Name: using an automated hirschberg test app to evaluate ocular alignment
Uploaded: 2020-03-24T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using an Automated Hirschberg Test App to Evaluate Ocular Alignment at JoVE.com

Dit werk werd deels ondersteund door NIH grant R44EY025902 en door de Mass Eye & Ear Curing Kids Grant.

Deze studie werd uitgevoerd in overeenstemming met de principes van de Verklaring van Helsinki, bij Schepens Eye Research Institute (Boston, MA) en Spaulding Rehabilitation Hospital (Boston, MA). Alle deelnemers hebben geïnformeerde toestemming verkregen. De studie werd goedgekeurd door de lokale institutionele review boards van Mass Eye and Ear (Boston, MA).
OPMERKING: Criteria voor inclusie van patiënten waren voorafgaande diagnose van horizontale scheelzien (constante of intermitterende e...

<ol>
	<li>Kemper, A. R., Clark, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preschool+vision+screening+in+pediatric+practices.">Preschool vision screening in pediatric practices.</a> Clinical Pediatrics. 45 (3), 263-266 (2006).</li><li>Rowe, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+profile+of+strabismus+in+stroke+survivors.">The profile of strabismus in stroke survivors.</a> Eye. 24 (4), 682-685 (2010).</li><li>Black, K., McCarus, C., Collins, M. L. Z., Jensen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+Manifestations+of+Autism+in+Ophthalmology.">Ocular Manifestations of Autism in Ophthalmology.</a> Strabismus. 21 (2), 98-102 (2013).</li><li>Taylor, K., Elliott, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interventions+for+strabismic+amblyopia.">Interventions for strabismic amblyopia.</a> Cochrane Database of Systematic Reviews. 10 (8), (2011).</li><li>Cotter, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fixation+preference+and+visual+acuity+testing+in+a+population-based+cohort+of+preschool+children+with+amblyopia+risk+factors.">Fixation preference and visual acuity testing in a population-based cohort of preschool children with amblyopia risk factors.</a> Ophthalmology. 116 (1), 145-153 (2009).</li><li>Robaei, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+Associated+with+Childhood+Strabismus:+Findings+from+a+Population-Based+Study.">Factors Associated with Childhood Strabismus: Findings from a Population-Based Study.</a> Ophthalmology. 113 (7), 1146-1153 (2006).</li><li>Tarczy-Hornoch, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+factors+for+decreased+visual+acuity+in+preschool+children:+the+multi-ethnic+pediatric+eye+disease+and+Baltimore+pediatric+eye+disease+studies.">Risk factors for decreased visual acuity in preschool children: the multi-ethnic pediatric eye disease and Baltimore pediatric eye disease studies.</a> Ophthalmology. 118 (11), 2262-2273 (2011).</li><li>Chan, K. W., Deng, L., Weissberg, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+Strabismus+by+Non-Health+Care+Professionals+in+an+Ethnically+Diverse+Set+of+Images.">Detection of Strabismus by Non-Health Care Professionals in an Ethnically Diverse Set of Images.</a> JAMA Ophthalmology. 134 (1), 30-36 (2016).</li><li>Hunter, D. G., Guyton, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vertical+location+of+the+corneal+light+reflex+in+strabismus+photography.">Vertical location of the corneal light reflex in strabismus photography.</a> Archives of Ophthalmology. 116 (6), 767-771 (1998).</li><li>Eskridge, J. B., Wick, B., Perrigin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Hirschberg+test:+a+double-masked+clinical+evaluation.">The Hirschberg test: a double-masked clinical evaluation.</a> American Journal of Optometry and Physiological Optics. 65 (9), 745-750 (1988).</li><li>Hasebe, S., Ohtsuki, H., Tadokoro, Y., Okano, M., Furuse, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+reliability+of+a+video-enhanced+Hirschberg+test+under+clinical+conditions.">The reliability of a video-enhanced Hirschberg test under clinical conditions.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 36 (13), 2678-2685 (1995).</li><li>Pundlik, S., Tomasi, M., Liu, R., Houston, K., Luo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+Preliminary+Evaluation+of+a+Smartphone+App+for+Measuring+Eye+Alignment.">Development and Preliminary Evaluation of a Smartphone App for Measuring Eye Alignment.</a> Translational Vision Science &amp; Technology. 8 (1), 19 (2019).</li><li>Cheng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EyeTurn+App+for+School+Vision+Screening.">The EyeTurn App for School Vision Screening.</a> American Academy of Optometry Annual Meeting. , (2018).</li><li>Committee on Practice and Ambulatory Medicine and Section on Ophthalmology. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Photoscreening+for+Children's+Vision+Screening.">Use of Photoscreening for Children's Vision Screening.</a> Pediatrics. 109 (3), 524-525 (2002).</li><li>Simons, B. D., Siatkowski, R. M., Schiffman, J. C., Berry, B. E., Flynn, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pediatric+photoscreening+for+strabismus+and+refractive+errors+in+a+high-risk+population.">Pediatric photoscreening for strabismus and refractive errors in a high-risk population.</a> Ophthalmology. 106 (6), 1073-1080 (1999).</li><li>Kerr, N. C., Somes, G., Enzenauer, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+developmentally-at-risk+status+on+the+reliability+of+the+iScreen(R)+photorefractive+device+in+young+children.">The effect of developmentally-at-risk status on the reliability of the iScreen(R) photorefractive device in young children.</a> The American Journal of Orthopedics. 61, 117-123 (2011).</li><li>Arnold, R. W., O'Neil, J. W., Cooper, K. L., Silbert, D. I., Donahue, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+smartphone+photoscreening+app+to+detect+refractive+amblyopia+risk+factors+in+children+aged+1-6+years.">Evaluation of a smartphone photoscreening app to detect refractive amblyopia risk factors in children aged 1-6 years.</a> Clinical Ophthalmology. 12, 1533-1537 (2018).</li></ol>

