Name: induction of eryptosis in red blood cells using a calcium ionophore
Uploaded: 2020-01-21T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction of Eryptosis in Red Blood Cells Using a Calcium Ionophore at JoVE.com

Diese Arbeit wurde durch den NIH-Zuschuss R15ES030140 und den NSF-Zuschuss CBET1903568 unterstützt. Die finanzielle Unterstützung durch das Russ College of Engineering and Technology und das Department of Chemical and Biomolecular Engineering an der Ohio University wird ebenfalls anerkannt.

Alle menschlichen Blutproben, die in dem nachstehend beschriebenen Protokoll verwendet wurden, wurden als nicht identifizierte Proben erworben. Für diese Studie wurden keine menschlichen Probanden direkt beteiligt oder rekrutiert. Die Leitlinien der Erklärung von Helsinki sollten verwendet werden, wenn die Forschung menschliche Subjekte betrifft.
1. Erythrozyten-Isolation vom Vollblut
<ol><li>Fügen Sie 500 l Vollblut in saurer Citratdextrose (ACD) (bei 4 °C) zu einem Mikrozentrifugenrohr...

<ol>
	<li>Bratosin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmed+Cell+Death+in+Mature+Erythrocytes:+A+Model+for+Investigating+Death+Effector+Pathways+Operating+in+the+Absence+of+Mitochondria.">Programmed Cell Death in Mature Erythrocytes: A Model for Investigating Death Effector Pathways Operating in the Absence of Mitochondria.</a> Cell Death and Differentiation. 8 (12), 1143-1156 (2001).</li><li>Lang, E., Lang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+Pathophysiological+Significance+of+Eryptosis,+the+Suicidal+Erythrocyte+Death.">Mechanisms and Pathophysiological Significance of Eryptosis, the Suicidal Erythrocyte Death.</a> Seminars in Cell and Developmental Biology. 39, 35-42 (2015).</li><li>Garnier, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythrocyte+Deformability+in+Diabetes+and+Erythrocyte+Membrane+Lipid+Composition.">Erythrocyte Deformability in Diabetes and Erythrocyte Membrane Lipid Composition.</a> Metabolism. 39 (8), 794-798 (1990).</li><li>Verkleij, A. 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Ziel dieses Verfahrens ist es, optimale Werte für die Ionophorkonzentration, die Behandlungszeit und die extrazelluläre Glukosekonzentration zu liefern, die wichtige Faktoren für eine erfolgreiche Induktion der Eryptose sind. Ein kritischer Schritt im Protokoll ist die Erschöpfung der extrazellulären Glukose, die trotz ihrer Bedeutung in der Literatur nicht ausreichend betont wurde. Der Zuckergehalt in normaler Ringer-Lösung (5 mM) wirkt hemmend auf die Eryptose. Glukosemangel in der extrazellulären Umgebung induz...

