Name: efficient differentiation of postganglionic sympathetic neurons using human pluripotent stem cells under feeder-free and chemically defined culture conditions
Uploaded: 2020-05-24T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Efficient Differentiation of Postganglionic Sympathetic Neurons using Human Pluripotent Stem Cells under Feeder-free and Chemically Defined Culture Conditions

Vi vill tacka Heidi Ulrichs för kritisk läsning och redigering av manuskriptet.

OBS: H9 PHOX2B: GFP reporter linje tillhandahölls av Oh et al.19. Vissa qPCR primers som används i detta dokument erhölls från OriGene Technologies, medan några sekvenser erhålls från Frith et al.20,30.
1. Set-up för skålbeläggning, mediaberedning och hPSC-underhåll
<ol><li>Skål beläggning<ol>
<li>
Vitronectinbeläggning (VTN)
		<ol>
<li>Placera injektionsflaska med VTN i ett 37 ?...

<ol>
	<li>Norcliffe-Kaufmann, L., Slaugenhaupt, S. A., Kaufmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Familial+dysautonomia:+History,+genotype,+phenotype+and+translational+research.">Familial dysautonomia: History, genotype, phenotype and translational research.</a> Progress in Neurobiology. 152, 131-148 (2017).</li><li>Stone, J. B., DeAngelis, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer-treatment-induced+neurotoxicity--focus+on+newer+treatments.">Cancer-treatment-induced neurotoxicity--focus on newer treatments.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 13 (2), 92-105 (2016).</li><li>Goldstein, D. S., Holmes, C., Lopez, G. J., Wu, T., Sharabi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+sympathetic+denervation+predicts+PD+in+at-risk+individuals.">Cardiac sympathetic denervation predicts PD in at-risk individuals.</a> Parkinsonism Related Disorders. 52, 90-93 (2018).</li><li>Froeschl, M., Hadziomerovic, A., Ruzicka, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Percutaneous+renal+sympathetic+denervation:+2013+and+beyond.">Percutaneous renal sympathetic denervation: 2013 and beyond.</a> Canadian Journal of Cardiology. 30 (1), 64-74 (2014).</li><li>Wehrwein, E. A., Orer, H. S., Barman, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overview+of+the+Anatomy,+Physiology,+and+Pharmacology+of+the+Autonomic+Nervous+System.">Overview of the Anatomy, Physiology, and Pharmacology of the Autonomic Nervous System.</a> Comprehensive Physiology. 6 (3), 1239-1278 (2016).</li><li>Le Douarin, N. M., Kalcheim, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Neural Crest. , (1999).</li><li>Sim&#245;es-Costa, M., Bronner, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+neural+crest+development+and+evolution+from+genomic+analysis.">Insights into neural crest development and evolution from genomic analysis.</a> Genome Research. 23 (7), 1069-1080 (2013).</li><li>Labosky, P. A., Kaestner, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+winged+helix+transcription+factor+Hfh2+is+expressed+in+neural+crest+and+spinal+cord+during+mouse+development.">The winged helix transcription factor Hfh2 is expressed in neural crest and spinal cord during mouse development.</a> Mechanisms of Development. 76 (1-2), 185-190 (1998).</li><li>Southard-Smith, E. M., Kos, L., Pavan, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sox10+mutation+disrupts+neural+crest+development+in+Dom+Hirschsprung+mouse+model.">Sox10 mutation disrupts neural crest development in Dom Hirschsprung mouse model.</a> Nature Genetics. 18 (1), 60-64 (1998).</li><li>Aruga, J., Tohmonda, T., Homma, S., Mikoshiba, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zic1+Promotes+the+Expansion+of+Dorsal+Neural+Progenitors+in+Spinal+Cord+by+Inhibiting+Neuronal+Differentiation.">Zic1 Promotes the Expansion of Dorsal Neural Progenitors in Spinal Cord by Inhibiting Neuronal Differentiation.</a> Developmental Biology. 244 (2), 329-341 (2002).</li><li>Garnett, A. T., Square, T. A., Medeiros, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BMP,+Wnt+and+FGF+signals+are+integrated+through+evolutionarily+conserved+enhancers+to+achieve+robust+expression+of+Pax3+and+Zic+genes+at+the+zebrafish+neural+plate+border.">BMP, Wnt and FGF signals are integrated through evolutionarily conserved enhancers to achieve robust expression of Pax3 and Zic genes at the zebrafish neural plate border.</a> Development. 139 (22), 4220-4231 (2012).</li><li>Kam, M. K., Lui, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+Hoxb5+in+the+development+of+vagal+and+trunk+neural+crest+cells.">Roles of Hoxb5 in the development of vagal and trunk neural crest cells.</a> Development Growth, Differentiation. 57 (2), 158-168 (2015).</li><li>Guillemot, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammalian+achaete-scute+homolog+1+is+required+for+the+early+development+of+olfactory+and+autonomic+neurons.">Mammalian achaete-scute homolog 1 is required for the early development of olfactory and autonomic neurons.</a> Cell. 75 (3), 463-476 (1993).</li><li>Pattyn, A., Morin, X., Cremer, H., Goridis, C., Brunet, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+homeobox+gene+Phox2b+is+essential+for+the+development+of+autonomic+neural+crest+derivatives.">The homeobox gene Phox2b is essential for the development of autonomic neural crest derivatives.</a> Nature. 399 (6734), 366-370 (1999).