Name: efficient differentiation of postganglionic sympathetic neurons using human pluripotent stem cells under feeder-free and chemically defined culture conditions
Uploaded: 2020-05-24T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Efficient Differentiation of Postganglionic Sympathetic Neurons using Human Pluripotent Stem Cells under Feeder-free and Chemically Defined Culture Conditions

Vi vil gjerne takke Heidi Ulrichs for kritisk lesing og redigering av manuskriptet.

MERK: H9 PHOX2B: GFP reporterlinjen ble levert av Oh et al.19. Noen qPCR primere som brukes i dette papiret ble hentet fra OriGene Technologies, mens noen sekvenser er hentet fra Frith et al.20,30.
1. Oppsett for oppvaskbelegg, medieforberedelse og hPSC-vedlikehold
<ol><li>Oppvaskbelegg<ol>
<li>
Vitronectin (VTN) belegg
		<ol>
<li>Plasser hetteglassene med VTN i et 37 °C vannbad til de er hel...

<ol>
	<li>Norcliffe-Kaufmann, L., Slaugenhaupt, S. A., Kaufmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Familial+dysautonomia:+History,+genotype,+phenotype+and+translational+research.">Familial dysautonomia: History, genotype, phenotype and translational research.</a> Progress in Neurobiology. 152, 131-148 (2017).</li><li>Stone, J. B., DeAngelis, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer-treatment-induced+neurotoxicity--focus+on+newer+treatments.">Cancer-treatment-induced neurotoxicity--focus on newer treatments.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 13 (2), 92-105 (2016).</li><li>Goldstein, D. S., Holmes, C., Lopez, G. J., Wu, T., Sharabi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+sympathetic+denervation+predicts+PD+in+at-risk+individuals.">Cardiac sympathetic denervation predicts PD in at-risk individuals.</a> Parkinsonism Related Disorders. 52, 90-93 (2018).</li><li>Froeschl, M., Hadziomerovic, A., Ruzicka, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Percutaneous+renal+sympathetic+denervation:+2013+and+beyond.">Percutaneous renal sympathetic denervation: 2013 and beyond.</a> Canadian Journal of Cardiology. 30 (1), 64-74 (2014).</li><li>Wehrwein, E. A., Orer, H. S., Barman, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overview+of+the+Anatomy,+Physiology,+and+Pharmacology+of+the+Autonomic+Nervous+System.">Overview of the Anatomy, Physiology, and Pharmacology of the Autonomic Nervous System.</a> Comprehensive Physiology. 6 (3), 1239-1278 (2016).</li><li>Le Douarin, N. M., Kalcheim, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Neural Crest. , (1999).</li><li>Sim&#245;es-Costa, M., Bronner, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+neural+crest+development+and+evolution+from+genomic+analysis.">Insights into neural crest development and evolution from genomic analysis.</a> Genome Research. 23 (7), 1069-1080 (2013).</li><li>Labosky, P. A., Kaestner, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+winged+helix+transcription+factor+Hfh2+is+expressed+in+neural+crest+and+spinal+cord+during+mouse+development.">The winged helix transcription factor Hfh2 is expressed in neural crest and spinal cord during mouse development.</a> Mechanisms of Development. 76 (1-2), 185-190 (1998).</li><li>Southard-Smith, E. M., Kos, L., Pavan, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sox10+mutation+disrupts+neural+crest+development+in+Dom+Hirschsprung+mouse+model.">Sox10 mutation disrupts neural crest development in Dom Hirschsprung mouse model.</a> Nature Genetics. 18 (1), 60-64 (1998).</li><li>Aruga, J., Tohmonda, T., Homma, S., Mikoshiba, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zic1+Promotes+the+Expansion+of+Dorsal+Neural+Progenitors+in+Spinal+Cord+by+Inhibiting+Neuronal+Differentiation.">Zic1 Promotes the Expansion of Dorsal Neural Progenitors in Spinal Cord by Inhibiting Neuronal Differentiation.</a> Developmental Biology. 244 (2), 329-341 (2002).</li><li>Garnett, A. T., Square, T. A., Medeiros, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BMP,+Wnt+and+FGF+signals+are+integrated+through+evolutionarily+conserved+enhancers+to+achieve+robust+expression+of+Pax3+and+Zic+genes+at+the+zebrafish+neural+plate+border.">BMP, Wnt and FGF signals are integrated through evolutionarily conserved enhancers to achieve robust expression of Pax3 and Zic genes at the zebrafish neural plate border.</a> Development. 139 (22), 4220-4231 (2012).</li><li>Kam, M. K., Lui, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+Hoxb5+in+the+development+of+vagal+and+trunk+neural+crest+cells.">Roles of Hoxb5 in the development of vagal and trunk neural crest cells.</a> Development Growth, Differentiation. 57 (2), 158-168 (2015).</li><li>Guillemot, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammalian+achaete-scute+homolog+1+is+required+for+the+early+development+of+olfactory+and+autonomic+neurons.">Mammalian achaete-scute homolog 1 is required for the early development of olfactory and autonomic neurons.</a> Cell. 75 (3), 463-476 (1993).</li><li>Pattyn, A., Morin, X., Cremer, H., Goridis, C., Brunet, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+homeobox+gene+Phox2b+is+essential+for+the+development+of+autonomic+neural+crest+derivatives.">The homeobox gene Phox2b is essential for the development of autonomic neural crest derivatives.</a> Nature. 399 (6734), 366-370 (1999).