Een persoon zonder professionele opleiding kan de EyeTurn-app gebruiken om foto's van de ogen vast te leggen en ooguitlijningsmetingen te verkrijgen, die kunnen worden geïnterpreteerd door een oogzorgspecialist ter plaatse of op afstand. De app biedt alleen de omvang van de verkeerde uitlijning, in plaats van een interpretatie of diagnose. Oogzorgprofessionals zoals optometristen of oogartsen moeten bepalen of de verkeerde uitlijning significant is of niet, en een diagnose stellen na het overwegen van andere factoren, w...

Meting van de ooguitlijning wordt vaak uitgevoerd in vision care klinieken. De test van de dekking met prismaneutralisatie is de algemeen gebruikte klinische methode voor het kwantificeren van de graad van oogverkeerde groepering (scheelzien). Deze methode vereist een hoge mate van opleiding en ervaring. Nauwkeurige meting wordt uitdagender wanneer patiënten niet volledig kunnen deelnemen aan het examen, zoals jonge kinderen1, personen met hersenletsel of beroerte2, of ontwikkelingsstoornissen3. Bovendien is er behoefte aan oculaire uitlijningstests in schoolscreening, omdat strabismus zich tijdens de kindertijd ontwikkelt bij naar schatting 5−8% van de Amerikaanse bevolking4, en een aanzienlijke risicofactor is voor amblyopie met ongeveer 30-40% van de gevallen van amblyopie toegeschreven aan scheelzien5,6,7.7 Echter, school verpleegkundigen zijn normaal gesproken niet opgeleid om de standaard cover test uit te voeren met prisma neutralisatie voor een dergelijke screening. Voor niet-oogzorgprofessionals is een bijkomende uitdaging in strabismusscreening dat intermitterende scheelzien (verkeerde uitlijning niet altijd tot uiting komt) en kleinere grootheden van verkeerde uitlijning niet visueel duidelijk zijn (<15 prismadiopters [Δ])8.
In een poging om de uitdagingen in de detectie en meting van scheelzien aan te pakken, hebben we een smartphone-app (EyeTurn) ontwikkeld die de fotografische Hirschberg-methode9 implementeert en automatiseert door de verplaatsing van hoornvliesreflecties tussen de ogen te vergelijken. Terwijl conventionele fotografische Hirschberg methode is aangetoond dat een goede reproduceerbaarheid in klinieken10hebben ,11, de kosten voor dedicated, standalone apparaten is een barrière voor brede adoptie. Door het verstrekken van een eenvoudig te gebruiken hulpmiddel om oogaanpassing met standaard smartphones te meten, veronderstellen wij het wijd in de vertoning van de schoolvisie zal worden goedgekeurd en door niet-oogzorgberoeps wordt gebruikt. Onze eerdere evaluatiestudies hebben aangetoond dat de app-meting in overeenstemming is met de huidige klinische standaard van prisma en alternatieve dekkingstest12, voor strabismus-grootheden van esotropia en exotropia tot 60Δ. In een pilot school screening studie, toonden we ook aan dat de app kan helpen de school verpleegkundige detecteren kinderen met intermitterende exotropia die werden gemist door standaard school visie screening protocollen13.
