Name: using an automated hirschberg test app to evaluate ocular alignment
Uploaded: 2020-03-24T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using an Automated Hirschberg Test App to Evaluate Ocular Alignment at JoVE.com

Bu çalışma kısmen NIH hibe R44EY025902 ve Mass Eye & Ear Curing Kids Grant tarafından desteklenmiştir.

Bu çalışma Helsinki Bildirgesi'nin ilkelerine uygun olarak, Schepens Göz Araştırma Enstitüsü (Boston, MA) ve Spaulding Rehabilitasyon Hastanesi'nde (Boston, MA) yürütülmüştür. Tüm katılımcılardan bilgilendirilmiş onay alındı. Çalışma Mass Eye and Ear (Boston, MA) yerel kurumsal inceleme kurulları tarafından onaylanmıştır.
NOT: Hasta dahil etme kriterleri yatay şaşılık (sabit veya aralıklı ekzotropi veya ezotropi) tanısı idi ve başka görme bozukluğu yoktu...

<ol>
	<li>Kemper, A. R., Clark, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preschool+vision+screening+in+pediatric+practices.">Preschool vision screening in pediatric practices.</a> Clinical Pediatrics. 45 (3), 263-266 (2006).</li><li>Rowe, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+profile+of+strabismus+in+stroke+survivors.">The profile of strabismus in stroke survivors.</a> Eye. 24 (4), 682-685 (2010).</li><li>Black, K., McCarus, C., Collins, M. L. Z., Jensen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+Manifestations+of+Autism+in+Ophthalmology.">Ocular Manifestations of Autism in Ophthalmology.</a> Strabismus. 21 (2), 98-102 (2013).</li><li>Taylor, K., Elliott, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interventions+for+strabismic+amblyopia.">Interventions for strabismic amblyopia.</a> Cochrane Database of Systematic Reviews. 10 (8), (2011).</li><li>Cotter, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fixation+preference+and+visual+acuity+testing+in+a+population-based+cohort+of+preschool+children+with+amblyopia+risk+factors.">Fixation preference and visual acuity testing in a population-based cohort of preschool children with amblyopia risk factors.</a> Ophthalmology. 116 (1), 145-153 (2009).</li><li>Robaei, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+Associated+with+Childhood+Strabismus:+Findings+from+a+Population-Based+Study.">Factors Associated with Childhood Strabismus: Findings from a Population-Based Study.</a> Ophthalmology. 113 (7), 1146-1153 (2006).</li><li>Tarczy-Hornoch, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+factors+for+decreased+visual+acuity+in+preschool+children:+the+multi-ethnic+pediatric+eye+disease+and+Baltimore+pediatric+eye+disease+studies.">Risk factors for decreased visual acuity in preschool children: the multi-ethnic pediatric eye disease and Baltimore pediatric eye disease studies.</a> Ophthalmology. 118 (11), 2262-2273 (2011).</li><li>Chan, K. W., Deng, L., Weissberg, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+Strabismus+by+Non-Health+Care+Professionals+in+an+Ethnically+Diverse+Set+of+Images.">Detection of Strabismus by Non-Health Care Professionals in an Ethnically Diverse Set of Images.</a> JAMA Ophthalmology. 134 (1), 30-36 (2016).</li><li>Hunter, D. G., Guyton, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vertical+location+of+the+corneal+light+reflex+in+strabismus+photography.">Vertical location of the corneal light reflex in strabismus photography.</a> Archives of Ophthalmology. 116 (6), 767-771 (1998).</li><li>Eskridge, J. B., Wick, B., Perrigin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Hirschberg+test:+a+double-masked+clinical+evaluation.">The Hirschberg test: a double-masked clinical evaluation.</a> American Journal of Optometry and Physiological Optics. 65 (9), 745-750 (1988).</li><li>Hasebe, S., Ohtsuki, H., Tadokoro, Y., Okano, M., Furuse, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+reliability+of+a+video-enhanced+Hirschberg+test+under+clinical+conditions.">The reliability of a video-enhanced Hirschberg test under clinical conditions.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 36 (13), 2678-2685 (1995).</li><li>Pundlik, S., Tomasi, M., Liu, R., Houston, K., Luo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+Preliminary+Evaluation+of+a+Smartphone+App+for+Measuring+Eye+Alignment.">Development and Preliminary Evaluation of a Smartphone App for Measuring Eye Alignment.</a> Translational Vision Science &amp; Technology. 8 (1), 19 (2019).</li><li>Cheng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EyeTurn+App+for+School+Vision+Screening.">The EyeTurn App for School Vision Screening.</a> American Academy of Optometry Annual Meeting. , (2018).</li><li>Committee on Practice and Ambulatory Medicine and Section on Ophthalmology. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Photoscreening+for+Children's+Vision+Screening.">Use of Photoscreening for Children's Vision Screening.</a> Pediatrics. 109 (3), 524-525 (2002).</li><li>Simons, B. D., Siatkowski, R. M., Schiffman, J. C., Berry, B. E., Flynn, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pediatric+photoscreening+for+strabismus+and+refractive+errors+in+a+high-risk+population.">Pediatric photoscreening for strabismus and refractive errors in a high-risk population.</a> Ophthalmology. 106 (6), 1073-1080 (1999).</li><li>Kerr, N. C., Somes, G., Enzenauer, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+developmentally-at-risk+status+on+the+reliability+of+the+iScreen(R)+photorefractive+device+in+young+children.">The effect of developmentally-at-risk status on the reliability of the iScreen(R) photorefractive device in young children.</a> The American Journal of Orthopedics. 61, 117-123 (2011).</li><li>Arnold, R. W., O'Neil, J. W., Cooper, K. L., Silbert, D. I., Donahue, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+smartphone+photoscreening+app+to+detect+refractive+amblyopia+risk+factors+in+children+aged+1-6+years.">Evaluation of a smartphone photoscreening app to detect refractive amblyopia risk factors in children aged 1-6 years.</a> Clinical Ophthalmology. 12, 1533-1537 (2018).</li></ol>