</li><li>Wildner, H., Gierl, M. S., Strehle, M., Pla, P., Birchmeier, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insm1+(IA-1)+is+a+crucial+component+of+the+transcriptional+network+that+controls+differentiation+of+the+sympatho-adrenal+lineage.">Insm1 (IA-1) is a crucial component of the transcriptional network that controls differentiation of the sympatho-adrenal lineage.</a> Development. 135 (3), 473-481 (2008).</li><li>Trainor, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Neural Crest Cells: Evolution, Development and Disease. , (2013).</li><li>Howard, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+perspectives+on+differentiation+of+autonomic+neurons.">Mechanisms and perspectives on differentiation of autonomic neurons.</a> Developmental Biology. 277 (2), 271-286 (2005).</li><li>Zeltner, N., Studer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pluripotent+stem+cell-based+disease+modeling:+current+hurdles+and+future+promise.">Pluripotent stem cell-based disease modeling: current hurdles and future promise.</a> Current Opinion in Cell Biology. 37, 102-110 (2015).</li><li>Oh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+Coupling+with+Cardiac+Muscle+Promotes+Maturation+of+hPSC-Derived+Sympathetic+Neurons.">Functional Coupling with Cardiac Muscle Promotes Maturation of hPSC-Derived Sympathetic Neurons.</a> Cell Stem Cell. 19 (1), 95-106 (2016).</li><li>Frith, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+axial+progenitors+generate+trunk+neural+crest+cells+in+vitro.">Human axial progenitors generate trunk neural crest cells in vitro.</a> Elife. 7, (2018).</li><li>Kirino, K., Nakahata, T., Taguchi, T., Saito, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+derivation+of+sympathetic+neurons+from+human+pluripotent+stem+cells+with+a+defined+condition.">Efficient derivation of sympathetic neurons from human pluripotent stem cells with a defined condition.</a> Scientific Reports. 8 (1), 12865 (2018).</li><li>Wu, H. F., Zeltner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overview+of+Methods+to+Differentiate+Sympathetic+Neurons+from+Human+Pluripotent+Stem+Cells.">Overview of Methods to Differentiate Sympathetic Neurons from Human Pluripotent Stem Cells.</a> Current Protocols Stem Cell Biology. 50 (1), 92 (2019).</li><li>Zeltner, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capturing+the+biology+of+disease+severity+in+a+PSC-based+model+of+familial+dysautonomia.">Capturing the biology of disease severity in a PSC-based model of familial dysautonomia.</a> Nature Medicine. 22 (12), 1421-1427 (2016).</li><li>Saito-Diaz, K., Wu, H. F., Zeltner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autonomic+Neurons+with+Sympathetic+Character+Derived+From+Human+Pluripotent+Stem+Cells.">Autonomic Neurons with Sympathetic Character Derived From Human Pluripotent Stem Cells.</a> Current Protocols Stem Cell Biology. 49 (1), 78 (2019).</li><li>Chambers, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+neural+conversion+of+human+ES+and+iPS+cells+by+dual+inhibition+of+SMAD+signaling.">Highly efficient neural conversion of human ES and iPS cells by dual inhibition of SMAD signaling.</a> Nature Biotechnology. 27 (3), 275-280 (2009).</li><li>Fattahi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deriving+human+ENS+lineages+for+cell+therapy+and+drug+discovery+in+Hirschsprung+disease.">Deriving human ENS lineages for cell therapy and drug discovery in Hirschsprung disease.</a> Nature. 531 (7592), 105-109 (2016).</li><li>Chen, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+defined+conditions+for+human+iPSC+derivation+and+culture.">Chemically defined conditions for human iPSC derivation and culture.</a> Nature Methods. 8 (5), 424-429 (2011).</li><li>Tchieu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Modular+Platform+for+Differentiation+of+Human+PSCs+into+All+Major+Ectodermal+Lineages.">A Modular Platform for Differentiation of Human PSCs into All Major Ectodermal Lineages.</a> Cell Stem Cell. 21 (3), 399-410 (2017).</li><li>Kvetnansky, R., Sabban, E. L., Palkovits, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Catecholaminergic+systems+in+stress:+structural+and+molecular+genetic+approaches.">Catecholaminergic systems in stress: structural and molecular genetic approaches.</a> Physiology Review. 89 (2), 535-606 (2009).</li><li>Frith, T. J. R., Tsakiridis, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+Generation+of+Trunk+Neural+Crest+and+Sympathetic+Neurons+from+Human+Pluripotent+Stem+Cells+Via+a+Neuromesodermal+Axial+Progenitor+Intermediate.">Efficient Generation of Trunk Neural Crest and Sympathetic Neurons from Human Pluripotent Stem Cells Via a Neuromesodermal Axial Progenitor Intermediate.</a> Current Protocols Stem Cell Biology. 49 (1), 81 (2019).</li><li>Saito-Diaz, K., Zeltner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells+for+disease+modeling,+cell+therapy+and+drug+discovery+in+genetic+autonomic+disorders:+a+review.">Induced pluripotent stem cells for disease modeling, cell therapy and drug discovery in genetic autonomic disorders: a review.</a> Clinical Autonomic Research. 29 (4), 367-384 (2019).</li><li>Clements, I. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+stimulation+of+multiwell+MEA+plates+for+neural+and+cardiac+applications.">Optogenetic stimulation of multiwell MEA plates for neural and cardiac applications.</a> Clinical and Translational Neurophotonics; Neural Imaging and Sensing; and Optogenetics and Optical Manipulation. 9690, (2016).</li></ol>