De iOS-versie van de app is momenteel beschikbaar voor onderzoekers en clinici op verzoek voor onderzoeksdoeleinden. De aanvragers hebben tot nu toe opgenomen school verpleegkundigen, pediatrische oogartsen, optometristen, neuro-oogartsen, en strabismus specialisten. Het doel van dit artikel is om de gedetailleerde app protocollen voor het gebruik van de app te delen om de oculaire uitlijning te evalueren onder verschillende weergaveomstandigheden, namelijk, in de buurt en ver fixatie afstand; met en zonder oogbedekking om de fusie van de verrekijker te doorbreken.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>EyeTurn</td>
			<td>EyeNexo</td>
			<td></td>
			<td>Smartphone app for measureing eye misalignment</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using an automated hirschberg test app to evaluate ocular alignment

Een smartphone app is ontwikkeld om de geautomatiseerde fotografische Hirschberg test uit te voeren voor objectieve meting van oculaire verkeerde uitlijning. Door het berekenen van het verschil in hoornvlies reflectie gegenereerd door de telefoon camera flitser ten opzichte van de iris centrum op basis van hoge resolutie beelden, kan de app meten verkeerde uitlijning met een veel hogere precisie dan het blote oog het uitvoeren van de Hirschberg test. Het is gevalideerd in een eerdere klinische evaluatiestudie door te vergelijken met de klinische gouden standaard-prisma en alternatieve dekkingstest. Het doel van dit artikel is om de testtechnieken te beschrijven met betrekking tot hoe de app te gebruiken om de occulaire uitlijning voor verschillende fixatieafstanden te meten, zonder of met dekking om fusie te breken, evenals hoekkappa, zodat gebruikers de app kunnen gebruiken om gelijkwaardige tests meestal gedaan in de kliniek met behulp van prisma's.

In dit werk beschrijven we de protocollen om de oculaire uitlijning te evalueren met behulp van een smartphone-app die de fotografische Hirschberg-test uitvoert. De interface van de app wordt weergegeven in figuur 1. De gebruikers kunnen ervoor kiezen om dekkingstest uit te voeren of een patiënt te meten met beide ogen die tegelijkertijd op een doel fixeren, hetzij op bijna- of ver fixatieafstanden. Zodra de kijkomstandigheden zijn bepaald, afhankelijk van d...

Watch this Scientific Journal Video about Using an Automated Hirschberg Test App to Evaluate Ocular Alignment at JoVE.com

Using an Automated Hirschberg Test App to Evaluate Ocular Alignment

We presenteren een protocol van het gebruik van een smartphone-app om Hirschberg-tests uit te voeren voor het meten van duidelijke en intermitterende oculaire verkeerde uitlijning (scheelzie) onder near and far fixatieomstandigheden.

Met behulp van een geautomatiseerde Hirschberg Test App om occulaire uitlijning te evalueren

A smartphone app has been developed to perform the automated photographic Hirschberg test for objective measurement of ocular misalignment. By computing ...

