Name: visualization and analysis of pharyngeal arch arteries using whole-mount immunohistochemistry and 3d reconstruction
Uploaded: 2020-03-31T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualization and Analysis of Pharyngeal Arch Arteries using Whole-mount Immunohistochemistry and 3D Reconstruction at JoVE.com

Vi tackar Brianna Alexander, Caolan O'Donnell och Michael Warkala för noggrann läsning och redigering av detta manuskript. Detta arbete stöddes av finansieringen från National Heart, Lung and Blood Institute vid NIH R01 HL103920, R01 HL134935, R21 OD025323-01 till SA; AJR stöds av NHLBI HL103920-08S1 och National Institute of Arthritis and Musculoskeletal and Skin Diseases Training grant T32052283-11.

Djuranvändning och djurförsök godkändes av institutionsvårds- och användningskommittén vid Rutgers university.
1. Utarbetande av lösningar
<ol><li>Förbered 1 L fosfatbuffrad koksaltlösning med 0,1% Triton-X-100 (PBST) och filtrera sterilisera. Denna lösning kan förvaras i rumstemperatur (RT) i minst ett år.</li>
	<li>Förbered 600 μl blockerande buffert bestående av 10% av det normala åsnaserumet i PBST. Gör denna lösning fräsch varje gång.</li>
	<li>Förbered 50 ml av f?...

<ol>
	<li>Hiruma, T., Nakajima, Y., Nakamura, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+pharyngeal+arch+arteries+in+early+mouse+embryo.">Development of pharyngeal arch arteries in early mouse embryo.</a> Journal of Anatomy. 201 (1), 15-29 (2002).</li><li>Hutson, M. R., Kirby, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Model+systems+for+the+study+of+heart+development+and+disease+Cardiac+neural+crest+and+conotruncal+malformations.">Model systems for the study of heart development and disease Cardiac neural crest and conotruncal malformations.</a> Seminars in Cell &amp; Developmental Biology. 18 (1), 101-110 (2007).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelium+in+the+pharyngeal+arches+3,+4+and+6+is+derived+from+the+second+heart+field.">Endothelium in the pharyngeal arches 3, 4 and 6 is derived from the second heart field.</a> Developmental Biology. 421 (2), 108-117 (2017).</li><li>Jerome, L. A., Papaioannou, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DiGeorge+syndrome+phenotype+in+mice+mutant+for+the+T-box+gene,+Tbx1.">DiGeorge syndrome phenotype in mice mutant for the T-box gene, Tbx1.</a> Nature Genetics. 27 (3), 286-291 (2001).</li><li>Lindsay, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tbx1+haploinsufficieny+in+the+DiGeorge+syndrome+region+causes+aortic+arch+defects+in+mice.">Tbx1 haploinsufficieny in the DiGeorge syndrome region causes aortic arch defects in mice.</a> Nature. 410 (6824), 97-101 (2001).</li><li>Weninger, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualising+the+Cardiovascular+System+of+Embryos+of+Biomedical+Model+Organisms+with+High+Resolution+Episcopic+Microscopy+(HREM).">Visualising the Cardiovascular System of Embryos of Biomedical Model Organisms with High Resolution Episcopic Microscopy (HREM).</a> Journal of Cardiovascular Development and Disease. 5 (4), 58 (2018).</li><li>Phillips, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pax9+is+required+for+cardiovascular+development+and+interacts+with+Tbx1+in+the+pharyngeal+endoderm+to+control+4th+pharyngeal+arch+artery+morphogenesis.">Pax9 is required for cardiovascular development and interacts with Tbx1 in the pharyngeal endoderm to control 4th pharyngeal arch artery morphogenesis.</a> Development. 146 (18), (2019).</li><li>Vlaeminck-Guillem, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Ets+family+member+Erg+gene+is+expressed+in+mesodermal+tissues+and+neural+crests+at+fundamental+steps+during+mouse+embryogenesis.">The Ets family member Erg gene is expressed in mesodermal tissues and neural crests at fundamental steps during mouse embryogenesis.</a> Mechanisms of Development. 91 (1-2), 331-335 (2000).</li><li>Ert&#252;rk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+imaging+of+the+unsectioned+adult+spinal+cord+to+assess+axon+regeneration+and+glial+responses+after+injury.">Three-dimensional imaging of the unsectioned adult spinal cord to assess axon regeneration and glial responses after injury.</a> Nature Medicine. 18 (1), 166-217 (2012).</li><li>Azaripour, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+survey+of+clearing+techniques+for+3D+imaging+of+tissues+with+special+reference+to+connective+tissue.">A survey of clearing techniques for 3D imaging of tissues with special reference to connective tissue.</a> Progress in Histochemistry and Cytochemistry. 51 (2), 9-23 (2016).</li><li>Richardson, D. S., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clarifying+Tissue+Clearing.">Clarifying Tissue Clearing.</a> Cell. 162 (2), 246-257 (2015).</li><li>Becker, K., J&#228;hrling, N., Saghafi, S., Weiler, R., Dodt, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+Clearing+and+Dehydration+of+GFP+Expressing+Mouse+Brains.">Chemical Clearing and Dehydration of GFP Expressing Mouse Brains.</a> PLoS One. 7 (3), e33916 (2012).</li><li>Ert&#252;rk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+imaging+of+solvent-cleared+organs+using+3DISCO.">Three-dimensional imaging of solvent-cleared organs using 3DISCO.</a> Nature Protocols. 7 (11), 1983-1995 (2012).</li><li>Kuwajima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ClearT:+a+detergent-+and+solvent-free+clearing+method+for+neuronal+and+non-neuronal+tissue.">ClearT: a detergent- and solvent-free clearing method for neuronal and non-neuronal tissue.</a> Development. 140 (6), 1364-1368 (2013).</li></ol>