</li><li>Wildner, H., Gierl, M. S., Strehle, M., Pla, P., Birchmeier, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insm1+(IA-1)+is+a+crucial+component+of+the+transcriptional+network+that+controls+differentiation+of+the+sympatho-adrenal+lineage.">Insm1 (IA-1) is a crucial component of the transcriptional network that controls differentiation of the sympatho-adrenal lineage.</a> Development. 135 (3), 473-481 (2008).</li><li>Trainor, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Neural Crest Cells: Evolution, Development and Disease. , (2013).</li><li>Howard, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+perspectives+on+differentiation+of+autonomic+neurons.">Mechanisms and perspectives on differentiation of autonomic neurons.</a> Developmental Biology. 277 (2), 271-286 (2005).</li><li>Zeltner, N., Studer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pluripotent+stem+cell-based+disease+modeling:+current+hurdles+and+future+promise.">Pluripotent stem cell-based disease modeling: current hurdles and future promise.</a> Current Opinion in Cell Biology. 37, 102-110 (2015).</li><li>Oh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+Coupling+with+Cardiac+Muscle+Promotes+Maturation+of+hPSC-Derived+Sympathetic+Neurons.">Functional Coupling with Cardiac Muscle Promotes Maturation of hPSC-Derived Sympathetic Neurons.</a> Cell Stem Cell. 19 (1), 95-106 (2016).</li><li>Frith, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+axial+progenitors+generate+trunk+neural+crest+cells+in+vitro.">Human axial progenitors generate trunk neural crest cells in vitro.</a> Elife. 7, (2018).</li><li>Kirino, K., Nakahata, T., Taguchi, T., Saito, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+derivation+of+sympathetic+neurons+from+human+pluripotent+stem+cells+with+a+defined+condition.">Efficient derivation of sympathetic neurons from human pluripotent stem cells with a defined condition.</a> Scientific Reports. 8 (1), 12865 (2018).</li><li>Wu, H. F., Zeltner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overview+of+Methods+to+Differentiate+Sympathetic+Neurons+from+Human+Pluripotent+Stem+Cells.">Overview of Methods to Differentiate Sympathetic Neurons from Human Pluripotent Stem Cells.</a> Current Protocols Stem Cell Biology. 50 (1), 92 (2019).</li><li>Zeltner, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capturing+the+biology+of+disease+severity+in+a+PSC-based+model+of+familial+dysautonomia.">Capturing the biology of disease severity in a PSC-based model of familial dysautonomia.</a> Nature Medicine. 22 (12), 1421-1427 (2016).</li><li>Saito-Diaz, K., Wu, H. F., Zeltner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autonomic+Neurons+with+Sympathetic+Character+Derived+From+Human+Pluripotent+Stem+Cells.">Autonomic Neurons with Sympathetic Character Derived From Human Pluripotent Stem Cells.</a> Current Protocols Stem Cell Biology. 49 (1), 78 (2019).</li><li>Chambers, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+neural+conversion+of+human+ES+and+iPS+cells+by+dual+inhibition+of+SMAD+signaling.">Highly efficient neural conversion of human ES and iPS cells by dual inhibition of SMAD signaling.</a> Nature Biotechnology. 27 (3), 275-280 (2009).</li><li>Fattahi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deriving+human+ENS+lineages+for+cell+therapy+and+drug+discovery+in+Hirschsprung+disease.">Deriving human ENS lineages for cell therapy and drug discovery in Hirschsprung disease.</a> Nature. 531 (7592), 105-109 (2016).</li><li>Chen, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+defined+conditions+for+human+iPSC+derivation+and+culture.">Chemically defined conditions for human iPSC derivation and culture.</a> Nature Methods. 8 (5), 424-429 (2011).</li><li>Tchieu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Modular+Platform+for+Differentiation+of+Human+PSCs+into+All+Major+Ectodermal+Lineages.">A Modular Platform for Differentiation of Human PSCs into All Major Ectodermal Lineages.</a> Cell Stem Cell. 21 (3), 399-410 (2017).</li><li>Kvetnansky, R., Sabban, E. L., Palkovits, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Catecholaminergic+systems+in+stress:+structural+and+molecular+genetic+approaches.">Catecholaminergic systems in stress: structural and molecular genetic approaches.</a> Physiology Review. 89 (2), 535-606 (2009).</li><li>Frith, T. J. R., Tsakiridis, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+Generation+of+Trunk+Neural+Crest+and+Sympathetic+Neurons+from+Human+Pluripotent+Stem+Cells+Via+a+Neuromesodermal+Axial+Progenitor+Intermediate.">Efficient Generation of Trunk Neural Crest and Sympathetic Neurons from Human Pluripotent Stem Cells Via a Neuromesodermal Axial Progenitor Intermediate.</a> Current Protocols Stem Cell Biology. 49 (1), 81 (2019).</li><li>Saito-Diaz, K., Zeltner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells+for+disease+modeling,+cell+therapy+and+drug+discovery+in+genetic+autonomic+disorders:+a+review.">Induced pluripotent stem cells for disease modeling, cell therapy and drug discovery in genetic autonomic disorders: a review.</a> Clinical Autonomic Research. 29 (4), 367-384 (2019).</li><li>Clements, I. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+stimulation+of+multiwell+MEA+plates+for+neural+and+cardiac+applications.">Optogenetic stimulation of multiwell MEA plates for neural and cardiac applications.</a> Clinical and Translational Neurophotonics; Neural Imaging and Sensing; and Optogenetics and Optical Manipulation. 9690, (2016).</li></ol>