De mobiele app die we hebben ontwikkeld kan worden gebruikt om strabismus te meten voor onderzoek of voor klinisch gebruik. Deze methode, vergemakkelijkt een eenvoudige strabismus meting, die momenteel vereist uitgebreide training en ervaring worden uitgevoerd met behulp van alleen een standaard telefoon camera en de app-software. In de app-interface kunnen gebruikers ervoor kiezen om een dekkingstest uit te voeren of om een patiënt te meten met beide ogen die tegelijkertijd op een doel zijn gefixeerd, op een bijna- of verre fixatieafstand.Als u tropia wilt meten, met één momentopname in met een bijna-fixatie, start u de app en stelt u de modus in op No Cover. Selecteer In de buurt en plaats de telefoon in een landschapsoriëntatie van ongeveer 40 centimeter van de patiënt op ooghoogte, met de achterste camera naar de patiënt gericht. Instrueer de patiënt om te fixeren op de zaklamp, die moet worden uitgeschakeld op dit punt.Voor tests die een nauwkeurige accommodatie vereisen, plakt u een fixatiedoel op de achterkant van de telefoon direct onder of boven de zaklamp. Wanneer de patiënt bevestigt dat ze fixeren, drukt u op de ronde knop om een momentopname te maken die door de app moet worden geanalyseerd. Wanneer de analyse is voltooid, toont de app de gedetecteerde limbusgrens, het midden van het oog en de locatie van de hoornvliesreflectie.Na het verifiëren dat deze functies zijn gedetecteerd zonder duidelijke fouten, observeren de metingen met betrekking tot de ooguitlijning. Druk vervolgens op de knop Opslaan om de huidige test in de telefoon op te slaan of druk op de knop Pijl-achter om opnieuw te testen. Als u intermitterende oculaire uitlijning voor verre fixatie in de app wilt meten, stelt u de modus in op Dekkingstest en selecteert u Ver.Houd de telefoon in een liggende oriëntatie, ongeveer 40 centimeter van de patiënt op ooghoogte met de flitscamera gepositioneerd tussen de ogen van de patiënt. Instrueer de patiënt om net boven de telefoon te kijken, naar een doel op ongeveer zes meter afstand. Laat de patiënt één oog bedekken en op de ronde knop drukken, de app begint met de detectie.Terwijl ervoor te zorgen dat de patiënt goed fixeert, hebben ze snel verwijderen van de occlusie. De app maakt automatisch een foto zodra de occlusie is verwijderd. Wanneer de analyse is voltooid, toont de app de gedetecteerde limbusgrens, het midden van het oog en de locatie van de hoornvliesreflectie.Nadat u hebt gecontroleerd of deze functies zonder duidelijke fouten worden gedetecteerd, controleert u de meetresultaten voor de ooguitlijning in prismadiopters, voordat u de gegevens opslaat of de test herhaalt. Voor hoekKappa-meting in de app selecteert u de kappa-hoek. Plaats de telefoon in een landschap oriëntatie ongeveer 40 centimeter van de patiënt op ooghoogte, en instrueren de patiënt om het oog te gebruiken om te worden getest om te fixeren op de zaklamp, terwijl het bedekken van het andere oog.Terwijl u ervoor zorgt dat de patiënt goed fixeert, tikt u op de ronde knop om een momentopname te maken, die door de app wordt geanalyseerd. Wanneer de analyse is voltooid, toont de app de gedetecteerde limbusgrens, het midden van het oog en de locatie van de hoornvliesreflectie. Nadat u hebt gecontroleerd of deze functies zonder duidelijke fouten zijn gedetecteerd, bekijkt u de meetresultaten voor de Kappa-hoek in graden.In deze representatieve analyse werden de limbusgrenzen van de twee ogen en de hoornvliesreflectie van de zaklamp correct gedetecteerd, wat suggereert dat de oculaire uitlijningsmaatregel niet onderhevig is aan de fout met beeldanalyse. In dit specifieke geval had de patiënt exotropie verlaten, zoals blijkt uit de grotere hoornvliesreflectie offset in het linkeroog. De app meldde echter niet welk oog was afgeweken, omdat in het geval van een kleine strabismushoek en onbekende Kappa-hoek het voor de app onbetrouwbaar zou zijn om het afwijkende oog te bepalen.Ter vergelijking, hier wordt een voorbeeld zonder scheelzien getoond. In deze analyse kan onjuiste limbusdetectie worden waargenomen. Hoewel de detectie van de hoornvliesreflectie correct is, komt de groene cirkel duidelijk niet overeen met de limbusgrens, wat aangeeft dat de test moet worden herhaald.In deze analyse van 14 proefpersonen, 10 onderwerpen tentoongesteld exotropie en vier onderwerpen gepresenteerd met exotropie. Lineaire regressieanalyse, bleek dat de oogmetingen van de strabismushoeken consistent waren met klinische dekkingstestmetingen. Bij het gebruik van de app zijn er twee belangrijke dingen om in gedachten te houden.Ten eerste stelt u de dekkingstest en de fixatiemodus voor elke specifieke test correct in. Twee, controleer of de detectie van de oogfunctie juist is. De app staat alleen strabismus meting toe en geeft geen diagnose.Clinici zullen de oculaire meting moeten combineren met andere visiemetingen om een diagnose te stellen.

