Name: visualization and analysis of pharyngeal arch arteries using whole-mount immunohistochemistry and 3d reconstruction
Uploaded: 2020-03-31T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualization and Analysis of Pharyngeal Arch Arteries using Whole-mount Immunohistochemistry and 3D Reconstruction at JoVE.com

Мы благодарим Брианну Александр, Каолан О'Доннелл и Майкла Варкалу за тщательное чтение и редактирование этой рукописи. Эта работа была поддержана финансированием из Национального института сердца, легких и крови NIH R01 HL103920, R01 HL134935, R21 OD025323-01 в SA; AJR поддерживается NHLBI HL103920-08S1 и Национальным институтом артрита и опорно-мостомузыка и кожных заболеваний Учебный грант T32052283-11.

Использование и процедуры использования животных были одобрены Институциональным комитетом по уходу за животными и использованию при Ратгерском университете.
1. Подготовка решений
<ol><li>Подготовьте 1 л фосфатного буферного солей с 0,1% Triton-X-100 (PBST) и пронесите фильтр. Это р...

<ol>
	<li>Hiruma, T., Nakajima, Y., Nakamura, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+pharyngeal+arch+arteries+in+early+mouse+embryo.">Development of pharyngeal arch arteries in early mouse embryo.</a> Journal of Anatomy. 201 (1), 15-29 (2002).</li><li>Hutson, M. R., Kirby, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Model+systems+for+the+study+of+heart+development+and+disease+Cardiac+neural+crest+and+conotruncal+malformations.">Model systems for the study of heart development and disease Cardiac neural crest and conotruncal malformations.</a> Seminars in Cell &amp; Developmental Biology. 18 (1), 101-110 (2007).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelium+in+the+pharyngeal+arches+3,+4+and+6+is+derived+from+the+second+heart+field.">Endothelium in the pharyngeal arches 3, 4 and 6 is derived from the second heart field.</a> Developmental Biology. 421 (2), 108-117 (2017).</li><li>Jerome, L. A., Papaioannou, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DiGeorge+syndrome+phenotype+in+mice+mutant+for+the+T-box+gene,+Tbx1.">DiGeorge syndrome phenotype in mice mutant for the T-box gene, Tbx1.</a> Nature Genetics. 27 (3), 286-291 (2001).</li><li>Lindsay, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tbx1+haploinsufficieny+in+the+DiGeorge+syndrome+region+causes+aortic+arch+defects+in+mice.">Tbx1 haploinsufficieny in the DiGeorge syndrome region causes aortic arch defects in mice.</a> Nature. 410 (6824), 97-101 (2001).</li><li>Weninger, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualising+the+Cardiovascular+System+of+Embryos+of+Biomedical+Model+Organisms+with+High+Resolution+Episcopic+Microscopy+(HREM).">Visualising the Cardiovascular System of Embryos of Biomedical Model Organisms with High Resolution Episcopic Microscopy (HREM).</a> Journal of Cardiovascular Development and Disease. 5 (4), 58 (2018).</li><li>Phillips, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pax9+is+required+for+cardiovascular+development+and+interacts+with+Tbx1+in+the+pharyngeal+endoderm+to+control+4th+pharyngeal+arch+artery+morphogenesis.">Pax9 is required for cardiovascular development and interacts with Tbx1 in the pharyngeal endoderm to control 4th pharyngeal arch artery morphogenesis.</a> Development. 146 (18), (2019).</li><li>Vlaeminck-Guillem, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Ets+family+member+Erg+gene+is+expressed+in+mesodermal+tissues+and+neural+crests+at+fundamental+steps+during+mouse+embryogenesis.">The Ets family member Erg gene is expressed in mesodermal tissues and neural crests at fundamental steps during mouse embryogenesis.</a> Mechanisms of Development. 91 (1-2), 331-335 (2000).</li><li>Ert&#252;rk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+imaging+of+the+unsectioned+adult+spinal+cord+to+assess+axon+regeneration+and+glial+responses+after+injury.">Three-dimensional imaging of the unsectioned adult spinal cord to assess axon regeneration and glial responses after injury.</a> Nature Medicine. 18 (1), 166-217 (2012).</li><li>Azaripour, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+survey+of+clearing+techniques+for+3D+imaging+of+tissues+with+special+reference+to+connective+tissue.">A survey of clearing techniques for 3D imaging of tissues with special reference to connective tissue.</a> Progress in Histochemistry and Cytochemistry. 51 (2), 9-23 (2016).</li><li>Richardson, D. S., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clarifying+Tissue+Clearing.">Clarifying Tissue Clearing.</a> Cell. 162 (2), 246-257 (2015).</li><li>Becker, K., J&#228;hrling, N., Saghafi, S., Weiler, R., Dodt, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+Clearing+and+Dehydration+of+GFP+Expressing+Mouse+Brains.">Chemical Clearing and Dehydration of GFP Expressing Mouse Brains.</a> PLoS One. 7 (3), e33916 (2012).</li><li>Ert&#252;rk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+imaging+of+solvent-cleared+organs+using+3DISCO.">Three-dimensional imaging of solvent-cleared organs using 3DISCO.</a> Nature Protocols. 7 (11), 1983-1995 (2012).</li><li>Kuwajima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ClearT:+a+detergent-+and+solvent-free+clearing+method+for+neuronal+and+non-neuronal+tissue.">ClearT: a detergent- and solvent-free clearing method for neuronal and non-neuronal tissue.</a> Development. 140 (6), 1364-1368 (2013).</li></ol>

