Name: induction of eryptosis in red blood cells using a calcium ionophore
Uploaded: 2020-01-21T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction of Eryptosis in Red Blood Cells Using a Calcium Ionophore at JoVE.com

Este trabalho foi apoiado pelo NIH grant R15ES030140 e NSF concessão CBET1903568. O apoio financeiro da Russ College of Engineering and Technology e do Departamento de Engenharia Química e Biomolecular da Universidade de Ohio também é reconhecido.

Todas as amostras de sangue humanas utilizadas no protocolo descrito abaixo foram compradas como amostras desidentificadas. Nenhum sujeito humano foi diretamente envolvido ou recrutado para este estudo. As orientações da Declaração de Helsínquia devem ser utilizadas quando a investigação envolve seres humanos.
1. Isolamento eritrócito de sangue inteiro
<ol><li>Adicione 500 μL de sangue inteiro em dextrose citrato ácido (ACD) (armazenado a 4 °C) a um tubo de microcentrífuga. NO...

<ol>
	<li>Bratosin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmed+Cell+Death+in+Mature+Erythrocytes:+A+Model+for+Investigating+Death+Effector+Pathways+Operating+in+the+Absence+of+Mitochondria.">Programmed Cell Death in Mature Erythrocytes: A Model for Investigating Death Effector Pathways Operating in the Absence of Mitochondria.</a> Cell Death and Differentiation. 8 (12), 1143-1156 (2001).</li><li>Lang, E., Lang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+Pathophysiological+Significance+of+Eryptosis,+the+Suicidal+Erythrocyte+Death.">Mechanisms and Pathophysiological Significance of Eryptosis, the Suicidal Erythrocyte Death.</a> Seminars in Cell and Developmental Biology. 39, 35-42 (2015).</li><li>Garnier, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythrocyte+Deformability+in+Diabetes+and+Erythrocyte+Membrane+Lipid+Composition.">Erythrocyte Deformability in Diabetes and Erythrocyte Membrane Lipid Composition.</a> Metabolism. 39 (8), 794-798 (1990).</li><li>Verkleij, A. 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A Probable Role for Bcl-2 Family Members.</a> Journal of Biological Chemistry. 277 (30), 27217-27226 (2002).</li><li>Liu, C. M., Hermann, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Ionomycin+as+a+Calcium+Ionophore.">Characterization of Ionomycin as a Calcium Ionophore.</a> Journal of Biological Chemistry. 253 (17), 5892-5894 (1978).</li><li>Klarl, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+Kinase+C+Mediates+Erythrocyte+"Programmed+Cell+Death"+Following+Glucose+Depletion.">Protein Kinase C Mediates Erythrocyte "Programmed Cell Death" Following Glucose Depletion.</a> American Journal of Physiology - Cell Physiology. 290 (1), C244-C253 (2006).</li><li>Danilov, Y. N., Cohen, C. 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F., Smith, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+the+Affinity+and+Cooperativity+of+Annexin+V-Membrane+Binding+under+Conditions+of+Low+Membrane+Occupancy.">Measurement of the Affinity and Cooperativity of Annexin V-Membrane Binding under Conditions of Low Membrane Occupancy.</a> Analytical Biochemistry. 329 (1), 112-119 (2004).</li><li>Jiang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eryptosis+as+an+Underlying+Mechanism+in+Systemic+Lupus+Erythematosus-Related+Anemia.">Eryptosis as an Underlying Mechanism in Systemic Lupus Erythematosus-Related Anemia.</a> Cellular Physiology and Biochemistry. 40 (6), 1391-1400 (2016).</li><li>Chakrabarti, A., Halder, S., Karmakar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythrocyte+and+Platelet+Proteomics+in+Hematological+Disorders.">Erythrocyte and Platelet Proteomics in Hematological Disorders.</a> Proteomics - Clinical Applications. 10 (4), 403-414 (2016).</li></ol>

O objetivo deste procedimento é fornecer valores ideais para a concentração de ionóforo, tempo de tratamento e concentração de glicose extracelular, que são fatores importantes para garantir a indução bem-sucedida da eryptose. Um passo crítico no protocolo é o esgotamento da glicose extracelular, que, apesar de sua importância, não tem sido suficientemente enfatizada na literatura. O teor de açúcar na solução ringer normal (5 mM) tem um efeito inibitório sobre a eryptose. O esgotamento da glicose no amb...