Profesyonel eğitimi olmayan bir kişi göz resimleri yakalamak ve yerinde veya uzaktan bir göz bakım uzmanı tarafından yorumlanabilir oküler hizalama ölçümleri elde eyeTurn uygulamasını kullanabilirsiniz. Uygulama, herhangi bir yorum veya tanı yerine yalnızca yanlış hizalamanın büyüklüğünü sağlar. Göz doktoru veya oftalmologlar gibi göz sağlığı uzmanları, yanlış hizalamanın önemli olup olmadığını belirlemeli ve ölçümün alındığı koşullar da dahil olmak üzere diğer faktörle...

Görme bakım kliniklerinde göz hizası ölçümü sıklıkla yapılmaktadır. Prizma nötralizasyonu ile kapak testi göz uyumsuzluk derecesini ölçmek için yaygın olarak kullanılan klinik yöntemdir (şaşılık). Bu yöntem yüksek derecede eğitim ve deneyim gerektirir. Doğru ölçüm, hastalar küçük çocuklar gibi sınava tam olarak giremediklerinde daha zor hale gelir1, beyin yaralanması veya inme olan bireyler2, veya gelişimsel engelli3. Ayrıca, okul taramasında göz hizalama testine ihtiyaç vardır, çünkü şaşılık çocukluk çağında ABD nüfusunun yaklaşık %5−8'inde gelişirveambliyopi vakalarının yaklaşık %30−40'ı şaşılık5,,6,7'yeatfedilen ambliyopi için önemli bir risk faktörüdür. Ancak, okul hemşireleri normalde bu tür tarama için prizma nötralizasyonu ile standart kapak testi yapmak için eğitimli değildir. Göz bakımı olmayan profesyoneller için, şaşılık taramasında ek bir sorun aralıklı şaşılığın (yanlış hizalama her zaman ortaya çıkmamasıdır) ve daha küçük büyüklüklerin görsel olarak belirgin olmamasıdır (<15 prizma diyoptrisi [Δ])8.
Şaşılık tespiti ve ölçümündeki zorlukları ele almak amacıyla, kornea yansımalarının göz ler arasındaki yer değiştirmesini karşılaştırarak fotoğrafik Hirschberg yöntemi9'u uygulayan ve otomatikleştiren bir akıllı telefon uygulaması (EyeTurn) geliştirdik. Konvansiyonel fotoğraf Hirschberg yöntemi kliniklerde iyi tekrarlanabilirlik olduğu gösterilmiştir iken10,11, özel için maliyet, bağımsız cihazlar geniş benimsenmesi için bir engeldir. Standart akıllı telefonlar ile göz hizasını ölçmek için kullanımı kolay bir araç sağlayarak, biz yaygın okul görme tarama ve olmayan göz bakım uzmanları tarafından kullanılan kabul edilecektir hipotez. Daha önceki değerlendirme çalışmalarımız, uygulama ölçümünün 60Δ'ye kadar olan ezotropi ve ekzotropi nin şaşılık büyüklükleri için prizma nın mevcut klinik standardı ve alternatif kapak testi12ile tutarlı olduğunu göstermiştir. Bir pilot okul tarama çalışmasında, biz de uygulama okul hemşiresi standart okul görme tarama protokolleri13tarafından cevapsız aralıklı exotropia olan çocukları tespit yardımcı olabileceğini gösterdi.
