Name: visualization and analysis of pharyngeal arch arteries using whole-mount immunohistochemistry and 3d reconstruction
Uploaded: 2020-03-31T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualization and Analysis of Pharyngeal Arch Arteries using Whole-mount Immunohistochemistry and 3D Reconstruction at JoVE.com

我们感谢布赖恩娜·亚历山大、曹兰·奥唐纳和迈克尔·沃卡拉仔细阅读和编辑这份手稿。这项工作得到了NIH R01 HL103920、R01 HL134935、R21 OD025323-01至SA国家心脏、肺血研究所的资助;AJR得到NHLBI HL103920-08S1和国家关节炎和肌肉骨骼和皮肤病训练补助金T32052283-11的支持。

罗格斯大学机构动物护理和使用委员会批准了动物使用和程序。
1. 准备解决方案
<ol><li>用 0.1% Triton-X-100 （PBST） 制备 1 L 的磷酸盐缓冲盐水，并消毒过滤器。此解决方案可在室温 （RT） 下存储至少一年。</li>
	<li>准备600μL的阻塞缓冲液，由PBST中正常驴血清的10%组成。每次使此解决方案新鲜。</li>
	<li>在流量罩中制备以下 50 mL 甲醇 （MeOH） 稀释剂：在去离子水中 （dH2...

<ol>
	<li>Hiruma, T., Nakajima, Y., Nakamura, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+pharyngeal+arch+arteries+in+early+mouse+embryo.">Development of pharyngeal arch arteries in early mouse embryo.</a> Journal of Anatomy. 201 (1), 15-29 (2002).</li><li>Hutson, M. R., Kirby, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Model+systems+for+the+study+of+heart+development+and+disease+Cardiac+neural+crest+and+conotruncal+malformations.">Model systems for the study of heart development and disease Cardiac neural crest and conotruncal malformations.</a> Seminars in Cell &amp; Developmental Biology. 18 (1), 101-110 (2007).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelium+in+the+pharyngeal+arches+3,+4+and+6+is+derived+from+the+second+heart+field.">Endothelium in the pharyngeal arches 3, 4 and 6 is derived from the second heart field.</a> Developmental Biology. 421 (2), 108-117 (2017).</li><li>Jerome, L. A., Papaioannou, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DiGeorge+syndrome+phenotype+in+mice+mutant+for+the+T-box+gene,+Tbx1.">DiGeorge syndrome phenotype in mice mutant for the T-box gene, Tbx1.</a> Nature Genetics. 27 (3), 286-291 (2001).</li><li>Lindsay, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tbx1+haploinsufficieny+in+the+DiGeorge+syndrome+region+causes+aortic+arch+defects+in+mice.">Tbx1 haploinsufficieny in the DiGeorge syndrome region causes aortic arch defects in mice.</a> Nature. 410 (6824), 97-101 (2001).</li><li>Weninger, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualising+the+Cardiovascular+System+of+Embryos+of+Biomedical+Model+Organisms+with+High+Resolution+Episcopic+Microscopy+(HREM).">Visualising the Cardiovascular System of Embryos of Biomedical Model Organisms with High Resolution Episcopic Microscopy (HREM).</a> Journal of Cardiovascular Development and Disease. 5 (4), 58 (2018).</li><li>Phillips, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pax9+is+required+for+cardiovascular+development+and+interacts+with+Tbx1+in+the+pharyngeal+endoderm+to+control+4th+pharyngeal+arch+artery+morphogenesis.">Pax9 is required for cardiovascular development and interacts with Tbx1 in the pharyngeal endoderm to control 4th pharyngeal arch artery morphogenesis.</a> Development. 146 (18), (2019).</li><li>Vlaeminck-Guillem, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Ets+family+member+Erg+gene+is+expressed+in+mesodermal+tissues+and+neural+crests+at+fundamental+steps+during+mouse+embryogenesis.">The Ets family member Erg gene is expressed in mesodermal tissues and neural crests at fundamental steps during mouse embryogenesis.</a> Mechanisms of Development. 91 (1-2), 331-335 (2000).</li><li>Ert&#252;rk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+imaging+of+the+unsectioned+adult+spinal+cord+to+assess+axon+regeneration+and+glial+responses+after+injury.">Three-dimensional imaging of the unsectioned adult spinal cord to assess axon regeneration and glial responses after injury.</a> Nature Medicine. 18 (1), 166-217 (2012).</li><li>Azaripour, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+survey+of+clearing+techniques+for+3D+imaging+of+tissues+with+special+reference+to+connective+tissue.">A survey of clearing techniques for 3D imaging of tissues with special reference to connective tissue.</a> Progress in Histochemistry and Cytochemistry. 51 (2), 9-23 (2016).</li><li>Richardson, D. S., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clarifying+Tissue+Clearing.">Clarifying Tissue Clearing.</a> Cell. 162 (2), 246-257 (2015).</li><li>Becker, K., J&#228;hrling, N., Saghafi, S., Weiler, R., Dodt, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+Clearing+and+Dehydration+of+GFP+Expressing+Mouse+Brains.">Chemical Clearing and Dehydration of GFP Expressing Mouse Brains.</a> PLoS One. 7 (3), e33916 (2012).</li><li>Ert&#252;rk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+imaging+of+solvent-cleared+organs+using+3DISCO.">Three-dimensional imaging of solvent-cleared organs using 3DISCO.</a> Nature Protocols. 7 (11), 1983-1995 (2012).</li><li>Kuwajima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ClearT:+a+detergent-+and+solvent-free+clearing+method+for+neuronal+and+non-neuronal+tissue.">ClearT: a detergent- and solvent-free clearing method for neuronal and non-neuronal tissue.</a> Development. 140 (6), 1364-1368 (2013).</li></ol>

