Deze video toont de dissectie techniek en relevante anatomische oriëntatiepunten voor de grote bekken ganglion en de bijbehorende autonome zenuwen in de mannelijke en vrouwelijke rat. De eerste dissectie wordt getoond voor de linkerkant van een mannelijke rat onmiddellijk postmortem. Toegang tot de buik en het bekken door middel van een ventrale middellijn incisie.
Beweeg de buikorganen voorzichtig naar de ene kant met behulp van tangen of katoen getipt applicators. Let op de locatie van de ventrale lobben van de prostaatklier en de urineblaas. Verplaats de zaadblas naar de contralaterale kant.
Snijd de vas deferens om een betere toegang tot het gebied boven het ganglion te bieden. Vanaf dit punt van de dissectie mag het weefsel niet uitdrogen, dus houd het weefsel vochtig met fysiologische zoutoplossing. Om het ganglion te visualiseren, zorgvuldig weg te ruimen weefsels in de buurt en boven het ganglion.
Gebruik indien nodig een oprolmechanisme om het dissectieveld vrij te houden. Verwijder een nabijgelegen aggregaat van vetweefsel en open de laterale fascia van het bekken. Identificeer de bekkenzenuw door het visualiseren van de interne iliacale ader en het is fijne tak projecteren in de richting van de grote bekken ganglion en de blaas.
Deze tak loopt parallel aan en soms ingebed in de bekkenzenuw dan doorkruist de ganglion. Plaats de fijne schuine tangen voorzichtig onder de bekkenzenuw en schuif de tangen mee om het te bevrijden van het omringende weefsel. Het kan ook mogelijk zijn om de bekkenzenuw te isoleren van het kleine vat dat parallel aan het loopt.
Identificeer de holle zenuw door het volgen van de bekkenzenuw naar de kruising met de ganglion volg dan de holle zenuw als het reist over de prostaat en vervolgens caudally naar de holle lichamen van de penis. Identificeer waar de hypogastrische zenuw zich aansluit bij de ganglion aan deze schedelrand na het reizen naast de urineleider. Identificeer de belangrijkste bekken ganglion en bevestig de locatie van elke belangrijke zenuw.
Identificeer de accessoire zenuwen aan de ventrale rand van de ganglion projecteren in de richting van de urine-en reproductieve traktaten. Om het grote bekken ganglion met de bijbehorende zenuwen te verwijderen, zachtjes schuiven tussen het ganglion en de onderliggende prostaatklier wordt voorzichtig niet te punctie de dunne capsule van de prostaat. Duidelijk eventuele laatste verbindingen met de omliggende weefsels dan snijd elke zenuw.
Verplaats de ganglion met zijn zenuwen naar de juiste oplossing voor uw experiment en bevestigen dat elk van de belangrijkste zenuwen intact zijn. De tweede dissectie wordt getoond voor de linkerkant van een vrouwelijke rat onmiddellijk postmortem. Beweeg de buikorganen voorzichtig naar de ene kant wijzend op de locatie van de baarmoederhoorn, urineblaas en rectum.
Snijd de eierstokken en baarmoedervaten en trek de baarmoederhoorn in. Voer de buikvliesruimte in en ruim een aggregaat van vetweefsel in de buurt van de baarmoederhals voorzichtig op. Identificeer de zijwand van de baarmoedercervix net caudal aan de kruising met de baarmoeder hoorns.
Deze regio is de belangrijkste mijlpaal voor het definiëren van de belangrijkste bekken ganglion locatie op rostrocaudal as van het dier. Verwijder zorgvuldig elk weefsel dat het volledige zicht op de neurale structuren belemmert en tegelijkertijd schade aan grote bloedvaten vermijdt. Identificeer de bekkenzenuw door het vinden van de interne iliacale ader en de fijne tak projecteren naar de grote bekken ganglion en de blaas.
Deze tak loopt parallel aan en soms ingebed in de bekkenzenuw dan dwarsen de ganglion. Identificeer de hypogastrische zenuw waar het zich aansluit bij de ganglion aan de schedelrand na het reizen langs de urineleider. Identificeer de holle zenuw door het volgen van de bekkenzenuw naar de kruising met de ganglion volg dan de holle zenuw als het reist caudally langs de laterale wand van de baarmoederhals naar de vagina.
De accessoire zenuwen zijn moeilijk te zien, maar project van de mediale aspect van de grote bekken ganglion. Ten slotte, identificeer de belangrijkste bekken ganglion en bevestig de locatie van elke belangrijke zenuw. Om het grote bekkenganglion met zijn bijbehorende zenuwen te verwijderen, schuift u zachtjes tussen het ganglion en de onderliggende baarmoederhals en verstoort u eventuele verbindingen tussen het ganglion en de baarmoederhals.
Duidelijk eventuele definitieve verbindingen met omliggende weefsels voor de lengtes van zenuwen die nodig zijn voor het experiment dan snijd elke zenuw. Verplaats de ganglion met zijn zenuwen naar de juiste oplossing voor uw experiment en bevestigen dat elk van de belangrijkste zenuwen intact zijn. Een voorbeeld van de grote bekken ganglion structuur wordt hier geïllustreerd met verschillende kenmerken van formaldehyde-vaste ganglia met behulp van conventionele immunohistochemie.
Dit beeld toont het volledige belangrijke bekkenganglion met zijn bijbehorende zenuwen die als volledige dikte gehele berg worden gevisualiseerd. Dit beeld toont een cryosection immunolabeled om noradrenergic neuronen aan te tonen door hun expressie van tyrosine hydroxylase. Dit beeld toont cholinerge neuronen gevisualiseerd door hun expressie van neuronale stikstofmonoxide synthase.
Tot slot, dit protocol en aanverwante schema's bieden onderzoekers die geïnteresseerd zijn in bekken viscerale functie met de instrumenten om te identificeren en ontleden de belangrijkste bekken ganglion in mannelijke en vrouwelijke ratten. Deze vaardigheden kunnen worden toegepast op vele soorten in vitro en in vivo experimentele manipulatie.