Vi har nylig publisert to vurderinger, en som diskuterer bruken av hPSC-avledede symNer for sykdomsmodellering31, samt en grundig sammenligning av tilgjengelige differensieringsprotokoller22. Dermed fokuserer vi her på å feilsøke den nåværende protokollen for å hjelpe den interesserte forskeren med å lykkes i å lage symNer. Under hele differensieringsprosessen, for å få konsistente data samt friske differensierte celler, bør kontaminering i alle stadier kontrolle...

Postganglionic sympatiske nevroner (symNer) tilhører det autonome nervesystemet (ANS) og har flere viktige roller i å svare og regulere homeostase av kroppen uavhengig av bevissthet. For eksempel stimulerer stress symNer og fremkaller kamp-eller-fly respons som fører til en økning i hjertefrekvens, blodtrykk og svette. SymNer påvirkes i flere menneskelige lidelser på grunn av genetikk, toksisitet/skade, eller som følgesvenner til andre sykdommer. Et eksempel på en genetisk nevropati er barndomsforstyrrelsen Familiær dysautonomi (FD), hvor en alvorlig dysregulering av symNer forårsaker dysautonom krise, tydelig ved svette, flekking av huden, oppkast angrep, hypertensjon og angst1. Et eksempel på toksisitet er kjemoterapi behandling, som er rapportert å ha toksiske bivirkninger på autonome nevroner2. Det er kjent at autonom denervation og hyper-inervation kan både føre til, eller følge, sykdommer som Parkinsons sykdom eller hypertensiv nyresykdom3,4. Dermed er det gunstig å kunne drive forskning og forstå mekanismene til symNbiologi og defekter i sammenheng med sykdom for søken etter nye og effektive behandlinger.
Anatomi Det perifere nervesystemet grener inn sensoriske og autonome divisjoner. De afferent nervene i sensorisk nervesystemet er ansvarlige for følelse av smerte og berøring, mens ANS er ansvarlig for å videresende informasjon fra alle organer til hjernen. ANS er delt inn i det enteriske nervesystemet, innervating mage-tarmkanalen, det parasympatiske nervesystemet, som er viktig for avslapning, og det sympatiske nervesystemet (SNS), som er viktig for aktivering / regulering av organer. SNS tilpasser et to-neuron system5. Preganglionic sympatiske nevrale aksoner i ryggmargen første prosjektet til sympatiske ganglia, hvor postganglionic symN celleorganer er plassert. Disse nevronene sender deretter lange projeksjoner for å innervate målet vev av hvert organ i kroppen. Signaler som overføres av preganglionic nevroner er kolinerge, mens postganglionic symNer er adrenerge og dermed uttrykke noradrenalin (NE) som deres viktigste nevrotransmitter. Det er få bemerkelsesverdige unntak av postganglionic, sympatiske nevroner som er kolinerge, inkludert de som innerver blodkar. Adrenerge postganglionic nevroner uttrykke enzymer tyrosin hydroksylase (TH), aromatisk L-aminosyre decarboxylase (AAAD), dopamin β-hydroksylase (DBH), og monoamin oksidase (MAO-A), alle ansvarlig for å generere og metabolisere NE. Videre uttrykker de NE resirkulering transportører og / eller reseptorer α-adrenerge reseptor (ADRA2), β-adrenerge reseptor (ADR2B), noradrenalin transportør (NET1), og vesikulær monoamin transportør (VMAT1/2).
Utvikling Under embryonalutvikling symNer er avledet fra neural crest (NC), som oppstår mellom nevrale røret og overlegge ectoderm6, og kan differensiere i flere cellelinjer, inkludert melanocytter, osteoblaster, adipocytter, glia, enteriske nevroner, sensoriske nevroner, og autonome nevroner7. Neural crest celler (NCCer) er svært trekkfugler celler som tar flere ruter gjennom embryoet. På dette tidlige stadiet av NC utvikling, cellene uttrykke markørene SNAIL1/2, FOXD3, og SOX108,9,10,11. Migrasjonsruten sammen med aksialplasseringen de vedtar bestemmer NC-undertypen de vil utvikle. Disse NC-undertypene kan skilles ut av deres spesifikke HOX-genuttrykk: Kraniale NCCer uttrykker ikke HOX-gener, vagal NCCer uttrykker HOX 1–5, trunk NCCer uttrykker HOX 6–9, og sakrale NCCer uttrykker HOX 10–1112. Blant dem er trunk NCCer anerkjent som den viktigste kilden til symNer. SymN-forløpere uttrykker transkripsjonsfaktoren MASH1/ASCL113, som fremmer uttrykk for PHOX2B14 og INSM115. GATA-familien av transkripsjonsfaktorer uttrykkes under sen sympatisk utvikling. GATA2 og GATA3 uttrykkes i symNene, som igjen aktiverer DBH16. Transkripsjonsfaktoren HAND2 er også viktig for uttrykk og vedlikehold av DBH og TH17.
HPSCer (f.eks. embryonale og induserte pluripotente stamceller) er et kraftig verktøy18 for å rekapitulere utviklingsparadigmer og generere symNer som deretter kan brukes til sykdomsmodellering av ulike menneskelige lidelser. Dermed, mens du genererer symNer fra hPSCer, er det avgjørende å følge utviklingsretningslinjer og vurdere uttrykk for passende markører langs differensieringsprosessen.