在3D小鼠胚胎中可视化内皮的能力为小鼠胚胎的发展提供了新的见解。在这里，我们提出了一个协议，允许对胚胎进行高分辨率的3D成像，血管连接的可视化，以及PAA形成的定量分析。该协议可用于查看基因改变或环境侮辱如何影响 PAA 发展。此处报告的程序使用针对VEGFR2和ERG的抗体来可视化PAA形成和量化EC编号;然而，额外的抗体可用于可视化和分析弓动脉发展的其他方面，如神?...

在小鼠胚胎形成期间，咽喉弓动脉（PAAs）出现为对称的两侧动脉对，将心脏与背动脉1连接起来。随着胚胎的发展，第一和第二对PAA回归，而第3、4和6PAA经历一系列不对称的重塑事件，形成主动脉2。
PAAs 3、4 和 6 通过血管生成而发展，这是血管的脱层3。这些弓动脉形成或改造的缺陷导致各种先天性心脏缺陷，如在DiGeorge综合征44，55患者看到。因此，理解调节PAA发展的机制可以导致对先天性心脏病（CHD）病因的更好理解。
目前用于可视化和分析PAA发展的方法包括组织部分的免疫荧光、血管铸件、印度墨水注射、高分辨率的异见显微镜和/或全卡免疫组织化学11、4、5、6、7。4,5,6,7在这里，我们描述了一种结合全载式免疫荧光、共聚焦显微镜和3D图像渲染的协议，以便收集、分析和量化体积数据、血管连接性和细胞识别。此外，我们详细介绍了一种将每个咽喉拱中的ECs数量分割和量化的方法，作为研究咽喉弓血管丛的形成及其重新改造到PAA的方法。虽然该协议是专为分析PAA发展而设计的，但它可用于分析其他正在发育的血管网络。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10x PBS</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>PBS10X02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20x water immersion objective</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>MRD77200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories</td>
			<td>1613101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 anti-goat</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-11055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 555 anti-mouse</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-31570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analysis Software</td>
			<td>Imaris 9.2.0</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzyl Alcohol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>305197</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzyl Benzoate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>8.18701.0100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover Slips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>16004-312</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI (5 mg/mL stock)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>D3571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Tubes (2.0 mL)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-408-138</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89370-084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon tubes (50 mL)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast wells</td>
			<td>Grace Bio Labs</td>
			<td>664113</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-VEGFR2</td>
			<td>R&#38;D Systems, Inc.</td>
			<td>AF644</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH1135-4LP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>A1HD25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-ERG</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab214341</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Donkey Serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9663</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>15710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipets</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-20D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes (35 mm)</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>32-103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes (60 mm)</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>32-105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Molds</td>
			<td>VWR</td>
			<td>18000-128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scapels</td>
			<td>Exelint International Co.</td>
			<td>29552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton-X-100</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP 151-500</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualization and analysis of pharyngeal arch arteries using whole-mount immunohistochemistry and 3d reconstruction