Возможность визуализировать эндотелий в эмбрионах мыши в 3D предоставила новые идеи в их развитии3. Здесь мы представляем протокол, который позволяет с высоким разрешением 3D-изображения эмбрионов, визуализации сосудистой связи, а также количественный анализ формирования P...

Во время эмбрионеза мыши, фарингеальные арочные артерии (PAAs) возникают как симметричные, двусторонние пары артерий, которые соединяют сердце с дорсальной аорты1. По мере развития эмбриона, первая и вторая пары PAAs регресс, в то время как3-й,4-й,и6-й PAA проходят серию асимметричных событий реконструкции для формирования аортальных артерий арки2.
PAAs 3, 4 и 6 развиваются через васкулогенез, который является де Ново формирование кровеносных сосудов3. Дефекты в формировании или ремоделирования этих арочных артерий приводят к различным врожденным порокам сердца, таким как те, которые наблюдаются у пациентов с синдромом ДиДжорджа4,5. Таким образом, понимание механизмов, которые регулируют развитие PAAs может привести к лучшему пониманию врожденных пороков сердца (ИГП) этиологии.
Текущие подходы для визуализации и анализа развития PAA включают иммунофлуоресценцию тканей, сосудистых слепков, инъекции чернил Индии, епископальной микроскопии высокого разрешения, и/или цельномонтаж иммуногистохимии1,4,,5,,6,7. В этом мы описываем протокол, сочетающий в себе иммунофлуоресценцию, конфокальные микроскопии и 3D-визуализацию изображений для сбора, анализа и количественной оценки объемных данных, сосудистой связи и клеточной идентичности. Кроме того, мы подробно метод разобщить и количественно номера eCs в каждой фарингиальной арки в качестве средства для изучения формирования фарингеальной арки сосудистого сплетения и его ремоделирования в PAAs. Хотя этот протокол предназначен для анализа развития PAA, он может быть использован для анализа других развивающихся сосудистых сетей.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10x PBS</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>PBS10X02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20x water immersion objective</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>MRD77200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories</td>
			<td>1613101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 anti-goat</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-11055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 555 anti-mouse</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-31570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analysis Software</td>
			<td>Imaris 9.2.0</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzyl Alcohol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>305197</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzyl Benzoate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>8.18701.0100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover Slips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>16004-312</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI (5 mg/mL stock)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>D3571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Tubes (2.0 mL)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-408-138</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89370-084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon tubes (50 mL)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast wells</td>
			<td>Grace Bio Labs</td>
			<td>664113</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-VEGFR2</td>
			<td>R&#38;D Systems, Inc.</td>
			<td>AF644</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH1135-4LP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>A1HD25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-ERG</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab214341</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Donkey Serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9663</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>15710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipets</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-20D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes (35 mm)</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>32-103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes (60 mm)</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>32-105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Molds</td>
			<td>VWR</td>
			<td>18000-128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scapels</td>
			<td>Exelint International Co.</td>
			<td>29552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton-X-100</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP 151-500</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualization and analysis of pharyngeal arch arteries using whole-mount immunohistochemistry and 3d reconstruction

