Name: using an automated hirschberg test app to evaluate ocular alignment
Uploaded: 2020-03-24T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using an Automated Hirschberg Test App to Evaluate Ocular Alignment at JoVE.com

وقد تم دعم هذا العمل جزئيا من قبل المعاهد القومية للصحة منحة R44EY025902 وبواسطة العين الشامل والأذن علاج الأطفال منحة.

وقد أجريت هذه الدراسة وفقا لمبادئ إعلان هلسنكي، في معهد شيبينز لبحوث العيون (بوسطن، ماجستير) ومستشفى سبولدينغ لإعادة التأهيل (بوسطن، ماجستير). وتم الحصول على موافقة مستنيرة من جميع المشاركين. تمت الموافقة على الدراسة من قبل مجالس المراجعة المؤسسية المحلية للعيون والأذن الشامل (بوسطن، MA).</...

<ol>
	<li>Kemper, A. R., Clark, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preschool+vision+screening+in+pediatric+practices.">Preschool vision screening in pediatric practices.</a> Clinical Pediatrics. 45 (3), 263-266 (2006).</li><li>Rowe, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+profile+of+strabismus+in+stroke+survivors.">The profile of strabismus in stroke survivors.</a> Eye. 24 (4), 682-685 (2010).</li><li>Black, K., McCarus, C., Collins, M. L. Z., Jensen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+Manifestations+of+Autism+in+Ophthalmology.">Ocular Manifestations of Autism in Ophthalmology.</a> Strabismus. 21 (2), 98-102 (2013).</li><li>Taylor, K., Elliott, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interventions+for+strabismic+amblyopia.">Interventions for strabismic amblyopia.</a> Cochrane Database of Systematic Reviews. 10 (8), (2011).</li><li>Cotter, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fixation+preference+and+visual+acuity+testing+in+a+population-based+cohort+of+preschool+children+with+amblyopia+risk+factors.">Fixation preference and visual acuity testing in a population-based cohort of preschool children with amblyopia risk factors.</a> Ophthalmology. 116 (1), 145-153 (2009).</li><li>Robaei, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+Associated+with+Childhood+Strabismus:+Findings+from+a+Population-Based+Study.">Factors Associated with Childhood Strabismus: Findings from a Population-Based Study.</a> Ophthalmology. 113 (7), 1146-1153 (2006).</li><li>Tarczy-Hornoch, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+factors+for+decreased+visual+acuity+in+preschool+children:+the+multi-ethnic+pediatric+eye+disease+and+Baltimore+pediatric+eye+disease+studies.">Risk factors for decreased visual acuity in preschool children: the multi-ethnic pediatric eye disease and Baltimore pediatric eye disease studies.</a> Ophthalmology. 118 (11), 2262-2273 (2011).</li><li>Chan, K. W., Deng, L., Weissberg, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+Strabismus+by+Non-Health+Care+Professionals+in+an+Ethnically+Diverse+Set+of+Images.">Detection of Strabismus by Non-Health Care Professionals in an Ethnically Diverse Set of Images.</a> JAMA Ophthalmology. 134 (1), 30-36 (2016).</li><li>Hunter, D. G., Guyton, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vertical+location+of+the+corneal+light+reflex+in+strabismus+photography.">Vertical location of the corneal light reflex in strabismus photography.</a> Archives of Ophthalmology. 116 (6), 767-771 (1998).</li><li>Eskridge, J. B., Wick, B., Perrigin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Hirschberg+test:+a+double-masked+clinical+evaluation.">The Hirschberg test: a double-masked clinical evaluation.</a> American Journal of Optometry and Physiological Optics. 65 (9), 745-750 (1988).</li><li>Hasebe, S., Ohtsuki, H., Tadokoro, Y., Okano, M., Furuse, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+reliability+of+a+video-enhanced+Hirschberg+test+under+clinical+conditions.">The reliability of a video-enhanced Hirschberg test under clinical conditions.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 36 (13), 2678-2685 (1995).</li><li>Pundlik, S., Tomasi, M., Liu, R., Houston, K., Luo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+Preliminary+Evaluation+of+a+Smartphone+App+for+Measuring+Eye+Alignment.">Development and Preliminary Evaluation of a Smartphone App for Measuring Eye Alignment.</a> Translational Vision Science &amp; Technology. 8 (1), 19 (2019).</li><li>Cheng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EyeTurn+App+for+School+Vision+Screening.">The EyeTurn App for School Vision Screening.</a> American Academy of Optometry Annual Meeting. , (2018).</li><li>Committee on Practice and Ambulatory Medicine and Section on Ophthalmology. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Photoscreening+for+Children's+Vision+Screening.">Use of Photoscreening for Children's Vision Screening.</a> Pediatrics. 109 (3), 524-525 (2002).</li><li>Simons, B. D., Siatkowski, R. M., Schiffman, J. C., Berry, B. E., Flynn, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pediatric+photoscreening+for+strabismus+and+refractive+errors+in+a+high-risk+population.">Pediatric photoscreening for strabismus and refractive errors in a high-risk population.</a> Ophthalmology. 106 (6), 1073-1080 (1999).</li><li>Kerr, N. C., Somes, G., Enzenauer, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+developmentally-at-risk+status+on+the+reliability+of+the+iScreen(R)+photorefractive+device+in+young+children.">The effect of developmentally-at-risk status on the reliability of the iScreen(R) photorefractive device in young children.</a> The American Journal of Orthopedics. 61, 117-123 (2011).</li><li>Arnold, R. W., O'Neil, J. W., Cooper, K. L., Silbert, D. I., Donahue, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+smartphone+photoscreening+app+to+detect+refractive+amblyopia+risk+factors+in+children+aged+1-6+years.">Evaluation of a smartphone photoscreening app to detect refractive amblyopia risk factors in children aged 1-6 years.</a> Clinical Ophthalmology. 12, 1533-1537 (2018).</li></ol>