using-an-automated-hirschberg-test-app-to-evaluate-ocular-alignment

Research

JoVE Journal

Medicine

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under physiologic conditions the endothelium is impermeable to albumin, so Evans blue bound albumin remains restricted within blood vessels. In pathologic conditions that promote increased vascular permeability endothelial cells partially lose their close contacts and the endothelium becomes permeable to small proteins such as albumin. This condition allows for extravasation of Evans Blue in tissues. A healthy endothelium prevents extravasation of the dye in the neighboring vascularized tissues. Organs with increased permeability will show significantly increased blue coloration compared to organs with intact endothelium. The level of vascular permeability can be assessed by simple visualization or by quantitative measurement of the dye incorporated per milligram of tissue of control versus experimental animal/tissue. Two powerful aspects of this assay are its simplicity and quantitative characteristics. Evans Blue dye can be extracted from tissues by incubating a specific amount of tissue in formamide. Evans Blue absorbance maximum is at 620 nm and absorbance minimum is at 740 nm. By using a standard curve for Evans Blue, optical density measurements can be converted into milligram dye captured per milligram of tissue. Statistical analysis should be used to assess significant differences in vascular permeability.

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

We are presenting an in vivo assay to test blood vessel permeability. This assay is based on intravenous injection of a dye and subsequent visualization of its diffusion into interstitial spaces.

Een<em&gt; In vivo</em&gt; Assay naar Blood Vessel Permeabiliteit Test

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under ...

Using Quantitative Real-time PCR to Determine Donor Cell Engraftment in a Competitive Murine Bone Marrow Transplantation Model

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules that regulate HSCs. In these transplant model systems, the function of HSCs is determined by the ability of these cells to engraft and reconstitute lethally irradiated recipient mice. Commonly, the donor cell contribution/engraftment is measured by antibodies to donor- specific cell surface proteins using flow cytometry. However, this method heavily depends on the specificity and the ability of the cell surface marker to differentiate donor-derived cells from recipient-originated cells, which may not be available for all mouse strains. Considering the various backgrounds of genetically modified mouse strains in the market, this cell surface/ flow cytometry-based method has significant limitations especially in mouse strains that lack well-defined surface markers to separate donor cells from congenic recipient cells. Here, we reported a PCR-based technique to determine donor cell engraftment/contribution in transplant recipient mice. We transplanted male donor bone marrow HSCs to lethally irradiated congenic female mice. Peripheral blood samples were collected at different time points post transplantation. Bone marrow samples were obtained at the end of the experiments. Genomic DNA was isolated and the Y chromosome specific gene, Zfy1, was amplified using quantitative Real time PCR. The engraftment of male donor-derived cells in the female recipient mice was calculated against standard curve with known percentage of male vs. female DNAs. Bcl2 was used as a reference gene to normalize the total DNA amount. Our data suggested that this approach reliably determines donor cell engraftment and provides a useful, yet simple method in measuring hematopoietic cell reconstitution in murine bone marrow transplantation models. Our method can be routinely performed in most laboratories because no costly equipment such as flow cytometry is required.

