Name: using an automated hirschberg test app to evaluate ocular alignment
Uploaded: 2020-03-24T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using an Automated Hirschberg Test App to Evaluate Ocular Alignment at JoVE.com

Detta arbete stöddes delvis av NIH-stipendiet R44EY025902 och av Mass Eye & Ear Curing Kids Grant.

Denna studie genomfördes i enlighet med grundsatserna i Helsingforsdeklarationen, vid Schepens Eye Research Institute (Boston, MA) och Spaulding Rehabilitation Hospital (Boston, MA). Informerat samtycke erhölls från alla deltagare. Studien godkändes av de lokala institutionella granskningsnämnderna för Mass Eye and Ear (Boston, MA).
OBS: Patienten integration kriterier var tidigare diagnos av horisontella skelning (konstant eller intermittent exotropia eller esotropia) och inga andra syn...

<ol>
	<li>Kemper, A. R., Clark, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preschool+vision+screening+in+pediatric+practices.">Preschool vision screening in pediatric practices.</a> Clinical Pediatrics. 45 (3), 263-266 (2006).</li><li>Rowe, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+profile+of+strabismus+in+stroke+survivors.">The profile of strabismus in stroke survivors.</a> Eye. 24 (4), 682-685 (2010).</li><li>Black, K., McCarus, C., Collins, M. L. Z., Jensen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+Manifestations+of+Autism+in+Ophthalmology.">Ocular Manifestations of Autism in Ophthalmology.</a> Strabismus. 21 (2), 98-102 (2013).</li><li>Taylor, K., Elliott, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interventions+for+strabismic+amblyopia.">Interventions for strabismic amblyopia.</a> Cochrane Database of Systematic Reviews. 10 (8), (2011).</li><li>Cotter, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fixation+preference+and+visual+acuity+testing+in+a+population-based+cohort+of+preschool+children+with+amblyopia+risk+factors.">Fixation preference and visual acuity testing in a population-based cohort of preschool children with amblyopia risk factors.</a> Ophthalmology. 116 (1), 145-153 (2009).</li><li>Robaei, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+Associated+with+Childhood+Strabismus:+Findings+from+a+Population-Based+Study.">Factors Associated with Childhood Strabismus: Findings from a Population-Based Study.</a> Ophthalmology. 113 (7), 1146-1153 (2006).</li><li>Tarczy-Hornoch, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+factors+for+decreased+visual+acuity+in+preschool+children:+the+multi-ethnic+pediatric+eye+disease+and+Baltimore+pediatric+eye+disease+studies.">Risk factors for decreased visual acuity in preschool children: the multi-ethnic pediatric eye disease and Baltimore pediatric eye disease studies.</a> Ophthalmology. 118 (11), 2262-2273 (2011).</li><li>Chan, K. W., Deng, L., Weissberg, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+Strabismus+by+Non-Health+Care+Professionals+in+an+Ethnically+Diverse+Set+of+Images.">Detection of Strabismus by Non-Health Care Professionals in an Ethnically Diverse Set of Images.</a> JAMA Ophthalmology. 134 (1), 30-36 (2016).</li><li>Hunter, D. G., Guyton, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vertical+location+of+the+corneal+light+reflex+in+strabismus+photography.">Vertical location of the corneal light reflex in strabismus photography.</a> Archives of Ophthalmology. 116 (6), 767-771 (1998).</li><li>Eskridge, J. B., Wick, B., Perrigin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Hirschberg+test:+a+double-masked+clinical+evaluation.">The Hirschberg test: a double-masked clinical evaluation.</a> American Journal of Optometry and Physiological Optics. 65 (9), 745-750 (1988).</li><li>Hasebe, S., Ohtsuki, H., Tadokoro, Y., Okano, M., Furuse, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+reliability+of+a+video-enhanced+Hirschberg+test+under+clinical+conditions.">The reliability of a video-enhanced Hirschberg test under clinical conditions.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 36 (13), 2678-2685 (1995).</li><li>Pundlik, S., Tomasi, M., Liu, R., Houston, K., Luo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+Preliminary+Evaluation+of+a+Smartphone+App+for+Measuring+Eye+Alignment.">Development and Preliminary Evaluation of a Smartphone App for Measuring Eye Alignment.</a> Translational Vision Science &amp; Technology. 8 (1), 19 (2019).</li><li>Cheng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EyeTurn+App+for+School+Vision+Screening.">The EyeTurn App for School Vision Screening.</a> American Academy of Optometry Annual Meeting. , (2018).</li><li>Committee on Practice and Ambulatory Medicine and Section on Ophthalmology. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Photoscreening+for+Children's+Vision+Screening.">Use of Photoscreening for Children's Vision Screening.</a> Pediatrics. 109 (3), 524-525 (2002).</li><li>Simons, B. D., Siatkowski, R. M., Schiffman, J. C., Berry, B. E., Flynn, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pediatric+photoscreening+for+strabismus+and+refractive+errors+in+a+high-risk+population.">Pediatric photoscreening for strabismus and refractive errors in a high-risk population.</a> Ophthalmology. 106 (6), 1073-1080 (1999).</li><li>Kerr, N. C., Somes, G., Enzenauer, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+developmentally-at-risk+status+on+the+reliability+of+the+iScreen(R)+photorefractive+device+in+young+children.">The effect of developmentally-at-risk status on the reliability of the iScreen(R) photorefractive device in young children.</a> The American Journal of Orthopedics. 61, 117-123 (2011).</li><li>Arnold, R. W., O'Neil, J. W., Cooper, K. L., Silbert, D. I., Donahue, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+smartphone+photoscreening+app+to+detect+refractive+amblyopia+risk+factors+in+children+aged+1-6+years.">Evaluation of a smartphone photoscreening app to detect refractive amblyopia risk factors in children aged 1-6 years.</a> Clinical Ophthalmology. 12, 1533-1537 (2018).</li></ol>