يمكن للشخص الذي لا يحصل على تدريب مهني استخدام تطبيق EyeTurn لالتقاط صور للعيون والحصول على قياسات محاذاة العين ، والتي قد يفسرها أخصائي رعاية العيون في الموقع أو عن بعد. يوفر التطبيق فقط حجم المحاذاة ، بدلاً من أي تفسير أو تشخيص. يجب على أخصائيي العناية بالعيون مثل أطباء العيون أو أطباء العيو...

يتم قياس محاذاة العين بشكل متكرر في عيادات رعاية البصر. اختبار الغطاء مع تحييد المنشور هو الطريقة السريرية المستخدمة عادة لقياس درجة اختلال العين (strabismus). تتطلب هذه الطريقة درجة عالية من التدريب والخبرة. يصبح القياس الدقيق أكثر تحديًا عندما لا يتمكن المرضى من المشاركة الكاملة في الفحص مثل الأطفال الصغار1أو الأفراد الذين يعانون من إصابات في الدماغ أو السكتة الدماغية2أو إعاقات النمو3. وعلاوة على ذلك، هناك حاجة لاختبار محاذاة العين في الفحص المدرسي، لأن الترابيسموس يتطور خلال مرحلة الطفولة في ما يقدر بنحو 5-8٪ من سكان الولايات المتحدة4،وهو عامل خطر كبير للamblyopia مع حوالي 30-40٪ من حالات قصر النظر تعزى إلى strabismus5,,6,,7. ومع ذلك، عادة ما لا يتم تدريب ممرضات المدارس على إجراء اختبار الغطاء القياسي مع تحييد المنشور لهذا الفحص. بالنسبة للمهنيين غير العين الرعاية، تحديا إضافيا في فحص strabismus هو أن strabismus متقطعة (عدم المواءمة لا يتجلى دائما) وأصغر حجم من عدم المواءمة ليست واضحة بصريا (<15 ديوبتر المنشور [Ο])8.
في محاولة للتصدي للتحديات في الكشف عن وقياس التراص، قمنا بتطوير تطبيق الهاتف الذكي (EyeTurn) الذي ينفذ وأتمتة طريقة هيرشبيرغ الفوتوغرافية9 من خلال مقارنة إزاحة انعكاسات القرنية بين العينين. في حين أن طريقة هيرشبيرغ الفوتوغرافية التقليدية قد ثبت أن لديها استنساخ جيد في العيادات10،11، فإن تكلفة الأجهزة المستقلة المخصصة هي حاجز للتبني على نطاق واسع. من خلال توفير أداة سهلة الاستخدام لقياس محاذاة العين مع الهواتف الذكية القياسية ، فإننا نفترض أنه سيتم اعتمادها على نطاق واسع في فحص الرؤية المدرسية واستخدامها من قبل المتخصصين في الرعاية من غير العيون. وقد أظهرت دراسات التقييم السابقة لدينا أن قياس التطبيق يتسق مع المعيار السريري الحالي للمنشور واختبار الغطاء البديل12، لمقادير من esotropia وexotropia تصل إلى 60Ο. في دراسة تجريبية لفحص المدرسة، أظهرنا أيضا أن التطبيق يمكن أن تساعد ممرضة المدرسة الكشف عن الأطفال الذين يعانون من exotropia متقطعة الذين غاب عن بروتوكولات فحص الرؤية المدرسية القياسية13.