Förmågan att visualisera endotel i mus embryon i 3D har gett nya insikter i deras utveckling3. Här presenterar vi ett protokoll som möjliggör högupplöst 3D-avbildning av embryon, visualisering av vaskulär anslutning och kvantitativa analyser av PAA-bildning. Detta protokoll kan användas för att se hur genetiska förändringar eller miljö förolämpningar inverkan PAA utveckling. Det förfarande som rapporteras här använder antikroppar mot VEGFR2 och ERG för att visualisera PAA-bildni...

Under mus embryogenesis, svalgbåge artärer (PAA) uppstår som symmetriska, bi-laterala par av artärer som förbinder hjärtat med dorsala aortae1. Som embryot utvecklas, den första och andra par paas regress, medan3: e,4:eoch 6:e PAA genomgår en rad asymmetriska ombyggnad händelser för att bilda aorta arch artärer2.
PAAs 3, 4 och 6 utvecklas via vaskulogenes, vilket är de novo bildandet av blodkärl3. Defekter i bildandet eller ombyggnad av dessa ärkeartärer ger upphov till olika medfödda hjärtfel, såsom de som ses hos patienter med DiGeorge syndrom4,5. Därför kan förståelse mekanismer som reglerar utvecklingen av PAAs leda till en bättre förståelse av medfödd hjärtsjukdom (CHD) etiologi.
Aktuella metoder för att visualisera och analysera PAA utveckling inkluderar immunofluorescens av vävnadssektioner, vaskulära avgjutningar, Indien bläck injektion, högupplöst episkopisk mikroskopi, och / eller helmonterad immunhistochemistry1,4,5,6,7. Häri beskriver vi ett protokoll som kombinerar helmonterad immunofluorescens, konfokalmikroskopi och 3D-bildåtergivning för att samla in, analysera och kvantifiera volymetriska data, vaskulär konnektivitet och cellidentitet. Vidare beskriver vi en metod för att dela upp och kvantifiera antalet ECs i varje faryngala som ett sätt att studera bildandet av faryngala arch vaskulära plexus och dess ombyggnad i PAAs. Medan detta protokoll är utformat för att analysera PAA utveckling, det kan användas för att analysera andra utveckla vaskulära nätverk.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10x PBS</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>PBS10X02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20x water immersion objective</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>MRD77200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories</td>
			<td>1613101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 anti-goat</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-11055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 555 anti-mouse</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-31570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analysis Software</td>
			<td>Imaris 9.2.0</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzyl Alcohol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>305197</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzyl Benzoate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>8.18701.0100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover Slips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>16004-312</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI (5 mg/mL stock)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>D3571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Tubes (2.0 mL)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-408-138</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89370-084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon tubes (50 mL)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast wells</td>
			<td>Grace Bio Labs</td>
			<td>664113</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-VEGFR2</td>
			<td>R&#38;D Systems, Inc.</td>
			<td>AF644</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH1135-4LP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>A1HD25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-ERG</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab214341</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Donkey Serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9663</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>15710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipets</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-20D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes (35 mm)</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>32-103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes (60 mm)</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>32-105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Molds</td>
			<td>VWR</td>
			<td>18000-128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scapels</td>
			<td>Exelint International Co.</td>
			<td>29552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton-X-100</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP 151-500</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualization and analysis of pharyngeal arch arteries using whole-mount immunohistochemistry and 3d reconstruction

