Name: assessment of memory function in pilocarpine-induced epileptic mice
Uploaded: 2020-06-04T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Memory Function in Pilocarpine-induced Epileptic Mice at JoVE.com

我们感谢李杰敏博士的技术支持。这项工作得到了韩国政府资助的韩国国家研究基金会（NRF-2019R1A2C1003958，NRF-2019K2A9A2A2A08000167）的支持。

所有实验程序均经韩国天主教大学伦理委员会批准，并根据《国家卫生研究院实验室动物护理和使用指南》（NIH出版物第80-23号）进行。
1. 新颖对象位置测试 （NL）
<ol><li>在皮洛卡平注射4-6周后准备癫痫C57BL/6或转基因小鼠。 注：急性癫痫发作是由腹内（IP）皮洛卡平注射引起的，遵循我们上次报告14中详述的协议。</li>
	<li>在行为测试开始前一天，将癫?...

本研究描述了评估慢性癫痫小鼠认知功能的实验程序。许多不同的行为测试范式用于评估小鼠18中的学习和记忆功能。莫里斯水迷宫、径向臂迷宫、Y迷宫、上下文恐惧调节和基于对象的测试是最常用的行为测试，并提供可靠的结果。其中，NL、NO和PS测试是评价癫痫小鼠,8、10学习和记忆的有效、简单的方法。8由于癫痫小鼠在行为过程中...

癫痫是一种慢性疾病，其特征是自发性复发性发作11、2、3。2,3由于重复性癫痫发作可引起大脑11、2、32,3的结构和功能异常，异常发作活动可引起认知功能障碍，这是最常见的癫痫相关合并症4,4、5、6。,6与慢性癫痫发作事件相反，这些发作是短暂的和短暂的，认知障碍会持续到癫痫患者的生活中，从而恶化他们的生活质量。因此，了解癫痫相关认知衰退的病理生理学机制非常重要。
各种癫痫实验动物模型被用来证明与慢性癫痫相关的学习和记忆缺陷787，8，9，10，11，12。,9,10,11,12,例如，莫里斯水迷宫、上下文恐惧调理、孔板、新型物体位置（NL）和新颖的物体识别（NO）测试经常被用来评估叶癫痫（TLE）的记忆功能障碍。由于海马是TLE显示病理学的主要区域之一，因此通常优先选择能够评估海马依赖记忆功能的行为测试。然而，鉴于癫痫发作可以诱发异常海马神经发生，并促成癫痫相关认知衰退10，测试变性新生儿神经元功能的行为范式（即空间模式分离，PS）8，13也可以提供有关癫痫记忆损伤细胞机制8,13的宝贵信息。
在本文中，我们演示了针对癫痫小鼠的一组内存测试 NL、NO 和 PS。测试简单且易于访问，不需要复杂的系统。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 ml syringe</td>
			<td>Sung-shim</td>
			<td></td>
			<td>Use with the 26 or 30 gauge needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Ethanol</td>
			<td>Duksan</td>
			<td>UN1170</td>
			<td>Spray to clean the box and objects</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>black curtain</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For avoiding unnecessary visual cues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cresyl violet</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C5042</td>
			<td>For Cresyl violet staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cryotome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>E21040041</td>
			<td>For tissue sectioning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>double-sided sticky tape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For the firm placement of the objects</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPX mounting medium</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>06522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethanol series</td>
			<td>Duksan</td>
			<td>UN1170</td>
			<td>Make 100%, 95%, 90%, 80%, 70% ethanol solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>floor plate with narrow grid patterns</td>
			<td>Leehyo-bio</td>
			<td></td>
			<td>Behavioral experiment equipment, plate size: 42.5 x 42.5 x 0.5 cm, grid size: 2.75 x 2.75 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>floor plate with wide grid patterns</td>
			<td>Leehyo-bio</td>
			<td></td>
			<td>Behavioral experiment equipment, plate size: 42.5 x 42.5 x 0.5 cm, grid size: 5.5 x 5.5 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>illuminometer</td>
			<td>TES Electrical Electronic Corp.</td>
			<td>1334A</td>
			<td>For the measurement of the room lighting (60 Lux)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intensive care unit</td>
			<td>Thermocare</td>
			<td>#W-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ketamine hydrochloride</td>
			<td>Yuhan</td>
			<td>7003</td>
			<td>Use to anesthetize the mouse for transcardial perfusion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED lamp</td>
			<td>Lungo</td>
			<td>P13A-0422-WW-04</td>
			<td>Lighting for the behavioral test room</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>objects</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Rubber doll, 50 ml plastic tube, glass Coplin jar, plastic T-flask, glass bottle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>open field box</td>
			<td>Leehyo-bio</td>
			<td></td>
			<td>Behavioral experiment equipment, size: 44 x 44 x 31 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paper towel</td>
			<td>Yuhan-Kimberly</td>
			<td>47201</td>
			<td>Use to dry open field box and objects</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>104005</td>
			<td>Make 4% solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pilocarpine hydrochloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ruler</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Use to locate the objects in the open field box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scopolamine methyl nitrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S2250</td>
			<td>Make 10X stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Smart system 3.0</td>
			<td>Panlab</td>
			<td></td>
			<td>Video tracking system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stopwatch</td>
			<td>Junso</td>
			<td>JS-307</td>
			<td>For the measurement of explorative activities of mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sucrose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9378</td>
			<td>For cryoprotection of tissue sections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>terbutaline hemisulfate salt</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T2528</td>
			<td>Make 10X stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>video camera (CCD camera)</td>
			<td>Vision</td>
			<td>VCE56HQ-12</td>
			<td>Place the camera directly overhead of the open field box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xylazine (Rompun)</td>
			<td>Bayer korea</td>
			<td>KR10381</td>
			<td>Use to anesthetize the mouse for transcardial perfusion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xylene</td>
			<td>Duksan</td>
			<td>UN1307</td>
			<td>For Cresyl violet staining</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of memory function in pilocarpine-induced epileptic mice