Неправильное образование или реконструкция фарингиальных архи-артерий (PAAs) 3, 4 и 6 способствуют некоторым из наиболее тяжелых форм врожденных пороков сердца. Для изучения формирования ПАО мы разработали протокол с использованием цельномонтажной иммунофлуоресценции в сочетании с бензиловым спиртом/бензил бензоатом (BABB) очисткой тканей и конфокальной микроскопией. Это позволяет визуализировать фарингиальную арку эндотелия при тонком клеточном разрешении, а также 3D-соединение сосуды. Используя программное обеспечение, мы создали протокол для количественной оценки количества эндотелиальных клеток (ECs) в PAAs, а также количество ЭК в сосудистом сплетении, окружающих PAA в пределах фаринговых арок 3, 4 и 6. При применении ко всему эмбриону, эта методология обеспечивает комплексную визуализацию и количественный анализ эмбриональных сосуд.

Представленный здесь протокол иммунофлуоресценции в целом устанавливает четкие и чистые результаты, позволяющие 3D-реконструкцию фарингеальной арки эндотелия, как видно на рисунке 1А. Важно инкубировать эмбрионы в течение достаточного колич...

Watch this Scientific Journal Video about Visualization and Analysis of Pharyngeal Arch Arteries using Whole-mount Immunohistochemistry and 3D Reconstruction at JoVE.com

Visualization and Analysis of Pharyngeal Arch Arteries using Whole-mount Immunohistochemistry and 3D Reconstruction

Здесь мы описываем протокол для визуализации и анализа фарингиальных арочных артерий 3, 4 и 6 эмбрионов мыши с использованием иммунофлуоресценции, очистки тканей, конфокальной микроскопии и 3D-реконструкции.

Визуализация и анализ фарингиальных архиерейных артерий с использованием иммуногистохимии и 3D-реконструкции

Improper formation or remodeling of the pharyngeal arch arteries (PAAs) 3, 4, and 6 contribute to some of the most severe forms of congenital heart ...