咽弓动脉（PAA）3、4和6的不当形成或重塑导致一些最严重的先天性心脏病。为了研究PAA的形成，我们开发了一种方案，使用全支式免疫荧光结合苯基醇/苯甲酸苯甲酸酯（BABB）组织清除和共聚焦显微镜。这允许以精细的细胞分辨率可视化咽喉拱内体，以及血管的 3D 连接。使用软件，我们建立了一个协议，以量化PAA中的内皮细胞 （EC） 数量，以及咽喉拱门 3、4 和 6 内围绕 PAA 的血管丛中的 E 数。该方法应用于整个胚胎时，对胚胎血管进行综合的可视化和定量分析。

此处介绍的全载免疫荧光协议产生清晰、干净的结果，允许对咽喉拱内皮进行3D重建，如图1A所示。在每个抗体溶液中孵育胚胎足够长的时间以确保通过样品完全渗透，以及彻底清洗胚胎后抗体孵育，这一点非常重要。在图 1B中，大而明亮的点是抗体或阻塞缓冲液溶液中微粒的结果。我们发现，每次抗?...

Watch this Scientific Journal Video about Visualization and Analysis of Pharyngeal Arch Arteries using Whole-mount Immunohistochemistry and 3D Reconstruction at JoVE.com

Visualization and Analysis of Pharyngeal Arch Arteries using Whole-mount Immunohistochemistry and 3D Reconstruction

在这里，我们描述了一种协议，使用全孔免疫荧光、组织清除、共聚焦显微镜和3D重建来可视化和分析小鼠胚胎的咽弓动脉3、4和6。

使用全载免疫作用化学和三维重建对咽弓动脉的可视化与分析

Improper formation or remodeling of the pharyngeal arch arteries (PAAs) 3, 4, and 6 contribute to some of the most severe forms of congenital heart ...