Determining donor cell engraftment presents a challenge in mouse bone marrow transplant models that lack well-defined phenotypical markers. We described a methodology to quantify male donor cell engraftment in female transplant recipient mice. This method can be used in all mouse strains for the study of HSC functions.

Met behulp van kwantitatieve real-time PCR voor donorcel Engraftment bepalen in een concurrerende Murine beenmergtransplantatie Model

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules ...

Using a Knee Arthrometer to Evaluate Tissue-specific Contributions to Knee Flexion Contracture in the Rat

Normal knee range of motion (ROM) is critical to well-being and allows one to perform basic activities such as walking, climbing stairs and sitting. Lost ROM is called a joint contracture and results in increased morbidity. Due to the difficulty of reversing established knee contractures, early detection is important, and hence, knowing risk factors for their development is essential. The rat represents a good model with which the effect of an intervention can be studied due to the similarity of rat knee anatomy to that of humans, the rat's ability to tolerate long durations of knee immobilization in flexion, and because mechanical data can be correlated with histologic and biochemical analysis of knee tissue.
Using an automated arthrometer, we demonstrate a validated, precise, reproducible, user-independent method of measuring the extension ROM of the rat knee joint at specific torques. This arthrometer can be used to determine the effects of interventions on knee joint ROM in the rat.

The goal of the protocol is to measure the extension range of motion of the rat knee. The effects of various diseases that increase the stiffness of the knee joint and the effectiveness of treatments can be quantified.

Met behulp van een knie-Arthrometer om te evalueren van weefsel-specifieke bijdragen aan knie flexie contractuur in de Rat

Normal knee range of motion (ROM) is critical to well-being and allows one to perform basic activities such as walking, climbing stairs and sitting. Lost ...

Sucrose Preference and Novelty-Induced Hypophagia Tests in Rats using an Automated Food Intake Monitoring System

The prevalence and incidence of depressive disorders are rising worldwide, affecting about 322 million individuals, underlining the need for behavioral studies in animal models. In this protocol, to study depression-like and anhedonic behavior in rats, the established sucrose preference and novelty-induced hypophagia tests are combined with an automated food and liquid intake monitoring system. Prior to testing, in the sucrose preference paradigm, male rats are trained for at least 2 days to consume a sucrose solution in addition to tap water. During the test, rats are again exposed to water and sucrose solution. Consumption is registered every second by the automated system. The ratio of sucrose to total water intake (sucrose preference ratio) is a surrogate parameter for anhedonia. In the novelty-induced hypophagia test, male rats undergo a training period in which they are exposed to a palatable snack. During training, rodents show a stable baseline snack intake. On test day, the animals are transferred from home cages into a fresh, empty cage representing a novel unknown environment with access to the known palatable snack. The automated system records the total intake and its underlying microstructure (e.g., latency to approaching the snack), providing insight into anhedonic and anxious behaviors. The combination of these paradigms with an automated measuring system provides more detailed information, along with higher accuracy by reducing measuring errors. However, the tests use surrogate parameters and only depict depression and anhedonia in an indirect manner.

Presented here is a protocol to study depression-like and anhedonic behavior in rats. It combines two well-established behavioral methods, the sucrose preference and novelty-induced hypophagia tests, with an automated food and liquid intake monitoring system, to indirectly investigate rodent behavior using surrogate parameters.

Sucrose voorkeur en nieuwheid-geïnduceerde Hypophagia Tests bij ratten met behulp van een geautomatiseerde voedselinname monitoring systeem

The prevalence and incidence of depressive disorders are rising worldwide, affecting about 322 million individuals, underlining the need for behavioral ...