نسخة iOS من التطبيق متاحة حاليا للباحثين والأطباء عند الطلب لأغراض البحث. وقد شمل الطلبون حتى الآن ممرضات المدارس، وأطباء العيون لدى الأطفال، وأطباء العيون، وأطباء العيون، وأطباء العيون العصبية، وأخصائيي السُطب. الغرض من هذه المقالة هو مشاركة بروتوكولات التطبيق التفصيلية لاستخدام التطبيق لتقييم محاذاة العين في ظل ظروف عرض مختلفة ، وهي مسافة التثبيت القريبة والبعيدة ؛ مع وبدون تغطية العين لكسر الانصهار المناظير.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>EyeTurn</td>
			<td>EyeNexo</td>
			<td></td>
			<td>Smartphone app for measureing eye misalignment</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using an automated hirschberg test app to evaluate ocular alignment

تم تطوير تطبيق الهاتف الذكي لإجراء اختبار Hirschberg الفوتوغرافي الآلي لقياس موضوعي لاختلال العين. من خلال حساب الفرق في انعكاس القرنية الناتجة عن فلاش كاميرا الهاتف بالنسبة لمركز القزحية استنادًا إلى صور عالية الدقة ، يمكن للتطبيق قياس عدم التوافق بدقة أعلى بكثير من العين المجردة التي تؤدي اختبار Hirschberg. وقد تم التحقق من صحته في دراسة تقييم سريرية سابقة من خلال مقارنة الذهب السريري ة معيار المنشور واختبار الغطاء البديل. الهدف من هذه المقالة هو وصف تقنيات الاختبار فيما يتعلق بكيفية استخدام التطبيق لقياس محاذاة العين لمسافات التثبيت المختلفة ، بدون أو مع غطاء لكسر الانصهار ، وكذلك زاوية كابا ، بحيث يمكن للمستخدمين استخدام التطبيق لأداء ما يعادلها الاختبارات التي تتم عادة في العيادة باستخدام المناشير.

في هذا العمل، نصف البروتوكولات لتقييم محاذاة العين باستخدام تطبيق الهاتف الذكي الذي ينفذ اختبار هيرشبيرغ الفوتوغرافي. يتم عرض واجهة التطبيق في الشكل 1. يمكن للمستخدمين اختيار إجراء اختبار الغطاء أو قياس المريض مع كلتا العينين تركز على هدف في وقت واحد، إم...

Watch this Scientific Journal Video about Using an Automated Hirschberg Test App to Evaluate Ocular Alignment at JoVE.com

Using an Automated Hirschberg Test App to Evaluate Ocular Alignment

نحن نقدم بروتوكول استخدام تطبيق الهاتف الذكي لإجراء اختبار Hirschberg لقياس اختلال العين الواضح والمتقطع (strabismus) في ظل ظروف التثبيت القريبة والبعيدة.

استخدام تطبيق اختبار Hirschberg الآلي لتقييم محاذاة العين

A smartphone app has been developed to perform the automated photographic Hirschberg test for objective measurement of ocular misalignment. By computing ...