Uygulamanın iOS sürümü şu anda araştırma amacıyla istek üzerine araştırmacılar ve klinisyenler tarafından kullanılabilir. İstekliler arasında şimdiye kadar okul hemşireleri, pediatrik oftalmologlar, göz doktorları, nöro-oftalmologlar ve şaşılık uzmanları yer aldı. Bu makalenin amacı, farklı görüntüleme koşulları altında göz hizalama değerlendirmek için uygulamayı kullanmak için ayrıntılı uygulama protokolleri paylaşmakiçin, yani, yakın ve uzak fiksasyon mesafesi; ve göz örtüsü olmadan dürbün füzyon kırmak için.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>EyeTurn</td>
			<td>EyeNexo</td>
			<td></td>
			<td>Smartphone app for measureing eye misalignment</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using an automated hirschberg test app to evaluate ocular alignment

Bir akıllı telefon uygulaması oküler yanlış hizalama objektif ölçümü için otomatik fotoğraf Hirschberg testi gerçekleştirmek için geliştirilmiştir. Yüksek çözünürlüklü görüntülere dayalı iris merkezine göre telefon kamerası flaşı tarafından oluşturulan kornea yansıması farkı hesaplayarak, uygulama Hirschberg testi gerçekleştiren çıplak göz çok daha yüksek bir hassasiyetle yanlış hizalama ölçebilirsiniz. Bir önceki klinik değerlendirme çalışmasında klinik altın standart prizma ve alternatif kapak testi ile karşılaştırılarak doğrulanmıştır. Bu makalenin amacı, kullanıcıların eşdeğer gerçekleştirmek için uygulamayı kullanabilmeleri için, füzyonu kırmak için kapaksız veya kapaklı farklı fiksasyon mesafeleri için göz hizasını ölçmek için uygulamanın nasıl kullanılacağına ilişkin test tekniklerini açıklamaktır. testler genellikle klinikte prizmalar kullanılarak yapılır.

Bu çalışmada, fotoğrafhirschberg testi gerçekleştiren bir akıllı telefon uygulaması kullanarak oküler hizalama değerlendirmek için protokolleri açıklar. Uygulamanın arayüzü Şekil 1'degösterilmiştir. Kullanıcılar kapak testi yapmayı seçebilir veya her iki gözü de hedefe aynı anda, yakın veya uzak fiksasyon mesafelerinde sabitleme yapan bir hastayı ölçebilir. Görüntüleme koşulları test amaçlarına bağlı olarak belirlendikt...

Watch this Scientific Journal Video about Using an Automated Hirschberg Test App to Evaluate Ocular Alignment at JoVE.com

Using an Automated Hirschberg Test App to Evaluate Ocular Alignment

Biz yakın ve uzak fiksasyon koşulları altında apaçık ve aralıklı oküler yanlış hizalama (şaşılık) ölçmek için Hirschberg testi gerçekleştirmek için bir akıllı telefon uygulaması kullanarak bir protokol sıyoruz.

