Name: assessment of acute wound healing using the dorsal subcutaneous polyvinyl alcohol sponge implantation and excisional tail skin wound models.
Uploaded: 2020-03-25T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Acute Wound Healing using the Dorsal Subcutaneous Polyvinyl Alcohol Sponge Implantation and Excisional Tail Skin Wound Models. at JoVE.com

著者らは、ブラウン大学フローサイトメトリーとソーティング施設のケビン・カールソンに、フローサイトメトリー実験に関する協議と支援に感謝したいと考えています。図 1B と C のイメージは、BioRender を使用して作成されました。ケイラ・リーとグレゴリー・セルパは、彼らの写真の援助に感謝しています。この研究は、以下からの助成金によって支えられました:国防高等研究プロジェクト庁(DARPA)YFAA15 D15AP00100、新しい科学賞のディーンの領域(ブラウン大学)、国立心臓肺血液研究所(NHLBI)1R01HL126887-01A1、環境科学研究所(NIES)T32-ES7272(環境病理学の訓練)とブラウン大学研究シード賞

ここで説明するすべての動物研究は、ブラウン大学の施設動物のケアと使用委員会によって承認され、国立衛生研究所の動物のケアと使用のためのガイドに従って行われました. 注:ビデオでは、手術ドレープはデモンストレーションのために省略されています。
PVAスポンジの皮下移植
<ol><li>8 mm x 8 mm x 4 mm の部分に PVA スポンジのシートをカットするはさみを使用します...