يمكن استخدام تطبيق الجوال الذي قمنا بتطويره لقياس الحولات للبحث أو للاستخدام السريري. هذه الطريقة، يسهل قياس الحول سهلة، والتي تتطلب حاليا التدريب واسعة النطاق والخبرة التي يتعين القيام بها باستخدام كاميرا الهاتف القياسية فقط وبرنامج التطبيق. في واجهة التطبيق ، يمكن للمستخدمين اختيار إجراء اختبار الغطاء أو قياس المريض مع كلتا العينين تركز على هدف في وقت واحد ، سواء على مسافة التثبيت القريب أو البعيد.لقياس tropia، مع لقطة واحدة في مع التثبيت القريب، وإطلاق التطبيق وتعيين الوضع إلى لا غطاء. حدد قرب ووضع الهاتف في اتجاه أفقي حوالي 40 سم من المريض على مستوى العين، مع الكاميرا الخلفية التي تواجه المريض. تعليمات المريض أن يركز على مصباح يدوي، والتي ينبغي أن تكون خارج في هذه المرحلة.للاختبارات التي تتطلب إقامة دقيقة، قم بلصق هدف التثبيت على الجزء الخلفي من الهاتف مباشرة تحت أو أعلى مصباح يدوي. عندما يؤكد المريض أنهم يركزون على الأزرار، اضغط على الزر المستدير لأخذ لقطة لتحليلها من قبل التطبيق. عند اكتمال التحليل، سوف تظهر التطبيق الحدود limbus الكشف عن، ومركز العين، وموقع انعكاس القرنية.بعد التحقق من أن هذه الميزات قد تم الكشف عن دون أخطاء واضحة، ومراقبة القياسات المتعلقة محاذاة العين. ثم اضغط على الزر حفظ لحفظ الاختبار الحالي في الهاتف، أو اضغط على زر السهم الخلفي لإعادة الاختبار. لقياس عدم المحاذاة العينية المتقطعة لتثبيت بعيد في التطبيق، قم بتعيين الوضع على اختبار Cover وحدد Far.أمسك الهاتف في اتجاه أفقي، حوالي 40 سم من المريض على مستوى العين مع كاميرا فلاش المتمركزة بين عيني المريض. تعليمات المريض للنظر فقط فوق الهاتف، إلى هدف حوالي ستة أمتار. يكون المريض تغطية عين واحدة واضغط على زر الجولة، والتطبيق سيبدأ الكشف.مع التأكد من أن المريض هو تثبيت بشكل صحيح، يكون لهم بسرعة إزالة انسداد. سيقوم التطبيق تلقائيا التقاط صورة بمجرد إزالة الانسداد. عند اكتمال التحليل، سوف تظهر التطبيق الحدود limbus الكشف عن، ومركز العين، وموقع انعكاس القرنية.بعد التحقق من أن هذه الميزات يتم الكشف عن الأخطاء واضحة، راجع نتائج القياس لمحاذاة العين في diopters المنشور، قبل حفظ البيانات أو تكرار الاختبار. لقياس زاوية كابا في التطبيق، حدد قياس زاوية كابا. ضع الهاتف في اتجاه المناظر الطبيعية حوالي 40 سنتيمترًا من المريض على مستوى العين ، وإرشاد المريض إلى استخدام العين ليتم اختبارها لتثبيتها على المصباح أثناء تغطية العين الأخرى.أثناء التأكد من أن المريض يتم تثبيت بشكل صحيح ، اضغط على الزر المستدير لالتقاط لقطة ، والتي سيتم تحليلها من قبل التطبيق. عند اكتمال التحليل، سوف تظهر التطبيق حد limbus الكشف عن، مركز العين، وموقع انعكاس القرنية. بعد التحقق من أن هذه الميزات يتم الكشف عن دون أخطاء واضحة، عرض نتائج القياس لزاوية كابا في درجة.في هذا التحليل التمثيلي ، تم الكشف عن حدود أطراف العينين وانعكاس القرنية للمصباح ، بشكل صحيح ، مما يشير إلى أن قياس محاذاة العين لا يخضع لخطأ تحليل الصورة. في هذه الحالة بالذات، كان المريض قد غادر exotropia كما هو واضح من أكبر تعويض انعكاس القرنية في العين اليسرى. التطبيق لم يبلغ عن العين التي انحرفت ومع ذلك، لأنه في حالات زاوية التطفل الصغيرة وزاوية كابا غير معروف، سيكون من غير الممكن الاعتماد عليها بالنسبة للتطبيق لتحديد العين المنحرفة.للمقارنة، هنا مثال دون الحول يظهر. في هذا التحليل، يمكن ملاحظة الكشف عن أطراف خاطئة. في حين أن الكشف عن انعكاس القرنية هو الصحيح، من الواضح أن الدائرة الخضراء لا تتطابق مع حدود أطراف، مما يشير إلى أن الاختبار يجب أن يتكرر.في هذا التحليل من 14 مواضيع, 10 عرضت المواضيع exotropia وأربعة مواضيع المقدمة مع exotropia. تحليل الانحدار الخطي، وكشف أن قياسات العين من زوايا الحول، كانت متسقة مع قياسات اختبار الغطاء السريري. عند استخدام التطبيق، هناك أمران مهمان يجب أن نضعهما في الاعتبار.واحد، تعيين اختبار الغطاء ووضع التثبيت بشكل صحيح لكل اختبار معين. اثنين، تحقق إذا كان الكشف عن ميزة العين هو الصحيح. التطبيق يسمح فقط قياس الحولات وأنها لا تعطي التشخيص.سيحتاج الأطباء إلى الجمع بين قياس العين مع قياسات الرؤية الأخرى لإجراء التشخيص.