Programmierter Zelltod bei Erythrozyten, auch bekannt als Eryptose, ist bei vielen klinischen Erkrankungen und hämatologischen Erkrankungen häufig. Eryptose ist mit Zellschrumpfung und dem Verlust der Phospholipid-Asymmetrie in der Zellplasmamembran1,2verbunden. Der Verlust der Asymmetrie führt zur Translokation von Phosphatidylserin (PS), einem Lipid, das normalerweise in der inneren Packungsbeilage3,4, zur äußeren Zellbroschüre lokalisiert ist, die Anmacrophagen an Phagozytose sendet und defekte Erythrozyten5,6,7,8. Am Ende der normalen Lebensdauer von Erythrozyten sorgt die Entfernung eryptotischer Zellen durch Makrophagen für das Gleichgewicht der erythrozyten im Umlauf. Jedoch, bei kranken Bedingungen, wie Sichelzellerkrankung und Thalassämie9,10,11, verbesserte Eryptose kann zu schwerer Anämie führen2. Aufgrund seiner Bedeutung bei hämatologischen Erkrankungen besteht ein erhebliches Interesse an der Untersuchung der Faktoren, die die Eryptose auslösen oder hemmen, und der molekularen Mechanismen, die diesem Prozess zugrunde liegen.
Die Plasmamembran gesunder Erythrozyten ist asymmetrisch, wobei verschiedene Phospholipide an den äußeren und inneren Blättchen lokalisiert werden. Membranasymmetrie wird in erster Linie durch die Wirkung von Membranenzymen reguliert. Aminophospholipid translocase erleichtert den Transport von Aminophospholipiden, PS und Phosphatidylethanolamin (PE), indem diese Lipide auf die innere Packungsbeilage der Zelle geleitet werden. Auf der anderen Seite transportiert Floppase das Cholin enthaltende Phospholipide, Phosphatidylcholin (PC) und Sphingomyelin (SM), von der inneren zur äußeren Packungsbeilage der Zellmembran12. Im Gegensatz zu gesunden Zellen wird die Membran eryptotischer Erythrozyten jedoch durchwühlt. Dies ist auf die Wirkung eines dritten Enzyms, Scramblase, zurückzuführen, das die Phospholipid-Asymmetrie durch die Erleichterung des bidirektionalen Transports von Aminophospholipiden13,14,15,16stört. Scramblase wird durch erhöhte intrazelluläre Konzentrationen von Ca2+aktiviert. Daher sind Calciumionophore, die den Transport von Ca2+ über die Zellmembran12erleichtern, effiziente Induktoren der Eryptose.
Ionomycin, ein Calcium-Ionophor, wurde weit verbreitet, um Eryptose in Erythrozyten12,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26zu induzieren. Ionomycin hat sowohl hydrophile als auch hydrophobe Gruppen, die notwendig sind, um Ca2+ Ion zu binden und zu erfassen und in den zytosolischen Raum27,28,29zu transportieren. Dies führt zur Aktivierung von Scramblase und Translokation von PS in die äußere Packungsbeilage, die leicht mit Annexin-V, einem zellulären Protein mit einer hohen Affinität zu PS12,nachgewiesen werden kann. Obwohl die Auslösung der Eryptose durch Ionomycin häufig berichtet wird, besteht eine erhebliche Methodabweichung in der Literatur (Tabelle 1). Die Population der Erythrozyten, die sich einer Eryptose unterziehen, hängt von verschiedenen Faktoren wie der Ionophorkonzentration, der Behandlungszeit mit Ionophor und dem Zuckergehalt der extrazellulären Umgebung ab (Glukose-Erschöpfung aktiviert Kationenkanäle und erleichtert den Eintritt von Ca2+ in den zytosolischen Raum)30,31. Allerdings gibt es wenig Konsistenz in diesen Faktoren in der Literatur, so dass es schwierig ist, Eryptose reproduzierbar in vitrodurchzuführen.
In diesem Protokoll stellen wir ein Schrittweiseverfahren zur Induziniösisierung von Eryptose bei menschlichen Erythrozyten vor. Es werden Faktoren untersucht, die eine erfolgreiche Eryptose beeinflussen, einschließlich Ca2+-Konzentration, Ionophorkonzentration, Behandlungszeit und Vorinkubation im Glukose-Erschöpften Puffer und es werden optimale Werte gemeldet. Dieses Verfahren zeigt, dass die Vorinkubation von Erythrozyten in einem glukosefreien Puffer den Prozentsatz der Eryptose im Vergleich zum glukosehaltigen Puffer signifikant erhöht. Dieses Protokoll kann im Labor verwendet werden, um eryptotische Erythrozyten für verschiedene Anwendungen zu produzieren.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>96-well plate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-565-331</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Annexin V Alexa Fluor 488 - apoptosis kit</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A10788</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSAria II flow cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>643177</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C79-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>M7157</td>
			<td>Model Eppendorf 5415C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal fluorescence microscopy</td>
			<td>Zeiss, LSM Tek Thornwood</td>
			<td></td>
			<td>Model LSM 510, Argon laser excited at 488 nm for taking images</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glasses circles</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-545-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable round bottom flow cytometry tube</td>
			<td>VWR</td>
			<td>VWRU47729-566</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>472301-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS</td>
			<td>VWR Life Science</td>
			<td>SH30028.02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose monohydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Y0001745</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES Buffer (1 M)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-751-7290</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ionomycin calcium salt</td>
			<td>EMD Milipore Corp.</td>
			<td>407952-1MG</td>
			<td>Dissolve in DMSO to reach 2 mM. Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P330-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>M65-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-681-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S271-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plain glass microscope slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-544-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Synergy HFM microplate reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whole blood in ACD</td>
			<td>Zen-Bio</td>
			<td></td>
			<td>Store at 4 &#176;C and warm to 37 &#176;C prior to use</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of eryptosis in red blood cells using a calcium ionophore