Этот метод позволяет разобщить каждую фарингеационную арку. Эндотелиальные номера клеток могут быть количественно в каждой арке в качестве средства для изучения фарингеальной арки развития артерии. Основными преимуществами такого подхода являются способность визуализировать связь между различными сосудистыми структурами и способность количественно определять, как структуры повлияли на мутантов.Аортические арчные артерии обычно мутируют при врожденных пороках сердца. Наш метод позволяет изучать, как мутации изменяют физиологический процесс формирования и ремоделирования сосудов. Хотя мы используем этот метод, чтобы получить представление о механизмах врожденного порока сердца, он может быть применен к другим системам, особенно с появлением световой микроскопии.Начните с использования стеклянной пипетки для передачи каждой мыши эмбрионального дня 9,5 или 10,5 эмбриона в отдельные две миллилитровые трубки, содержащие один миллилитр PBS. После фиксации используйте тонкие щипси, чтобы тщательно ущипнуть эмбрион чуть выше задней части и сделать поперечный разрез, чтобы удалить заднюю половину эмбриона. Чтобы пронизать эмбрионы, замените PBS с PBST и поместите эмбрионы на четыре градуса цельсия с нежным возбуждением на ночь.На следующий день замените PBST 600 микролитров блокирующего буфера, не касаясь эмбрионов для 16-18-часовой инкубации при четырех градусах Цельсия с нежным возбуждением. На следующее утро замените блокирующий буфер на 600 микролитров первичного антитела интереса на трубку на четырех-пятидневную инкубацию при четырех градусах Цельсия с нежным возбуждением. В конце инкубации, мыть эмбрионы в один миллилитр PBST в течение четырех-пяти часов с нежным возбуждением при комнатной температуре изменения PBS каждый час, а затем ночь инкубации в свежем PBST при четырех градусах по Цельсию и четыре-пять дополнительных один час моет на следующий день.После последней стирки замените PBST в каждой трубке 600 микролитров соответствующего вторичного раствора антител для четырех-пятидневной инкубации при четырех градусах Цельсия. В конце инкубации, мыть эмбрионы в один миллилитр свежего PBST за стирку, как только что продемонстрировали и использовать стеклянную пипетку, чтобы аккуратно перенести каждый эмбрион в отдельных пластиковых форм парафина. Тщательно удалите любой PBST вокруг каждого эмбриона и сориентировать каждый эмбрион в сагиттальном положении.Затем быстро добавить около 500 микролитров горячей агарозы в каждой форме, пока каждый эмбрион просто покрыты и место формы на льду, покрытом алюминиевой фольгой, пока агароза затвердеет. Для обезвоживания эмбриональных образцов используйте чистый скальпель, чтобы разрезать блок агарозы вокруг каждого эмбриона и использовать типсы, чтобы схватить агаросу для переноса в помеченную двухми миллилитровую трубку, содержащую один миллилитр 25%метанола. После часовой инкубации с нежным возбуждением в темноте замените 25%-ный метанол одним миллилитром 50%метанола на трубку для дополнительной часовой инкубации в темноте.После окончания обезвоживания замените 100%-ный метанол одним миллилитром 50%BABB для часовой инкубации с нежным возбуждением в темноте. В конце инкубации замените 50%BABB на один миллилитр 100%BABB на трубку для часовой инкубации с нежным возбуждением в темноте, а затем второй инкубацией со 100%BABB, как только что продемонстрировано. Чтобы смонтировать эмбрионы для визуализации, снимите клей с быстрой бампера и поместите бампер на 24 на шесть миллилитров число 1,5 стеклянные крышки.Нанесите мягкое давление на клей, чтобы удалить любые пузырьки воздуха между крышкой и бампером и тщательно отбросить 100%BABB от каждой трубки. Затем используйте тонкие типсы, чтобы тщательно перенести эмбрион в быстрый колодец, не касаясь эмбриона и поместите второй крышку на бампер. Чтобы выть эндотелий во всю третью фарингеационную арку, откройте изображение, представляющие интерес для программного обеспечения, и нажмите добавить новую поверхность.Двойной щелчок поверхности один и переименовать новую поверхность в третью фарингеальной арки. Выберите автоматическое создание пропустить, редактировать вручную, и установить ориентацию поверхности на плоскости Y. Используйте положение ломтика для того чтобы поместить третью плоскость поверхности арки pharyngeal к где третья PAA и спинная аорта соединяют.Поверните изображение так, чтобы третья фанингальная плоскость поверхности арки была в поле зрения и выключите срез орто. В режиме контура рисования выберите функцию режима рисования расстояния и при необходимости отрегулируйте настройки параметра. Когда все параметры будут установлены, нажмите клавишу Escape и нажмите рисовать, чтобы проследить периметр третьей фарингальной арки с курсором мыши.Затем используйте положение ломтика, чтобы переместить от 10 до 25 ломтиков и проследить периметр фарингеальной арки. Когда вся арка была прослежена, нажмите создать поверхность для создания поверхности трассировки области. Для маскировки всплыли структуры, в меню редактирования, выберите выбор маски для третьего PAA и DAPI и нажмите OK. Затем переименуй новый канал в PAA DAPI.Повторите этот шаг для остальных каналов. Чтобы визуализировать эндотелиальное сплетение отдельно от PAA, выберите выбор маски для третьего PAA и выберите DAPI. Uncheck выберите voxels внешней поверхности и проверить выберите voxels внутри поверхности.Установите выберите voxels внутри поверхности до нуля и нажмите OK. Переименовать новый канал как не-PAA DAPI. Повторите этот шаг для остальных каналов. Выберите выбор маски для третьего PA и выберите не-PAA DAPI и нажмите OK. Переименовать новый канал как сплетение DAPI.Повторите этот шаг для остальных каналов. Для количественной оценки отдельных эндотелиальных ячеек в каждой структуре интереса, в панели регулировки дисплея, выключите все каналы, кроме канала PAA ERG. В меню свойств нажмите добавить новые пятна и нажмите кнопку, чтобы переименовать пятна одного PAA общее количество эндотелиальных ячеек.Нажмите на синюю стрелку и выберите канал PAA ERG для источника канала. Отрегулируйте предполагаемый диаметр XY до четырех микрометров и нажмите на синюю стрелку, чтобы перейти к следующей панели. Используйте скользящую шкалу, чтобы скорректировать количество пятен, чтобы гарантировать, что каждое положительное эндотелиальное ядро клетки ERG представлено одним пятном.Затем нажмите зеленую двойную стрелку и выключите канал PAA ERG в панели регулировки дисплея. Включите канал PAA VEGFR2, чтобы визуализировать эндотелий PAA и нажмите редактировать и добавлять/удалять, чтобы выбрать поверхность объекта. Затем нажмите Escape и удерживайте Shift, чтобы удалить любые пятна, которые не являются положительными VEGFR2, и нажмите на вкладку статистики, чтобы определить общее количество эндотелиальных ячеек.Целый крепление иммунофторесценции дает четкие и чистые результаты, позволяющие 3D-реконструкцию фарингеальной арки эндотелия. На этом изображении наличие больших ярких точек является результатом твердых частиц в антителах или блокирующих буферных растворах. После фарингальной арки и окрашивания поверхности ПАА использование функции маски позволяет визуально отделить и независимо проанализировать поверхностные области.Маскировка также позволяет индивидуальный анализ и количественную оценку эндотелиальных номеров клеток в каждой структуре. Например, здесь функция пятна была использована для количественной оценки общего числа эндотелиальных клеток как в ПАА, так и в сплетении, назначив одно место для каждого ядра, выражаюго ERG. На этом изображении можно наблюдать положительное отрицательное пятно ERG VEGFR2, которое было создано спотовой функцией.Поэтому необходимо проверить, что каждая точка, распознаемая программным обеспечением, на самом деле представляет собой единую эндотелианую ячейку. Чтобы получить чистые и четкие изображения, не забудьте спина вниз все решения и правильно и тщательно мыть каждый эмбрион после инкубации антител. Важно помнить, что BABB является коррозионным и токсичным.Ручка и отказаться от растворителя должным образом и не забудьте запечатать расплавленных эмбрионов полностью, чтобы предотвратить утечку BABB.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