<ol>
	<li>Gottrup, F., Agren, M. S., Karlsmark, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+for+use+in+wound+healing+research:+a+survey+focusing+on+in+vitro+and+in+vivo+adult+soft+tissue.">Models for use in wound healing research: a survey focusing on in vitro and in vivo adult soft tissue.</a> Wound Repair and Regeneration: Official Publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 8 (2), 83-96 (2000).</li><li>Elliot, S., Wikramanayake, T. C., Jozic, I., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Modeling+Conundrum:+Murine+for+Cutaneous+Wound+Healing.">A Modeling Conundrum: Murine for Cutaneous Wound Healing.</a> Journal of Investigative Dermatology. 138 (4), 736-740 (2018).</li><li>Eming, S. A., Martin, P., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair+and+regeneration:+Mechanisms,+signaling,+and+translation.">Wound repair and regeneration: Mechanisms, signaling, and translation.</a> Science Translational Medicine. 6 (265), (2014).</li><li>Huber-Lang, M., Lambris, J. D., Ward, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+immune+responses+to+trauma.">Innate immune responses to trauma.</a> Nature Immunology. 19 (4), 327-341 (2018).</li><li>Novak, M. L., Koh, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+Transitions+of+Macrophages+Orchestrate+Tissue+Repair.">Phenotypic Transitions of Macrophages Orchestrate Tissue Repair.</a> The American Journal of Pathology. 183 (5), 1352-1363 (2013).</li><li>Martins-Green, M., Petreaca, M., Wang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+and+Their+Receptors+Are+Key+Players+in+the+Orchestra+That+Regulates+Wound+Healing.">Chemokines and Their Receptors Are Key Players in the Orchestra That Regulates Wound Healing.</a> Advances in Wound Care. 2 (7), 327-347 (2013).</li><li>Guerrero-Juarez, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+analysis+reveals+fibroblast+heterogeneity+and+myeloid-derived+adipocyte+progenitors+in+murine+skin+wounds.">Single-cell analysis reveals fibroblast heterogeneity and myeloid-derived adipocyte progenitors in murine skin wounds.</a> Nature Communications. 10 (1), 650 (2019).</li><li>Shook, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myofibroblast+proliferation+and+heterogeneity+are+supported+by+macrophages+during+skin+repair.">Myofibroblast proliferation and heterogeneity are supported by macrophages during skin repair.</a> Science. 362 (6417), 2971 (2018).</li><li>Davidson, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+wound+repair,+cell+proliferation,+and+collagen+accumulation+are+produced+by+a+cartilage-derived+growth+factor.">Accelerated wound repair, cell proliferation, and collagen accumulation are produced by a cartilage-derived growth factor.</a> The Journal of Cell Biology. 100 (4), 1219-1227 (1985).</li><li>Buckley, A., Davidson, J. M., Kamerath, C. D., Wolt, T. B., Woodward, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained+release+of+epidermal+growth+factor+accelerates+wound+repair.">Sustained release of epidermal growth factor accelerates wound repair.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 82 (21), 7340-7344 (1985).</li><li>Peterson, J. M., Barbul, A., Breslin, R. J., Wasserkrug, H. L., Efron, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Significance+of+T-lymphocytes+in+wound+healing.">Significance of T-lymphocytes in wound healing.</a> Surgery. 102 (2), 300-305 (1987).</li><li>Efron, J. E., Frankel, H. L., Lazarou, S. A., Wasserkrug, H. L., Barbul, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+healing+and+T-lymphocytes.">Wound healing and T-lymphocytes.</a> Journal of Surgical Research. 48 (5), 460-463 (1990).</li><li>Sch&#228;ffer, M. R., Tantry, U., Thornton, F. J., Barbul, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+nitric+oxide+synthesis+in+wounds:+pharmacology+and+effect+on+accumulation+of+collagen+in+wounds+in+mice.">Inhibition of nitric oxide synthesis in wounds: pharmacology and effect on accumulation of collagen in wounds in mice.</a> The European Journal of Surgery = Acta Chirurgica. 165 (3), 262-267 (1999).</li><li>Opalenik, S. R., Davidson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+differentiation+of+bone+marrow-derived+cells+during+wound+repair.">Fibroblast differentiation of bone marrow-derived cells during wound repair.</a> FASEB Journal: Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 19 (11), 1561-1563 (2005).</li><li>J&#228;rvel&#228;inen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+decorin+in+cutaneous+wound+healing+and+angiogenesis.">A role for decorin in cutaneous wound healing and angiogenesis.</a> Wound Repair and Regeneration: Official Publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 14 (4), 443-452 (2006).</li><li>Luckett, L. R., Gallucci, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-6+(IL-6)+modulates+migration+and+matrix+metalloproteinase+function+in+dermal+fibroblasts+from+IL-6KO+mice.">Interleukin-6 (IL-6) modulates migration and matrix metalloproteinase function in dermal fibroblasts from IL-6KO mice.</a> The British Journal of Dermatology. 156 (6), 1163-1171 (2007).</li><li>Daniel, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+the+postburn+wound+inflammatory+response+by+gammadelta+T-cells.">Regulation of the postburn wound inflammatory response by gammadelta T-cells.</a> Shock. 28 (3), 278-283 (2007).</li><li>MacLauchlan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+fusion,+giant+cell+formation,+and+the+foreign+body+response+require+matrix+metalloproteinase+9.">Macrophage fusion, giant cell formation, and the foreign body response require matrix metalloproteinase 9.</a> Journal of Leukocyte Biology. 85 (4), 617-626 (2009).</li><li>Schwacha, M. G., Thobe, B. M., Daniel, T., Hubbard, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+thermal+injury+on+wound+infiltration+and+the+dermal+inflammatory+response.">Impact of thermal injury on wound infiltration and the dermal inflammatory response.</a> Journal of Surgical Research. 158 (1), 112-120 (2010).</li><li>Ganesh, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostaglandin+E2+Induces+Oncostatin+M+Expression+in+Human+Chronic+Wound+Macrophages+through+Axl+Receptor+Tyrosine+Kinase+Pathway.">Prostaglandin E2 Induces Oncostatin M Expression in Human Chronic Wound Macrophages through Axl Receptor Tyrosine Kinase Pathway.