Vi publicerade nyligen två recensioner, en diskuterar användningen av hPSC-härledda symNs för sjukdom modellering31 samt en djupgående jämförelse av tillgängliga differentiering protokoll22. Således fokuserar vi här på felsökning av det nuvarande protokollet för att hjälpa den intresserade forskaren att lyckas göra symNs. Under hela differentieringsprocessen, för att få konsekventa data samt friska differentierade celler, bör kontaminering i alla steg kont...

Postganglionic sympatiska nervceller (symNs) tillhör det autonoma nervsystemet (ANS) och har flera viktiga roller i att svara och reglera homeostas i kroppen oberoende av medvetande. Till exempel stimulerar stress symNs och framkallar kampen-eller-flykt svar som leder till en ökning av hjärtfrekvens, blodtryck, och svettning. SymNs påverkas i flera mänskliga sjukdomar på grund av genetik, toxicitet / skada, eller som följeslagare till andra sjukdomar. Ett exempel på en genetisk neuropati är barndomssjukdomen Familjär Dysautonomia (FD), där en allvarlig dysregulation av symNs orsakar dysautonomisk kris, uppenbart genom svettning, blotching av huden, kräkningar attacker, hypertoni, och ångest1. Ett exempel på toxicitet är kemoterapi behandling, som har rapporterats ha toxiska biverkningar på autonoma nervceller2. Det är känt att autonoma denervation och hyper-innervation kan både leda till, eller åtfölja, sjukdomar som Parkinsons sjukdom eller hypertensiv njursjukdom3,4. Således är det fördelaktigt att kunna forska och förstå mekanismerna för symN-biologi och defekter i samband med sjukdom för att söka nya och effektiva behandlingar.
Anatomi Det perifera nervsystemet förgrena sig i sensoriska och autonoma divisioner. De afferent nerverna i det sensoriska nervsystemet är ansvariga för känsla av smärta och beröring, medan ANS är ansvarig för att vidarebefordra information från alla organ till hjärnan. ANS är indelat i det enteriska nervsystemet, innervating av mag-tarmkanalen, det parasympatiska nervsystemet, vilket är viktigt för avkoppling, och det sympatiska nervsystemet (SNS), vilket är viktigt för aktivering/reglering av organ. SNS anpassar ett två-neuron system5. Preganglionic sympatiska neurala axoner i ryggmärgen första projektet till sympatiska ganglier, där postganglionic symN cell organ finns. Dessa nervceller skickar sedan långa projektioner för att innervera målvävnaderna i varje organ i kroppen. Signaler som överförs av preganglionic nervceller är kolinerga, medan postganglionic symNs är adrenerga och därmed uttrycka noradrenalin (NE) som deras huvudsakliga signalsubstans. Det finns några anmärkningsvärda undantag av postganglionic, sympatiska nervceller som är kolinerga, inklusive de innervating blodkärl. Adrenerga postganglionic nervceller uttrycka enzymer tyrosin hydroxylase (TH), aromatiska L-aminosyra decarboxylase (AAAD), dopamin β-hydroxylas (DBH), och monoamin oxidas (MAO-A), alla ansvariga för att generera och metabolisera NE. Dessutom uttrycker de NE återvinning transportörer och/eller receptorer α-adrenerga receptor (ADRA2), β-adrenerga receptor (ADR2B), noradrenalin transportör (NET1), och vesikulär monoamin transportör (VMAT1/2).
Utveckling Under embryonal utveckling symNs härrör från neurala krönet (NC), som framträder mellan neuralröret och överlagra ectoderm6, och kan skilja i flera cell härstamningar, inklusive melanocyter, osteoblaster, adipocyter, glia, enteriska nervceller, sensoriska nervceller, och autonoma nervceller7. Neurala crest celler (NCCs) är långvandrande celler som tar flera vägar genom embryot. I detta tidiga skede av NC utveckling, cellerna uttrycka markörer SNAIL1/2, FOXD3, och SOX108,9,10,11. Migreringsvägen tillsammans med den axiella plats som de antar bestämmer den NC-undertyp som de kommer att utvecklas till. Dessa NC subtyper kan särskiljas genom deras specifika HOX genuttryck: Cranial NCCs inte uttrycka HOX gener, vagal NCCs express HOX 1-5, trunk NCCs express HOX 6-9, och sakrala NCCs express HOX 10-1112. Bland dem är trunk NCCs erkända som den viktigaste källan till symNs. SymN prekursorer uttrycka transkriptionsfaktorn MASH1/ASCL113, som främjar uttryck för PHOX2B14 och INSM115. Gata familjen av transkriptionsfaktorer uttrycks under sen sympatisk utveckling. GATA2 och GATA3 uttrycks i symNs, som i sin tur aktiverar DBH16. Transkriptionsfaktorn HAND2 är också viktig för uttryck och underhåll av DBH och TH17.
HPS (t.ex. embryonala och inducerade pluripotenta stamceller) är ett kraftfullt verktyg18 för att rekapitalitulera utvecklingsparadigm och generera symN som sedan kan användas för sjukdomsmodellering av olika mänskliga sjukdomar. Samtidigt som symNs skapas från hPSC är det därför viktigt att följa utvecklingsriktlinjerna och bedöma uttryck för lämpliga markörer längs differentieringen.