认知障碍是叶癫痫最常见的合并症之一。为了在癫痫动物模型中重述癫痫相关认知衰退，我们产生了由皮洛卡平治疗的慢性癫痫小鼠。我们使用这些癫痫小鼠为三种不同的行为测试提供了一个协议：新对象位置 （NL）、新对象识别 （NO） 和模式分离 （PS） 测试，分别用于评估地点、对象和上下文的学习和记忆。我们解释了如何在运动场测试后，为NL、NO和PS测试设置行为装置并提供实验程序，该测试测量动物的基底运动活动。我们还描述了NL、NO和PS测试在评估癫痫小鼠记忆功能的其他行为测试方面的技术优势。最后，我们讨论了癫痫小鼠在熟悉会话期间未能与物体进行良好接触的可能原因和解决方案，这是成功进行记忆测试的关键步骤。因此，该协议提供了有关如何使用小鼠评估癫痫相关记忆损伤的详细信息。NL、NO 和 PS 测试简单、高效的检测，适用于评估癫痫小鼠中不同类型的记忆。

图1显示了评估认知功能的一般实验时间表和设置。在引入皮洛卡平引起的急性癫痫发作六周后，小鼠接受NL、NO和PS测试，按该顺序在测试之间间隔3天休息期（图1A）。对于 NL 测试，在熟悉会话 （F1） 期间，两个相同的对象放置在开放字段中，第二天，一个对象移动到新位置。在 NO 测试中，一个对象在测试会话期间被替换为新对象。对于 PS 测试，两?...

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Assessment of Memory Function in Pilocarpine-induced Epileptic Mice

本文介绍了评估皮洛卡平诱导癫痫小鼠记忆损伤的实验程序。该协议可用于研究癫痫相关认知衰退的病理生理学机制，这是癫痫最常见的合并症之一。

皮洛卡平诱导癫痫小鼠记忆功能评估

Cognitive impairment is one of the most common comorbidities in temporal lobe epilepsy. To recapitulate epilepsy-associated cognitive decline in an animal ...

