Name: induction of eryptosis in red blood cells using a calcium ionophore
Uploaded: 2020-01-21T15:00:00
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この作品は、NIH補助金R15ES030140およびNSF補助金CBET1903568によってサポートされました。ラス工科大学とオハイオ大学化学・生体分子工学科からの資金援助も認められています。

以下に説明するプロトコルで使用されるすべてのヒト血液サンプルは、非同定サンプルとして購入された。この研究に直接関与したり募集したりしたヒト被験者は一人もいない。ヘルシンキ宣言のガイドラインは、研究が人間の被験者を含む場合に使用する必要があります。
1. 全血からの赤血球分離
<ol><li>酸クエン酸デキストロース(ACD)に500μLの全血を加え(4°Cで保存)?...

<ol>
	<li>Bratosin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmed+Cell+Death+in+Mature+Erythrocytes:+A+Model+for+Investigating+Death+Effector+Pathways+Operating+in+the+Absence+of+Mitochondria.">Programmed Cell Death in Mature Erythrocytes: A Model for Investigating Death Effector Pathways Operating in the Absence of Mitochondria.</a> Cell Death and Differentiation. 8 (12), 1143-1156 (2001).</li><li>Lang, E., Lang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+Pathophysiological+Significance+of+Eryptosis,+the+Suicidal+Erythrocyte+Death.">Mechanisms and Pathophysiological Significance of Eryptosis, the Suicidal Erythrocyte Death.</a> Seminars in Cell and Developmental Biology. 39, 35-42 (2015).</li><li>Garnier, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythrocyte+Deformability+in+Diabetes+and+Erythrocyte+Membrane+Lipid+Composition.">Erythrocyte Deformability in Diabetes and Erythrocyte Membrane Lipid Composition.</a> Metabolism. 39 (8), 794-798 (1990).</li><li>Verkleij, A. 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A Probable Role for Bcl-2 Family Members.</a> Journal of Biological Chemistry. 277 (30), 27217-27226 (2002).</li><li>Liu, C. M., Hermann, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Ionomycin+as+a+Calcium+Ionophore.">Characterization of Ionomycin as a Calcium Ionophore.</a> Journal of Biological Chemistry. 253 (17), 5892-5894 (1978).</li><li>Klarl, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+Kinase+C+Mediates+Erythrocyte+"Programmed+Cell+Death"+Following+Glucose+Depletion.">Protein Kinase C Mediates Erythrocyte "Programmed Cell Death" Following Glucose Depletion.</a> American Journal of Physiology - Cell Physiology. 290 (1), C244-C253 (2006).</li><li>Danilov, Y. N., Cohen, C. 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F., Smith, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+the+Affinity+and+Cooperativity+of+Annexin+V-Membrane+Binding+under+Conditions+of+Low+Membrane+Occupancy.">Measurement of the Affinity and Cooperativity of Annexin V-Membrane Binding under Conditions of Low Membrane Occupancy.</a> Analytical Biochemistry. 329 (1), 112-119 (2004).</li><li>Jiang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eryptosis+as+an+Underlying+Mechanism+in+Systemic+Lupus+Erythematosus-Related+Anemia.">Eryptosis as an Underlying Mechanism in Systemic Lupus Erythematosus-Related Anemia.</a> Cellular Physiology and Biochemistry. 40 (6), 1391-1400 (2016).</li><li>Chakrabarti, A., Halder, S., Karmakar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythrocyte+and+Platelet+Proteomics+in+Hematological+Disorders.">Erythrocyte and Platelet Proteomics in Hematological Disorders.</a> Proteomics - Clinical Applications. 10 (4), 403-414 (2016).</li></ol>

この手順の目的は、エリプトーシスの誘導を成功させるために重要な要因であるイオノフォア濃度、治療時間、および細胞外グルコース濃度に最適な値を提供することです。プロトコルの重要なステップは、細胞外グルコースの枯渇であり、その重要性にもかかわらず、文献では十分に強調されていない。通常のリンガー溶液中の糖度(5mM)は、赤血球症に対する阻害効果を有する。細胞外環?...

