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5.7K Views
•
08:46 min
May 18th, 2020
DOI :
10.3791/60730-v
Chapters
0:04
Introduction
0:41
Crosslinking
2:44
Immunoprecipitation
5:31
Dephosphorylation and PNK Treatment
6:53
Results: WDR43 and LIN28 FbioCLIP-seq
8:17
Conclusion
Transcript
只有和只有结合的蛋白质控制多个生物过程。这种 FLAG-Biotin CLIP-seq 方法,因此在全球范围内描述哺乳动物细胞中RNA和RBB的特殊和时间排列。这种方法允许有效地检测直接蛋白结合的RNA,无需SDS-PAGE和膜转移程序。
与传统的 CLIP-seq 相比,它是无同位素的,不需要蛋白质特异性抗体。首先将大约300万只小鼠胚胎STEM细胞镀在10厘米的盘子里,并在一夜之间孵育。第二天,用真空去除介质,在室温下用两毫升0.25%的三丁辛EDTA治疗细胞两分钟。
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Summary
在这里,我们提出了一个改进的 CLIP-seq 协议, 称为 FbioCLIP-seq 与 FLAG 生物素串联纯化,以确定哺乳动物细胞中RNA结合蛋白(RBPs)的RNA靶点。
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