</a> The Journal of Immunology. 189 (5), 2563-2573 (2012).</li><li>Deskins, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+mesenchymal+stromal+cells:+identifying+assays+to+predict+potency+for+therapeutic+selection.">Human mesenchymal stromal cells: identifying assays to predict potency for therapeutic selection.</a> Stem Cells Translational Medicine. 2 (2), 151-158 (2013).</li><li>Daley, J. M., Brancato, S. K., Thomay, A. A., Reichner, J. S., Albina, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+phenotype+of+murine+wound+macrophages.">The phenotype of murine wound macrophages.</a> Journal of Leukocyte Biology. 87 (1), 59-67 (2010).</li><li>Thomay, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+Interleukin-1+Signaling+Improves+the+Quality+of+Wound+Healing.">Disruption of Interleukin-1 Signaling Improves the Quality of Wound Healing.</a> The American Journal of Pathology. 174 (6), 2129-2136 (2009).</li><li>Brancato, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor+4+signaling+regulates+the+acute+local+inflammatory+response+to+injury+and+the+fibrosis/neovascularization+of+sterile+wounds.">Toll-like receptor 4 signaling regulates the acute local inflammatory response to injury and the fibrosis/neovascularization of sterile wounds.</a> Wound Repair and Regeneration: Official Publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 21 (4), 624-633 (2013).</li><li>Daley, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+macrophage+phenotype+by+soluble+product(s)+released+from+neutrophils.">Modulation of macrophage phenotype by soluble product(s) released from neutrophils.</a> Journal of Immunology. 174 (4), 2265-2272 (2005).</li><li>Crane, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+monocyte+to+macrophage+transition+in+the+murine+sterile+wound.">The monocyte to macrophage transition in the murine sterile wound.</a> PloS One. 9 (1), 86660 (2014).</li><li>Falanga, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Full-thickness+wounding+of+the+mouse+tail+as+a+model+for+delayed+wound+healing:+accelerated+wound+closure+in+Smad3+knock-out+mice.">Full-thickness wounding of the mouse tail as a model for delayed wound healing: accelerated wound closure in Smad3 knock-out mice.</a> Wound Repair and Regeneration. 12 (3), 320-326 (2004).</li><li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+underlying+skeletal+growth+arrest+by+cutaneous+scarring.">Molecular mechanisms underlying skeletal growth arrest by cutaneous scarring.</a> Bone. 66, 223-231 (2014).</li><li>Zhou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Model+for+Cutaneous+Wound+Healing+and+Scarring+in+the+Rat.">A Novel Model for Cutaneous Wound Healing and Scarring in the Rat.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 143 (2), 468-477 (2019).</li><li>Crane, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+influenza+A+virus+infection+leads+to+suppression+of+the+innate+immune+response+to+dermal+injury.">Pulmonary influenza A virus infection leads to suppression of the innate immune response to dermal injury.</a> PLOS Pathogens. 14 (8), 1007212 (2018).</li><li>Grada, A., Mervis, J., Falanga, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+Techniques+Made+Simple:+Animal+Models+Healing.">Research Techniques Made Simple: Animal Models Healing.</a> Journal of Investigative Dermatology. 138 (10), 2095-2105 (2018).</li><li>Ritti&#233;, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+mechanisms+of+skin+repair+in+humans+and+other+mammals.">Cellular mechanisms of skin repair in humans and other mammals.</a> Journal of Cell Communication and Signaling. 10 (2), 103-120 (2016).</li><li>Falanga, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+Bone+Marrow-Derived+Cultured+Mesenchymal+Stem+Cells+Delivered+in+a+Fibrin+Spray+Accelerate+Healing+in+Murine+and+Human+Cutaneous+Wounds.">Autologous Bone Marrow-Derived Cultured Mesenchymal Stem Cells Delivered in a Fibrin Spray Accelerate Healing in Murine and Human Cutaneous Wounds.</a> Tissue Engineering. 13 (6), 1299-1312 (2007).</li><li>Lucas, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+Roles+of+Macrophages+in+Diverse+Phases+of+Skin+Repair.">Differential Roles of Macrophages in Diverse Phases of Skin Repair.</a> The Journal of Immunology. 184 (7), 3964-3977 (2010).</li><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+the+function+and+fate+of+neutrophils+in+sterile+injury+and+repair.">Visualizing the function and fate of neutrophils in sterile injury and repair.</a> Science. 358 (6359), 111-116 (2017).</li><li>Mirza, R. E., Koh, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contributions+of+cell+subsets+to+cytokine+production+during+normal+and+impaired+wound+healing.">Contributions of cell subsets to cytokine production during normal and impaired wound healing.</a> Cytokine. , 1-4 (2014).</li><li>Mirza, R., DiPietro, L. A., Koh, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+and+Specific+Macrophage+Ablation+Is+Detrimental+to+Wound+Healing+in+Mice.">Selective and Specific Macrophage Ablation Is Detrimental to Wound Healing in Mice.</a> The American Journal of Pathology. 175 (6), 2454-2462 (2010).</li><li>DiPietro, L. A., Burdick, M., Low, Q. E., Kunkel, S. L., Strieter, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MIP-1alpha+as+a+critical+macrophage+chemoattractant+in+murine+wound+repair.">MIP-1alpha as a critical macrophage chemoattractant in murine wound repair.</a> Journal of Clinical Investigation. 101 (8), 1693-1698 (1998).</li><li>Wetzler, C., K&#228;mpfer, H., Stallmeyer, B., Pfeilschifter, J., Frank, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large+and+Sustained+Induction+of+Chemokines+during+Impaired+Wound+Healing+in+the+Genetically+Diabetic+Mouse:+Prolonged+Persistence+of+Neutrophils+and+Macrophages+during+the+Late+Phase+of+Repair.">Large and Sustained Induction of Chemokines during Impaired Wound Healing in the Genetically Diabetic Mouse: Prolonged Persistence of Neutrophils and Macrophages during the Late Phase of Repair.</a> Journal of Investigative Dermatology. 115 (2), 245-253 (2000).</li><li>Kim, D. J., Mustoe, T., Clark, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutaneous+wound+healing+in+aging+small+mammals:+a+systematic+review.">Cutaneous wound healing in aging small mammals: a systematic review.</a> Wound Repair and Regeneration. 23 (3), 318-339 (2015).</li></ol>