赤血球のプログラム細胞死は、赤血球とも呼ばれ、多くの臨床状態および血腫性疾患で一般的である。赤血球症は、細胞形質膜1、2における細胞収縮およびリン脂質非対称性の喪失に関連する。非対称性の喪失は、通常内側リーフレット3、4に局在する脂質であるホスファチジルセリン(PS)を細胞外リーフレットに転位させ、マクロファージにシグナルを送り、欠陥のある赤血球5、6、7、8を除去する。赤血球の正常寿命の終わりに、マクロファージによる赤血球の除去は、循環中の赤血球のバランスを保証する。しかしながら、鎌状赤血球症およびサラセミア9、10、11などの疾患状態では、赤血球症の増強が重症貧血2をもたらし得る。血行性疾患における重要性から、赤血球症を誘発または阻害する因子と、この過程の基礎となる分子機構を調べることに大きな関心がある。
健康な赤血球の形質膜は非対称であり、異なるリン脂質が外側と内側のリーフレットに局在する。膜非対称性は、主に膜酵素の作用によって調節される。アミノリン脂質トランスロカーゼは、アミノリン脂質、PSおよびホスファチジルエタノールアミン(PE)の輸送を促進し、これらの脂質を細胞内リーフレットに導くことによって。一方、フロフパーゼは、リン脂質を含むコリンを輸送し、ホスファチジルコリン(PC)およびスフィンゴミエリン(SM)を、細胞膜12の内側から外側のリーフレットに輸送する。しかし、健康な細胞とは異なり、赤球の膜はスクランブルされます。これは、第3の酵素の作用によるもので、スクランバゼは、アミノリン脂質13、14、15、16の双方向輸送を促進することによりリン脂質非対称性を破壊する。スクランマゼは、Ca2+の高い細胞内レベルによって活性化される。従って、細胞膜12を横切るCa2+の輸送を容易にするカルシウムイオノフォアは、赤血球症の効率的な誘導剤である。
イオノマイシンは、イオノフォアカルシウムであり、赤血球12、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26で赤血球中の赤血球を誘導するために広く使用されている。イオノマイシンは、Ca2+イオンを結合および捕捉し、それを細胞質空間27、28、29に輸送するために必要な親水性基および疎水性基の両方を有する。これは、スクランブラーゼの活性化およびPSの外側リーフレットへの転位につながり、これは、PS12に対する親和性が高い細胞タンパク質であるアネキシンVを用いて容易に検出することができる。イオノマイシンによるエリプトーシスの誘発は一般的に報告されているが、文献にはかなりの方法の不一致がある(表1)。赤血球の集団は、イオノフォア濃度、イオノフォアによる治療時間、および細胞外環境の糖度(グルコース枯渇がカチオンチャネルを活性化し、細胞質空間へのCa2+の侵入を容易にする)30、31などの異なる要因に依存する。しかし、文献ではこれらの因子にはほとんど一貫性がなく、インビトロで再現的に赤血球症を行うことが困難である。
このプロトコルでは、ヒト赤血球において赤血球を誘導する段階的な手順を提示する。Ca2+濃度、イオノフォア濃度、治療時間、グルコース枯渇緩衝液中のプレインキュベーションを含む成功したエリプトーシスに影響を与える因子を調べ、最適な値が報告される。この手順は、グルコースフリー緩衝液中の赤血球のプレインキュベーションが、グルコース含有緩衝液と比較して赤血球症の割合を有意に増加することを示す。このプロトコルは、様々な用途に対して赤血球を作製するために実験室で使用することができます。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>96-well plate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-565-331</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Annexin V Alexa Fluor 488 - apoptosis kit</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A10788</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSAria II flow cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>643177</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C79-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>M7157</td>
			<td>Model Eppendorf 5415C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal fluorescence microscopy</td>
			<td>Zeiss, LSM Tek Thornwood</td>
			<td></td>
			<td>Model LSM 510, Argon laser excited at 488 nm for taking images</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glasses circles</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-545-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable round bottom flow cytometry tube</td>
			<td>VWR</td>
			<td>VWRU47729-566</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>472301-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS</td>
			<td>VWR Life Science</td>
			<td>SH30028.02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose monohydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Y0001745</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES Buffer (1 M)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-751-7290</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ionomycin calcium salt</td>
			<td>EMD Milipore Corp.</td>
			<td>407952-1MG</td>
			<td>Dissolve in DMSO to reach 2 mM. Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P330-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>M65-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-681-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S271-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plain glass microscope slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-544-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Synergy HFM microplate reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whole blood in ACD</td>
			<td>Zen-Bio</td>
			<td></td>
			<td>Store at 4 &#176;C and warm to 37 &#176;C prior to use</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of eryptosis in red blood cells using a calcium ionophore