En person utan yrkesutbildning kan använda EyeTurn-appen för att ta bilder av ögonen och få okulär justeringsmätningar, vilket kan tolkas av en ögonvårdsspecialist på plats eller på distans. Appen ger endast omfattningen av feljusteringen, snarare än någon tolkning eller diagnos. Ögonvårdspersonal såsom optiker eller ögonläkare bör avgöra om feljusteringen är betydande eller inte, och ställa en diagnos efter att ha övervägt andra faktorer, inklusive de villkor under vilka mätningen gjordes.
<p...

Mätning av ögonjustering utförs ofta i synvårdskliniker. Täcktest med prisma neutralisering är den vanliga kliniska metoden för att kvantifiera graden av ögon feljustering (skelning). Denna metod kräver en hög grad av utbildning och erfarenhet. Noggrann mätning blir mer utmanande när patienter inte helt kan delta i examen som små barn1, personer med hjärnskador eller stroke2, eller utvecklingsstörning3. Dessutom finns det ett behov av okulär anpassning testning i skolan screening, eftersom skelning utvecklas under barndomen i uppskattningsvis 5−8% av den amerikanska befolkningen4, och är en betydande riskfaktor för amblyopi med cirka 30−40% av fall av amblyopi tillskrivs skelning5,,6,7. Skolsköterskor är dock normalt inte utbildade för att genomföra standardkåpningstestet med prismaneutralisering för sådan screening. För icke-ögonvårdspersonal är en ytterligare utmaning vid skelningsscreening att intermittent skelning (felinriktning inte alltid manifesteras) och mindre magnituder av feljustering är inte visuellt uppenbara (<15 prisma dioptrier [Δ])8.
I ett försök att ta itu med utmaningarna i detektion och mätning av skelning har vi utvecklat en smartphone-app (EyeTurn) som implementerar och automatiserar den fotografiska Hirschbergmetoden9 genom att jämföra förskjutning av hornhinnans reflektioner mellan ögonen. Medan konventionella fotografiska Hirschberg metod har visat sig ha god reproducerbarhet i kliniker10,11, kostnaden för dedikerade, fristående enheter är ett hinder för bred antagande. Genom att tillhandahålla ett lätt att använda verktyg för att mäta ögonjustering med vanliga smartphones, vi hypotesen att det kommer att vara allmänt antas i skolan vision screening och används av icke-ögonvård proffs. Våra tidigare utvärderingsstudier har visat att appmätningen överensstämmer med den aktuella kliniska standarden för prisma och alternativt täcktest12, för skelningsstorlekar av esotropia och exotropia upp till 60Δ. I en pilotskola screening studie, Vi visade också att appen kan hjälpa skolsköterskan upptäcka barn med intermittent exotropia som missades av standard skolan vision screening protokoll13.
IOS-versionen av appen är för närvarande tillgänglig för forskare och kliniker på begäran för forskningsändamål. De som har begärt har hittills inkluderat skolsköterskor, barnläkare, optiker, neuro-ögonläkare och skelningsspecialister. Syftet med den här artikeln är att dela detaljerade appprotokoll för att använda appen för att utvärdera okulär justering under olika visningsförhållanden, nämligen nära och långt fixeringsavstånd. med och utan ögontäckning för att bryta binokulär fusion.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>EyeTurn</td>
			<td>EyeNexo</td>
			<td></td>
			<td>Smartphone app for measureing eye misalignment</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using an automated hirschberg test app to evaluate ocular alignment