Eryptose, Erythrozyten programmiertzelltod, tritt bei einer Reihe von hämatologischen Erkrankungen und während der Verletzung von Erythrozyten. Ein Kennzeichen eryptotischer Zellen ist der Verlust der kompositorischen Asymmetrie der Zellmembran, die zur Translokation von Phosphatidylserin in die äußere Membranbroschüre führt. Dieser Prozess wird durch eine erhöhte intrazelluläre Konzentration von Ca2+ausgelöst, die Scramblase aktiviert, ein Enzym, das die bidirektionale Bewegung von Phospholipiden zwischen Membranbroschüren erleichtert. Angesichts der Bedeutung der Eryptose unter verschiedenen krankheiten gab es Bemühungen, Eryptose in vitrozu induzieren. Solche Bemühungen haben sich im Allgemeinen auf das Calciumionophor, Ionomycin, zur Verbesserung der intrazellulären Ca2+-Konzentration und induzieren Eryptose verlassen. Jedoch, viele Diskrepanzen wurden in der Literatur über das Verfahren zur Induktion von Eryptose mit Ionomycin berichtet. Hierin berichten wir über ein Schritt-für-Schritt-Protokoll für Ionomycin-induzierte Eryptose bei menschlichen Erythrozyten. Wir konzentrieren uns auf wichtige Schritte im Verfahren, einschließlich der Ionophorkonzentration, Inkubationszeit und Glukoseermangel, und liefern repräsentative Ergebnisse. Dieses Protokoll kann verwendet werden, um Reproduzierbar Eryptose im Labor zu induzieren.

Optimierung der Ionomycinkonzentration
Während Ionomycin erforderlich ist, um Eryptose zu induzieren, können erhöhte Ionomycinkonzentrationen zu Hämolyse führen (d. h. Lyse von Erythrozyten und Freisetzung von Hämoglobin), die vermieden werden muss. Die Behandlung von Erythrozyten mit 1 M Ionomycin in Ringer-Lösung für 2 h reicht aus, um Eryptose zu induzieren, wie eine erfolgreiche Etikettierung mit Ann...

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Induction of Eryptosis in Red Blood Cells Using a Calcium Ionophore

Ein Protokoll zur Induktion von Eryptose, programmierter Zelltod in Erythrozyten, mit dem Calciumionophor, Ionomycin, wird zur Verfügung gestellt. Erfolgreiche Eryptose wird durch Dieüberwachung der Lokalisation Phosphatidylserin in der Membran äußere Packungsbeilage bewertet. Faktoren, die den Erfolg des Protokolls beeinflussen, wurden untersucht und optimale Bedingungen bereitgestellt.

Induktion der Eryptose in roten Blutkörperchen mit einem Calcium-Ionophor

Eryptosis, erythrocyte programmed cell death, occurs in a number of hematological diseases and during injury to erythrocytes. A hallmark of eryptotic ...