この記事では、急性創傷治癒反応の評価を可能にする2つの難治性マウス創傷モデルについて説明する。最初の方法は、後部皮下空間におけるPVAスポンジの外科的移植を伴う。このアプローチは、単離されたスポンジから得られた多数の細胞および創傷液の量による細胞創傷治癒応答を研究するための生検ベースの創傷モデルに対して明確な利点を提供する。この処置を成功させるためには、...

創傷治癒過程を調べるために利用できる多くのマウスモデルシステムがあり、それぞれが特定の利点と限界11、22を有する。以下の方法は、2つのマウス創傷モデルを提示し、それぞれが創傷治癒応答の特定の側面に対処し、傷害に対する応答における摂動の原因および影響を特定するために使用することができる。創傷治癒のプロセスは、明確な段階で起こる。第1段階は、血小板、好中球、および単球/マクロファージの急速な流入、ならびに炎症性サイトカインおよびケモカインの産生を特徴とする炎症性である。炎症の解決に続いて、環境は、前線維および前血管新生サイトカインおよび成長因子の誘導により、より修復的な状態に移行する。顆粒組織は、堆積し、新血管は、筋線維芽細胞、線維芽細胞、上皮細胞、および内皮細胞の移動と形成される。最終段階では、細胞外マトリックスが再モデル化され、瘢痕形成と創傷閉鎖が進行する2,,3,,4,,5,6,7,8.5
単一のマウスモデルは、創傷治癒2のすべての段階を研究するシステムを提供しない。ここでは、2つの外科的創傷モデルが記載されている:1つは急性細胞およびサイトカイン創傷治癒応答を解明し、もう1つは創傷閉鎖および組織学的分析の評価を可能にする。これら2つの方法は、創傷治癒応答の異なる側面に対する摂動または併存の影響を評価するために相補的な方法で採用され得る。ポリビニルアルコール(PVA)スポンジの皮下注入は、細胞および造粒組織応答の多くの側面を解明するために何十年もげっ歯類モデルで使用されてきたシステムである9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20 、21,22,23,24.このアプローチはサイトカインが豊富な創傷液および細胞浸潤物の検索を可能にする。このモデルでは、PVAスポンジの1 cm x 1 cm x 0.5 cmの部分は後後の後方の正中線で作られた2cmの切開を通して皮下のポケットに置かれる。切開は外科用クリップで閉じられ、スポンジは細胞および液体の分離のための後の時点で取り出すことができる。分離されたスポンジの細胞およびサイトカインミリューは、着床後約14日までの急性創傷治癒の正常な段階を反映する。後の時点で、このモデルは造粒組織形成および異物応答1を研究する上でより有利である。このシステムを用いて、>106細胞を6 単離することが可能であり、これは表現型および機能的アッセイおよびRNA単離に対して明確な利点を提供し、他の生検ベースの方法11、22、23、25、2622,23から細胞を単離する上で。,25,26
創傷閉鎖率は、尾部皮膚切除モデルを用いて決定される。このモデルでは、最初にFalangaらによって記述され、他の人によって報告されたように27、28、29、30、,29,30尾の皮膚の1cm x 0.3 cmの完全な厚さのセクションは尾の基部の近くで除去される。27,創傷領域は容易に視覚化され、時間の経過とともに測定することができる。あるいは、尾部組織は組織学的解析のために単離され得る。このアプローチは、十分に確立された後部パンチ生検法に代わるものとして、または組み合わせて使用することができる。これら2つのモデルの主な違いは、創傷閉鎖率、毛皮の有無、および皮膚構造22、31、3231,32である。尾の皮膚の傷は、完全閉鎖が起こるのに約21日かかるため、創傷閉鎖を評価するためのより長い時間枠を提供する。これは、主にパンニクルカルノサスの作用による収縮によって、はるかに速く治癒する非スプラネートの後側パンチ生検に反対している。副生部の裏切りパンチ生検はよりゆっくりと治癒し、収縮治癒の影響を減少させるが、収縮ベースの,メカニズム1、2、27、30、31、332,27を制限するために異物の存在に依存する。,3330,311
記載された創傷モデルは摂動の不在の正常な創傷治癒過程を理解するための有益である。げっ歯類の皮膚の治癒は、緩い構造、収縮治癒への依存、およびその他の解剖学的な違いを含む人間の皮膚とは非常に重要な点で異なりますが、マウスシステムは、機械学的およびスクリーニング研究のための特定の利点を提供します。これらの中で最も重要なのは、近血種株および遺伝子変異体の入手可能性、遺伝的な難解性、および低コストである。マウス研究から得られた機械学的洞察は、ブタシステム22,3131のような人間の皮膚治癒をより密接に模倣する複雑な動物モデルに翻訳することができる。
定常状態における創傷治癒応答を調べることに加えて、これらのモデルは、細胞、サイトカインおよび総組織レベルにおける創傷治癒欠陥の基礎を理解するために、併存疾患と組み合わせることができる。この特定の設定では、2つのモデルを協調して使用して、術後肺炎などの特定の併存疾患の影響を評価し、急性細胞創傷治癒応答および創傷閉鎖率30の両方に及ぼす影響を評価することができる。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:709px;" width="709">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:317px;">10x Phosphate Buffered Saline</td>
			<td style="width:121px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:104px;">BP3991</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:317px;">15 mL centrifuge tubes, Olympus</td>
			<td style="width:121px;">Genesee</td>
			<td style="width:104px;">28-103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:317px;">1x HBSS (+Calcium, +Magnesium, &#8211;Phenol Red)</td>
			<td style="width:121px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:104px;">14025076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:317px;">5ml Syringe</td>
			<td style="width:121px;">BD</td>
			<td style="width:104px;">309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:317px;">Anti-mouse CD45.2-APC Fire750</td>
			<td style="width:121px;">BioLegend</td>
			<td style="width:104px;">109852</td>
			<td>Clone 104</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:317px;">Anti-mouse F4/80-eFluor660</td>
			<td style="width:121px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:104px;">50-4801-82</td>
			<td>Clone BM8</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:317px;">Anti-mouse Ly6C-FITC</td>
			<td style="width:121px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:104px;">553104</td>
			<td>Clone AL-21</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:317px;">Anti-mouse Ly6G-PerCP-eFluor710</td>
			<td style="width:121px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:104px;">46-9668-82</td>
			<td>Clone 1A8-Ly6g</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:317px;">Anti-mouse Siglec-F-APC-R700</td>
			<td style="width:121px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:104px;">565183</td>
			<td>Clone E50-2440</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:317px;">Autoclip Stainless Steel Wound Clip Applier</td>
			<td style="width:121px;">Braintree Scientific</td>
			<td style="width:104px;">NC9021392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:317px;">Autoclip Stainless Steel Wound Clips, 9mm</td>
			<td style="width:121px;">Braintree Scientific</td>
			<td style="width:104px;">NC9334081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:317px;">Blender Bag, 80mL</td>
			<td style="width:121px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:104px;">14258201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:317px;">Culture Tube, 16mL, 17x100</td>
			<td style="width:121px;">Genesee Scientific</td>
			<td style="width:104px;">21-130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:317px;">Fetal Bovine Serum - Standard</td>
			<td style="width:121px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:104px;">10437028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:317px;">Fixable Viability Dye eFluor506</td>
			<td style="width:121px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:104px;">65-0866-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:317px;">Hepes Solution, 1M</td>
			<td style="width:121px;">Genesee Scientific</td>
			<td style="width:104px;">25-534</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:317px;">ImageJ Software</td>
			<td style="width:121px;">NIH</td>
			<td style="width:104px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:317px;">Penicillin-Streptomycin (5000 U/mL)</td>
			<td style="width:121px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:104px;">15070-063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:317px;">Polyvinyl alcohol sponge - large pore size</td>
			<td style="width:121px;">Ivalon/PVA Unlimited</td>
			<td style="width:104px;"></td>
			<td>www.sponge-pva.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:317px;">Povidone-iodine solution, 10%</td>
			<td style="width:121px;">Fisher Scientific</td>
			<td>3955-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:317px;">Spray barrier film, Cavilon</td>
			<td style="width:121px;">3M</td>
			<td style="width:104px;">3346E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:317px;">Stomacher 80 Biomaster, 110V</td>
			<td style="width:121px;">Seward</td>
			<td style="width:104px;">0080/000/AJ</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of acute wound healing using the dorsal subcutaneous polyvinyl alcohol sponge implantation and excisional tail skin wound models.