Felaktig bildning eller ombyggnad av faryngala ärrarterna (PAA) 3, 4 och 6 bidrar till några av de allvarligaste formerna av medfödd hjärtsjukdom. För att studera bildandet av PAA, utvecklade vi ett protokoll med hela montera immunofluorescens tillsammans med bensylalkohol/bensylbensoat (BABB) vävnad clearing och confocal mikroskopi. Detta möjliggör visualisering av faryngala arch enottel vid en fin cellulär upplösning samt 3D-anslutning av vaskulaturen. Med hjälp av programvara har vi upprättat ett protokoll för att kvantifiera antalet endotelceller (ECs) i PAA, samt antalet ECs inom vaskulärplexus som omger PAAs inom faryngala bågar 3, 4 och 6. När den tillämpas på hela embryot ger denna metod en omfattande visualisering och kvantitativ analys av embryonal vaskulatur.

Hela berget immunfluorescens protokoll som presenteras här ger tydliga och rena resultat, vilket möjliggör 3D-rekonstruktion av faryngala endotel, som ses i figur 1A. Det är viktigt att inkubera embryon under en tillräckligt lång tid i varje antikroppslösning för att säkerställa fullständig penetration genom provet, samt att noggrant tvätta embryon efter inkubation av antikroppar. I figur 1B</...

Watch this Scientific Journal Video about Visualization and Analysis of Pharyngeal Arch Arteries using Whole-mount Immunohistochemistry and 3D Reconstruction at JoVE.com

Visualization and Analysis of Pharyngeal Arch Arteries using Whole-mount Immunohistochemistry and 3D Reconstruction

Här beskriver vi ett protokoll för att visualisera och analysera faryngala arch artärer 3, 4 och 6 av mus embryon med hela montera immunofluorescens, vävnad clearing, confocal mikroskopi och 3D återuppbyggnad.

Visualisering och analys av faryngala Arch Artärer med hela berget Immunohistochemistry och 3D-rekonstruktion

Improper formation or remodeling of the pharyngeal arch arteries (PAAs) 3, 4, and 6 contribute to some of the most severe forms of congenital heart ...