Endothelial Cell Transcytosis Assay as an In Vitro Model to Evaluate Inner Blood-Retinal Barrier Permeability

Dysfunction of the blood-retinal barrier (BRB) contributes to the pathophysiology of several vascular eye diseases, often resulting in retinal edema and subsequent vision loss. The inner blood-retinal barrier (iBRB) is mainly composed of retinal vascular endothelium with low permeability under physiological conditions. This feature of low permeability is tightly regulated and maintained by low rates of paracellular transport between adjacent retinal microvascular endothelial cells, as well as transcellular transport (transcytosis) through them. The assessment of retinal transcellular barrier permeability may provide fundamental insights into iBRB integrity in health and disease. In this study, we describe an endothelial cell (EC) transcytosis assay, as an in vitro model for evaluating iBRB permeability, using human retinal microvascular endothelial cells (HRMECs). This assay assesses the ability of HRMECs to transport transferrin and horseradish peroxidase (HRP) in receptor- and caveolae-mediated transcellular transport processes, respectively. Fully confluent HRMECs cultured on porous membrane were incubated with fluorescent-tagged transferrin (clathrin-dependent transcytosis) or HRP (caveolae-mediated transcytosis) to measure the levels of transferrin or HRP transferred to the bottom chamber, indicative of transcytosis levels across the EC monolayer. Wnt signaling, a known pathway regulating iBRB, was modulated to demonstrate the caveolae-mediated HRP-based transcytosis assay method. The EC transcytosis assay described here may provide a useful tool for investigating the molecular regulators of EC permeability and iBRB integrity in vascular pathologies and for screening drug delivery systems.

Endothelial Cell Transcytosis Assay as an In Vitro Model to Evaluate Inner Blood-Retinal Barrier Permeability

This protocol illustrates an in vitro endothelial cell transcytosis assay as a model to evaluate inner blood-retinal barrier permeability by measuring the ability of human retinal microvascular endothelial cells to transport horseradish peroxidase across cells in caveolae-mediated transcellular transport processes.

Endotheelceltranscytosetest als een in vitro model om de permeabiliteit van de binnenste bloed-retinale barrière te evalueren

Dysfunction of the blood-retinal barrier (BRB) contributes to the pathophysiology of several vascular eye diseases, often resulting in retinal edema and ...

Semi-Automated Planimetric Quantification of Dental Plaque Using an Intraoral Fluorescence Camera

Dental plaque accumulation is quantified using clinical indices or, otherwise, the planimetric plaque index (PPI),&#160;which measures the relative area of a tooth that is covered by plaque deposits. Compared to clinical indices, the PPI has a higher discriminatory power, but traditional planimetry is a time-consuming analysis, as the plaque-covered and clean tooth areas have to be determined manually for each image using image-processing software. Here, we present a method for the semi-automated planimetric quantification of dental plaque, which allows for the rapid processing of up to 1,000 images simultaneously. The method exploits the enhanced contrast between disclosed plaque, sound tooth surfaces, and soft tissues in fluorescence images acquired with an intraoral camera. Careful execution of the clinical procedures and accurate image acquisition are crucial steps for the successful semi-automated identification of the plaque-covered areas. The method is suitable for planimetry on sound facial and oral tooth surfaces, on most composite resin restorations, and on teeth with orthodontic brackets, but not on metallic restorations. Compared to traditional PPI recordings, semi-automated planimetry considerably reduces the amount of time spent on the analysis, as well as the subjective human input, thus increasing the reproducibility of planimetric measurements.

This study presents a semi-automated digital image analysis procedure for the planimetric quantification of disclosed dental plaque based on images acquired with an intraoral fluorescence camera. The method allows for the rapid and reliable quantification of dental plaque in the research environment.

Semi-geautomatiseerde planimetrische kwantificering van tandplak met behulp van een intraorale fluorescentiecamera

Dental plaque accumulation is quantified using clinical indices or, otherwise, the planimetric plaque index (PPI),&#160;which measures the relative area ...