认知障碍是叶癫痫最常见的合并疾病之一。我们将介绍一个协议，描述如何使用慢性癫痫的小鼠模型评估记忆损伤。新颖的物体位置、新颖的物体识别和图案分离测试都是简单而短的，可以减轻动物的压力。它使此测试成为评估癫痫小鼠记忆功能的最佳方法，而没有自发性复发性癫痫发作的额外触发因素。首先，将动物适应家中笼子里的低光，至少30分钟。准备一个打开的字段框。在习惯的第一天，放置和照明仪在开放领域框的中心。将照度调整为 60 勒克斯。要评估每只小鼠的运动活动，请使用动物行为视频跟踪软件。打开视频跟踪软件后，校准打开字段框的大小。然后轻轻地将实验鼠标放在面向墙壁的开放领域框中。打开智能程序，单击"自定义"和"接受"。单击图像源。选择已安装的摄像机后，按"设置"按钮。调整摄像机分辨率并按"接受"。校准后，拖动计算机鼠标以适合框大小。并填写内框大小。单击"区域定义"以保存和调整每个框大小，然后单击"保存"。红色框是跟踪范围，因此它适合内框大小，而粉红色框适合轮廓。按检测设置。单击"快照"，然后按"开始测试"，检查是否跟踪了特定区域，然后预先进行"停止测试"，然后接受。单击"时间设置"。选择预设时间后，将延迟时间设置为 15 分钟，然后按"接受"。按"主题"设置代号。单击"计划程序"，删除现有详细信息，然后将主题中修改的代码名拖动到会话 1。单击数据采集。单击"录制"按钮，然后单击"开始"。将鼠标放入框中并跟踪 15 分钟。录音 15 分钟后，将鼠标返回到其家庭笼子。恢复明亮的光线。单击数据采集。然后单击"活动分析"将代码名称"Sham"拖动到旁边的窗口。单击"报表定义"按钮。单击"新报表定义"按钮，然后单击"摘要报告"，然后按"接受"。单击"区域中的主题名称和距离"，并将其发送到侧面。然后按"接受"按钮。单击红色检查标记，然后单击"分析"。检查结果。第二天和第三天，重复习惯会议。第四天执行熟悉会话。在昏暗的灯光下，将每只鼠标放在空旷的空旷的田野中三分钟。短暂的习惯后，动物回到它的笼子。将两个相同的物体，橡胶娃娃，放入离相邻墙壁五厘米远的露天竞技场。用双面胶带固定对象。将实验鼠标引入离物体最远的墙面的开放场箱中。允许免费探索 20 分钟，并使用两个秒表手动测量探索这两个对象所花费的时间。不要量化为探索时间，任何行为，其中动物鼻子不指向对象。一旦鼠标达到 30 秒的最小探索时间，对于两个对象，停止 F1 会话，然后将鼠标转移到其主保持架。如果鼠标在 20 分钟内无法浏览对象 30 秒，请从打开的字段框中删除鼠标，并将其从进一步会话中排除。第五天，执行新颖的对象位置测试会话。将鼠标转移到开放区域进行康复治疗三分钟。然后把它还到它的笼子里。将一个对象移到对角线位置，将实验鼠标放在打开的字段框的墙壁上。使用视频跟踪系统进行 10 分钟的免费探索和录制。使用两个秒表测量探索每个对象所花费的时间。接下来，通过抓住尾巴将鼠标转移到其家庭笼子。三天，让鼠标休息，免费获得食物和水。第九天，为一只鼠标进行15分钟的习惯训练。第10天进行简短的康复训练，为期三分钟。然后暂时把它还回它的家笼。将两个相同物体，50毫升塑料管装满40毫升水，放在开阔的田野里，离相邻的墙壁5厘米远。将实验鼠标引入开放字段框，朝向离物体最远的墙。由于鼠标将暴露在两个不同的对象在NO测试，一个50毫升的塑料管充满了40毫升的水，和一个玻璃科普林罐罐。在熟悉会话期间，通过为小组中一半的动物呈现两个相同的物体，即玻璃科普林罐子，来平衡对象。然后使用两个不同的对象，允许自由探索 20 分钟，并使用两个秒表手动测量探测这两个对象所花费的时间。一旦鼠标达到两个对象的最小过期时间 30 秒，停止熟悉会话。