Denna metod gör att varje faryngeal båge som ska compartmentalized. Endothelial cell nummer kan sedan kvantifieras i varje båge som ett sätt att studera faryngeal arch artär utveckling. De främsta fördelarna med detta tillvägagångssätt är förmågan att visualisera relationen mellan olika vaskulära strukturer och förmågan att kvantitativt bestämma hur strukturerna påverkade mutanterna.Aorta arch artärer är ofta muterade i medfödda hjärtsjukdomar. Vår metod möjliggör studier av hur mutationer förändrar den fysiologiska processen för kärlbildning och ombyggnad. Även om vi använder denna metod för att få insikter i mekanismerna för medfödda hjärtsjukdomar, kan det tillämpas på andra system särskilt med tillkomsten av ljus-ark mikroskopi.Börja med att använda en glaspipett för att överföra varje mus embryonal dag 9,5 eller 10,5 embryo till enskilda två milliliter rör som innehåller en milliliter PBS. Efter fixering, använd fina tnödningar för att försiktigt nypa embryot strax ovanför bakb och göra en tvärgående snitt för att ta bort den bakre halvan av embryot. För att genomsyra embryona, ersätt PBS med PBST och placera embryona på fyra grader Celsius med mild agitation över natten.Nästa dag, ersätta PBST med 600 mikroliter av blockerande buffert utan att röra embryon för en 16 till 18-timmars inkubation vid fyra grader Celsius med mild agitation. Nästa morgon, ersätta den blockerande buffert med 600 mikroliter av den primära antikroppen av intresse per rör för en fyra till fem dagars inkubation vid fyra grader Celsius med mild agitation. I slutet av inkubationen, tvätta embryon i en milliliter av PBST i fyra till fem timmar med mild agitation vid rumstemperatur ändra PBS varje timme, följt av en övernattning inkubation i färska PBST vid fyra grader Celsius och fyra till fem ytterligare en timme tvättar nästa dag.Efter den sista tvätten, byt ut PBST i varje rör med 600 mikroliter av lämplig sekundär antikroppslösning för en fyra till fem dagars inkubation vid fyra grader Celsius. I slutet av inkubationen, tvätta embryon i en milliliter av färsk PBST per tvätt som bara visat och använda en glaspipett för att försiktigt överföra varje embryo till enskilda plast paraffin formar. Avlägsna försiktigt alla PBST från runt varje embryo och orientera varje embryo i sagittal position.Sedan snabbt lägga till ca 500 mikroliter av varm agaros till varje mögel tills varje embryo är bara täckt och placera formar på is täckt med aluminiumfolie tills agaros har stelnat. För uttorkning av embryonala prover, använd en ren skalpell för att skära ett block av agaros runt varje embryo och använda forceps för att förstå agaros för överföring till en märkt två milliliter rör som innehåller en milliliter av 25%metanol. Efter en timmes inkubation med mild agitation i mörker, ersätt 25%metanol med en milliliter på 50%metanol per rör för ytterligare en timmes inkubation i mörker.Efter uttorkaningens, byt ut 100%metanolen med en milliliter på 50%BABB för en timmes inkubation med mild agitation i mörker. Vid slutet av inkubationen, byt ut 50%BABB med en milliliter på 100%BABB per rör för en timmes inkubation med mild agitation i mörker, följt av en andra inkubation med 100%BABB som just visats. För att montera embryon för avbildning, ta bort limmet från en snabb brunn stötfångare och placera stötfångaren på en 24 med sex milliliter nummer 1,5 glas coverslip.Applicera försiktigt tryck på limmet för att avlägsna eventuella luftbubblor mellan täcklappet och stötfångaren och kassera försiktigt 100%BABB från varje rör. Använd sedan fina tyngre för att försiktigt överföra embryot till den snabba brunnen utan att röra embryot och placera en andra coverslip på stötfångaren. För att ytan endothelet i hela tredje faryngeal båge, öppna bilden av intresset för programvaran och klicka på Lägg till ny yta.Dubbelklicka på yta ett och byt namn på den nya ytan till tredje faryngeal bågen. Välj hoppa över automatisk skapande, redigera manuellt och ställ in ytorienteringen på YZ-planet. Använd slice positionen för att placera den tredje faryngeal arch yta plan till där den tredje PAA och dorsala aorta ansluta.Rotera bilden så att det tredje faryngealbågens ytplan är i sikte och stäng av orto-utsnitt. Välj funktionen för avståndsritningsläge under rita konturläget och justera parameterinställningarna vid behov. När alla parametrar har ställts in trycker du på Escape-tangenten och klickar på Rita för att spåra omkretsen av den tredje faryngeal bågen med musmarkören.Använd sedan skiva positionen för att flytta 10 till 25 skivor och spåra omkretsen av faryngeal bågen. När hela bågen har spårats klickar du på Skapa yta för att generera ytan av den spårade regionen. För maskering av de ytbehandlade strukturerna väljer du maskval för den tredje PAA- och DAPI-menyn i redigeringsmenyn och klickar på OK. Byt sedan namn på den nya kanalen som PAA DAPI.Upprepa det här steget för de återstående kanalerna. Om du vill visualisera endotelplexus separat från PAA väljer du maskval för den tredje PAA och väljer DAPI. Avmarkera Välj voxels utanför yta till och kontrollera välj voxels insidan yta till.Ange välj voxels inuti yta till noll och klicka på OK. Byt namn på den nya kanalen som icke-PAA DAPI. Upprepa det här steget för de återstående kanalerna. Välj maskval för den tredje PA:en och välj icke-PAA DAPI och klicka på OK. Byt namn på den nya kanalen till plexus DAPI.Upprepa det här steget för de återstående kanalerna. För att kvantifiera de enskilda endotelcellerna inom varje struktur av intresse, i panelen för visningsjusteringar, stänger du av alla kanaler utom PAA ERG-kanalen. Under menyn Egenskaper klickar du på Lägg till nya fläckar och klickar för att byta namn på fläckar en PAA totalt antal endotelceller.Klicka på den blå pilen och välj PAA ERG-kanal för källkanalen. Justera den uppskattade XY-diametern till fyra mikrometer och klicka på den blå pilen för att gå vidare till nästa panel. Använd skjutskalan för att justera antalet fläckar för att säkerställa att varje ERG-positiv endotelcellkärna representeras av en plats.Därefter klickar du på den gröna dubbelpilen och stänger av PAA ERG-kanalen i visningsjusteringspanelen. Slå på PAA VEGFR2 kanal för att visualisera PAA-endotelet och klicka på redigera och lägg till/ta bort för att välja yta på objekt. Tryck sedan på Escape och håll ned Skift för att ta bort eventuella fläckar som inte är VEGFR2 positiva och klicka på fliken statistik för att bestämma det totala antalet endotelceller.Hela montera immunofluorescens producerar tydliga och rena resultat som gör det möjligt för 3D återuppbyggnaden av faryngeal arch endotelet. I den här bilden är närvaron av de stora ljusa prickarna resultatet av partiklar i antingen antikroppen eller blockerande buffertlösningar. Efter faryngeal arch och PAA yta färgning, användning av masken funktion gör att de ytbehandlade regionerna att vara visuellt åtskilda och självständigt analyseras.Maskering möjliggör också individuell analys och kvantifiering av endotelcellsnummer inom varje struktur. Till exempel, här dekorfunktion användes för att kvantifiera det totala antalet endotelceller i både PAA och plexus genom att tilldela en enda plats för varje kärna uttrycker ERG. I denna bild kan en ERG positiv VEGFR2 negativ spot som har genererats av dekorfunktionen observeras.Därför är det väsentligt att kontrollera att varje punkt som känns igen av programvaran faktiskt representerar en enda endotelcell. För att få rena och tydliga bilder, kom ihåg att snurra ner alla lösningar och att ordentligt och noggrant tvätta varje embryo efter antikroppsinkubationer. Det är viktigt att komma ihåg att BABB är frätande och giftigt.Hantera och kassera lösningsmedlet ordentligt och se till att försegla de smälta embryona helt för att förhindra BABB-läckage.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