Tidligere symN-protokoll Få forskningsgrupper har tidligere rapportert generering av symNer fra hPSCs19,20,21. Den direkte sammenligningen av disse protokollene til hverandre og vår ble gjennomgått nylig22. I 201623publiserte vi en differensieringsprotokoll for generering av autonome nevroner med symN-karakter (figur 1A). Denne protokollen brukte KSR-basert medium, som ble brukt i både vedlikehold av udifferensierte hPSCer og celledifferensiering. Videre ble hPSCer opprettholdt på mus embryonale fibroblaster (MEF materceller). Vi brukte denne protokollen og PsCer fra pasienter med FD for å modellere lidelsen23. I 2019 beskrev vi en mer detaljert versjon av denne eldre protokollen24. Oppsummert, nevrale skjebnen ble indusert av dual SMAD hemming25 å blokkere TGF-β og BMP signalisering i de første 2 dagene. WNT-aktivering ved hjelp av CHIR99021 fremmet nevrale forfedre til å bli NC-celler. På dag 11 ble cellene sortert etter FACS for CD49D+ eller SOX10+ populasjoner26,23, som ga ca 40% NC generasjon effektivitet. Dermed var sortering nødvendig for å sikre effektivitet og renhet for de neste trinnene i differensiering. NcCs ble opprettholdt og forsterket som spheroids med kombinert behandling av FGF2 og CHIR. Etter 4 dager ble NC-spheroidene for vedlikehold belagt og gitt BDNF, GDNF og NGF for å fullføre symN-modningen. Selv om disse symN-merkene uttrykte sterke symN-markører som ASCL1, TH, DBH og PHOX2A, var markører for mer modne symNer, inkludert uttrykk for nikotinacetylkolinreseptoren (CHRNA3/CHRNB4) og vesikeltransportør (VMAT1/2), lav selv etter 70 dager med differensiering. HOX-gener i denne protokollen ble ikke formelt testet, og modne nevrale egenskaper, inkludert elektrofysiologisk aktivitet av cellene, ble ikke verifisert.
Her presenterer vi en optimalisert protokoll for å generere symNer (figur 1B). HPSCer vedlikeholdes i materfrie forhold, på vitronectin (VTN)-belagte retter, ved hjelp av Essential 8 (E8) media27. Formelen for differensieringsmediet er endret på hvert trinn, og dermed øke prosentandelen av NC-populasjonen28. SymN modning kan gjøres på CD49D+/SOX10+ sortert eller usortert bulk NCC populasjoner. Begge viser høye nivåer av symN markør uttrykk av dag 30. Videre er symNene som genereres med denne protokollen, responsiv til elektrofysiologisk opptak og behandlinger med symN-aktivator og inhibitorforbindelser.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>100 mm cell culture dishes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL conical tissue culture tubes</td>
			<td>VWR/Corning</td>
			<td>89039-664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well tissue culture plates</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well ultra-low-attachment plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>07 200 601 and 07 200 602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5% CO2/20% O2 tissue culture incubator</td>
			<td>Thermo Fisher/Life Technologies</td>
			<td>Heracell VIOS 160i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml conical tissue culture tubes</td>
			<td>VWR/Corning</td>
			<td>89039-656</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well tissue culture plates</td>
			<td>Costar</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Innovation Cell Technologies</td>
			<td>AT104500</td>
			<td>Cell dissociation solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-AP2a antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab108311</td>
			<td>Host: Rabbit; 1:400 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Ascl1 antibody</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>556604</td>
			<td>Host: Mouse IgG1; 1:200 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD49D antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>304313</td>
			<td>Host: Mouse IgG1; 5 &#956;l/million cells in 100 &#956;l volume</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD49D antibody (isotype)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>400125</td>
			<td>Host: Mouse IgG1; 5 &#956;l/million cells in 100 &#956;l volume</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-DAPI antibody</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D9542</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-DBH antibody</td>
			<td>Immunostar</td>
			<td>22806</td>
			<td>Host: Rabbit; 1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GFP antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab13970</td>
			<td>Host: Chicken; 1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-HOXC9 antibody</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-365692</td>
			<td>Host: Mouse IgG1; 1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-NET1 antibody</td>
			<td>Mab</td>
			<td>NET17-1</td>
			<td>Host: Mouse; 1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-PRPH antibody</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>SC-377093/H0112</td>
			<td>Host: Mouse IgG2a; 1:200 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-SOX10 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab50839</td>
			<td>Host: Mouse; 1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-TH antibody</td>
			<td>Pel-Freez</td>
			<td>P40101- 150</td>
			<td>Host: Rabbit; 1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ascorbic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A8960-5G</td>
			<td>Stock concentration: 100 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 supplement</td>
			<td>Thermo Fisher/Life Technologies</td>
			<td>12587-010</td>
			<td>Stock concentration: 50x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BDNF</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>248-BD</td>
			<td>Stock concentration: 10 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BMP4</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>314-BP</td>
			<td>Stock concentration: 6 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counter</td>
			<td>Thermo Fisher/Life Technologies</td>
			<td>Countess II</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counting chamber slides</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>C10312</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>57021&#38;5424R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHIR99021</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>4423</td>