using-an-automated-hirschberg-test-app-to-evaluate-ocular-alignment

Research

JoVE Journal

Medicine

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under physiologic conditions the endothelium is impermeable to albumin, so Evans blue bound albumin remains restricted within blood vessels. In pathologic conditions that promote increased vascular permeability endothelial cells partially lose their close contacts and the endothelium becomes permeable to small proteins such as albumin. This condition allows for extravasation of Evans Blue in tissues. A healthy endothelium prevents extravasation of the dye in the neighboring vascularized tissues. Organs with increased permeability will show significantly increased blue coloration compared to organs with intact endothelium. The level of vascular permeability can be assessed by simple visualization or by quantitative measurement of the dye incorporated per milligram of tissue of control versus experimental animal/tissue. Two powerful aspects of this assay are its simplicity and quantitative characteristics. Evans Blue dye can be extracted from tissues by incubating a specific amount of tissue in formamide. Evans Blue absorbance maximum is at 620 nm and absorbance minimum is at 740 nm. By using a standard curve for Evans Blue, optical density measurements can be converted into milligram dye captured per milligram of tissue. Statistical analysis should be used to assess significant differences in vascular permeability.

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

We are presenting an in vivo assay to test blood vessel permeability. This assay is based on intravenous injection of a dye and subsequent visualization of its diffusion into interstitial spaces.

على<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; الفحص لفحص الدم نفاذية سفينة

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under ...

Using Quantitative Real-time PCR to Determine Donor Cell Engraftment in a Competitive Murine Bone Marrow Transplantation Model

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules that regulate HSCs. In these transplant model systems, the function of HSCs is determined by the ability of these cells to engraft and reconstitute lethally irradiated recipient mice. Commonly, the donor cell contribution/engraftment is measured by antibodies to donor- specific cell surface proteins using flow cytometry. However, this method heavily depends on the specificity and the ability of the cell surface marker to differentiate donor-derived cells from recipient-originated cells, which may not be available for all mouse strains. Considering the various backgrounds of genetically modified mouse strains in the market, this cell surface/ flow cytometry-based method has significant limitations especially in mouse strains that lack well-defined surface markers to separate donor cells from congenic recipient cells. Here, we reported a PCR-based technique to determine donor cell engraftment/contribution in transplant recipient mice. We transplanted male donor bone marrow HSCs to lethally irradiated congenic female mice. Peripheral blood samples were collected at different time points post transplantation. Bone marrow samples were obtained at the end of the experiments. Genomic DNA was isolated and the Y chromosome specific gene, Zfy1, was amplified using quantitative Real time PCR. The engraftment of male donor-derived cells in the female recipient mice was calculated against standard curve with known percentage of male vs. female DNAs. Bcl2 was used as a reference gene to normalize the total DNA amount. Our data suggested that this approach reliably determines donor cell engraftment and provides a useful, yet simple method in measuring hematopoietic cell reconstitution in murine bone marrow transplantation models. Our method can be routinely performed in most laboratories because no costly equipment such as flow cytometry is required.