Ex vivo Kultur av Pharyngeal Arches att studera hjärta och muskelstamfäder och deras nisch

The pharyngeal mesoderm of developing embryos contributes to broad regions of head and heart musculature. We have developed a novel method to study head ...

Organ Culture and Whole Mount Immunofluorescence Staining of Mouse Wolffian Ducts

Organ kultur och Hela Mount immunofluorescensfärgning av Mus Wolffian kanaler

Tubal morphogenesis is a fundamental requirement for the development of most mammalian organs, including the male reproductive system. The epididymis, an ...

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

Visualisering och kvantitativ analys av embryonisk angiogenes i<em&gt; Xenopus tropicalis</em

Blood vessels supply oxygen and nutrients throughout the body, and the formation of the vascular network is under tight developmental control. The ...

Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin

Horisontell helmontering: Ett nytt bearbetnings- och bildprotokoll för tjocka, tredimensionella vävnads tvärsnitt av huden

Processing a tissue of interest to generate a microscopic image that supports a scientific argument can be challenging. The acquisition of high-quality ...

Visualizing Multiciliated Cells in the Zebrafish Through a Combined Protocol of Whole Mount Fluorescent In Situ Hybridization and Immunofluorescence

Visualizing Multiciliated Cells in the Zebrafish Through a Combined Protocol of Whole Mount Fluorescent In Situ Hybridization and Immunofluorescence

Visualisera Multiciliated celler i zebrafisk genom en kombinerad protokoll av hela Mount fluorescerande In Situ hybridisering och immunofluorescens

In recent years, the zebrafish embryo has emerged as a popular model to study developmental biology due to traits such as ex utero embryo development and ...

Whole-mount Clearing and Staining of Arabidopsis Flower Organs and Siliques

Whole-mount Clearing and Staining of Arabidopsis Flower Organs and Siliques

Hela-mount Clearing och färgning av Arabidopsis blomma organ och Siliques

Due to its formidable tools for molecular genetic studies, Arabidopsis thaliana is one of the most prominent model species in plant biology and, ...

Quantitative Whole-mount Immunofluorescence Analysis of Cardiac Progenitor Populations in Mouse Embryos

Kvantitativa hela-mount immunofluorescens analys av hjärt stamceller populationer i musembryon

The use of ever-advancing imaging techniques has contributed broadly to our increased understanding of embryonic development. Pre-implantation development ...

Whole Mount Immunofluorescence and Follicle Quantification of Cultured Mouse Ovaries

Hela berget immunofluorescens och follikeln kvantifiering av odlade mus äggstockarna

Research in the field of mammalian reproductive biology often involves evaluating the overall health of ovaries and testes. Specifically, in females, ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

Visualisera den noden och Notochordal plattan i Gastrulating musembryon som använder Scanning Electron Microscopy och hela Mount immunofluorescens

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

Dissection of the Drosophila Pupal Retina for Immunohistochemistry, Western Analysis, and RNA Isolation

Dissection of the Drosophila Pupal Retina for Immunohistochemistry, Western Analysis, and RNA Isolation

Dissektion av Drosophila Pupp näthinnan för immunohistokemi, västra analys och RNA isolering

The Drosophila pupal retina provides an excellent model system for the study of morphogenetic processes during development. In this paper, we present a ...