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•
10:35 min
January 30th, 2020
DOI :
10.3791/60848-v
Chapters
0:04
Introduction
0:27
Design and Assembly of pSUmC-4.0 with Homology Arms Specific to the Gene of Interest
2:20
Transformation of C. trachomatis with pSUmC 4.0 + Homology Arms for Gene Deletion by Allelic Exchange
5:54
Clonal Isolation of Green-only C. trachomatis Deletion Mutant Containing the loxP Flanked Selection Cassette by Limiting Dilution
7:38
Transformation of C. trachomatis FRAEM Mutant with pSU-Cre to Initiate Removal of loxP Flanked Selection Cassette
8:42
Results: FLAEM Enables Markerless Gene Deletion in C. trachomatis and alleviates Cassette-induced Polar Effects
9:47
Conclusion
Transcript
凝集カセットのアレリック交換変異誘発は、遺伝子欠失が遺伝子産物の機能を理解するために利用できる貴重なツールであるため、重要な方法です。この技術の主な利点は、下流の遺伝子に極性効果を与えることなく標的遺伝子欠失を可能にすることです。5つの素数および3つの相同性組換え用の主要相同性アームとして機能する欠失をターゲットとする遺伝子の約3キロベース領域を直接上流および下流に特定し、テキストプロトコルに示すようにプライマーを割り当てます。
1つまたは2つの反応で、抽出したばかりのクラミジ
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Summary
ここで説明する、フラミジア・トラコマティスにおける標的化されたマーカーレス遺伝子欠失の方法であり、フロキサセット対立遺伝子交換変異誘発、FLAEMを用いた。
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