Determining donor cell engraftment presents a challenge in mouse bone marrow transplant models that lack well-defined phenotypical markers. We described a methodology to quantify male donor cell engraftment in female transplant recipient mice. This method can be used in all mouse strains for the study of HSC functions.

باستخدام الكمي في الوقت الحقيقي PCR لتحديد الجهات المانحة Engraftment خلية في التنافسية نموذج الفئران زرع نخاع العظم

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules ...

Using a Knee Arthrometer to Evaluate Tissue-specific Contributions to Knee Flexion Contracture in the Rat

Normal knee range of motion (ROM) is critical to well-being and allows one to perform basic activities such as walking, climbing stairs and sitting. Lost ROM is called a joint contracture and results in increased morbidity. Due to the difficulty of reversing established knee contractures, early detection is important, and hence, knowing risk factors for their development is essential. The rat represents a good model with which the effect of an intervention can be studied due to the similarity of rat knee anatomy to that of humans, the rat's ability to tolerate long durations of knee immobilization in flexion, and because mechanical data can be correlated with histologic and biochemical analysis of knee tissue.
Using an automated arthrometer, we demonstrate a validated, precise, reproducible, user-independent method of measuring the extension ROM of the rat knee joint at specific torques. This arthrometer can be used to determine the effects of interventions on knee joint ROM in the rat.

The goal of the protocol is to measure the extension range of motion of the rat knee. The effects of various diseases that increase the stiffness of the knee joint and the effectiveness of treatments can be quantified.

استخدام أرثروميتير ركبة تقييم المساهمات الخاصة بالانسجة إلى انكماش انثناء الركبة في الفئران

Normal knee range of motion (ROM) is critical to well-being and allows one to perform basic activities such as walking, climbing stairs and sitting. Lost ...

Sucrose Preference and Novelty-Induced Hypophagia Tests in Rats using an Automated Food Intake Monitoring System

The prevalence and incidence of depressive disorders are rising worldwide, affecting about 322 million individuals, underlining the need for behavioral studies in animal models. In this protocol, to study depression-like and anhedonic behavior in rats, the established sucrose preference and novelty-induced hypophagia tests are combined with an automated food and liquid intake monitoring system. Prior to testing, in the sucrose preference paradigm, male rats are trained for at least 2 days to consume a sucrose solution in addition to tap water. During the test, rats are again exposed to water and sucrose solution. Consumption is registered every second by the automated system. The ratio of sucrose to total water intake (sucrose preference ratio) is a surrogate parameter for anhedonia. In the novelty-induced hypophagia test, male rats undergo a training period in which they are exposed to a palatable snack. During training, rodents show a stable baseline snack intake. On test day, the animals are transferred from home cages into a fresh, empty cage representing a novel unknown environment with access to the known palatable snack. The automated system records the total intake and its underlying microstructure (e.g., latency to approaching the snack), providing insight into anhedonic and anxious behaviors. The combination of these paradigms with an automated measuring system provides more detailed information, along with higher accuracy by reducing measuring errors. However, the tests use surrogate parameters and only depict depression and anhedonia in an indirect manner.

Presented here is a protocol to study depression-like and anhedonic behavior in rats. It combines two well-established behavioral methods, the sucrose preference and novelty-induced hypophagia tests, with an automated food and liquid intake monitoring system, to indirectly investigate rodent behavior using surrogate parameters.

Sucrose تفضيل واختبارات نقص في بphagia الناجمة عن الجدة في الفئران باستخدام نظام رصد الغذائية الآلي

The prevalence and incidence of depressive disorders are rising worldwide, affecting about 322 million individuals, underlining the need for behavioral ...