En smartphone app har utvecklats för att utföra den automatiserade fotografiska Hirschberg test för objektiv mätning av okulär feljustering. Genom att beräkna skillnaden i hornhinnans reflektion som genereras av telefonens kamerablixt i förhållande till iris centrum baserat på högupplösta bilder, kan appen mäta feljustering med en mycket högre precision än blotta ögat utför Hirschberg testet. Det har validerats i en tidigare klinisk utvärderingsstudie genom att jämföra med det kliniska guldstandardprisma och alternativa täcktestet. Målet med den här artikeln är att beskriva testtekniker om hur du använder appen för att mäta okulär justering för olika fixeringsavstånd, utan eller med täckning för att bryta fusion, samt vinkel kappa, så att användarna kan använda appen för att utföra motsvarande tester som vanligtvis görs på kliniken med prismor.

I detta arbete beskriver vi protokollen för att utvärdera okulär justering med hjälp av en smartphone app som utför fotografiska Hirschberg testet. Gränssnittet för appen visas i figur 1. Användarna kan välja att utföra täcktest eller mäta en patient med båda ögonen fixerar vid ett mål samtidigt, antingen på nära eller långt fixering avstånd. När visningsförhållandena har fastställts beroende på teständamål, kan användarna följa pr...

Watch this Scientific Journal Video about Using an Automated Hirschberg Test App to Evaluate Ocular Alignment at JoVE.com

Using an Automated Hirschberg Test App to Evaluate Ocular Alignment

Vi presenterar ett protokoll för att använda en smartphone app för att utföra Hirschberg test för att mäta manifest och intermittent okulär feljustering (skelning) under nära och långt fixering villkor.

Använda en automatiserad Hirschberg Test App för att utvärdera Okulär Justering

A smartphone app has been developed to perform the automated photographic Hirschberg test for objective measurement of ocular misalignment. By computing ...