創傷治癒は、炎症、造粒組織形成、線維症、および分解能の整然とした進行を必要とする複雑なプロセスである。マウスモデルは、これらのプロセスに貴重な機械分析を提供します;しかし、創傷治癒応答のすべての側面に完全に対処する単一のモデルはありません。代わりに、創傷治癒のさまざまな側面に対処するために複数のモデルを使用することが理想的です。ここでは、創傷治癒応答の多様な側面に対処する2つの異なる方法について説明する。最初のモデルでは、ポリビニルアルコールスポンジはマウスのドーサムに沿って皮下に埋め込まれます。スポンジの取り出し後、細胞は機械的破壊によって単離され、液体は遠心分離によって抽出され、急性創傷環境における細胞およびサイトカイン応答の詳細な特徴付けが可能になる。このモデルの制限は、創傷閉鎖率を評価できないことです。このためには、テールスキン切除モデルが利用される。このモデルでは、尾の表面に沿って、尾の底部の近くに10 mm x 3 mmの長方形の尾の皮片が切除される。このモデルは、平面解析のために簡単に撮影して治癒率を決定し、組織学的分析のために切除することができます。両方の方法は、遺伝的に変化したマウス株、または、創傷治癒機構を解明するために、糖尿病、老化、または二次感染などの併存疾患のモデルと組み合わせて利用することができる。