此方法允许每个咽拱门被分割。然后，每个拱门中都可以量化内皮细胞数，作为研究咽状拱状动脉发育的一种手段。这种方法的主要优点是能够可视化不同血管结构之间的关系，以及定量确定结构如何影响突变体的能力。主动脉在先天性心脏病中通常发生变异。我们的方法允许研究突变如何改变血管形成和重塑的生理过程。虽然我们使用这种方法来深入了解先天性心脏病的机制，但它可以应用于其他系统，特别是随着光片显微镜的出现。首先使用玻璃移液器将每只小鼠胚胎日9.5或10.5胚胎移植到含有1毫升PBS的单个两毫升管子中。固定后，使用细钳小心地捏紧胚胎，然后做横向切切，取出胚胎的后半部分。要渗透胚胎，请用PBST替换PBS，并在一夜之间将胚胎在4摄氏度下轻轻搅拌。第二天，用600微升的阻尼缓冲液代替PBST，无需接触胚胎，在4摄氏度下用温和的搅拌进行16至18小时的孵育。第二天早上，用每管感兴趣的主要抗体的600微升替换阻塞缓冲液，在4摄氏度下用温和的搅拌进行4至5天的孵育。在孵育结束时，在PBST的一毫升中清洗胚胎4至5小时，在室温下温和搅拌，每小时改变PBS，随后在4摄氏度的新鲜PBST中过夜孵育，第二天再用4至5小时洗涤。最后一次洗涤后，用600微升适当的二次抗体溶液更换每个管中的PBST，在4摄氏度下进行4至5天的孵育。在孵化结束时，将胚胎洗涤至每洗一毫升新鲜PBST，并使用玻璃移液器轻轻地将每个胚胎移植到单独的塑料石蜡模具中。小心地从每个胚胎周围取出任何PBST，将每个胚胎定向到下垂位置。然后快速添加约500微升的热阿加罗斯到每个模具，直到每个胚胎刚刚覆盖，并放置在冰上覆盖着铝箔的模具，直到阿加罗斯已经凝固。对于胚胎样本的脱水，使用干净的手术刀在每个胚胎周围切割一块黄糖，并使用钳子抓住黄糖转移到含有一毫升25%甲醇的两毫升管中。在黑暗中轻轻搅拌一小时后，用每管50%甲醇的一毫升代替25%甲醇，在黑暗中再孵育一小时。脱水结束后，用一毫升50%的甲醇代替100%甲醇，在黑暗中轻轻搅拌一小时。在孵育结束时，将 50%BABB 替换为每管 100%BABB 的 1 毫升，在黑暗中轻轻搅拌一小时，然后用 100% BABB 进行第二次孵育，正如刚刚证明的。要安装胚胎进行成像，请从快速井保险杠上取下粘合剂，将保险杠放在 24 由 6 毫升数 1.5 玻璃盖玻片上。向粘合剂施加温和压力，以去除盖玻片和保险杠之间的任何气泡，并小心地将 100%BABB 从每个管中丢弃。然后使用细钳小心地将胚胎移植到快速井中，而不接触胚胎，并在保险杠上放置第二个盖玻片。要在整个第三咽拱中显示内皮，请打开软件中感兴趣的图像，然后单击添加新表面。双击曲面 1，将新曲面重命名为第三个咽拱。选择跳过自动创建，手动编辑，并设置到 YZ 平面的表面方向。使用切片位置将第三个咽拱形表面平面放置到第三个 PAA 和后大干道连接的位置。旋转图像，使第三个咽形拱形表面平面在视图中并关闭正交切片器。在绘制轮廓模式下，选择距离绘制模式功能并根据需要调整参数设置。设置所有参数后，按 Escape 键并单击绘制以使用鼠标光标跟踪第三个咽拱的周长。然后使用切片位置移动 10 到 25 个切片，并跟踪咽拱的周长。跟踪整个拱门后，单击"创建曲面"以生成跟踪区域的表面。要蒙版结构，请在编辑菜单中选择第三个 PAA 和 DAPI 的蒙版选择，然后单击"确定"。然后将新通道重命名为 PAA DAPI。对其余通道重复此步骤。要将内皮丛与 PAA 分开可视化，请选择第三个 PAA 的蒙版选择，然后选择 DAPI。取消选中曲面外部的体素，并选中曲面内的选名体。将曲面内的选择体素设置为零，然后单击"确定"。将新通道重命名为非 PAA DAPI。对其余通道重复此步骤。为第三个 PA 选择蒙版选择，然后选择非 PAA DAPI，然后单击"确定"。将新通道重命名为丛达皮。对其余通道重复此步骤。要量化每个感兴趣结构中的单个内皮细胞，在显示调整面板中，请关闭除 PAA ERG 通道之外的所有通道。在属性菜单下，单击"添加新点"并单击以重命名点内皮单元格总数一个 PAA 总数。单击蓝色箭头，然后选择源通道的 PAA ERG 通道。将估计的 XY 直径调整为四微米，然后单击蓝色箭头以进入下一个面板。使用滑动刻度调整斑点数，以确保每个 ERG 正内皮细胞核由一个点表示。接下来，单击绿色双箭头并关闭显示调整面板中的 PAA ERG 通道。打开 PAA VEGFR2 通道以可视化 PAA 内皮，然后单击编辑和添加/删除以选择对象表面。然后按"转义"并按住 Shift 以删除所有不是 VEGFR2 正点的点，然后单击统计选项卡以确定内皮单元格的总数。全安装免疫荧光产生清晰、干净的结果，使咽拱内皮的三维重建。在此图像中，大亮点的存在是抗体或阻塞缓冲液中颗粒物的结果。在咽拱和PAA表面染色后，使用掩膜功能可以直观地分离表面区域并独立分析。掩蔽还允许对每个结构中的内皮细胞数进行单独的分析和定量。例如，此处使用点特征来量化 PAA 和丛中的内皮细胞总数，为每个表示 ERG 的核分配一个点。在此图像中，可以观察到由点函数生成的 ERG 正 VEGFR2 负点。因此，必须验证软件识别的每个点是否实际表示单个内皮单元格。为了获得清晰和清晰的图像，请记住旋转所有溶液，并在抗体孵化后正确彻底地清洗每个胚胎。重要的是要记住，BABB具有腐蚀性和毒性。正确处理和丢弃溶剂，确保完全密封熔化的胚胎，防止 BABB 泄漏。