Tidigare symN-protokoll Få forskargrupper har tidigare rapporterat generering av symNs från hPSCs19,20,21. Den direkta jämförelsen av dessa protokoll till varandra och vår granskades nyligen22. I 201623, Vi publicerade en differentiering protokoll för generering av autonoma nervceller med symN karaktär (Figur 1A). Detta protokoll används KSR-baserade medium, som användes i både underhåll av odifferentierade hPSCs och cell differentiering. Dessutom bibehölls hPSCs på mus embryonala fibroblaster (MEF feeder celler). Vi använde detta protokoll och PSCs från patienter med FD att modellera sjukdomen23. Under 2019 beskrev vi en mer detaljerad version av detta äldre protokoll24. Sammanfattningsvis var neurala ödet framkallas av dubbla SMAD hämning25 att blockera TGF-β och BMP signalering under de första 2 dagarna. WNT aktivering med CHIR99021 främjas neurala förfäder att bli NC celler. På dag 11, celler sorterades av FACS för CD49D+ eller SOX10+ populationer26,23, som gav cirka 40% NC generation effektivitet. Det behövdes därför sortering för att säkerställa effektiviteten och renhetsgraden för nästa steg i differentiering. NCCs bibehölls och förstärktes som sfäroider med kombinerad behandling av FGF2 och CHIR. Efter 4 dagar var NC sfäroider av underhåll pläterade och ges BDNF, GDNF och NGF att avsluta symN mognad. Även om dessa symNs uttryckt starka symN markörer såsom ASCL1, TH, DBH och PHOX2A, markörer för mer mogna symNs, inklusive uttryck för nikotinacetylkolin receptorn (CHRNA3/CHRNB4) och vesicle transportör (VMAT1/2), var låga även efter 70 dagars differentiering. HOX gener i detta protokoll testades inte formellt, och mogna neurala egenskaper, inklusive elektrofysiologisk aktivitet av cellerna, kontrollerades inte.
Här presenterar vi ett optimerat protokoll för att generera symNs(Figur 1B). HPSCs underhålls i matarfria förhållanden, på vitronectin (VTN)-belagda rätter, med Essential 8 (E8) media27. Formeln för differentieringsmedierna har ändrats i varje steg, vilket ökar andelen av NC-befolkningen28. Den symN mognad kan göras på CD49D+/SOX10+ sorterade eller osorterade bulk NCC populationer. Båda visar höga nivåer av symN markör uttryck av dag 30. Dessutom är de symN som genereras med detta protokoll lyhörda för elektrofysiologisk inspelning och behandlingar med symN aktivator och hämmare föreningar.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>100 mm cell culture dishes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL conical tissue culture tubes</td>
			<td>VWR/Corning</td>
			<td>89039-664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well tissue culture plates</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well ultra-low-attachment plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>07 200 601 and 07 200 602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5% CO2/20% O2 tissue culture incubator</td>
			<td>Thermo Fisher/Life Technologies</td>
			<td>Heracell VIOS 160i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml conical tissue culture tubes</td>
			<td>VWR/Corning</td>
			<td>89039-656</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well tissue culture plates</td>
			<td>Costar</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Innovation Cell Technologies</td>
			<td>AT104500</td>
			<td>Cell dissociation solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-AP2a antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab108311</td>
			<td>Host: Rabbit; 1:400 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Ascl1 antibody</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>556604</td>
			<td>Host: Mouse IgG1; 1:200 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD49D antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>304313</td>
			<td>Host: Mouse IgG1; 5 &#956;l/million cells in 100 &#956;l volume</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD49D antibody (isotype)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>400125</td>
			<td>Host: Mouse IgG1; 5 &#956;l/million cells in 100 &#956;l volume</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-DAPI antibody</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D9542</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-DBH antibody</td>
			<td>Immunostar</td>
			<td>22806</td>
			<td>Host: Rabbit; 1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GFP antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab13970</td>
			<td>Host: Chicken; 1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-HOXC9 antibody</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-365692</td>
			<td>Host: Mouse IgG1; 1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-NET1 antibody</td>
			<td>Mab</td>
			<td>NET17-1</td>
			<td>Host: Mouse; 1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-PRPH antibody</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>SC-377093/H0112</td>
			<td>Host: Mouse IgG2a; 1:200 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-SOX10 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab50839</td>
			<td>Host: Mouse; 1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-TH antibody</td>
			<td>Pel-Freez</td>
			<td>P40101- 150</td>
			<td>Host: Rabbit; 1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ascorbic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A8960-5G</td>
			<td>Stock concentration: 100 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 supplement</td>
			<td>Thermo Fisher/Life Technologies</td>
			<td>12587-010</td>
			<td>Stock concentration: 50x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BDNF</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>248-BD</td>
			<td>Stock concentration: 10 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BMP4</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>314-BP</td>
			<td>Stock concentration: 6 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counter</td>
			<td>Thermo Fisher/Life Technologies</td>
			<td>Countess II</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counting chamber slides</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>C10312</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>57021&#38;5424R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHIR99021</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>4423</td>