赤血球は、細胞死をプログラムし、多くの血球疾患および赤血球への損傷の間に起こる。赤血球の特徴は、細胞膜の組成非対称性の喪失であり、膜外葉にホスファチジルセリンの転座につながる。このプロセスは、膜リーフレット間のリン脂質の双方向移動を促進する酵素であるスクランバゼを活性化するCa2+の細胞内濃度の増加によって引き起こされます。様々な疾患状態における赤血球症の重要性を考えると、インビトロで赤血球症を誘発する取り組みが行われてきた。このような努力は、一般に、カルシウムイオノフォア、イオノマイシン、細胞内Ca2+濃度を増強し、赤血球症を誘発することに依存してきた。しかしながら、ヨーノマイシンを用いてエリプトーシスを誘導する手順に関して、文献には多くの不一致が報告されている。本明細書では、ヒト赤血球におけるイオノマイシン誘発性赤血球に対する段階的なプロトコルを報告する。イオノフォア濃度、インキュベーション時間、グルコース枯渇などの重要なステップに焦点を当て、代表的な結果を提供します。このプロトコルは、実験室で再現的に赤血球症を誘発するために使用することができる。

イオノマイシン濃度の最適化
イオノマイシンは赤血球を誘発するために必要であるが、イオノマイシン濃度の増加は、出血(すなわち赤血球の溶解およびヘモグロビンの放出)を避ける必要がある。2時間のリンガー溶液中の1μMイオノマイシンによる赤血球の治療は、アネキシンVアレクサ小麦粉488共役とFACS分析...

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Induction of Eryptosis in Red Blood Cells Using a Calcium Ionophore

赤血球の誘導のためのプロトコルは、赤血球における細胞死をプログラムし、イオノフォアカルシウム、イオノマイシン、を使用して、提供される。成功したエリプトーシスは、膜外葉ペレット中の局在ホスファチジルセリンをモニタリングすることによって評価される。プロトコルの成功に影響を与える要因が検討され、最適な条件が提供されています。

カルシウムイオノフォアを用いた赤血球中の赤血球誘導

Eryptosis, erythrocyte programmed cell death, occurs in a number of hematological diseases and during injury to erythrocytes. A hallmark of eryptotic ...