PVAスポンジ移植後の全身炎症反応 PVAスポンジ移植手術は、創傷の1日後に血漿中IL-6の誘導によって示されるように全身的な炎症反応を発生させた(図2A)。TNF-αおよびIL-1βを含む他の炎症性サイトカイン、ならびにCCL2およびCXCL1を含むケモカインの配列は、PVAスポンジ移植後の最初の7日間に全身に誘導され、他の26,30,3...

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Acute Wound Healing using the Dorsal Subcutaneous Polyvinyl Alcohol Sponge Implantation and Excisional Tail Skin Wound Models. at JoVE.com

Assessment of Acute Wound Healing using the Dorsal Subcutaneous Polyvinyl Alcohol Sponge Implantation and Excisional Tail Skin Wound Models.

ここでは、2つのマウス創傷治癒モデルが記載されており、1つは細胞およびサイトカイン創傷治癒応答を評価するように設計され、もう1つは創傷閉鎖率を定量化するように設計されている。これらの方法は、糖尿病などの複雑な疾患モデルと共に使用して、創傷治癒不良の様々な側面のメカニズムを決定することができる。

後部皮下ポリビニルアルコールスポンジの移植と切除テール皮膚創傷モデルを用いた急性創傷治癒の評価

Wound healing is a complex process that requires the orderly progression of inflammation, granulation tissue formation, fibrosis, and resolution. Murine ...