Den mobilapp som vi har tagit fram kan användas för att mäta skelning för forskning eller för klinisk användning. Denna metod, underlättar en enkel skelning mätning, som för närvarande kräver omfattande utbildning och erfarenhet för att utföras med endast en vanlig telefonkamera och appen programvara. I appgränssnittet kan användarna välja att utföra ett omslagstest eller att mäta en patient med båda ögonen fixerade vid ett mål samtidigt, antingen på nära eller långt fixeringsavstånd.För att mäta tropia, med en enda ögonblicksbild i med en nära fixering, starta appen och ställa in läget till No Cover. Välj Near och placera telefonen i en liggande orientering cirka 40 centimeter från patienten i ögonhöjd, med den bakre kameran vänd mot patienten. Instruera patienten att fixera på ficklampan, som bör vara avstängd på denna punkt.För tester som kräver ett exakt boende, klistra in ett fixeringsmål på baksidan av telefonen direkt under eller ovanför ficklampan. När patienten bekräftar att de fixerar trycker du på den runda knappen för att ta en ögonblicksbild som ska analyseras av appen. När analysen är klar kommer appen att visa den upptäckta limbusgränsen, mitten av ögat och platsen för hornhinnereflektionen.Efter att ha verifierat att dessa funktioner har upptäckts utan uppenbara fel, observera de mätningar som rör ögat anpassning. Sedan trycker du på spara-knappen för att spara det aktuella testet i telefonen, eller tryck på bakåtpilsknappen för att testa igen. Om du vill mäta intermittent okulär feljustering för långt fixering i appen ställer du in läget till Cover Test och väljer Långt.Håll telefonen i en liggande orientering, cirka 40 centimeter från patienten i ögonhöjd med blixtkameran placerad mellan patientens ögon. Instruera patienten att titta precis ovanför telefonen, till ett mål cirka sex meter bort. Har patienten täcka ett öga och tryck på den runda knappen, kommer appen att börja detekteringen.Samtidigt se till att patienten fixerar ordentligt, har dem snabbt ta bort ocklusionen. Appen tar automatiskt en bild så fort ocklusionen tas bort. När analysen är klar kommer appen att visa den upptäckta limbusgränsen, mitten av ögat och platsen för hornhinnereflektionen.Efter att ha verifierat att dessa funktioner upptäcks utan uppenbara fel, granska mätresultaten för ögat anpassningen i prisma dioptrier, innan du sparar data eller upprepa testet. För Vinkel Kappa-mätning i appen väljer du måttEt Kappavinkel. Placera telefonen i en liggande orientering cirka 40 centimeter från patienten i ögonhöjd, och instruera patienten att använda ögat som ska testas för att fixera på ficklampan samtidigt som den täcker det andra ögat.Medan du ser till att patienten fixerar ordentligt, tryck på den runda knappen för att ta en ögonblicksbild, som kommer att analyseras av appen. När analysen är klar, kommer appen att visa den upptäckta limbus gränsen, mitten av ögat, och placeringen av hornhinnans reflektion. Efter att ha verifierat att dessa funktioner upptäcks utan uppenbara fel, visa mätresultaten för Kappa vinkel i grader.I denna representativa analys, limbus gränserna för de två ögonen och hornhinnans reflektion av ficklampan, upptäcktes korrekt, vilket tyder på att okulär inriktningen åtgärden inte är föremål för BildAnalys fel. I detta särskilda fall hade patienten lämnat exotropia som är uppenbart från den större hornhinnans reflektion offset i det vänstra ögat. Appen rapporterade inte vilket öga som avvek dock, eftersom det i fall av en liten skelningsvinkel och okänd Kappavinkel skulle vara otillförlitligt för appen att bestämma det avvikna ögat.Som jämförelse visas här ett exempel utan skelning. I denna analys kan felaktig limbus-detektion observeras. Medan upptäckten av hornhinnans reflektion är korrekt, matchar den gröna cirkeln tydligt inte limbusgränsen, vilket indikerar att testet bör upprepas.I denna analys av 14 ämnen, uppvisade 10 ämnen exotropia och fyra ämnen som presenteras med exotropia. Linjär regressionsanalys, visade att ögonmåtten av skelmusvinklarna, överensstämde med kliniska täcktestmätningar. När du använder appen finns det två viktiga saker att tänka på.Ett, ställ in täckprovet och fixeringsläget korrekt för varje specifikt test. Två, kontrollera om detektering av ögonfunktionen är korrekt. Appen tillåter bara skelningsmätning och den ger ingen diagnos.Kliniker kommer att behöva kombinera okulär mätning med andra vision mätningar för att göra en diagnos.

using-an-automated-hirschberg-test-app-to-evaluate-ocular-alignment

Research

JoVE Journal

Medicine

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under physiologic conditions the endothelium is impermeable to albumin, so Evans blue bound albumin remains restricted within blood vessels. In pathologic conditions that promote increased vascular permeability endothelial cells partially lose their close contacts and the endothelium becomes permeable to small proteins such as albumin. This condition allows for extravasation of Evans Blue in tissues. A healthy endothelium prevents extravasation of the dye in the neighboring vascularized tissues. Organs with increased permeability will show significantly increased blue coloration compared to organs with intact endothelium. The level of vascular permeability can be assessed by simple visualization or by quantitative measurement of the dye incorporated per milligram of tissue of control versus experimental animal/tissue. Two powerful aspects of this assay are its simplicity and quantitative characteristics. Evans Blue dye can be extracted from tissues by incubating a specific amount of tissue in formamide. Evans Blue absorbance maximum is at 620 nm and absorbance minimum is at 740 nm. By using a standard curve for Evans Blue, optical density measurements can be converted into milligram dye captured per milligram of tissue. Statistical analysis should be used to assess significant differences in vascular permeability.

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

We are presenting an in vivo assay to test blood vessel permeability. This assay is based on intravenous injection of a dye and subsequent visualization of its diffusion into interstitial spaces.

En<em&gt; In vivo</em&gt; Analys för att testa Permeabilitet blodkärl

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under ...