ヨノマイシンを用いた紅斑症を誘導する努力が数多く行われている。しかし、このプロセスの正確な手順は、文献で明確に概説されていません。イオノマイシンを用いた紅斑症を誘導するステップバイステップの手順を提供します。この手順の主な利点は、信頼性の高い、再現性のある方法でヒト赤血球の赤紅斑を誘導することです。まず、酸クエン酸デキストロースに500マイクロリットルの冷たい全血をマイクロ遠心分離チューブに加えます。全血を室温で5分間5分間、700倍gで遠心分離し、透明な血漿と薄いバフィーコートをピペットを使用して赤い赤血球層を残します。125ミリモル塩化ナトリウム、5ミリモル塩化カリウム、1ミリモル硫酸マグネシウム、32ミリモルHEPES、5ミリモルグルコース、1ミリモルクロリドカルシウムを含むリンガー溶液の1リットルを調製します。1モル水酸化ナトリウムの2マイクロリットル滴を加えて、pHを7.4に調整します。グルコースフリーリンジャー溶液を調製するには、同じプロトコルに従いますが、溶液中にグルコースを含まないでください。細胞ペレットをリンガー溶液の1.5ミリリットルに懸濁し、室温で5分間700倍gで遠心し、上清を取り除くことによって、リンガー溶液で赤血球を2回洗浄します。その後、9,960マイクロリットルのグルコースフリーリンジャー溶液で40マイクロリットルの赤血球ペレットを再懸濁して0.4%ヘマトクリットを作り、10ミリリットルの最終体積に達する。細胞懸濁液を摂氏37度で7日間インキュベートする。グルコースフリーバッファー内の赤血球の前培養は、エリスプトーゼを著しく誘発する。高いエリプトシスは、無糖緩衝液中の7日間の前培養後に得られた。630マイクロリットルのDMSOにヨノマイシンカルシウム塩の1ミリグラムを溶解し、2ミリモルの最終濃度に達する。20ミリリットルのアリコートとマイナス20度で保存します。調製した0.4%ヘマトクリットの1ミリリットルを取り、1マイクロモルの最終濃度に達するために2ミリモルイオノマイシンの0.5マイクロリットルを追加します。摂氏37度で2時間インキュベートします。ヨノマイシン処理を行っていないヘマトクリットを1ミリリットルの陰性対照として使用する。ヨノマイシンを処理し、未処理のヘマトクリットを室温で5分間5分間処理し、その上清を取り除いて細胞ペレットをチューブの底に残します。リンガー溶液の1.5ミリリットルに細胞ペレットを懸濁し、室温で5分間700倍gで遠心し、上清を捨てて、リンガー溶液で細胞を3回洗浄します。融解を測定するには、未処理の0.4%ヘマトクリットをマイクロ遠心管に1ミリリットル加え、0%ヘモリシスの陰性対照として摂氏37度で2時間インキュベートする。100%の正のコントロールを調製するために、未処理の0.4%ヘマトクリットの1ミリリットルをマイクロ遠心分離管に加え、遠心分離機を室温で5分間700倍にします。上清を取り除き、蒸留水1ミリリットルを細胞ペレットに加えて再懸濁し、摂氏37度で2時間インキュベートします。次に、0.4%ヘマトクリット処理したヨノマイシンをマイクロ遠心チューブに1ミリリットル加える。未処理の細胞を遠心分離し、細胞を処理し、蒸留水中の細胞を室温で5分間700回gで処理した。上清の200マイクロリットルを96ウェルプレートの各ウェルに移します。マイクロプレートリーダーを使用して、541ナノメートルで吸光度を測定します。A0、A100、ATが水中のリンジャー溶液中の赤血球の吸光度と、ヨノマイシンによる処理されたエルチロサイトの吸光度である式を用いて溶血を計算します。PBSの8ミリリットルで5XアネキシンV結合バッファーの2ミリリットルを希釈し、1X結合バッファーを得る。1X結合バッファーの1ミリリットルでヨノマイシン処理および未処理の細胞ペレットを再懸濁します。結合バッファー内の細胞懸濁液の 235 マイクロリットルを取り、マイクロ遠心チューブにアネキシン V アレクサフルーオール 488 コンジュゲートの 15 マイクロリットルを追加します。暗い場所で20分間室温で細胞をインキュベートします。室温で5分間700回gで遠心分離機。上清を取り除く。細胞ペレットを結合バッファーの 1.5 ミリリットルにサスペンドし、遠心分離機を 700 回 g で室温で 5 分間にして、1X 結合バッファーで 2 回洗浄します。上清を取り除き、フローサイトメトリー測定のために1X結合バッファの250マイクロリットルの細胞ペレットを再懸濁します。今、アネキシン-V染色赤血球の200マイクロリットルをフローサイトメトリーと互換性のある1ミリリットルの丸い底ポリスチレンチューブに移します。フローサイトメトリーソフトウェアにログインし、新しい実験ボタンをクリックします。新しいチューブボタンをクリックします。グローバルシートを選択し、488ナノメートルの励起波長と530ナノメートルの発光波長で蛍光強度を測定する適用分析を選択します。蛍光活性化細胞選別分析のために収集する細胞数を20,000に設定する。目的のチューブを選択し、ロードボタンをクリックします。前方散乱および側面散乱測定のための記録ボタンをクリックします。すべてのサンプルに対して繰り返します。検体ボタンを右クリックし、バッチ分析の適用をクリックして結果ファイルを生成します。標本ボタンを右クリックし、FSCファイルを生成をクリックします。このプロトコルでは、1つのマイクロモルイオノマイシンおよびリンガー溶液を用いた赤血球の治療は、FACS分析によるアネキシン-V Fluor 488コンジュゲートおよび定量化に成功した標識によって証明されるように、エリプトーゼを誘導するのに十分であった。5および10マイクロモルでのヨノマイシンの濃度が高いほど、紅斑症がわずかに増加した。しかし、このような濃度もまた、凝行を増強した。ヨノマイシンおよびリンガー溶液中の赤血球のインキュベーションは、わずか30分間、紅斑症を誘発するのに十分であった。インキュベーション時間の増加は、最大2時間の紅斑のレベルを増加させた。しかし、さらにインキュベーション時間は、紅斑症のレベルのわずかな減少をもたらした。180分後の血化の高い値は、ヨノマイシンによる処理の180分で存在した生存細胞と同じ量の培養後の紅斑症の減少を説明する。ヨノマイシン治療を伴う赤血球は、アウターリーフレットにおけるホスファチジルセリンへのアネキシン-Vの結合に対する明るい蛍光シグナルを示した。対照的に、治療を行っていない細胞は、非常に低いエリプト症を示す非常に弱い蛍光シグナルを示した。グルコースフリーバッファーでのプレインキュベーションは、紅斑症の誘導のための重要なトリガーです。広範囲の疾患でエリプト症が観察されるため、このプロトコルに従う実験はフィールド固有である。研究室では、赤血球症が膜の生体物理特性やナノ材料との膜相互作用に及ぼす影響を調べることに興味を持っています。紅斑症は、糖尿病、鎌状赤血球貧血、サラセミアなどの多数の疾患に関連しています。エリプト症を誘発するための再現性のプロトコルを持つことは、これらの分野の研究者が各分野に固有のさらなる科学的な質問を調査するのに役立ちます。