Endothelial Cell Transcytosis Assay as an In Vitro Model to Evaluate Inner Blood-Retinal Barrier Permeability

Dysfunction of the blood-retinal barrier (BRB) contributes to the pathophysiology of several vascular eye diseases, often resulting in retinal edema and subsequent vision loss. The inner blood-retinal barrier (iBRB) is mainly composed of retinal vascular endothelium with low permeability under physiological conditions. This feature of low permeability is tightly regulated and maintained by low rates of paracellular transport between adjacent retinal microvascular endothelial cells, as well as transcellular transport (transcytosis) through them. The assessment of retinal transcellular barrier permeability may provide fundamental insights into iBRB integrity in health and disease. In this study, we describe an endothelial cell (EC) transcytosis assay, as an in vitro model for evaluating iBRB permeability, using human retinal microvascular endothelial cells (HRMECs). This assay assesses the ability of HRMECs to transport transferrin and horseradish peroxidase (HRP) in receptor- and caveolae-mediated transcellular transport processes, respectively. Fully confluent HRMECs cultured on porous membrane were incubated with fluorescent-tagged transferrin (clathrin-dependent transcytosis) or HRP (caveolae-mediated transcytosis) to measure the levels of transferrin or HRP transferred to the bottom chamber, indicative of transcytosis levels across the EC monolayer. Wnt signaling, a known pathway regulating iBRB, was modulated to demonstrate the caveolae-mediated HRP-based transcytosis assay method. The EC transcytosis assay described here may provide a useful tool for investigating the molecular regulators of EC permeability and iBRB integrity in vascular pathologies and for screening drug delivery systems.

Endothelial Cell Transcytosis Assay as an In Vitro Model to Evaluate Inner Blood-Retinal Barrier Permeability

This protocol illustrates an in vitro endothelial cell transcytosis assay as a model to evaluate inner blood-retinal barrier permeability by measuring the ability of human retinal microvascular endothelial cells to transport horseradish peroxidase across cells in caveolae-mediated transcellular transport processes.

فحص نقل الخلايا البطانية كنموذج في المختبر لتقييم نفاذية الحاجز الدموي الشبكي الداخلي

Dysfunction of the blood-retinal barrier (BRB) contributes to the pathophysiology of several vascular eye diseases, often resulting in retinal edema and ...

Semi-Automated Planimetric Quantification of Dental Plaque Using an Intraoral Fluorescence Camera

Dental plaque accumulation is quantified using clinical indices or, otherwise, the planimetric plaque index (PPI),&#160;which measures the relative area of a tooth that is covered by plaque deposits. Compared to clinical indices, the PPI has a higher discriminatory power, but traditional planimetry is a time-consuming analysis, as the plaque-covered and clean tooth areas have to be determined manually for each image using image-processing software. Here, we present a method for the semi-automated planimetric quantification of dental plaque, which allows for the rapid processing of up to 1,000 images simultaneously. The method exploits the enhanced contrast between disclosed plaque, sound tooth surfaces, and soft tissues in fluorescence images acquired with an intraoral camera. Careful execution of the clinical procedures and accurate image acquisition are crucial steps for the successful semi-automated identification of the plaque-covered areas. The method is suitable for planimetry on sound facial and oral tooth surfaces, on most composite resin restorations, and on teeth with orthodontic brackets, but not on metallic restorations. Compared to traditional PPI recordings, semi-automated planimetry considerably reduces the amount of time spent on the analysis, as well as the subjective human input, thus increasing the reproducibility of planimetric measurements.

This study presents a semi-automated digital image analysis procedure for the planimetric quantification of disclosed dental plaque based on images acquired with an intraoral fluorescence camera. The method allows for the rapid and reliable quantification of dental plaque in the research environment.

القياس الكمي شبه الآلي للوحة الأسنان باستخدام كاميرا مضان داخل الفم

Dental plaque accumulation is quantified using clinical indices or, otherwise, the planimetric plaque index (PPI),&#160;which measures the relative area ...