			<td>Stock concentration: 6 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryo-vial</td>
			<td>Thermo Fisher/Life Technologies</td>
			<td>375353</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dbcAMP</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D0627</td>
			<td>Stock concentration: 100 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Thermo Fisher/Life Technologies</td>
			<td>10829-018</td>
			<td>Stock concentration: 1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Thermo Fisher/Life Technologies</td>
			<td>11330-057</td>
			<td>Stock concentration: 1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Thermo Fisher/Life Technologies</td>
			<td>BP231-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E6 medium</td>
			<td>gibco</td>
			<td>A15165-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E8 medium</td>
			<td>gibco</td>
			<td>A15169-01</td>
			<td>Stock concentration: 1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E8 supplement</td>
			<td>gibco</td>
			<td>A15171-01</td>
			<td>Stock concentration: 50x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>ED2SS</td>
			<td>Stock concentration: 0.5 M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrophysiology plates (AXION cytoview MEA96)</td>
			<td>Axion BioSystems</td>
			<td>M768-tMEA-96W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS machine</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>CytoFLEX (for FACS)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS machine</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>MoFlo Astrios EQ (for sorting)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS tubes (blue filter cap)</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS tubes (white cap)</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Atlanta Biologicals</td>
			<td>S11150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GDNF</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>450</td>
			<td>Stock concentration: 10 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Geltrex</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A1413202</td>
			<td>Basement membrane matrix; Stock concentration: 100x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hPSCs</td>
			<td>Thomson et al., (1998)</td>
			<td>WA09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hPSCs</td>
			<td>Oh et al. (2016)</td>
			<td>H9-PHOX2B::eGFP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human fibronectin (FN)</td>
			<td>VWR/Corning</td>
			<td>47743-654</td>
			<td>Stock concentration: 1 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Thermo Fisher/Gibco</td>
			<td>25030-081</td>
			<td>Stock concentration: 200 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LN tank</td>
			<td>Custom Biogenic Systems</td>
			<td>V-1500AB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEA reader</td>
			<td>Axion BioSystems</td>
			<td>Maestro Pro</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse laminin I (LM)</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>3400-010-01</td>
			<td>Stock concentration: 1 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 supplement</td>
			<td>Thermo Fisher/Life Technologies</td>
			<td>17502-048</td>
			<td>Stock concentration: 100x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal medium</td>
			<td>gibco</td>
			<td>21103-049</td>
			<td>Stock concentration: 1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NGF</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>450-01</td>
			<td>Stock concentration: 25 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline (PBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-136</td>
			<td>Stock concentration: 1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-ornithine hydrobromide (PO)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3655</td>
			<td>Stock concentration: 15 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primocin (antibiotics)</td>
			<td>InvivoGen</td>
			<td>ANTPM1</td>
			<td>Stock concentration: 50 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>qPCR machine</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories</td>
			<td>C1000 Touch</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>qPCR plates</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories</td>
			<td>HSP9601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>recombinant FGF2</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>233-FB/CF</td>
			<td>Stock concentration: 10 &#956;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retinoic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R2625</td>
			<td>Stock concentration: 1 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB431542</td>
			<td>Tocris/R&#38;D Systems</td>
			<td>1614</td>
			<td>Stock concentration: 10 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MT-25-900-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitronectin (VTN)</td>
			<td>Thermo Fisher/Life Technologies</td>
			<td>A14700</td>
			<td>Stock concentration: 0.5 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>VWR/Corning</td>
			<td>706308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y27632</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>1254</td>
			<td>Stock concentration: 10 mM</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