Экс Vivo культуры глотки Арки для изучения Сердце и мышцы предшественников и свою нишу

The pharyngeal mesoderm of developing embryos contributes to broad regions of head and heart musculature. We have developed a novel method to study head ...

Organ Culture and Whole Mount Immunofluorescence Staining of Mouse Wolffian Ducts

Орган Культура и Всего горе Иммунофлуоресценции Окрашивание мыши Вольфовых Трубочек

Tubal morphogenesis is a fundamental requirement for the development of most mammalian organs, including the male reproductive system. The epididymis, an ...

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

Визуализация и количественный анализ эмбрионального ангиогенеза у<em&gt; Xenopus tropicalis</em

Blood vessels supply oxygen and nutrients throughout the body, and the formation of the vascular network is under tight developmental control. The ...

Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin

Горизонтальная целая гора: новый протокол обработки и обработки изображений для толстых, трехмерных поперечных сечений кожи

Processing a tissue of interest to generate a microscopic image that supports a scientific argument can be challenging. The acquisition of high-quality ...

Visualizing Multiciliated Cells in the Zebrafish Through a Combined Protocol of Whole Mount Fluorescent In Situ Hybridization and Immunofluorescence

Visualizing Multiciliated Cells in the Zebrafish Through a Combined Protocol of Whole Mount Fluorescent In Situ Hybridization and Immunofluorescence

Визуализация Multiciliated клетки в Zebrafish через комбинированные протокола вся гора флуоресцентные в Situ Гибридизация и иммунофлуоресценции

In recent years, the zebrafish embryo has emerged as a popular model to study developmental biology due to traits such as ex utero embryo development and ...

Whole-mount Clearing and Staining of Arabidopsis Flower Organs and Siliques

Whole-mount Clearing and Staining of Arabidopsis Flower Organs and Siliques

Целом гора очистки и окраски Arabidopsis цветок органов и Siliques

Due to its formidable tools for molecular genetic studies, Arabidopsis thaliana is one of the most prominent model species in plant biology and, ...

Quantitative Whole-mount Immunofluorescence Analysis of Cardiac Progenitor Populations in Mouse Embryos

Анализ количественного состава Гора иммунофлюоресценции сердечной прародитель населения в эмбрионов мыши

The use of ever-advancing imaging techniques has contributed broadly to our increased understanding of embryonic development. Pre-implantation development ...

Whole Mount Immunofluorescence and Follicle Quantification of Cultured Mouse Ovaries

Вся гора иммунофлюоресценции и количественная оценка фолликула культивировали мыши яичников

Research in the field of mammalian reproductive biology often involves evaluating the overall health of ovaries and testes. Specifically, in females, ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

Визуализация узлов и Notochordal пластины в Gastrulating эмбрионов мыши, используя растровая электронная микроскопия и вся гора иммунофлуоресценции

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

Dissection of the Drosophila Pupal Retina for Immunohistochemistry, Western Analysis, and RNA Isolation

Dissection of the Drosophila Pupal Retina for Immunohistochemistry, Western Analysis, and RNA Isolation

Рассечение дрозофилы куколки сетчатки для иммуногистохимии, Западный анализ и РНК изоляции

The Drosophila pupal retina provides an excellent model system for the study of morphogenetic processes during development. In this paper, we present a ...