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

咽弓的体外培养研究心脏和肌肉祖细胞和自己的优势

The pharyngeal mesoderm of developing embryos contributes to broad regions of head and heart musculature. We have developed a novel method to study head ...

科研

发育生物学

Organ Culture and Whole Mount Immunofluorescence Staining of Mouse Wolffian Ducts

器官培养和鼠标沃尔弗导管的全山免疫染色

Tubal morphogenesis is a fundamental requirement for the development of most mammalian organs, including the male reproductive system. The epididymis, an ...

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

胚胎血管生成的可视化和定量分析<em&gt;热带非洲爪蟾</em

Blood vessels supply oxygen and nutrients throughout the body, and the formation of the vascular network is under tight developmental control. The ...

Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin

水平整体安装：厚三维组织横截面皮肤的新型加工和成像方案

Processing a tissue of interest to generate a microscopic image that supports a scientific argument can be challenging. The acquisition of high-quality ...

Visualizing Multiciliated Cells in the Zebrafish Through a Combined Protocol of Whole Mount Fluorescent In Situ Hybridization and Immunofluorescence

Visualizing Multiciliated Cells in the Zebrafish Through a Combined Protocol of Whole Mount Fluorescent In Situ Hybridization and Immunofluorescence

全贴装荧光原位杂交和免疫荧光法在斑马鱼中 Multiciliated 细胞的可视化

In recent years, the zebrafish embryo has emerged as a popular model to study developmental biology due to traits such as ex utero embryo development and ...

Whole-mount Clearing and Staining of Arabidopsis Flower Organs and Siliques

Whole-mount Clearing and Staining of Arabidopsis Flower Organs and Siliques

拟南芥花器官和角果的全装清和染色

Due to its formidable tools for molecular genetic studies, Arabidopsis thaliana is one of the most prominent model species in plant biology and, ...

Quantitative Whole-mount Immunofluorescence Analysis of Cardiac Progenitor Populations in Mouse Embryos

小鼠胚胎心肌内祖群的定量全贴免疫荧光分析

The use of ever-advancing imaging techniques has contributed broadly to our increased understanding of embryonic development. Pre-implantation development ...

Whole Mount Immunofluorescence and Follicle Quantification of Cultured Mouse Ovaries

培养小鼠卵巢的全贴装免疫荧光和卵泡定量研究

Research in the field of mammalian reproductive biology often involves evaluating the overall health of ovaries and testes. Specifically, in females, ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

用扫描电镜和全贴免疫荧光技术可视化小鼠胚胎中的节点和外型板

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

Dissection of the Drosophila Pupal Retina for Immunohistochemistry, Western Analysis, and RNA Isolation

Dissection of the Drosophila Pupal Retina for Immunohistochemistry, Western Analysis, and RNA Isolation

嗜酸性粒植物视网膜免疫组织化学、西方分析和 Rna 分离的解剖

The Drosophila pupal retina provides an excellent model system for the study of morphogenetic processes during development. In this paper, we present a ...