efficient differentiation of postganglionic sympathetic neurons using human pluripotent stem cells under feeder-free and chemically defined culture conditions

Mänskliga pluripotenta stamceller (hPSC) har blivit ett kraftfullt verktyg för sjukdomsmodellering och studiet av människans embryonala utveckling in vitro. Vi presenterade tidigare en differentiering protokoll för härledning av autonoma nervceller med sympatisk karaktär som har tillämpats på patienter med autonoma neurotoxiskt. Protokollet byggdes dock på Knock Out Serum Replacement (KSR) och feeder-baserade odlingsförhållanden, och för att säkerställa hög differentieringseffektivitet var cellsortering nödvändig. Dessa faktorer orsakar hög variation, höga kostnader och låg reproducerbarhet. Dessutom har mogna sympatiska egenskaper, inklusive elektrisk aktivitet, inte verifierats. Här presenterar vi ett optimerat protokoll där PSC-kultur och differentiering utförs i matarfria och kemiskt definierade kulturförhållanden. Genetiska markörer identifiera bålen neurala krönet identifieras. Ytterligare differentiering i postganglionic sympatiska nervceller uppnås efter 20 dagar utan behov av cellsortering. Elektrofysiologisk inspelning visar ytterligare den funktionella neuronidentiteten. Bränning upptäcks från våra differentierade nervceller kan förbättras genom nikotin och undertrycks av adrenerga receptorn antagonist propranolol. Mellanliggande sympatiska neurala stamceller i detta protokoll kan upprätthållas som neurala sfäroider i upp till 2 veckor, vilket möjliggör expansion av kulturerna. Sammanfattningsvis visar vår uppdaterade sympatiska neuron differentiering protokoll hög differentiering effektivitet, bättre reproducerbarhet, mer flexibilitet, och bättre neural mognad jämfört med den tidigare versionen. Detta protokoll kommer att ge forskarna de celler som behövs för att studera mänskliga sjukdomar som påverkar det autonoma nervsystemet.

I det här protokollet ger vi instruktioner om hur du genererar symN från hPSC. De kulturförhållanden som demonstrerades här förbättrades från ett tidigare publicerat protokoll23,,24 (figur 1A)till matarfria och kemiskt definierade förhållanden (figur 1B). Två alternativ finns, ett där symN görs inom 20 dagar, och ett annat där de nationella centralbankerna kan utökas i 2 veckor för att ge...

Watch this Scientific Journal Video about Efficient Differentiation of Postganglionic Sympathetic Neurons using Human Pluripotent Stem Cells under Feeder-free and Chemically Defined Culture Conditions

Efficient Differentiation of Postganglionic Sympathetic Neurons using Human Pluripotent Stem Cells under Feeder-free and Chemically Defined Culture Conditions

I detta protokoll beskriver vi en stabil, mycket effektiv differentiering strategi för generering av postganglionic sympatiska nervceller från mänskliga pluripotenta stamceller. Denna modell kommer att göra nervceller tillgängliga för användning av studier av flera autonoma sjukdomar.

Effektiv differentiering av postganglitoniska sympatiska nervceller med hjälp av mänskliga pluripotenta stamceller under Feeder-fria och kemiskt definierade kulturförhållanden

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have become a powerful tool for disease modeling and the study of human embryonic development in vitro. We previously ...