第二天，执行新颖的对象识别测试会话。首先，将鼠标转移到开阔的田地进行康复治疗，进行三分钟，然后将其返回到其家庭笼子。在距离相邻墙壁五厘米远的地方，用玻璃Coplin罐子代替管子，使老鼠接触到一根管子和一个玻璃科普林罐。对于在第一次熟悉过程中暴露在玻璃科普林罐中的一半动物，用装满 40 毫升水的 50 毫升塑料管替换玻璃科普林罐。使老鼠接触到一根管子和一杯科普林罐。使用视频跟踪系统录制时，请进行 10 分钟的免费探索。然后抓住实验鼠的尾巴，把它转移到它的家笼。三天，让老鼠休息，免费获得食物和水。对于 NL 分析，请打开"自定义和接受"开始程序。单击图像源。选择已安装的摄像机后，按"设置"按钮。只需相机分辨率，然后按"接受"。单击"打开视频文件夹"按钮打开已保存的视频。从鼠标进入时观看保存的视频 10 分钟，并测量浏览每个对象所花费的时间。在第 15 天，首次执行了 PS 测试的第一个熟悉会话。这是为鼠标到开放领域康复，三分钟。将地板与宽网格和两个相同的对象放置。塑料T瓶，装满50毫升水，在露天盒子里。然后将实验鼠标引入离物体最远的墙面的开放场箱中。允许免费探索20分钟。使用两个秒表手动测量探索这两个对象的时间。一旦鼠标达到两个物体的最小探索时间 30 秒，停止第一个熟悉会话，将动物转移到其家庭笼子。为了平衡对象和图案分离测试的一半动物放置地板与宽网格和两个相同的对象，玻璃瓶的计数器平衡实验在开放领域框。然后将实验鼠标引入开放领域框，并允许20分钟的自由探索。一旦鼠标达到两个物体的最小探索时间30秒，停止第一个熟悉会话，将动物转移到其家庭笼子。第二天，将鼠标转移到野外进行康复治疗三分钟。然后把它还到它的笼子里接下来，在狭窄的栅格地板上使用两个玻璃瓶执行第二次熟悉会话。对于平衡实验，在狭窄的网格地板上用两个装满水的 T 瓶执行第二次熟悉会话。第二天执行模式分离测试会话。将鼠标转移到开放区域，三分钟内没有物体进行康复。然后把它还到它的笼子里接下来，将装满水和玻璃瓶的 T 瓶放在狭窄的网格地板上。使T瓶水充满，在新颖的对象。对于平衡实验，将每个对象放在狭窄的网格地板上，使玻璃瓶成为新对象。然后为实验鼠到开阔的田野区域探索10分钟。使用视频跟踪系统进行 10 分钟的免费探索和录制。抓住实验鼠的尾巴，把它转移到它的家笼。使用两个秒表测量探索每个对象所花费的时间。计算等于新对象与熟悉对象所花费时间之差的区分比，除以探索两个对象的总时间。皮洛卡平引起急性癫痫发作六周后。老鼠将接受新颖的物体位置测试。新颖的对象识别试验和图案分离试验。按该顺序在测试之间分开三天的休息时间。经证实，两个对象之间没有显著偏好。与Sham对巴对相比，癫痫小鼠在三次测试中的歧视率明显降低。显示空间记忆损伤。对运动活动进行测量，表明癫痫动物显著增加。而探索这些物体的动机是沙姆和癫痫动物之间的可比性。最后，用水晶紫罗兰染色确认癫痫发作诱发神经元损伤后，对海马细胞死亡进行了评估。与Sham控制不同，皮洛卡平治疗动物在海马和CA3亚场中表现出对皮诺蒂奇细胞的证明。在 NO 和 PS 测试中计数对于减少此设备特定对象中固有的偏差至关重要。此外，慢性癫痫小鼠开放显示高度焦虑，这需要多个习惯步骤，以足够的好评国家的实验设置。时间修改，如我们协议中对象的数量或位置可以提供内存测试。这可能有助于详细阐述与认知衰退相关的癫痫的复杂机制。看完这段视频后，你应该对如何评估癫痫中记忆障碍的不同方面有一个很好的理解。

Research

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