf die Wege zu beschränken, die die geneswichtig enthalten.Um Pfade zu identifizieren, die mehr Gene kommentieren, als zufällig erwartet würden, verwenden Sie eine Funktion unter der Anreicherungsregisterkarte. Anschließend wird der Haupttabelle eine Spalte hinzugefügt, die den entsprechenden p-Wert aus dem genauen Test eines Fishers anzeigt. Wählen Sie die Datenbank aus, um potenzielle drogenfähige Gene aus voreingestellter Anmerkung anzuzeigen, indem Sie ein entsprechendes Symbol auf der linken Seite des Hauptfensters überprüfen.Um einen Pfad für die Visualisierung auszuwählen, klicken Sie auf den Namen, der auf der Seite "Pfad-Viewer" angezeigt wird. Symbole, die jeden Anmerkungssatz darstellen, werden neben dem zugeordneten Gen angezeigt. Wenn Sie auf ein beliebiges Gen im Pfad klicken, wird die entsprechende Seite der Genkarten geöffnet.Wählen Sie die Wege aus, die annotierte Gene von Interesse und Treffer für potenzielle Medikamente für weitere Analysen zeigten. Führen Sie die Gewebearbeit in einer laminaren Strömungshaube durch, um sterile Bedingungen aufrechtzuerhalten. Legen Sie das Tumorgewebe in eine Schale, die kalte PBS oder Gewebekulturmedien wie RPMI, DMEM enthält und Antibiotika enthält.Identifizieren und isolieren Sie lebensfähiges Tumormaterial aus angrenzendem normalen und nekrotischen Gewebe mit Hilfe eines Pathologen. Verwenden Sie sterile Zangen und Skalpell, um nekrotisches Material zu entfernen, auf das ein Pathologe hingewiesen hat. Um subkutane Engraftment durchzuführen, schneiden Sie das Tumorgewebe mit sterilen Zangen, Skalpell oder chirurgischen Scheren in kleine Fragmente, etwa 2 x 2 x 2 Millimeter groß.Übertragen Sie das fragmentierte Gewebe auf Eis in eine vorgekühlte Petrischale. Lassen Sie kalte Matrigel in die Schale mit dem fragmentierten Gewebe, etwa 200 Mikroliter pro 10 Stück Gewebe. Gut mischen und die Gewebefragmente 10 Minuten im Matrigel einweichen lassen.Verwenden Sie sterile chirurgische Schere und Zangen, um einen 5-10 Millimeter vertikalen Hautschnitt an beiden Flanken einer Maus zu machen. Setzen Sie gerade Zangen sanft in den subkutanen Raum ein, um eine Tasche zu schaffen, die groß genug ist, um ein Tumorfragment unter das Fettpolster zu legen. Verwenden Sie sterile gerade Zangen, um Tumorfragmente in die zuvor vorbereitete Tasche in jeder von fünf Mäusen einzufügen.Schließen Sie den Hautschnitt mit Gewebekleber. Nach der Implantation, um die Lymphozytenproliferation zu hemmen, injizieren Sie jede Maus mit 100 Mikroliter Rituximab. Bereiten Sie die Maus für die orale Gavage vor, indem Sie die Haut des Rückens kneifen und sie nach hinten biegen, so dass der Kopf und die Lippen der Maus bewegungsunfähig sind.Setzen Sie die Gavage-Sonde an der Rückseite der Mauskehle ein, bis die Sonde die Speiseröhre erreicht. Stellen Sie sicher, dass die Sonde nicht zu weit eingesetzt wird, da die Lunge der Maus den Tod verursachen kann. Der repräsentative Genomschwimmer veranschaulicht die Landschaft genomischer Veränderungen in einem Tumor.Typisch für hochgradige Serosubtyp-Tumoren, mehrere Gewinne blaue Linien und Verluste rote Linien, wurden identifiziert, die ein hohes Maß an genomischer Instabilität. Die Top-Trend-Veränderung für therapeutische Interventionen im OC101-Tumor war eine Amplifikation am Chromosom 17, bei der ERBB2, ein Gen, das für HER2-Rezeptorkodiert ist, beteiligt war. Um die Ergebnisse auf DNA-Ebene zu validieren, wurden mehrere Sätze spezifischer Primer für die Ränder des verstärkten Bereichs entwickelt.Und PCR wurde durchgeführt. Bei der Verwendung der Kontrolle der menschlichen DNA wurde kein Amplifikationsprodukt absorbiert. Für OC101-Tumor-DNA wurden spezifische Bänder identifiziert.In einem anderen Variantentumor, T14, wurden zahlreiche DNA-Gewinne beobachtet. Dazu gehörten AKT2 in RICTOR-Genen. Die Validierung auf Proteinebene mit Immunoblotting zeigte einen hohen AKT-Gehalt in RICTOR.Eine signifikante Verringerung der Tumorbelastung wurde in der chemotherapiebehandelten Gruppe bis zum Ende der sechsten Woche beobachtet. Es gab einen zusätzlichen Nutzen gegenüber der Chemotherapie allein in den Gruppen, die eine Kombinationsbehandlung erhielten. Tumorgewebe wurde für die molekulare Analyse des Behandlungsreaktionens am Ende der Behandlungsstudie gesammelt.Die Gesamt- und Phosphorylatwerte von S6, AKT und mTOR wurden mittels Immunoblotting ermittelt. Der Vergleich der Konzentrationen dieser Proteine in unbehandelten, chemotherapiebehandelten und mit AKT- oder mTOR-Hemmerbehandelten behandelten Proteinen zeigte bei den beiden letztgenannten eine deutliche Abnahme. Der vorgestellte Ansatz ist sehr nützlich, um die klinische Studie in PDX-Modellen durchzuführen.Es nutzt die molekularen Eigenschaften des Tumors, wie durch genomische Profilierung erhalten, um die beste Wahl von Medikamenten für Tests zu bestimmen.