Using Quantitative Real-time PCR to Determine Donor Cell Engraftment in a Competitive Murine Bone Marrow Transplantation Model

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules that regulate HSCs. In these transplant model systems, the function of HSCs is determined by the ability of these cells to engraft and reconstitute lethally irradiated recipient mice. Commonly, the donor cell contribution/engraftment is measured by antibodies to donor- specific cell surface proteins using flow cytometry. However, this method heavily depends on the specificity and the ability of the cell surface marker to differentiate donor-derived cells from recipient-originated cells, which may not be available for all mouse strains. Considering the various backgrounds of genetically modified mouse strains in the market, this cell surface/ flow cytometry-based method has significant limitations especially in mouse strains that lack well-defined surface markers to separate donor cells from congenic recipient cells. Here, we reported a PCR-based technique to determine donor cell engraftment/contribution in transplant recipient mice. We transplanted male donor bone marrow HSCs to lethally irradiated congenic female mice. Peripheral blood samples were collected at different time points post transplantation. Bone marrow samples were obtained at the end of the experiments. Genomic DNA was isolated and the Y chromosome specific gene, Zfy1, was amplified using quantitative Real time PCR. The engraftment of male donor-derived cells in the female recipient mice was calculated against standard curve with known percentage of male vs. female DNAs. Bcl2 was used as a reference gene to normalize the total DNA amount. Our data suggested that this approach reliably determines donor cell engraftment and provides a useful, yet simple method in measuring hematopoietic cell reconstitution in murine bone marrow transplantation models. Our method can be routinely performed in most laboratories because no costly equipment such as flow cytometry is required.

Determining donor cell engraftment presents a challenge in mouse bone marrow transplant models that lack well-defined phenotypical markers. We described a methodology to quantify male donor cell engraftment in female transplant recipient mice. This method can be used in all mouse strains for the study of HSC functions.

Använda kvantitativ realtids-PCR för att avgöra Engraftment donatorcellen i en konkurrenskraftig Murine Bone Marrow Transplantation Modell

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules ...

Using a Knee Arthrometer to Evaluate Tissue-specific Contributions to Knee Flexion Contracture in the Rat

Normal knee range of motion (ROM) is critical to well-being and allows one to perform basic activities such as walking, climbing stairs and sitting. Lost ROM is called a joint contracture and results in increased morbidity. Due to the difficulty of reversing established knee contractures, early detection is important, and hence, knowing risk factors for their development is essential. The rat represents a good model with which the effect of an intervention can be studied due to the similarity of rat knee anatomy to that of humans, the rat's ability to tolerate long durations of knee immobilization in flexion, and because mechanical data can be correlated with histologic and biochemical analysis of knee tissue.
Using an automated arthrometer, we demonstrate a validated, precise, reproducible, user-independent method of measuring the extension ROM of the rat knee joint at specific torques. This arthrometer can be used to determine the effects of interventions on knee joint ROM in the rat.

The goal of the protocol is to measure the extension range of motion of the rat knee. The effects of various diseases that increase the stiffness of the knee joint and the effectiveness of treatments can be quantified.

Använda en knä Arthrometer att utvärdera vävnadsspecifika bidrag till knä flexionskontraktur hos råtta

Normal knee range of motion (ROM) is critical to well-being and allows one to perform basic activities such as walking, climbing stairs and sitting. Lost ...

Sucrose Preference and Novelty-Induced Hypophagia Tests in Rats using an Automated Food Intake Monitoring System

The prevalence and incidence of depressive disorders are rising worldwide, affecting about 322 million individuals, underlining the need for behavioral studies in animal models. In this protocol, to study depression-like and anhedonic behavior in rats, the established sucrose preference and novelty-induced hypophagia tests are combined with an automated food and liquid intake monitoring system. Prior to testing, in the sucrose preference paradigm, male rats are trained for at least 2 days to consume a sucrose solution in addition to tap water. During the test, rats are again exposed to water and sucrose solution. Consumption is registered every second by the automated system. The ratio of sucrose to total water intake (sucrose preference ratio) is a surrogate parameter for anhedonia. In the novelty-induced hypophagia test, male rats undergo a training period in which they are exposed to a palatable snack. During training, rodents show a stable baseline snack intake. On test day, the animals are transferred from home cages into a fresh, empty cage representing a novel unknown environment with access to the known palatable snack. The automated system records the total intake and its underlying microstructure (e.g., latency to approaching the snack), providing insight into anhedonic and anxious behaviors. The combination of these paradigms with an automated measuring system provides more detailed information, along with higher accuracy by reducing measuring errors. However, the tests use surrogate parameters and only depict depression and anhedonia in an indirect manner.