Es gab viele Bemühungen, Eryptose mit Ionomycin zu induzieren. Das genaue Verfahren für diesen Prozess ist jedoch in der Literatur nicht klar umrissen. Wir bieten ein Schritt-für-Schritt-Verfahren, um Eryptose mit Ionomycin zu induzieren.Der Hauptvorteil dieses Verfahrens besteht darin, Eryptose bei menschlichen Erythrozyten auf zuverlässige und reproduzierbare Weise zu induzieren. Zu Beginn 500 Mikroliter kaltes Vollblut in Säurecitrat-Dextrose in ein Mikrozentrifugenrohr geben. Zentrifugieren Sie das Ganze bei 700 mal g für fünf Minuten bei Raumtemperatur und entfernen Sie das klare Plasma und das dünne, buffy Mantel mit einer Pipette, um die rote Erythrozytenschicht zu verlassen.Bereiten Sie einen Liter Ringer-Lösung mit 125 Millimolaren-Natriumchlorid, fünf Millimolaren-Kaliumchlorid, einem Millimolaren-Magnesiumsulfat, 32 Millimolaren-HEPES, fünf Millimolaren Glukose und einem Millimolaren Calciumchlorid vor. Stellen Sie den pH-Wert auf 7,4 ein, indem Sie zwei Mikrolitertropfen eines Mol-Natriumhydroxids hinzufügen. Um glukosefreie Ringer-Lösung vorzubereiten, folgen Sie dem gleichen Protokoll, aber enthalten Sie keine Glukose in der Lösung.Waschen Sie die Erythrozyten zweimal in Ringer-Lösung, indem Sie das Zellpellet in 1,5 Milliliter Ringer-Lösung aufhängen, bei Raumtemperatur fünf Minuten lang zentrifugieren und den Überstand entfernen. Dann machen Sie eine 0,4%hämatocrit durch Die Aussetzung 40 Mikroliter des Erythrozytenpellets in 9, 960 Mikroliter glukosefreie Ringer-Lösung, um ein endgültiges Volumen von 10 Milliliter zu erreichen. Inkubieren Sie die Zellsuspension bei 37 Grad Celsius für sieben Tage.Die Vorinkubation von Erythrozyten in einem glukosefreien Puffer löst signifikant Eryptose aus. Eine hohe Eryptose wurde nach sieben Tagen Vorinkubation im zuckerfreien Puffer erreicht. Lösen Sie ein Milligramm Ionomycin-Calciumsalz in 630 Mikroliter DMSO auf, um eine Endkonzentration von zwei Millimolar zu erreichen.Aliquot in 20 Milliliter und lagern bei minus 20 Grad Celsius. Nehmen Sie einen Milliliter des vorbereiteten 0,4%Hämatokrit und fügen Sie 0,5 Mikroliter von zwei Millimolar-Ionomycin hinzu, um eine endgültige Konzentration von einem Mikromolar zu erreichen. Zwei Stunden bei 37 Grad Celsius inkubieren.Verwenden Sie einen Milliliter des Hämatokrits ohne Ionomycin-Behandlung als Negativkontrolle. Zentrifugieren Sie die mit Ionomycin behandelten und unbehandelten Hämatokriten bei 700 mal g für fünf Minuten bei Raumtemperatur und entfernen Sie ihre Überwälstmittel, um die Zellpellets am Boden der Rohre zu verlassen. Waschen Sie die Zellen dreimal mit Ringer-Lösung, indem Sie die Zellpellets in 1,5 Milliliter Ringer-Lösung aufhängen, bei Raumtemperatur fünf Minuten lang zentrifugieren und die Überblässen entsorgen.Um die Hämolyse zu messen, fügen Sie einen Milliliter des unbehandelten 0,4%Hämatokrits in ein Mikrozentrifugenrohr und brüten zwei Stunden lang bei 37 Grad Celsius als Negativkontrolle von 0%Hämolyse. Um die positive Kontrolle der 100%hämolyse vorzubereiten, fügen Sie einen Milliliter des unbehandelten 0,4%Hämatokrits bei 700-fachem g bei Raumtemperatur in ein Mikrozentrifugenrohr und eine Zentrifuge ein. Entfernen Sie den Überstand und fügen Sie dem Zellpellet einen Milliliter destilliertes Wasser hinzu, um es wieder aufzuhängen und zwei Stunden bei 37 Grad Celsius zu brüten.Als nächstes fügen Sie einem Mikrozentrifugenröhrchen einen Milliliter des behandelten Ionomycins 0,4% Hämatokrit hinzu. Zentrifugieren Sie die unbehandelten Zellen, behandelten Zellen und die Zellen in destilliertem Wasser bei 700-fachem g für fünf Minuten bei Raumtemperatur. 