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Molecular Biology

Cancer Research

Unit 2

Cancer

SCIENTISTS IN ACTION

Development and Maintenance of a Preclinical Patient Derived Tumor Xenograft Model for the Investigation of Novel Anti-Cancer Therapies

Entwicklung und Wartung eines Präklinische Patienten gewonnen Tumorxenotransplantates Modell für die Untersuchung von neuartigen Anti-Krebs-Therapien

Patient derived tumor xenograft (PDTX) models provide a necessary platform in facilitating anti-cancer drug development prior to human trials. Human tumor ...

Forschung

Krebsforschung

Labeling of Breast Cancer Patient-derived Xenografts with Traceable Reporters for Tumor Growth and Metastasis Studies

Die Markierung von Brustkrebs-Patienten stamm Xenografts mit Nachvollziehbare Reporter für Tumorwachstum und Metastasierung Studies

The use of preclinical models to study tumor biology and response to treatment is central to cancer research. Long-established human cell lines, and many ...

Establishment of a Primary Culture of Patient-derived Soft Tissue Sarcoma

Einrichtung einer primären Kultur des Patienten abgeleitet Weichteilsarkomen

Soft tissue sarcomas (STS) represent a spectrum of heterogeneous malignancies with a difficult diagnosis, classification, and management. To date, more ...

Flow Cytometry to Estimate Leukemia Stem Cells in Primary Acute Myeloid Leukemia and in Patient-derived-xenografts, at Diagnosis and Follow Up

Flow Cytometry um Leukämie-Stammzellen in primäre akute myeloische Leukämie und Patienten-abgeleitet-Xenotransplantate bei Diagnose und folgen bis zu schätzen

Acute myeloid leukemia (AML) is a heterogeneous, and if not treated, fatal disease. It is the most common cause of leukemia-associated mortality in ...

Isolation and Characterization of Tumor-initiating Cells from Sarcoma Patient-derived Xenografts

Isolierung und Charakterisierung tumorinitiierender Zellen aus Sarkom-Patienten-abgeleiteten Xenografts

The existence and importance of tumor-initiating cells (TICs) have been supported by increasing evidence during the past decade. These TICs have been ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Etablierung von vom Magenkrebs abgeleiteten Xenograft-Modellen und Primärzelllinien

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Enhanced Viability for Ex vivo 3D Hydrogel Cultures of Patient-Derived Xenografts in a Perfused Microfluidic Platform

Verbesserte Lebensfähigkeit für Ex vivo 3D Hydrogelkulturen von patientenabgeleiteten Xenografts in einer perfused Microfluidic Platform

Patient-derived xenografts (PDX), generated when resected patient tumor tissue is engrafted directly into immunocompromised mice, remain biologically ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

Arzneimittel-Screening von Primärpatienten abgeleitetTumor Xenografts in Zebrafischen

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

Hochdurchsatz-In-vitro-Assay mit patientenabgeleiteten Tumororganoiden

Patient-derived tumor organoids (PDOs) are expected to be a preclinical cancer model with better reproducibility of disease than traditional cell culture ...

Profiling Sensitivity to Targeted Therapies in EGFR-Mutant NSCLC Patient-Derived Organoids

Profiling der Sensitivität gegenüber zielgerichteten Therapien in EGFR-mutierten NSCLC-patientenabgeleiteten Organoiden

Novel 3D cancer organoid cultures derived from clinical patient specimens represent an important model system to evaluate intratumor heterogeneity and ...