A morte celular programada em eritrócitos, também conhecida como eritrose, é comum em muitas condições clínicas e distúrbios hematológicos. A eryptose está associada ao encolhimento celular e à perda de assimetria fosfolípida na membrana plasmática celular1,2. A perda de assimetria resulta na translocação de fosfatidylserine (PS), um lipídio normalmente localizado no folheto interno3,4, para o folheto exterior celular, que sinaliza para macrófagos para phagocitose e remover eritrócitos defeituosos5,6,7,8. No final da vida útil normal dos eritrócitos, a remoção de células eritptoticas por macrófagos garante o equilíbrio dos eritrócitos em circulação. No entanto, em condições doentes, como doença falciforme e talassemia9,10,11,eritrese reforçada pode resultar em anemia grave2. Devido à sua importância em doenças hematológicas, há um interesse significativo em examinar os fatores que induzem ou inibem a eryptose e os mecanismos moleculares subjacentes a este processo.
A membrana plasmática de eritrócitos saudáveis é assimétrica, com diferentes fosfolípidos localizando-se nos folhetos externos e internos. A assimetria da membrana é regulada principalmente pela ação das enzimas da membrana. O translocase aminofosfosfórico facilita o transporte de aminofosfípidos, PS e fosfatidylethanolamina (PE), direcionando esses lipídios para o folheto interno celular. Por outro lado, o floppase transporta a colina contendo fosfolípidos, fosfatatidylcholine (PC) e esfingomielina (SM), do interior ao folheto externo da membrana celular12. No entanto, ao contrário das células saudáveis, a membrana dos eritrócitos eritptoticos é embaralhada. Isto é devido à ação de uma terceira enzima, scramblase, que interrompe a assimetria fosfolípido, facilitando o transporte bidirecional de aminofosfosfípidos13,14,15,16. Scramblase é ativado por níveis intracelulares elevados de Ca2+. Portanto, os ionóforos de cálcio, que facilitam o transporte de Ca2+ através da membrana celular12,são indutores eficientes de eitosse.
Ionomicina, um ionóforo de cálcio, tem sido amplamente utilizado para induzir erittose em eritrócitos12,17,18,19,20,22,23,24,25,26. Ionomicina tem grupos hidrofílicos e hidrofóbicos, que são necessários para ligar e capturar íon Ca2 +, e transportá-lo para o espaço citosólico27,28,29. Isso leva à ativação de scramblase e translocação de PS para o folheto externo, que pode ser facilmente detectado usando annexin-V, uma proteína celular com uma alta afinidade com PS12. Embora provocar a eryptose por ionomicina seja relatado geralmente, há uma discrepância considerável do método na literatura(tabela 1). A população de eritrócitos submetidos à eritrose depende de diferentes fatores, como concentração de ionóforo, tempo de tratamento com ionóforo e o teor de açúcar do ambiente extracelular (esgotamento da glicose ativa canais de caation e facilita a entrada de Ca2+ no espaço citosólico)30,31. No entanto, há pouca consistência nesses fatores na literatura, dificultando o desempenho da eritose reproduzivelmente in vitro.
Neste protocolo, apresentamos um procedimento passo a passo para induzir eritrose em eritrócitos humanos. Os fatores que afetam a eryptose bem-sucedida que inclui a concentração de Ca2+, concentração do ionophore, tempo do tratamento, e pre-incubação no amortecedor glicose-esgotado são examinados e os valores óptimos são relatados. Este procedimento demonstra que a pré-incubação de eritrócitos em um amortecedor livre de glicose aumenta significativamente a porcentagem de eritrose em comparação com tampão contendo glicose. Este protocolo pode ser usado em laboratório para produzir eritrócitos eritptoticos para várias aplicações.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>96-well plate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-565-331</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Annexin V Alexa Fluor 488 - apoptosis kit</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A10788</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSAria II flow cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>643177</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C79-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>M7157</td>
			<td>Model Eppendorf 5415C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal fluorescence microscopy</td>
			<td>Zeiss, LSM Tek Thornwood</td>
			<td></td>
			<td>Model LSM 510, Argon laser excited at 488 nm for taking images</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glasses circles</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-545-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable round bottom flow cytometry tube</td>
			<td>VWR</td>
			<td>VWRU47729-566</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>472301-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS</td>
			<td>VWR Life Science</td>
			<td>SH30028.02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose monohydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Y0001745</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES Buffer (1 M)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-751-7290</td>
			<td>Store at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ionomycin calcium salt</td>
			<td>EMD Milipore Corp.</td>
			<td>407952-1MG</td>
			<td>Dissolve in DMSO to reach 2 mM. Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P330-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>M65-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-681-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S271-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plain glass microscope slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-544-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Synergy HFM microplate reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whole blood in ACD</td>
			<td>Zen-Bio</td>
			<td></td>
			<td>Store at 4 &#176;C and warm to 37 &#176;C prior to use</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of eryptosis in red blood cells using a calcium ionophore