200 Mikroliter der Überräube in jeden Brunnen einer 96-Well-Platte übertragen.Messen Sie die Absorption mit 541 Nanometern mit einem Mikroplattenleser. Berechnen Sie die Hämolyse mit der Gleichung, wobei A0, A100 und AT die Absorption von Erythrozyten in Ringer-Lösung in Wasser und die Absorption von behandelten Erthyrozyten durch Ionomycin sind. Verdünnen Sie zwei Milliliter des 5X Annexin-V Bindungspuffers in acht Milliliter PBS, um einen 1X Bindungspuffer zu erhalten.Setzen Sie die mit Ionomycin behandelten und unbehandelten Zellpellets in einem Milliliter des 1X Bindungspuffers aus. Nehmen Sie 235 Mikroliter der Zellsuspensionen im Bindungspuffer und fügen Sie 15 Mikroliter Annexin-V Alexa Fluor 488 Konjugat in einem Mikrozentrifugenrohr hinzu. Inkubieren Sie die Zellen bei Raumtemperatur für 20 Minuten an einem dunklen Ort.Zentrifuge bei 700 mal g für fünf Minuten bei Raumtemperatur. Entfernen Sie den Überstand. Waschen Sie die Zellen zweimal mit 1X Bindungspuffer, indem Sie das Zellpellet in 1,5 Milliliter des Bindungspuffers aufhängen und bei 700-fachem g bei Raumtemperatur fünf Minuten lang zentrifugieren.Entfernen Sie den Überstand und setzen Sie die Zellpellets in 250 Mikroliter 1X Bindungspuffer für die Durchflusszytometriemessung wieder auf. Nun 200 Mikroliter der annein-V gebeizten Erythrozyten in einen Milliliter runde Unterteil-Polystyrolröhren übertragen, die mit der Durchflusszytometrie kompatibel sind. Melden Sie sich bei der Flow-Zytometrie-Software an und klicken Sie auf die neue Experimentschaltfläche.Klicken Sie auf die neue Tube-Taste. Wählen Sie das globale Blatt aus, und wählen Sie die Anwendungsanalyse aus, um die Fluoreszenzintensität mit einer Anregungswellenlänge von 488 Nanometern und einer Emissionswellenlänge von 530 Nanometern zu messen. Legen Sie die Anzahl der Zellen auf 20 000 fest, die für die fluoreszenzaktivierte Zellsortierungsanalyse gesammelt werden sollen.Wählen Sie das gewünschte Rohr und klicken Sie auf den Ladeknopf. Klicken Sie auf die Aufnahmetaste für die Messung der Vorwärtsstreuung und der Seitenstreuung. Wiederholen Sie dies für alle Proben.Klicken Sie mit der rechten Maustaste auf den Muster-Button und klicken Sie auf Chargenanalyse anwenden, um die Ergebnisdatei zu generieren. Rechtsklick auf Muster-Button und klicken Sie auf FSC-Dateien generieren. In diesem Protokoll reichte die Behandlung von Erythrozyten mit einer Mikromolar-Ionomycin- und Ringer-Lösung für zwei Stunden aus, um Eine Eryptose auszulösen, wie eine erfolgreiche Kennzeichnung mit Annexin-V Fluor 488-Konjugat und Quantifizierung durch FACS-Analyse belegt.Höhere Konzentrationen von Ionomycin bei fünf und zehn Mikromolaren führten zu einem leichten Anstieg der Eryptose. Solche Konzentrationen verstärkten jedoch auch die Hämolyse. Die Inkubation von Erythrozyten in Ionomycin und Ringer-Lösung für nur 30 Minuten reichte aus, um Eryptose zu induzieren.Erhöhte Inkubationszeit erhöhte das Niveau der Eryptose für bis zu zwei Stunden. Eine weitere Inkubationszeit führte jedoch zu einem leichten Rückgang des Eryptosespiegels. Der höhere Wert der Hämolyse nach 180 Minuten erklärt die Reduktion der Eryptose nach der gleichen Menge an Inkubation wie weniger lebensfähige Zellen nach 180 Minuten Behandlung mit Ionomycin existierten.Erythrozyten mit Ionomycin-Behandlung zeigten ein helles Fluoreszenzsignal an die Bindung von Annexin-V an Phosphatidylserin in der äußeren Packungsbeilage. Im Gegensatz dazu zeigten Zellen ohne Behandlung ein sehr schwaches Fluoreszenzsignal, das auf eine sehr geringe Eryptose hindeutet. Die Vorinkubation in einem glukosefreien Puffer ist ein wichtiger Auslöser für die Induktion der Eryptose.Da Eryptose bei einer Vielzahl von Krankheiten beobachtet wird, sind die Experimente nach diesem Protokoll feldspezifisch. In unserem Labor sind wir daran interessiert, die Auswirkungen der Eryptose auf die biophysikalischen Eigenschaften der Membran und die Wechselwirkungen mit Nanomaterialien zu untersuchen. Eryptose ist mit einer großen Anzahl von Krankheiten wie Diabetes, Sichelzellanämie und Thalassämie verbunden.Ein reproduzierbares Protokoll zur Induktion von Eryptose kann Forschern in jedem dieser Bereiche helfen, weitere wissenschaftliche Fragen zu untersuchen, die für jedes Gebiet spezifisch sind.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Analyses of Mitochondrial Calcium Influx in Isolated Mitochondria and Cultured Cells