Presented here is a protocol to study depression-like and anhedonic behavior in rats. It combines two well-established behavioral methods, the sucrose preference and novelty-induced hypophagia tests, with an automated food and liquid intake monitoring system, to indirectly investigate rodent behavior using surrogate parameters.

Sackaros preferens och nyhet-inducerad hypofagi tester hos råttor med hjälp av ett automatiserat födointag övervakningssystem

The prevalence and incidence of depressive disorders are rising worldwide, affecting about 322 million individuals, underlining the need for behavioral ...

Endothelial Cell Transcytosis Assay as an In Vitro Model to Evaluate Inner Blood-Retinal Barrier Permeability

Dysfunction of the blood-retinal barrier (BRB) contributes to the pathophysiology of several vascular eye diseases, often resulting in retinal edema and subsequent vision loss. The inner blood-retinal barrier (iBRB) is mainly composed of retinal vascular endothelium with low permeability under physiological conditions. This feature of low permeability is tightly regulated and maintained by low rates of paracellular transport between adjacent retinal microvascular endothelial cells, as well as transcellular transport (transcytosis) through them. The assessment of retinal transcellular barrier permeability may provide fundamental insights into iBRB integrity in health and disease. In this study, we describe an endothelial cell (EC) transcytosis assay, as an in vitro model for evaluating iBRB permeability, using human retinal microvascular endothelial cells (HRMECs). This assay assesses the ability of HRMECs to transport transferrin and horseradish peroxidase (HRP) in receptor- and caveolae-mediated transcellular transport processes, respectively. Fully confluent HRMECs cultured on porous membrane were incubated with fluorescent-tagged transferrin (clathrin-dependent transcytosis) or HRP (caveolae-mediated transcytosis) to measure the levels of transferrin or HRP transferred to the bottom chamber, indicative of transcytosis levels across the EC monolayer. Wnt signaling, a known pathway regulating iBRB, was modulated to demonstrate the caveolae-mediated HRP-based transcytosis assay method. The EC transcytosis assay described here may provide a useful tool for investigating the molecular regulators of EC permeability and iBRB integrity in vascular pathologies and for screening drug delivery systems.

Endothelial Cell Transcytosis Assay as an In Vitro Model to Evaluate Inner Blood-Retinal Barrier Permeability

This protocol illustrates an in vitro endothelial cell transcytosis assay as a model to evaluate inner blood-retinal barrier permeability by measuring the ability of human retinal microvascular endothelial cells to transport horseradish peroxidase across cells in caveolae-mediated transcellular transport processes.

Endotelcellstranscytosanalys som en in vitro-modell för att utvärdera inre blod-retinal barriärpermeabilitet

Dysfunction of the blood-retinal barrier (BRB) contributes to the pathophysiology of several vascular eye diseases, often resulting in retinal edema and ...

Semi-Automated Planimetric Quantification of Dental Plaque Using an Intraoral Fluorescence Camera

Dental plaque accumulation is quantified using clinical indices or, otherwise, the planimetric plaque index (PPI),&#160;which measures the relative area of a tooth that is covered by plaque deposits. Compared to clinical indices, the PPI has a higher discriminatory power, but traditional planimetry is a time-consuming analysis, as the plaque-covered and clean tooth areas have to be determined manually for each image using image-processing software. Here, we present a method for the semi-automated planimetric quantification of dental plaque, which allows for the rapid processing of up to 1,000 images simultaneously. The method exploits the enhanced contrast between disclosed plaque, sound tooth surfaces, and soft tissues in fluorescence images acquired with an intraoral camera. Careful execution of the clinical procedures and accurate image acquisition are crucial steps for the successful semi-automated identification of the plaque-covered areas. The method is suitable for planimetry on sound facial and oral tooth surfaces, on most composite resin restorations, and on teeth with orthodontic brackets, but not on metallic restorations. Compared to traditional PPI recordings, semi-automated planimetry considerably reduces the amount of time spent on the analysis, as well as the subjective human input, thus increasing the reproducibility of planimetric measurements.

This study presents a semi-automated digital image analysis procedure for the planimetric quantification of disclosed dental plaque based on images acquired with an intraoral fluorescence camera. The method allows for the rapid and reliable quantification of dental plaque in the research environment.