			<td>Stock concentration: 6 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryo-vial</td>
			<td>Thermo Fisher/Life Technologies</td>
			<td>375353</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dbcAMP</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D0627</td>
			<td>Stock concentration: 100 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Thermo Fisher/Life Technologies</td>
			<td>10829-018</td>
			<td>Stock concentration: 1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Thermo Fisher/Life Technologies</td>
			<td>11330-057</td>
			<td>Stock concentration: 1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Thermo Fisher/Life Technologies</td>
			<td>BP231-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E6 medium</td>
			<td>gibco</td>
			<td>A15165-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E8 medium</td>
			<td>gibco</td>
			<td>A15169-01</td>
			<td>Stock concentration: 1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E8 supplement</td>
			<td>gibco</td>
			<td>A15171-01</td>
			<td>Stock concentration: 50x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>ED2SS</td>
			<td>Stock concentration: 0.5 M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrophysiology plates (AXION cytoview MEA96)</td>
			<td>Axion BioSystems</td>
			<td>M768-tMEA-96W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS machine</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>CytoFLEX (for FACS)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS machine</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>MoFlo Astrios EQ (for sorting)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS tubes (blue filter cap)</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS tubes (white cap)</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Atlanta Biologicals</td>
			<td>S11150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GDNF</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>450</td>
			<td>Stock concentration: 10 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Geltrex</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A1413202</td>
			<td>Basement membrane matrix; Stock concentration: 100x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hPSCs</td>
			<td>Thomson et al., (1998)</td>
			<td>WA09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hPSCs</td>
			<td>Oh et al. (2016)</td>
			<td>H9-PHOX2B::eGFP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human fibronectin (FN)</td>
			<td>VWR/Corning</td>
			<td>47743-654</td>
			<td>Stock concentration: 1 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Thermo Fisher/Gibco</td>
			<td>25030-081</td>
			<td>Stock concentration: 200 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LN tank</td>
			<td>Custom Biogenic Systems</td>
			<td>V-1500AB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEA reader</td>
			<td>Axion BioSystems</td>
			<td>Maestro Pro</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse laminin I (LM)</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>3400-010-01</td>
			<td>Stock concentration: 1 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 supplement</td>
			<td>Thermo Fisher/Life Technologies</td>
			<td>17502-048</td>
			<td>Stock concentration: 100x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal medium</td>
			<td>gibco</td>
			<td>21103-049</td>
			<td>Stock concentration: 1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NGF</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>450-01</td>
			<td>Stock concentration: 25 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline (PBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-136</td>
			<td>Stock concentration: 1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-ornithine hydrobromide (PO)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3655</td>
			<td>Stock concentration: 15 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primocin (antibiotics)</td>
			<td>InvivoGen</td>
			<td>ANTPM1</td>
			<td>Stock concentration: 50 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>qPCR machine</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories</td>
			<td>C1000 Touch</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>qPCR plates</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories</td>
			<td>HSP9601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>recombinant FGF2</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>233-FB/CF</td>
			<td>Stock concentration: 10 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retinoic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R2625</td>
			<td>Stock concentration: 1 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB431542</td>
			<td>Tocris/R&#38;D Systems</td>
			<td>1614</td>
			<td>Stock concentration: 10 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MT-25-900-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitronectin (VTN)</td>
			<td>Thermo Fisher/Life Technologies</td>
			<td>A14700</td>
			<td>Stock concentration: 0.5 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>VWR/Corning</td>
			<td>706308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y27632</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>1254</td>
			<td>Stock concentration: 10 mM</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