Detta protokoll gör det möjligt härledning av sympatiska nervceller från mänskliga pluripotenta stamceller. Dessa celler kommer att göra det möjligt för en forskare att studera mänskliga sjukdomar som påverkar det sympatiska nervsystemet. Denna teknik gör härledning av sympatiska nervceller i uppdelade feeder-free mötesförhållanden vid en hög skalbar effektivitet.Det resulterar i elektriskt aktiva nervceller i 20 dagar. Denna teknik kan tillämpas på sjukdomar som orsakas av en dysfunktionell sympatiska nervsystemet, Det också kan användas för sjukdom modellering, regenerativ medicin, och drog screening. Dessa celler skulle kunna användas in vitro för att förnya någon vävnad inom ett samkultursystem, till exempel för studier av hjärtvävnadsreglering.När den mänskliga pluripotenta stamcellskulturen når 80 till 90%konfluency, bör stora kolonier med släta ljusa kanter observeras. För klyvning, tvätta kulturen med PBS innan du behandlar cellerna med fyra milliliter på 0,25 molar EDTA vid 37 grader Celsius och 5%koldioxid. Efter två minuter spolar du plattan med 10 milliliter E8-medium och överför den fristående cellupphängningen till ett koniskt rör på 15 milliliter.Överför sedan 500 mikroliter celler till en 9,5 milliliter alikvot av färskt E8-medium. Och tallrik stamcellerna på nya vitronectin belagda 100 millimeters rätter. En dag före differentiering induktion, päls lämpligt antal sex brunnsplattor med två milliliter av källaren membran matris per brunn.Och förvara plattorna i fyra grader Celsius över natten. Nästa morgon, värma plattorna till rumstemperatur och tvätta redo att dela mänskliga pluripotenta stamcellskultur två gånger med färska PBS per tvätt. Efter den andra tvätten, behandla cellerna med sju milliliter på 0,5 millimolar EDTA i 15 minuter i cellodlingsinkubatorn innan de aspirerar de flytande mänskliga pluripotenta stamcellerna och överför de skördade cellerna till ett 50 milliliterrör.Tillsätt en lika stor volym PBS till röret för att späda ut EDTA och samla in cellerna genom centrifugeringen. Resuspend pelleten i en milliliter av dag 01 differentieringsmedium innan du lägger till en lämplig volym medium för redovisning. Späd cellerna till en 1,25 gånger 10 till den femte celler per kvadratcentimeter koncentration i milliliter av differentiering medium per brunn.Aspirera alla källaren membranmatrislösning från varje brunn av den tidigare beredda till sex väl platta. Sedan utsäde två milliliter celler i varje brunn och placera plattan i cellkulturen inkubatorn. Nästa morgon, mata cellerna med tre milliliter dag 01 differentiering medium per brunn.På dag två av differentiering, mata cellerna med tre milliliter dag två till 10 differentiering medium per brunn, mata sedan cellerna varannan dag fram till dag 10. För att aggregera neurala crest celler i sfäroider, på dag 10, tvätta cellerna med PBS. Och tillsätt två milliliter dissociation medium till varje brunn.Efter 20 minuter i inkubatorn för cellodlingen, överför du de flytande cellerna till ett koniskt rör på 50 milliliter och för upp suspensionens volym i röret till 50 milliliter med färsk PBS. Samla in cellerna genom centrifugeringen. Och resuspend pelleten i en tillräcklig volym av dag 10 till 14 sfäroid medium för räkning.Efter räkning, späd cellerna till en fem gånger 10 till de femte cellerna per 500 mikroliter koncentration med hjälp av dag 10 till 14 sfäroid medium. Och platta 500 mikroliter celler i varje brunn av en ultra låg fastsättning 24-brunnsplatta. Sedan tillbaka cellerna till cellodlingen inkubatorn.För att inducera en minimal sfäroid kultur, på dag 11 av kultur, mata neurala krönet sfäroider med ytterligare 500 mikroliter dag 10 till 14 sfäroid medium per brunn. På dag 12, luta plattan för att ackumulera sfäroiderna på ena sidan av plattan. Och försiktigt aspirera så mycket medium som möjligt från varje brunn utan att aspirera sfäroider.Mata sedan sfäroiderna med en milliliter dag 10 till 14 sfäroid medium per brunn. För att inducera en utökad sfäroidkultur, på dag 15, mata sfäroiderna med 1,5 milliliter dag 10 till 14 sfäroid medium kompletterat med 0,5 mikromolar retinoinsyra per brunn. Sedan tillbaka sfäroiderna till cellkulturens inkubator.För sympatisk neuron differentiering, på dag 14 eller 28, luta plattan för att ackumulera sfäroiderna på ena sidan av plattan och försiktigt aspirera så mycket medium som möjligt. Mata cellerna med en milliliter av sympatiskt neuron medium. För att bryta upp stora sfäroid aggregat i mindre sfäroider, tillsätt inte mer än en milliliter medium per brunn och pipettera sfäroiderna fem till 10 gånger innan uppdelning.Och ta bort överskottet laminin fibronectin från tidigare beredda 24-brunnsplattor. Dela plattan en milliliter av sfäroider från varje brunn på 24-brunnar sfäroid kultur plattan mellan fyra separata brunnar av den nya belagda 24-brunnsplattan. Lägg till 250 mikroliter av färskt sympatiskt neuron medium till varje brunn.Och placera plattan i cellkulturens inkubator. Nästa morgon, ersätta mediet i varje brunn med en milliliter av sympatisk neuron medium kompletteras med 0,125 mikromolar retinoinsyra och returnera plattan till cellkulturen inkubatorn. Efter dag 35, mata nervceller genom att noggrant ersätta endast hälften av det befintliga mediet i varje brunn med färskt medium.Före differentiering bör de mänskliga pluripotenta stamcellskolonierna vara runda med blanka, släta kanter och liten till ingen differentiering. Cellerna uttrycker neurala krönet markör Sox10 från dag fyra till 10. Neurala crest celler framträder i tät förmörkad åsar som är synliga från dag sex på.Dessa åsar uttrycker också Sox10. På neurala crest celler skede, Sox10 korrelerar med cellytan markör CD49D, som kan användas för att sortera neurala crest celler. Positiva sorterade och osorterade populationer producerade neurala crest sfäroider på ett liknande sätt.Medan negativa sorterade celler inte aggregerar ordentligt, producerar inte runda, släta friska letar sfäroider och dör inom tre till fyra dagar. Dessutom, när neurala crest sfäroider jämförs på dag 14, den kvantitativa omvänd transkriptas PCR för neurala crest och sympatiska nerv progenitor markörer, betydande skillnader mellan sorterade och osorterade celler kan inte upptäckas. Dag 20 eller 35, respektive minimala eller utökade protokoll, neuroider kan observeras växer i ett radiellt mönster från de bifogade sfäroiderna.Markörer relaterade till noradrenalin syntes och transport uttrycks i detta skede, liksom Hox6 genom nio bål neurala crest gener. Elektrofysiologisk inspelning upptäcker också neural aktivitet från dag 20 på. Sådan aktivitet kan förstärkas eller undertryckas av läkemedel som riktar autoreceptorer av sympatiska nervceller justera funktionaliteten hos differentierade nervceller.Den mänskliga förespråkaren själva måste vara friska börjar på dag noll av differentiering, annars kommer experimentet sannolikt misslyckas. Farmakologiska hämmare eller aktivatorer kan läggas till neuronerna för att förstå deras normala eller patologiska beteende. Denna metod öppnar en ny väg för att studera sympatisk biologi och patologi eftersom det nu är möjligt att få biopsier av sympatiska nervceller från människor lätt.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Human Peripheral T Cells Using Sendai Virus in Feeder-free Conditions