منع عتامة المحفظة الخلفية من خلال دوران العدسة داخل العين في جراحات إعتام عدسة العين

Rotating the Intraocular Lens to Prevent Posterior Capsular Opacification in Cataract Surgeries

Posterior capsule opacification (PCO) is a common postoperative complication of extracapsular cataract surgery, which is caused by the proliferation and migration of lens epithelial cells and can affect long-term visual outcomes significantly. The most effective treatment for PCO is neodymium-doped yttrium aluminum garnet (Nd:YAG) laser capsulotomy; however, this treatment is associated with posterior segment complication and can break the stability of capsular bag, affecting the position and function of trifocal or toric intraocular lenses (IOLs). Advances in surgical procedures, IOL design, and pharmacy have reduced the rate of PCO in recent years, concentrating on the inhibition of proliferative lens epithelial cells (LECs). This protocol aimed to clear LECs more thoroughly during phacoemulsification and IOL implantation. The first several steps, including clear corneal incision, continuous circular capsulorhexis, hydrodissection, hydrodelineation, and phacoemulsification, were completed as conventional procedures. After placing the IOL into the capsular bag, rotation of the IOL by at least 360&#176; was performed using an irrigation/aspiration tip or a hook, with slight stress on the posterior capsule. Some residuals occurred in the originally transparent capsular bag after rotation of the IOLs. Then, these materials and the viscoelastic were cleared completely using an irrigation/aspiration system. A clear posterior capsule was observed after the surgery in patients undergoing this method. This method of rotating IOLs is a simple, effective, and safe way to prevent PCO by clearing residual LECs and can be carried out without extra tools or skills.

تسليط الضوء على المؤلف: تعزيز النتائج البصرية في جراحة إعتام عدسة العين: تقنية جديدة لمنع عتامة المحفظة الخلفية من خلال دوران IOL 

The present protocol describes removing residual epithelial cells by rotating the intraocular lens in extracapsular cataract surgery without extra tools for preventing posterior capsular opacification.

تدوير العدسة داخل العين لمنع عتامة المحفظة الخلفية في جراحات إعتام عدسة العين

Posterior capsule opacification (PCO) is a common postoperative complication of extracapsular cataract surgery, which is caused by the proliferation and ...

معالج آلي لتصنيع الخلايا التائية ذات مستقبلات المستضدات الوهمية على نطاق سريري

Chimeric Antigen Receptor T Cell Manufacturing on an Automated Cell Processor

Chimeric antigen receptor (CAR)-T cells represent a promising immunotherapeutic approach for the treatment of various malignant and non-malignant diseases. CAR-T cells are genetically modified T cells that express a chimeric protein that recognizes and binds to a cell surface target, resulting in the killing of the target cell. Traditional CAR-T cell manufacturing methods are labor-intensive, expensive, and may carry the risk of contamination. The CliniMACS Prodigy, an automated cell processor, allows for manufacturing cell therapy products at a clinical scale in a closed system, minimizing the risk of contamination. Processing occurs semi-automatically under the control of a computer and thus&#160;minimizes human involvement in the process, which saves time and reduces variability and errors.
This manuscript and video describes the T cell transduction (TCT) process for manufacturing CAR-T cells using this processor. The TCT process involves CD4+/CD8+ T cell enrichment, activation, transduction with a viral vector, expansion, and harvest. Using the Activity Matrix, a functionality that allows ordering and timing of these steps, the TCT process can be customized extensively. We provide a walk-through of CAR-T cell manufacturing in compliance with current Good Manufacturing Practice&#160;(cGMP) and discuss required release testing and preclinical experiments that will support an Investigational New Drug (IND) application. We demonstrate&#160;the feasibility and discuss the advantages and disadvantages of using a&#160;semi-automatic process for clinical CAR-T cell manufacturing. Finally, we describe an ongoing investigator-initiated clinical trial that targets pediatric B-cell malignancies [NCT05480449] as an example of how this manufacturing process can be applied in a clinical setting.

تسليط الضوء على المؤلف: التطورات في تصنيع الخلايا التائية ذات مستقبلات المستضدات الوهمية وإنتاج العلاج الجيني 

This article details the manufacturing process for chimeric antigen receptor T cells for clinical use, specifically using an automated cell processor capable of performing viral transduction and cultivation of T cells. We provide recommendations and describe pitfalls that should be considered during the process development and implementation of an early-phase clinical trial.