Eritrose, morte celular programada de eritrócito, ocorre em uma série de doenças hematológicas e durante a lesão aos eritrócitos. Uma marca registrada das células eryptoticas é a perda da assimetria composicional da membrana celular, levando à translocação de fósforoarfrino para o folheto externo da membrana. Este processo é desencadeado pelo aumento da concentração intracelular de Ca2+, que ativa a scramblase, uma enzima que facilita o movimento bidirecional de fosfolípidos entre folhetos de membrana. Dada a importância da eryptose em várias condições doentes, tem havido esforços para induzir a erytose in vitro. Tais esforços têm geralmente invocado o ionóforo de cálcio, ionomicina, para melhorar a concentração intracelular Ca2 + e induzir a eryptose. Entretanto, muitas discrepâncias foram relatadas na literatura a respeito do procedimento para induzir a eryptose usando o ionomycin. Aqui, relatamos um protocolo passo a passo para eritptose induzida pela ionomicina em eritrócitos humanos. Nós nos concentramos em etapas importantes no procedimento, incluindo a concentração de ionóforo, tempo de incubação e esgotamento da glicose, e fornecer resultado representativo. Este protocolo pode ser usado para induzir reproduzivelmente a eryptose em laboratório.

Otimização da concentração de ionomicina
Enquanto a ionomicina é necessária para induzir eritrose, o aumento das concentrações de ionomicina pode levar à hemolíse (ou seja, lise de eritrócitos e liberação de hemoglobina), que precisa ser evitada. O tratamento dos eritrócitos com 1 μM ionomicina na solução Ringer para 2 h é suficiente para induzir eritptose, como evidenciado pela rotulagem bem s...

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Induction of Eryptosis in Red Blood Cells Using a Calcium Ionophore

Um protocolo para a indução da eritupse, a morte celular programada em eritrócitos, usando o ionóforo de cálcio, ionomicina, é fornecido. A eittose bem-sucedida é avaliada monitorando a fosfateina da localização no folheto exterior da membrana. Foram examinados fatores que afetam o sucesso do protocolo e condições ideais fornecidas.

Indução de eryptose em glóbulos vermelhos usando um ionóforo de cálcio

Eryptosis, erythrocyte programmed cell death, occurs in a number of hematological diseases and during injury to erythrocytes. A hallmark of eryptotic ...