Generering av inducerade pluripotenta stamceller från humana perifera T-celler med Sendai virus i Feeder fria förhållanden

Recently, iPSCs have attracted attention as a new source of cells for regenerative therapies. Although the initial method for generating iPSCs relied on ...

Feeder-free Derivation of Melanocytes from Human Pluripotent Stem Cells

Feeder-fria Derivering av Melanocyter från Human pluripotenta stamceller

Human pluripotent stem cells (hPSCs) represent a platform to study human development in vitro under both normal and disease conditions. Researchers can ...

Large-Scale Production of Cardiomyocytes from Human Pluripotent Stem Cells Using a Highly Reproducible Small Molecule-Based Differentiation Protocol

Storskalig produktion av Cardiomyocytes från Human pluripotenta stamceller med hjälp av en mycket reproducerbar liten molekyl baserad differentiering protokoll

Maximizing the benefit of human pluripotent stem cells (hPSCs) for research, disease modeling, pharmaceutical and clinical applications requires robust ...

Efficient Differentiation of Pluripotent Stem Cells to NKX6-1+ Pancreatic Progenitors

Efficient Differentiation of Pluripotent Stem Cells to NKX6-1+ Pancreatic Progenitors

Effektiv Differentiering av pluripotenta stamceller till NKX6-1<sup&gt; +</sup&gt; Pankreasstamfäder

Pluripotent stem cells have the ability to self renew and differentiate to multiple lineages, making them an attractive source for the generation of ...

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

In vitro-differentiering av mänskliga pluripotenta stamceller till trophoblastic celler

The placenta is the first organ to develop during embryogenesis and is required for the survival of the developing embryo. The placenta is comprised of ...

Defined and Scalable Generation of Hepatocyte-like Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Definierade och skalbar generation av hepatocyte-liknande celler från mänskliga pluripotenta stamceller

Human pluripotent stem cells (hPSCs) possess great value for biomedical research. hPSCs can be scaled and differentiated to all cell types found in the ...

Defined Xeno-free and Feeder-free Culture Conditions for the Generation of Human iPSC-derived Retinal Cell Models

Definierade Xeno-fri och Feeder-fri odlingsbetingelser för den Generation av mänskliga iPSC-derived Retinal cellmodeller

The production of specialized cells from pluripotent stem cells provides a powerful tool to develop new approaches for regenerative medicine. The use of ...

Efficient and Scalable Directed Differentiation of Clinically Compatible Corneal Limbal Epithelial Stem Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Effektiv och skalbar riktad differentiering av kliniskt kompatibel korneal limbala epitelial stamceller från mänskliga pluripotenta stamceller

Corneal limbal epithelial stem cells (LESCs) are responsible for continuously renewing the corneal epithelium, and thus maintaining corneal homeostasis ...

Efficient Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Liver Cells

Effektiv differentiering av humana pluripotenta stamceller till leverceller

The liver detoxifies harmful substances, secretes vital proteins, and executes key metabolic activities, thus sustaining life. Consequently, liver ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

I Vitro Generation av Somite derivat från mänskliga inducerade stamceller pluripotenta

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...