Halvautomatisk planimetrisk kvantifiering av tandplack med hjälp av en intraoral fluorescenskamera

Dental plaque accumulation is quantified using clinical indices or, otherwise, the planimetric plaque index (PPI),&#160;which measures the relative area ...

Förhindra bakre kapselopacifiering genom IOL-rotation vid kataraktoperationer

Rotating the Intraocular Lens to Prevent Posterior Capsular Opacification in Cataract Surgeries

Posterior capsule opacification (PCO) is a common postoperative complication of extracapsular cataract surgery, which is caused by the proliferation and migration of lens epithelial cells and can affect long-term visual outcomes significantly. The most effective treatment for PCO is neodymium-doped yttrium aluminum garnet (Nd:YAG) laser capsulotomy; however, this treatment is associated with posterior segment complication and can break the stability of capsular bag, affecting the position and function of trifocal or toric intraocular lenses (IOLs). Advances in surgical procedures, IOL design, and pharmacy have reduced the rate of PCO in recent years, concentrating on the inhibition of proliferative lens epithelial cells (LECs). This protocol aimed to clear LECs more thoroughly during phacoemulsification and IOL implantation. The first several steps, including clear corneal incision, continuous circular capsulorhexis, hydrodissection, hydrodelineation, and phacoemulsification, were completed as conventional procedures. After placing the IOL into the capsular bag, rotation of the IOL by at least 360&#176; was performed using an irrigation/aspiration tip or a hook, with slight stress on the posterior capsule. Some residuals occurred in the originally transparent capsular bag after rotation of the IOLs. Then, these materials and the viscoelastic were cleared completely using an irrigation/aspiration system. A clear posterior capsule was observed after the surgery in patients undergoing this method. This method of rotating IOLs is a simple, effective, and safe way to prevent PCO by clearing residual LECs and can be carried out without extra tools or skills.

Författare Spotlight: Förbättra visuella resultat vid kataraktkirurgi: En ny teknik för att förhindra bakre kapselopacifiering genom IOL-rotation 

The present protocol describes removing residual epithelial cells by rotating the intraocular lens in extracapsular cataract surgery without extra tools for preventing posterior capsular opacification.

Rotera den intraokulära linsen för att förhindra bakre kapselopacifiering vid kataraktoperationer

Posterior capsule opacification (PCO) is a common postoperative complication of extracapsular cataract surgery, which is caused by the proliferation and ...

Automatiserad processor för tillverkning av CAR-T-celler i klinisk skala

Chimeric Antigen Receptor T Cell Manufacturing on an Automated Cell Processor

Chimeric antigen receptor (CAR)-T cells represent a promising immunotherapeutic approach for the treatment of various malignant and non-malignant diseases. CAR-T cells are genetically modified T cells that express a chimeric protein that recognizes and binds to a cell surface target, resulting in the killing of the target cell. Traditional CAR-T cell manufacturing methods are labor-intensive, expensive, and may carry the risk of contamination. The CliniMACS Prodigy, an automated cell processor, allows for manufacturing cell therapy products at a clinical scale in a closed system, minimizing the risk of contamination. Processing occurs semi-automatically under the control of a computer and thus&#160;minimizes human involvement in the process, which saves time and reduces variability and errors.
This manuscript and video describes the T cell transduction (TCT) process for manufacturing CAR-T cells using this processor. The TCT process involves CD4+/CD8+ T cell enrichment, activation, transduction with a viral vector, expansion, and harvest. Using the Activity Matrix, a functionality that allows ordering and timing of these steps, the TCT process can be customized extensively. We provide a walk-through of CAR-T cell manufacturing in compliance with current Good Manufacturing Practice&#160;(cGMP) and discuss required release testing and preclinical experiments that will support an Investigational New Drug (IND) application. We demonstrate&#160;the feasibility and discuss the advantages and disadvantages of using a&#160;semi-automatic process for clinical CAR-T cell manufacturing. Finally, we describe an ongoing investigator-initiated clinical trial that targets pediatric B-cell malignancies [NCT05480449] as an example of how this manufacturing process can be applied in a clinical setting.

Författare i fokus: Framsteg inom CAR-T-celltillverkning och genterapiproduktion 

This article details the manufacturing process for chimeric antigen receptor T cells for clinical use, specifically using an automated cell processor capable of performing viral transduction and cultivation of T cells. We provide recommendations and describe pitfalls that should be considered during the process development and implementation of an early-phase clinical trial.