これらのモデルは、細胞およびサイトカイン動態および創傷閉鎖を含む創傷治癒応答の様々な側面を評価するために実施することができる。PVAスポンジモデルは、表現型および機能的分析のための何百万もの創傷白血球の回収を可能にし、尾部皮膚切除モデルはゆっくりと治癒する創傷を容易に視覚化することを可能にする。PVAスポンジおよび切除テール創傷モデルは、糖尿病や肺炎などの併存疾患と組み合わせて使用して、創傷治癒への影響を理解することができます。メレディス・クレーンとの手順を実証することは、私の研究室の研究アシスタントであるビル・ヘンリーです。実験を始める前に、はさみを使ってPVAスポンジのシートを8×8×4ミリメートルにカットします。PBS内のスポンジを殺菌する前に、ビーカーで滅菌PBS中のスポンジ片を10分間水分補給します。スポンジが冷えたら、PBSに沈んだスポンジを摂氏4度で保管してください。手順の日に、滅菌層流れフードに無菌培養皿に実験動物ごとに6つのスポンジを置き、麻酔を受けた8〜12週齢の男性C57-Black/6マウスでつま先ピンチに対する応答の欠如を確認します。アシスタントは、ドーサムと滅菌ガーゼに沿って髪を除去するためにバリカンを使用して、ポビドネ-ヨウ素溶液を剃った領域に2回塗布し、続いて単一の70%エタノール塗布を行います。助手は、加熱されたパッドの上に置かれた無菌外科ドレープにマウスを移す必要があります。無菌手袋を着用し、下地の組織から後部皮膚を引き離すために鉗子を使用し、滅菌手術用はさみを使用して、尾部の基部に約2センチメートル前部の後方正中線に沿って2センチメートルの切開を行う。無菌鉗子で切開を開いたままにして、無菌、湾曲した、鈍い先端の外科用はさみを使用して、図に示すように、ドーサムに沿って皮下ポケットを形成する。はさみを挿入したら、チップを2回開閉して、挿入したスポンジを保持するのに十分な大きさのポケットを形成します。ポケットが作成されたら、無菌手術用はさみを使用して、培養皿の1つのPVAスポンジを静かに絞って余分なPBSを取り除きます。次に、スポンジを片隅に持ち上げ、ハサミで角を曲げて、スポンジを皮下ポケットに入れます。6つのスポンジがすべて実証されているように配置されたら、無菌鉗子を使用して切開後部皮膚をつまみ、2つのステンレススチール製の巻きクリップで切開を閉じます。PVAスポンジ液の分離のために、移植後1〜14日後、外科用ステープルを取り除き、歯付き鉗子で切開を開く。はさみを使用して後部中線に沿って切開を延長し、鉗子を使用して皮下ポケットからスポンジを1本抽出します。氷の上の16ミリリットルの培養チューブにネストされた5ミリリットルのシリンジのバレルにスポンジを置き、必要に応じてスポンジの表面に付着したままの結合組織を切り離すためにはさみを使用します。すべてのスポンジが抽出され、実証されるように移管された場合、培養管を遠心分離して創傷液を採取する。PVAスポンジから細胞を分離するには、ちょうど実証したようにスポンジを採取した後、5ミリリットルのHBSS採取媒体を含む15ミリリットルの円錐管に入れる。すべてのスポンジが収集されたら、スポンジサスペンションを80ミリリットルのブレンダーバッグにデカントし、パドルがスポンジと媒体に当たるようにパドルブレンダーのハッチからバッグを掛けます。パドルブレンダーを60秒間高く走るように設定し、startを押します。ブレンダーが停止したら、袋の中のスポンジを絞って培地を完全に放出し、ピペットを使用してブレンダーバッグから15ミリリットルのチューブに培地を戻します。パドルブレンダーの設定を調整して高い30秒間実行し、ブレンダーバッグに5ミリリットルのミディアムを追加します。収集した培地のチューブを遠心する前に、さらに2回胃の培養を繰り返します。細胞と赤血球の赤いペレットは、円錐管の下部に表示される必要があります。.蒸留水900マイクロリットルを細胞と3~5秒間混合してから、100マイクロリットルの100マイクロリットルのPBSと1x PBSの4ミリリットルで溶菌を中和します。遠心分離によって細胞を収集し、下流分析のために適切な媒体中の白い細胞ペレットを再懸濁する。尾部皮膚創傷を作成するには、麻酔下でつま先ピンチへの応答の欠如を確認した後、8〜12週齢、男性、C57-Black/6マウス、生殖不能ガーゼを使用してポビドネヨウ素溶液を手術部位に2回塗布し、続いて70%エタノールを1回塗布する。永久的なマーカーとあらかじめ作られたテンプレートを使用して、尾の裏面、尾のベースから10ミリメートルの上に10×3ミリメートルのセクションをトレースし、無菌外科ドレープの上にマウスを置きます。無菌の外科用手袋を着用し、無菌メスの刃を使用して、創傷領域の右、下、および左端に沿って完全な厚さの切開を行います。滅菌鉗子を使用して、切除された皮膚を尾から剥がし、生殖不能の外科用はさみを使用して創傷領域の上端を切り取る。滅菌ガーゼを使用して、出血を止めるために傷口に圧力をかけ、創傷床にスプレーバリアフィルムを塗布する。次に、一定の間隔で一定の距離から創傷を撮影し、平面解析により写真を解析し、創傷面積の測定値を決定する。PVAスポンジ移植手術は、創傷の翌日に血漿中のIL-6の誘導によって示されるように、全身的な炎症反応を生成する。PVAスポンジ創傷から回収できる細胞の数は、スポンジ内の一次細胞浸潤集団を含む好中球、単球、およびマクロファージで、時間の経過とともに増加する。好中球はLy6G陽性、シグレック-F陰性細胞として同定される。シグレク-F陽性細胞は主に好酸球である。Ly6G陰性のシグレック-F陰性細胞のGAT化により、F4/80陽性単球およびマクロファージの同定が可能となる。F4/80陽性細胞は、Ly6Cの発現によりさらに分化し、Ly6C高炎症性単球とLy6C低単球由来マクロファージを区別することができる。切除尾皮膚モデルは、密な毛皮を欠く堅い皮膚の創傷閉鎖を研究する後部皮膚パンチ生検法に代わるものを提供する。創傷閉鎖は、創傷床の面積を時間の経過とともに測定することによって定量することができる。尾の皮膚の創傷はまた、HとEとマッソンのトリクロム染色を介して組織学的分析によって断面で観察することができる。これらの画像では、切除された皮膚の横方向のマージンは、尾の後ろ面の矢印によって示されています。定常性創傷治癒を理解するために、治療化合物または介入はまた、PVAスポンジへの直接注入または尾創床への送達を通じて試験することができる。