Analysen der mitochondrialen Calcium Zustrom in isolierten Mitochondrien und kultivierten Zellen

Ca2+ handling by mitochondria is a critical function regulating both physiological and pathophysiological processes in a broad spectrum of cells. The ...

Forschung

Biochemie

Dissipative Microgravimetry to Study the Binding Dynamics of the Phospholipid Binding Protein Annexin A2 to Solid-supported Lipid Bilayers Using a Quartz Resonator

Dissipative Microgravimetry die Bindung Dynamik der Phospholipid-bindende Protein Annexin A2, solide unterstützt Lipid Bilayer mit einem Quarz-Resonator zu studieren

The dissipative quartz crystal microbalance technique is a simple and label-free approach to measure simultaneously the mass uptake and viscoelastic ...

In Vivo Calcium Imaging in C. elegans Body Wall Muscles

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In Vivo Calcium Imaging in C. elegans Körperwandmuskeln

The model organism C. elegans provides an excellent system to perform in vivo calcium imaging. Its transparent body and genetic manipulability allow for ...

Translating Ribosome Affinity Purification (TRAP) for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Übersetzen von Ribososomen-Affinitätsreinigung (TRAP) zur RNA-Isolierung von Endothelzellen In vivo

Many studies have been limited to using in vitro cellular assays and whole tissues or isolating of specific cell types from animals for in vitro analysis ...

SUMO-Binding Entities (SUBEs) as Tools for the Enrichment, Isolation, Identification, and Characterization of the SUMO Proteome in Liver Cancer

SUMO-Binding Entities SUBEs as Tools for the Enrichment, Isolation, Identification, and Characterization of the SUMO Proteome in Liver Cancer

SUMO-Binding Entities (SUBEs) als Werkzeuge zur Anreicherung, Isolierung, Identifizierung und Charakterisierung des SUMO-Proteoms bei Leberkrebs

Post-translational modification is a key mechanism regulating protein homeostasis and function in eukaryotic cells. Among all ubiquitin-like proteins in ...

Ultra-High-Speed Western Blot using Immunoreaction Enhancing Technology

Ultra-High-Speed Western Blot mit Immunoreaction Enhancing Technology

A western blot (also known as an immunoblot) is a canonical method for biomedical research. It is commonly used to determine the relative size and ...

Rapid Determination of Antibody-Antigen Affinity by Mass Photometry

Schnelle Bestimmung der Antikörper-Antigen-Affinität durch Massenphotometrie

Measurements of the specificity and affinity of antigen-antibody interactions are critically important for medical and research applications. In this ...

Inner Mitochondrial Membrane Sensitivity to Na+ Reveals Partially Segmented Functional CoQ Pools

Inner Mitochondrial Membrane Sensitivity to Na+ Reveals Partially Segmented Functional CoQ Pools

Innere Empfindlichkeit der mitochondrialen Membran gegenüber Na+ zeigt teilweise segmentierte funktionelle CoQ-Pools

Ubiquinone (CoQ) pools in the inner mitochondrial membrane (IMM) are partially segmented to either complex I or FAD-dependent enzymes. Such subdivision ...

A Semi-Automated and Reproducible Biological-Based Method to Quantify Calcium Deposition In Vitro

A Semi-Automated and Reproducible Biological-Based Method to Quantify Calcium Deposition In Vitro

Eine halbautomatische und reproduzierbare biologisch basierte Methode zur Quantifizierung der Kalziumablagerung in vitro

Vascular calcification involves a series of degenerative pathologies, including inflammation, changes to cellular phenotype, cell death, and the absence ...

A "Dual-Addition" Calcium Fluorescence Assay for the High-Throughput Screening of Recombinant G Protein-Coupled Receptors

Ein "Dual-Addition"-Calciumfluoreszenz-Assay für das Hochdurchsatz-Screening von rekombinanten G-Protein-gekoppelten Rezeptoren

G protein-coupled receptors (GPCRs) represent the largest superfamily of receptors and are the targets of numerous human drugs. High-throughput screening ...