efficient differentiation of postganglionic sympathetic neurons using human pluripotent stem cells under feeder-free and chemically defined culture conditions

Humane pluripotente stamceller (hPSCer) har blitt et kraftig verktøy for sykdomsmodellering og studiet av menneskelig embryonisk utvikling in vitro. Vi har tidligere presentert en differensieringsprotokoll for avledning av autonome nevroner med sympatisk karakter som har blitt brukt på pasienter med autonom nevropati. Protokollen ble imidlertid bygget på Knock Out Serum Replacement (KSR) og materbaserte kulturforhold, og for å sikre høy differensieringseffektivitet var cellesortering nødvendig. Disse faktorene forårsaker høy variasjon, høye kostnader og lav reproduserbarhet. Videre har modne sympatiske egenskaper, inkludert elektrisk aktivitet, ikke blitt verifisert. Her presenterer vi en optimalisert protokoll der PSC-kultur og differensiering utføres i materfrie og kjemisk definerte kulturforhold. Genetiske markører som identifiserer trunk neural crest er identifisert. Ytterligere differensiering til postganglioniske sympatiske nevroner oppnås etter 20 dager uten behov for cellesortering. Elektrofysiologisk opptak viser videre funksjonell nevron identitet. Avfyring oppdaget fra våre differensierte nevroner kan forbedres av nikotin og undertrykkes av adrenerge reseptorantagonist propranolol. Mellomliggende sympatiske nevrale stamfarer i denne protokollen kan opprettholdes som nevrale spheroider i opptil 2 uker, noe som gjør det mulig å utvide kulturene. I sum viser vår oppdaterte sympatiske nevrondifferensieringsprotokoll høy differensieringseffektivitet, bedre reproduserbarhet, mer fleksibilitet og bedre neural modning sammenlignet med den forrige versjonen. Denne protokollen vil gi forskere cellene som er nødvendige for å studere menneskelige lidelser som påvirker det autonome nervesystemet.

I denne protokollen gir vi instruksjoner om hvordan du genererer symNer fra hPSCer. Kulturforholdene som ble demonstrert her ble forbedret fra en tidligere publisert protokoll23,24 (Figur 1A) til materfrie og kjemisk definerte forhold ( Figur1B). To alternativer er gitt, en der symNer er laget innen 20 dager, og en annen hvor NCCer kan utvides i 2 uker for å generere flere celler som deretter kan differ...

Watch this Scientific Journal Video about Efficient Differentiation of Postganglionic Sympathetic Neurons using Human Pluripotent Stem Cells under Feeder-free and Chemically Defined Culture Conditions

Efficient Differentiation of Postganglionic Sympathetic Neurons using Human Pluripotent Stem Cells under Feeder-free and Chemically Defined Culture Conditions

I denne protokollen beskriver vi en stabil, svært effektiv differensieringsstrategi for generering av postganglioniske sympatiske nevroner fra humane pluripotente stamceller. Denne modellen vil gjøre nevroner tilgjengelig ei bruk av studier av flere autonome lidelser.

Effektiv differensiering av postganglioniske sympatiske nevroner ved hjelp av humane pluripotente stamceller under materfrie og kjemisk definerte kulturforhold

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have become a powerful tool for disease modeling and the study of human embryonic development in vitro. We previously ...

