Este vídeo mostrará a técnica de dissecção e marcos anatômicos relevantes para o gânglio pélvico e nervos autônomos associados no rato macho e feminino. A primeira dissecação é mostrada para o lado esquerdo de um rato macho imediatamente após a morte. Acesse o abdômen e a pélvis através de uma incisão de linha média ventral.
Mova suavemente os órgãos abdominais para um lado usando fórceps ou aplicadores de ponta de algodão. Observe a localização dos lobos ventral da próstata e da bexiga urinária. Mova a vesícula seinal para o lado contralateral.
Corte os vas deferens para fornecer melhor acesso à área sobreo gânglio. A partir deste ponto da dissecção, o tecido não deve secar, por isso mantenha o tecido úmido com soro fisiológico. Para visualizar o gânglio, limpe cuidadosamente os tecidos próximos e sobrelavelmente o gânglio.
Se necessário, use um retrátil para manter o campo de dissecção limpo. Remova um agregado próximo do tecido adiposo e abra a fáscia lateral da pelve. Identifique o nervo pélvico visualizando a veia ilícíaca interna e seu ramo fino projetando-se em direção ao gânglio pélvico principal e à bexiga.
Este ramo corre paralelamente e às vezes embutido dentro do nervo pélvico, em seguida, atravessa o gânglio. Coloque suavemente fórceps finos inclinados sob o nervo pélvico e deslize os fórceps junto para libertá-lo do tecido circundante. Também pode ser possível isolar o nervo pélvico do pequeno vaso que corre paralelamente a ele.
Identifique o nervo cavernoso seguindo o nervo pélvico até sua junção com o gânglio e siga o nervo cavernoso enquanto ele viaja através da próstata e, em seguida, caudaly em direção aos corpos cavernosos do pênis. Identifique onde o nervo hipogástrico se junta ao gânglio nesta borda craniana depois de viajar ao lado do ureter. Identifique o gânglio pélvico principal e confirme a localização de cada nervo principal.
Identifique os nervos acessórios na borda ventral do gânglio projetando-se em direção aos tratos urinário e reprodutivo. Para remover o gânglio pélvico com seus nervos associados, deslize suavemente fórceps entre o gânglio e a glândula próstata subjacente tomando cuidado para não perfurar a fina cápsula da próstata. Limpe todas as conexões finais com os tecidos circundantes e corte cada nervo.
Mova o gânglio com seus nervos para a solução apropriada para o seu experimento e confirme que cada um dos nervos principais está intacto. A segunda dissecação é mostrada para o lado esquerdo de um rato fêmea imediatamente após a morte. Mova suavemente os órgãos abdominais para um lado observando a localização do chifre uterino, bexiga urinária e reto.
Corte os vasos ovariano e uterino e retraia o chifre uterino. Entre no espaço peritoneal e limpe suavemente um agregado de tecido adiposo localizado perto do colo uterino. Identifique a parede lateral do colo uterino apenas caudal à sua junção com os chifres uterinos.
Esta região é o principal marco para a definição da localização do gânglio pélvico no eixo rostrocaudal do animal. Remova cuidadosamente qualquer tecido que impeça a visão completa das estruturas neurais, evitando danos aos vasos principais. Identifique o nervo pélvico encontrando a veia ilícíaca interna e seu ramo fino projetando-se em direção ao gânglio pélvico principal e à bexiga.
Este ramo corre paralelamente e às vezes incorporado dentro do nervo pélvico, em seguida, transversa o gânglio. Identifique o nervo hipogástrico onde ele se junta ao gânglio em sua borda craniana depois de viajar ao lado do ureter. Identifique o nervo cavernoso seguindo o nervo pélvico até sua junção com o gânglio e siga o nervo cavernoso enquanto ele viaja caudalmente ao longo da parede lateral do colo uterino em direção à vagina.
Os nervos acessórios são difíceis de ver, mas projetam a partir do aspecto medial do gânglio pélvico principal. Finalmente, identifique o gânglio pélvico principal e confirme a localização de cada nervo principal. Para remover o gânglio pélvico com seus nervos associados, deslize suavemente fórceps entre o gânglio e o colo do útero subjacente e interrompa quaisquer conexões entre o gânglio e o colo do útero.
Limpe quaisquer conexões finais com tecidos circundantes para os comprimentos dos nervos necessários para o experimento e corte cada nervo. Mova o gânglio com seus nervos para a solução apropriada para o seu experimento e confirme que cada um dos nervos principais está intacto. Um exemplo da maior estrutura gânglio pélvico é ilustrado aqui mostrando várias características de gânglios fixos por formaldeído usando imunohistoquímica convencional.
Esta imagem mostra todo o gânglio pélvico com seus nervos associados visualizados como uma espessura total de montagem. Esta imagem mostra uma criosecção imunolaterada para demonstrar neurônios noradrenérgicos por sua expressão de hidroxilase de tyrosina. Esta imagem mostra neurônios colinérgicos visualizados por sua expressão de sinthase de óxido nítrico neuronal.
Em conclusão, este protocolo e esquemas relacionados fornecem aos pesquisadores interessados na função visceral pélvica com as ferramentas para identificar e dissecar o gânglio pélvico principal em ratos machos e fêmeas. Essas habilidades podem ser aplicadas a muitos tipos de manipulação experimental in vitro e in vivo.