Houve muitos esforços para induzir a eritose usando ionomicina. No entanto, o procedimento exato para este processo não está claramente descrito na literatura. Fornecemos um procedimento passo a passo para induzir a eritose usando ionomicina.A principal vantagem deste procedimento é induzir a eritose em eritrócitos humanos de forma confiável e reprodutível. Para começar, adicione 500 microliters de sangue frio inteiro em citrato ácido dextrose a um tubo de microcentrifuge. Centrifugar o sangue inteiro a 700 vezes g durante cinco minutos em temperatura ambiente e remover o plasma claro e o fino casaco buffy usando uma pipeta para deixar a camada de eritrócito vermelho.Prepare um litro de solução Ringer contendo cloreto de sódio de 125 milimilas, cinco cloreto de potássio milimila, um sulfato de magnésio milimil, 32 milimilas HEPES, cinco milialares de glicose e um cloreto de cálcio mililiar. Ajuste o pH para 7,4 adicionando duas gotas de microliter de um hidróxido de sódio molar. Para preparar a solução Ringer sem glicose, siga o mesmo protocolo, mas não inclua glicose na solução.Lave os eritrócitos duas vezes na solução Ringer suspendendo a pelota celular em 1,5 mililitros da solução Ringer, centrifugando a 700 vezes g por cinco minutos à temperatura ambiente e removendo o supernatário. Em seguida, faça um hematócrito de 0,4%, reutilizando 40 microliters da pelota eritrócito em 9,960 microliters de solução Ringer sem glicose para atingir um volume final de 10 mililitros. Incubar a suspensão celular a 37 graus Celsius durante sete dias.A pré-incubação de eritrócitos em um buffer sem glicose desencadeia significativamente a eritose. A eritpoose alta foi obtida após sete dias de pré-incubação no tampão sem açúcar. Dissolva um miligrama de sal de cálcio de ionomicina em 630 microliters de DMSO para alcançar uma concentração final de dois milimiliar.Alíquota em 20 mililitros e armazenar a menos 20 graus Celsius. Tome um mililitro do hematócrito preparado de 0,4% e adicione 0,5 microlitres de dois milimíneos de ionomicina milimiliar para alcançar a concentração final de um micromolar. Incubar por duas horas a 37 graus Celsius.Use um mililitro do hematócrito sem tratamento de ionomicina como controle negativo. Centrifugar a ionomicina tratada e hematócritos não tratados a 700 vezes g por cinco minutos em temperatura ambiente e remover seus supernantes para deixar as pelotas de célula na parte inferior dos tubos. Lave as células três vezes com a solução Ringer suspendendo as pelotas de células em 1,5 mililitros da solução Ringer, centrifugando a 700 vezes g por cinco minutos à temperatura ambiente e descartando os supernantes.Para medir a hemólise, adicione um mililitro do hematócrito não tratado de 0,4% a um tubo de microcentrífuga e incubar por duas horas a 37 graus Celsius como o controle negativo de 0%hemólise. Para preparar o controle positivo da hemólise 100%, adicione um mililitro do hematócrito não tratado de 0,4% a um tubo de microcentrifuuge e centrífuga a 700 vezes g por cinco minutos à temperatura ambiente. Remova o supernasce e adicione um mililitro de água destilada à pelota celular para resuspengar e incubar por duas horas a 37 graus Celsius.Em seguida, adicione um mililitro da ionomicina tratada 0,4% hematócrito a um tubo de microcentrífuga. Centrifugar as células não tratadas, as células tratadas e as células em água destilada a 700 vezes g por cinco minutos à temperatura ambiente. Transfira 200 microliters dos supernantes para cada poço de uma placa de 96 poços.Meça a absorvância em 541 nanômetros usando um leitor de micro placas. Calcule a hemólise usando a equação onde A0, A100 e AT são a absorção de eritrócitos na solução ringer na água e a absorção de erthrócitos tratados por ionomicina. Diluir dois mililitros do buffer de ligação 5X Annexin-V em oito mililitros de PBS para obter o buffer de ligação 1X.Resuspenque as pelotas celulares tratadas com ionomicina e não tratadas em um mililitro do buffer de ligação 1X. Pegue 235 microliters das suspensões celulares no buffer de ligação e adicione 15 microliters de anexo-V Alexa Fluor 488 conjugado em um tubo de microcentrifuuge. Incubar as células à temperatura ambiente por 20 minutos em um lugar escuro.Centrifugar a 700 vezes g por cinco minutos em temperatura ambiente. Remova o supernatante. Lave as células duas vezes com tampão de ligação 1X suspendendo a pelota de célula em 1,5 mililitros do buffer de ligação e centrifugando a 700 vezes g por cinco minutos à temperatura ambiente.Remova o supernascer e resuspenja as pelotas de célula em 250 microliters de tampão de ligação 1X para medição da citometria de fluxo. Agora transfira 200 microlitres dos eritrócitos manchados de Anexo-V para um mililitro de tubos de poliestireno redondo compatível com citometria de fluxo. Faça login no software de citometria de fluxo e clique no novo botão de experimento.Clique no novo botão do tubo. Selecione a folha global e escolha a análise de aplicação para medir a intensidade da fluorescência com um comprimento de onda de excitação de 488 nanômetros e um comprimento de onda de emissão de 530 nanômetros. Defina o número de células para 20.000 a serem coletadas para análise de triagem celular ativada por fluorescência.Selecione o tubo desejado e clique no botão de carga. Clique no botão gravar para dispersão para frente e medição de dispersão lateral. Repita para todas as amostras.Clique com o botão direito do mouse no botão da amostra e clique em aplicar análise em lote para gerar o arquivo de resultado. Clique com o botão direito do mouse no botão da amostra e clique em gerar arquivos FSC. Neste protocolo, o tratamento de eritrócitos com uma solução de ionomicina micromolar e ringer por duas horas foi suficiente para induzir a eryptose como evidenciado pela rotulagem bem sucedida com o conjugado Annexin-V Fluor 488 e quantificação pela análise FACS.Concentrações mais elevadas de ionomicina aos cinco e 10 micromolar resultaram em um ligeiro aumento na eritpoose. No entanto, tais concentrações também aumentaram a hemólise. A incubação de eritrócitos na solução de ionomicina e Ringer por apenas 30 minutos foi suficiente para induzir eritbiose.O aumento do tempo de incubação aumentou o nível de eritpoose por até duas horas. No entanto, um novo tempo de incubação resultou em uma ligeira diminuição no nível de eritpoose. O maior valor da hemólise após 180 minutos explica a redução da eryptose após a mesma quantidade de incubação que as células menos viáveis existiram após 180 minutos de tratamento com ionomicina.Os eritrócitos com tratamento de ionomicina mostraram um sinal de fluorescência brilhante para a ligação de Anexo-V à serina fosfatita no folheto externo. Em contraste, as células sem tratamento apresentaram um sinal de fluorescência muito fraco indicando eritose muito baixa. A pré-incubação em um tampão sem glicose é um importante gatilho para a indução da eritose.Uma vez que a eritpoose é observada em uma ampla gama de doenças, os experimentos que seguem este protocolo são específicos de campo. Em nosso laboratório, estamos interessados em examinar os efeitos da eritpoose nas propriedades biofísicas da membrana e interações de membrana com nanomateriais. A eritose está associada a um grande número de doenças, incluindo diabetes, anemia falciforme e talassemia.Ter um protocolo reprodutível para induzir a eritose pode ajudar pesquisadores em qualquer um desses campos a investigar mais questões científicas específicas para cada campo.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Analyses of Mitochondrial Calcium Influx in Isolated Mitochondria and Cultured Cells