Denne protokollen tillater avledning av sympatiske nevroner fra menneskelige pluripotente stamceller. Disse cellene vil gjøre det mulig for en forsker å studere menneskelige lidelser som påvirker det sympatiske nervesystemet. Denne teknikken tillater avledning av sympatiske nevroner i delte materfrie møteforhold med høy skalerbar effektivitet.Det resulterer i elektrisk aktive nevroner i 20 dager. Denne teknikken kan brukes på sykdommer forårsaket av et dysfunksjonelt sympatisk nervesystem, det kan også brukes til sykdomsmodellering, regenerativ medisin og narkotikascreening. Disse cellene kan brukes in vitro til å innovere vev i et co-kultursystem, for eksempel for studiet av hjertevevregulering.Når den menneskelige pluripotente stamcellekulturen når 80 til 90% samløpet, bør store kolonier med glatte lyse kanter observeres. For splitting, vask kulturen med PBS før du behandler cellene med fire milliliter på 0,25 molar EDTA ved 37 grader Celsius og 5% karbondioksid. Etter to minutter, skyll platen med 10 milliliter E8 medium og overfør den frittliggende cellefjæringen til et konisk rør på 15 milliliter.Deretter overfører du 500 mikroliter celler til en 9,5 milliliter aliquot av friskt E8-medium. Og plate stamcellene på nye vitronectin belagt 100 millimeter retter. En dag før differensiering induksjon, belegge riktig antall seks brønnplater med to milliliter kjeller membran matrise per brønn.Og lagre platene på fire grader Celsius over natten. Neste morgen varmer du platene til romtemperatur og vasker klar til å splitte menneskelig pluripotent stamcellekultur to ganger med frisk PBS per vask. Etter den andre vasken, behandle cellene med syv milliliter på 0,5 millimolar EDTA i 15 minutter i cellekulturinkubatoren før du aspirerer de flytende menneskelige pluripotente stamcellene og overfører de høstede cellene til et 50 milliliter rør.Tilsett et likt volum PBS til røret for å fortynne EDTA og samle cellene ved sentrifugering. Resuspend pellet i en milliliter dag 01 differensiering medium før du legger til et passende volum av medium for regnskap. Fortynn cellene til en 1,25 ganger 10 til de femte cellene per kvadratcentimeterkonsentrasjon i milliliter differensieringsmedium per brønn.Aspirer hele kjelleren membranmatriseløsning fra hver brønn av den tidligere forberedt til seks brønnplate. Deretter frø to milliliter celler i hver brønn og legg platen i cellekulturinkubatoren. Neste morgen, mate cellene med tre milliliter dag 01 differensiering medium per brønn.På dag to av differensiering, mate cellene med tre milliliter dag to til 10 differensiering medium per brønn, deretter mate cellene annenhver dag til dag 10. For å samle nevrale crest celler i sfæroider, på dag 10, vask cellene med PBS. Og legg til to milliliter dissosiasjonsmedium til hver brønn.Etter 20 minutter i cellekulturinkubatoren, overfør de flytende cellene til et 50 milliliter konisk rør og bringe volumet av suspensjon i røret til 50 milliliter med frisk PBS. Samle cellene ved sentrifugering. Og resuspend pellet i et tilstrekkelig volum av dag 10 til 14 sfæroid medium for telling.Etter telling, fortynne cellene til en fem ganger 10 til de femte cellene per 500 mikroliter konsentrasjon ved hjelp av dag 10 til 14 sfæroid medium. Og plate 500 mikroliter av celler i hver brønn av en ultra lav vedlegg 24-brønns plate. Deretter returnerer cellene til cellekulturinkubatoren.For å indusere en minimal sfæroid kultur, på dag 11 av kultur, mate nevrale crest sfæroider med ytterligere 500 mikroliter på dag 10 til 14 sfæroid medium per brønn. På dag 12 vipp platen for å samle spheroidene på den ene siden av platen. Og forsiktig aspirere så mye medium som mulig fra hver brønn uten aspirerende sfæroider.Mat deretter spheroidene med en milliliter dag 10 til 14 sfæroid medium per brønn. For å indusere en utvidet sfæroid kultur, på dag 15, mate sfæroider med 1,5 milliliter dag 10 til 14 sfæroid medium supplert med 0,5 mikromolar retinosyre per brønn. Deretter returnerer spheroider til cellekulturinkubatoren.For sympatisk neuron differensiering, på dag 14 eller 28, vipp platen for å samle spheroidene på den ene siden av platen og forsiktig aspirere så mye medium som mulig. Mate cellene med en milliliter sympatisk neuron medium. For å bryte opp store sfæroide aggregater i mindre sfæroider, legg ikke mer enn en milliliter medium per brønn og pipette sfæroidene fem til 10 ganger før splitting.Og fjern overflødig laminin fibronectin fra tidligere forberedt 24-brønnplater. Del platen en milliliter sfæroider fra hver brønn på 24-brønner sfæroid kulturplate mellom fire separate brønner av den nye belagte 24-brønnsplaten. Tilsett 250 mikroliter med friskt sympatisk nevron medium til hver brønn.Og legg platen i cellekulturinkubatoren. Neste morgen, erstatt mediet i hver brønn med en milliliter sympatisk neuron medium supplert med 0,125 mikromolar retinosyre og returnere platen til cellekulturinkubatoren. Etter dag 35, mate nevronene ved å nøye erstatte bare halvparten av det eksisterende mediet i hver brønn med friskt medium.Før differensiering bør de menneskelige pluripotente stamcellekoloniene være runde med skinnende, glatte kanter og liten eller ingen differensiering. Cellene uttrykker nevrale crest markør Sox10 fra dag fire til 10. Nevrale crest celler dukker opp i tette mørke rygger som er synlige fra dag seks på.Disse ryggene uttrykker også Sox10. På neural crest celler scenen, Sox10 korrelerer med celleoverflaten markør CD49D, som kan brukes til å sortere nevrale crest celler. Positive sorterte og usorterte populasjoner produserte nevrale crest sfæroider på en lignende måte.Mens negative sorterte celler ikke aggregerer riktig, ikke produsere runde, glatt sunn utseende sfæroider og dø innen tre til fire dager. Videre, når neural crest sfæroider sammenlignes på dag 14, kan den kvantitative omvendte transkripsjons-PCR for neural crest og sympatiske nervestamfarmarkører, signifikante forskjeller mellom de sorterte og usorterte cellene ikke oppdages. På dag 20 eller 35, de respektive minimale eller utvidede protokollene, kan neuroider observeres vokser i et radialt mønster fra de vedlagte sfæroidene.Markører knyttet til noradrenalinsyntese og transport uttrykkes på dette stadiet, samt Hox6 gjennom ni trunk neural crest gener. Elektrofysiologisk opptak oppdager også nevrale aktivitet fra dag 20 på. Slik aktivitet kan forbedres eller undertrykkes av legemidler som retter seg mot autoreseptorer av sympatiske nevroner som justerer funksjonaliteten til differensierte nevroner.Den menneskelige talsmannen selv må være sunn fra dag null av differensiering, ellers vil eksperimentet sannsynligvis mislykkes. Farmakologiske hemmere eller aktivatorer kan legges til nevronene for å forstå deres normale eller patologiske oppførsel. Denne metoden åpner en ny vei for å studere sympatisk biologi og patologi siden det nå er mulig å få biopsier av sympatiske nevroner fra mennesker enkelt.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Human Peripheral T Cells Using Sendai Virus in Feeder-free Conditions