Voorkomen van posterieure kapseltroebeling door IOL-rotatie bij staaroperaties

Rotating the Intraocular Lens to Prevent Posterior Capsular Opacification in Cataract Surgeries

Posterior capsule opacification (PCO) is a common postoperative complication of extracapsular cataract surgery, which is caused by the proliferation and migration of lens epithelial cells and can affect long-term visual outcomes significantly. The most effective treatment for PCO is neodymium-doped yttrium aluminum garnet (Nd:YAG) laser capsulotomy; however, this treatment is associated with posterior segment complication and can break the stability of capsular bag, affecting the position and function of trifocal or toric intraocular lenses (IOLs). Advances in surgical procedures, IOL design, and pharmacy have reduced the rate of PCO in recent years, concentrating on the inhibition of proliferative lens epithelial cells (LECs). This protocol aimed to clear LECs more thoroughly during phacoemulsification and IOL implantation. The first several steps, including clear corneal incision, continuous circular capsulorhexis, hydrodissection, hydrodelineation, and phacoemulsification, were completed as conventional procedures. After placing the IOL into the capsular bag, rotation of the IOL by at least 360&#176; was performed using an irrigation/aspiration tip or a hook, with slight stress on the posterior capsule. Some residuals occurred in the originally transparent capsular bag after rotation of the IOLs. Then, these materials and the viscoelastic were cleared completely using an irrigation/aspiration system. A clear posterior capsule was observed after the surgery in patients undergoing this method. This method of rotating IOLs is a simple, effective, and safe way to prevent PCO by clearing residual LECs and can be carried out without extra tools or skills.

Auteur in de schijnwerpers: Verbetering van visuele resultaten bij staaroperaties: een nieuwe techniek om posterieure capsulaire opacificatie te voorkomen door IOL-rotatie 

The present protocol describes removing residual epithelial cells by rotating the intraocular lens in extracapsular cataract surgery without extra tools for preventing posterior capsular opacification.

Het roteren van de intraoculaire lens om posterieure kapselopacificatie bij staaroperaties te voorkomen

Posterior capsule opacification (PCO) is a common postoperative complication of extracapsular cataract surgery, which is caused by the proliferation and ...

Geautomatiseerde processor voor de productie van CAR-T-cellen op klinische schaal

Chimeric Antigen Receptor T Cell Manufacturing on an Automated Cell Processor

Chimeric antigen receptor (CAR)-T cells represent a promising immunotherapeutic approach for the treatment of various malignant and non-malignant diseases. CAR-T cells are genetically modified T cells that express a chimeric protein that recognizes and binds to a cell surface target, resulting in the killing of the target cell. Traditional CAR-T cell manufacturing methods are labor-intensive, expensive, and may carry the risk of contamination. The CliniMACS Prodigy, an automated cell processor, allows for manufacturing cell therapy products at a clinical scale in a closed system, minimizing the risk of contamination. Processing occurs semi-automatically under the control of a computer and thus&#160;minimizes human involvement in the process, which saves time and reduces variability and errors.
This manuscript and video describes the T cell transduction (TCT) process for manufacturing CAR-T cells using this processor. The TCT process involves CD4+/CD8+ T cell enrichment, activation, transduction with a viral vector, expansion, and harvest. Using the Activity Matrix, a functionality that allows ordering and timing of these steps, the TCT process can be customized extensively. We provide a walk-through of CAR-T cell manufacturing in compliance with current Good Manufacturing Practice&#160;(cGMP) and discuss required release testing and preclinical experiments that will support an Investigational New Drug (IND) application. We demonstrate&#160;the feasibility and discuss the advantages and disadvantages of using a&#160;semi-automatic process for clinical CAR-T cell manufacturing. Finally, we describe an ongoing investigator-initiated clinical trial that targets pediatric B-cell malignancies [NCT05480449] as an example of how this manufacturing process can be applied in a clinical setting.

Auteur in de schijnwerpers: vooruitgang in de productie van CAR-T-cellen en de productie van gentherapie 

This article details the manufacturing process for chimeric antigen receptor T cells for clinical use, specifically using an automated cell processor capable of performing viral transduction and cultivation of T cells. We provide recommendations and describe pitfalls that should be considered during the process development and implementation of an early-phase clinical trial.