Análises de influxo de cálcio mitocondrial em mitocôndrias isoladas e células cultivadas

Ca2+ handling by mitochondria is a critical function regulating both physiological and pathophysiological processes in a broad spectrum of cells. The ...

Bioquímica

Dissipative Microgravimetry to Study the Binding Dynamics of the Phospholipid Binding Protein Annexin A2 to Solid-supported Lipid Bilayers Using a Quartz Resonator

Microgravimetry dissipativo para estudar a dinâmica da vinculação do fosfolipídeo proteína anexina A2 para Bilayers do Lipid com suporte sólido usando um ressonador de quartzo

The dissipative quartz crystal microbalance technique is a simple and label-free approach to measure simultaneously the mass uptake and viscoelastic ...

In Vivo Calcium Imaging in C. elegans Body Wall Muscles

In Vivo Calcium Imaging in C. elegans Body Wall Muscles

In vivo Calcium Imaging em C. elegans corpo parede músculos

The model organism C. elegans provides an excellent system to perform in vivo calcium imaging. Its transparent body and genetic manipulability allow for ...

Translating Ribosome Affinity Purification (TRAP) for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Traduzindo a purificação de afinidade Ribossome (TRAP) para isolamento de RNA de células endoteliais in vivo

Many studies have been limited to using in vitro cellular assays and whole tissues or isolating of specific cell types from animals for in vitro analysis ...

SUMO-Binding Entities (SUBEs) as Tools for the Enrichment, Isolation, Identification, and Characterization of the SUMO Proteome in Liver Cancer

SUMO-Binding Entities SUBEs as Tools for the Enrichment, Isolation, Identification, and Characterization of the SUMO Proteome in Liver Cancer

Entidades vinculantes ao SUMO (SUBEs) como ferramentas para enriquecimento, isolamento, identificação e caracterização do Proteome SUMO em Câncer de Fígado

Post-translational modification is a key mechanism regulating protein homeostasis and function in eukaryotic cells. Among all ubiquitin-like proteins in ...

Ultra-High-Speed Western Blot using Immunoreaction Enhancing Technology

Blot ocidental de alta velocidade usando tecnologia de aprimoramento de imunoreaction

A western blot (also known as an immunoblot) is a canonical method for biomedical research. It is commonly used to determine the relative size and ...

Rapid Determination of Antibody-Antigen Affinity by Mass Photometry

Determinação rápida da afinidade anticorpo-antígeno por fotometria em massa

Measurements of the specificity and affinity of antigen-antibody interactions are critically important for medical and research applications. In this ...

A "Dual-Addition" Calcium Fluorescence Assay for the High-Throughput Screening of Recombinant G Protein-Coupled Receptors

Um ensaio de fluorescência de cálcio de "dupla adição" para a triagem de alto rendimento de receptores acoplados à proteína G recombinante

G protein-coupled receptors (GPCRs) represent the largest superfamily of receptors and are the targets of numerous human drugs. High-throughput screening ...

Immunostaining-Based Detection of Dynamic Alterations in Red Blood Cell Proteins

Detecção de Alterações Dinâmicas em Proteínas Eritrocitárias Baseadas em Imunomarcação

Antibody labeling of red blood cell (RBC) proteins is a commonly used, semi-quantitative method to detect changes in overall protein content or acute ...

Smartphone como um dispositivo analítico para quantificar proteínas usando o ensaio de Bradford

RGBradford: Protein Quantitation with a Smartphone Camera

Autor em destaque: uma abordagem alternativa para a quantificação de proteínas pelo ensaio de Bradford usando um smartphone 

RGBradford: Quantificação de proteínas com uma câmera de smartphone

Protein quantitation is an essential procedure in life sciences research. Amongst several other methods, the Bradford assay is one of the most used. ...