Generering av Induced Pluripotent stamceller fra menneske perifere T-celler Bruke Sendai Virus i Feeder-free betingelser

Recently, iPSCs have attracted attention as a new source of cells for regenerative therapies. Although the initial method for generating iPSCs relied on ...

Feeder-free Derivation of Melanocytes from Human Pluripotent Stem Cells

Feeder-fri Utledning av Melanocytter fra Menneskelig Pluripotent stamceller

Human pluripotent stem cells (hPSCs) represent a platform to study human development in vitro under both normal and disease conditions. Researchers can ...

Large-Scale Production of Cardiomyocytes from Human Pluripotent Stem Cells Using a Highly Reproducible Small Molecule-Based Differentiation Protocol

Storskala produksjon av cardiomyocytes fra Menneskelig Pluripotent stamceller ved hjelp av en meget reproduserbar lite molekyl-Based Differensiering Protocol

Maximizing the benefit of human pluripotent stem cells (hPSCs) for research, disease modeling, pharmaceutical and clinical applications requires robust ...

Efficient Differentiation of Pluripotent Stem Cells to NKX6-1+ Pancreatic Progenitors

Efficient Differentiation of Pluripotent Stem Cells to NKX6-1+ Pancreatic Progenitors

Effektiv Differensiering av pluripotent stamceller til å NKX6-1<sup&gt; +</sup&gt; bukspyttkjertelen stamfedre

Pluripotent stem cells have the ability to self renew and differentiate to multiple lineages, making them an attractive source for the generation of ...

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

In Vitro Differensiering av menneskelige pluripotent stamceller til trophoblastic Cells

The placenta is the first organ to develop during embryogenesis and is required for the survival of the developing embryo. The placenta is comprised of ...

Defined and Scalable Generation of Hepatocyte-like Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Definert og Scalable Generation of hepatocytter lignende celler fra menneskelige Pluripotent stamceller

Human pluripotent stem cells (hPSCs) possess great value for biomedical research. hPSCs can be scaled and differentiated to all cell types found in the ...

Defined Xeno-free and Feeder-free Culture Conditions for the Generation of Human iPSC-derived Retinal Cell Models

Definerte Xeno-fri og mater-fri kultur betingelser for generering av menneskelig iPSC-avledet Retinal celle modeller

The production of specialized cells from pluripotent stem cells provides a powerful tool to develop new approaches for regenerative medicine. The use of ...

Efficient and Scalable Directed Differentiation of Clinically Compatible Corneal Limbal Epithelial Stem Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Effektiv og skalerbar rettet differensiering av klinisk kompatibel hornhinnen Limbal epitel stamceller fra menneskelige Pluripotent stamceller

Corneal limbal epithelial stem cells (LESCs) are responsible for continuously renewing the corneal epithelium, and thus maintaining corneal homeostasis ...

Efficient Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Liver Cells

Effektiv differensiering av Human Pluripotent stamceller i leverceller

The liver detoxifies harmful substances, secretes vital proteins, and executes key metabolic activities, thus sustaining life. Consequently, liver ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

I Vitro generasjon av Somite derivater fra menneske indusert stamceller Pluripotent

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...