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Analyses of Mitochondrial Calcium Influx in Isolated Mitochondria and Cultured Cells

ミトコンドリアの分離と培養細胞におけるミトコンドリアのカルシウム流入の解析

Ca2+ handling by mitochondria is a critical function regulating both physiological and pathophysiological processes in a broad spectrum of cells. The ...

Dissipative Microgravimetry to Study the Binding Dynamics of the Phospholipid Binding Protein Annexin A2 to Solid-supported Lipid Bilayers Using a Quartz Resonator

散逸の Microgravimetry 結合タンパク質アネキシン A2 への水晶振動子を用いた固相担脂質膜リン脂質の結合動態を研究するには

The dissipative quartz crystal microbalance technique is a simple and label-free approach to measure simultaneously the mass uptake and viscoelastic ...

In Vivo Calcium Imaging in C. elegans Body Wall Muscles

In Vivo Calcium Imaging in C. elegans Body Wall Muscles

C.エレガンス体壁筋肉における生体内カルシウムイメージング

The model organism C. elegans provides an excellent system to perform in vivo calcium imaging. Its transparent body and genetic manipulability allow for ...

Translating Ribosome Affinity Purification (TRAP) for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

生体内細胞からのRNA単離に対するリボソーム親和性精製(TRAP)の翻訳

Many studies have been limited to using in vitro cellular assays and whole tissues or isolating of specific cell types from animals for in vitro analysis ...

SUMO-Binding Entities (SUBEs) as Tools for the Enrichment, Isolation, Identification, and Characterization of the SUMO Proteome in Liver Cancer

SUMO-Binding Entities SUBEs as Tools for the Enrichment, Isolation, Identification, and Characterization of the SUMO Proteome in Liver Cancer

肝癌における相撲プロテオームの濃縮、単離、同定、特性評価のためのツールとしての相撲結合エンティティ(SES)

Post-translational modification is a key mechanism regulating protein homeostasis and function in eukaryotic cells. Among all ubiquitin-like proteins in ...

Ultra-High-Speed Western Blot using Immunoreaction Enhancing Technology

免疫反応向上技術を用いた超高速ウェスタンブロット

A western blot (also known as an immunoblot) is a canonical method for biomedical research. It is commonly used to determine the relative size and ...

Rapid Determination of Antibody-Antigen Affinity by Mass Photometry

質量光測定による抗体-抗原アフィニティーの迅速な測定

Measurements of the specificity and affinity of antigen-antibody interactions are critically important for medical and research applications. In this ...

Inner Mitochondrial Membrane Sensitivity to Na+ Reveals Partially Segmented Functional CoQ Pools

Inner Mitochondrial Membrane Sensitivity to Na+ Reveals Partially Segmented Functional CoQ Pools

Na+ に対するミトコンドリア内膜感受性が部分的にセグメント化された機能的CoQプールを明らかにする

Ubiquinone (CoQ) pools in the inner mitochondrial membrane (IMM) are partially segmented to either complex I or FAD-dependent enzymes. Such subdivision ...

A Semi-Automated and Reproducible Biological-Based Method to Quantify Calcium Deposition In Vitro

A Semi-Automated and Reproducible Biological-Based Method to Quantify Calcium Deposition In Vitro

in vitroでカルシウム沈着を定量するための半自動化された再現性のある生物学的ベースの方法

Vascular calcification involves a series of degenerative pathologies, including inflammation, changes to cellular phenotype, cell death, and the absence ...

A "Dual-Addition" Calcium Fluorescence Assay for the High-Throughput Screening of Recombinant G Protein-Coupled Receptors

組換えGタンパク質共役型受容体のハイスループットスクリーニングのための「二重付加」カルシウム蛍光アッセイ

G protein-coupled receptors (GPCRs) represent the largest superfamily of receptors and are the targets of numerous human drugs. High-throughput screening ...