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Cutaneous Leishmaniasis in the Dorsal Skin of Hamsters: a Useful Model for the Screening of Antileishmanial Drugs

ハムスターの背部皮膚における皮膚リーシュマニア症：Antileishmanial薬剤のスクリーニングのための有用なモデル

Traditionally, hamsters are experimentally inoculated in the snout or the footpad. However in these sites an ulcer not always occurs, measurement of ...

免疫・感染学

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

マウスにおける同種のCD4 T細胞応答を研究する尾皮膚の移植

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

の検出のための磁気スターラー方法<em&gt;旋毛虫</em筋肉試料中&gt;幼虫

Trichinellosis is a debilitating disease in humans and is caused by the consumption of raw or undercooked meat of animals infected with the nematode ...

A Novel In Vitro Wound Healing Assay to Evaluate Cell Migration

A Novel In Vitro Wound Healing Assay to Evaluate Cell Migration

新規In Vitro細胞移動を評価する癒しのアッセイを傷

The aim of this work is to show a novel method to evaluate the ability of some immunomodulatory molecules, such as antimicrobial peptides (AMPs), to ...

In Vivo Imaging of Reactive Oxygen Species in a Murine Wound Model

In Vivo Imaging of Reactive Oxygen Species in a Murine Wound Model

生体内でマウスにおける活性酸素種のイメージング創モデル

The generation of reactive oxygen species (ROS) is a hallmark of inflammatory processes, but in excess, oxidative stress is widely implicated in various ...

Chronic, Acute, and Reactivated HIV Infection in Humanized Immunodeficient Mouse Models

ヒト化免疫不全マウスモデルにおける慢性、急性、再活性化HIV感染

Humanized NOD/SCID/IL-2 receptor &#947;-chainnull mice recapitulate some features of human immunity, which can be exploited in basic and pre-clinical ...

A Delayed Inoculation Model of Chronic Pseudomonas aeruginosa Wound Infection

A Delayed Inoculation Model of Chronic Pseudomonas aeruginosa Wound Infection

慢性緑膿菌創傷感染の遅延接種モデル

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) is a major nosocomial pathogen of increasing relevance to human health and disease, particularly in the setting of ...

Studying Effects of Cigarette Smoke on Pseudomonas Infection in Lung Epithelial Cells

Studying Effects of Cigarette Smoke on Pseudomonas Infection in Lung Epithelial Cells

肺上皮細胞における シュードモナス 感染に及ぼすタバコの煙の影響の研究

Cigarette smoking is the major etiological cause for lung emphysema and chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Cigarette smoking also promotes ...

Live Imaging of Chemokine Receptors in Zebrafish Neutrophils During Wound Responses

創傷応答中のゼブラフィッシュ好中球中のケモカイン受容体のライブイメージング

Leukocyte guidance by chemical gradients is essential for immune responses. Neutrophils are the first cells to be recruited to sites of tissue damage ...

A Novel High-Throughput Ex Vivo Ovine Skin Wound Model for Testing Emerging Antibiotics

A Novel High-Throughput Ex Vivo Ovine Skin Wound Model for Testing Emerging Antibiotics

新しい抗生物質をテストするための新しいハイスループット Ex Vivo ヒツジ皮膚創傷モデル

The development of antimicrobials is an expensive process with increasingly low success rates, which makes further investment in antimicrobial discovery ...