Oküler Hizalama değerlendirmek için Otomatik Hirschberg Test Uygulaması kullanma

A smartphone app has been developed to perform the automated photographic Hirschberg test for objective measurement of ocular misalignment. By computing ...

Geliştirdiğimiz mobil uygulama, araştırma veya klinik kullanım için şaşılığı ölçmek için kullanılabilir. Bu yöntem, şu anda sadece standart bir telefon kamerası ve uygulama yazılımı kullanılarak gerçekleştirilmesi için kapsamlı eğitim ve deneyim gerektiren kolay bir şaşılık ölçümü kolaylaştırır. Uygulama arabiriminde, kullanıcılar bir kapak testi yapmayı veya her iki gözü de hedefe aynı anda, yakın veya uzak bir fiksasyon mesafesinde sabitlenmiş bir hastayı ölçmeyi seçebilirler.Tropia ölçmek için, yakın bir fiksasyon ile tek bir anlık görüntü ile, uygulamayı başlatın ve No Cover modu ayarlayın. Telefonun yakınını seçin ve arka kamera hastaya bakacak şekilde hastadan yaklaşık 40 santimetre uzaklıktaki bir manzara oryantasyonuna yerleştirin. Hastaya el fenerine sabitlemesi için talimat ver.Kesin bir konaklama gerektiren testler için, el fenerinin hemen altında veya üstüne telefonun arkasına bir sabitleme hedefi yapıştırın. Hasta sabitleme olduğunu doğruladığında, uygulama tarafından analiz edilecek anlık görüntü almak için yuvarlak düğmeye basın. Analiz tamamlandığında, uygulama algılanan uzuv sınırını, gözün merkezini ve kornea yansımasının yerini gösterir.Bu özelliklerin belirgin hatalar olmadan algılandığını doğruladıktan sonra, göz hizalamasıyla ilgili ölçümleri gözlemleyin. Ardından, geçerli testi telefonda kaydetmek için Kaydet düğmesine basın veya yeniden test etmek için arka ok düğmesine basın. Uygulamada uzak fiksasyon için aralıklı oküler hizalamayı ölçmek için modu Cover Test olarak ayarlayın ve Far'ı seçin.Telefonu bir manzara yönlendirmesinde tutun, hastanın gözleri arasına yerleştirilmiş flaş kamera ile göz hizasında ki hastadan yaklaşık 40 santimetre uzakta. Hastaya telefonun hemen üstünden, yaklaşık altı metre ötedeki bir hedefe bakmasını söyle. Hastanın bir gözünü kapaması ve yuvarlak düğmeye basması için uygulama algılamaya başlayacaktır.Hastanın düzgün bir şekilde sabitlediğinden emin olurken, tıkanıklığı hızlı bir şekilde çıkartın. Uygulama, tıkanıklık kaldırılır kaldırılmaz otomatik olarak fotoğraf çekecektir. Analiz tamamlandığında, uygulama algılanan uzuv sınırını, gözün merkezini ve kornea yansımasının yerini gösterir.Bu özelliklerin belirgin hatalar olmadan algılandıktan sonra, verileri kaydetmeden veya testi yinelemeden önce prizma diyoptrisinde göz hizalaması için ölçüm sonuçlarını gözden geçirin. Uygulamadaki Angle Kappa ölçümü için Kappa açısını ölçün'i seçin. Telefonu hastadan yaklaşık 40 santimetre uzaklıktaki bir manzara yönünde yerleştirin ve hastaya diğer gözü kaplarken el fenerine sabitlemek için test edilecek gözü kullanmasını emredin.Hastanın düzgün bir şekilde sabitlediğinden emin olurken, uygulama tarafından analiz edilecek anlık görüntü almak için yuvarlak düğmeye dokunun. Analiz tamamlandığında, uygulama algılanan limbus sınırını, gözün merkezini ve kornea yansımasının yerini gösterir. Bu özelliklerin belirgin hatalar olmadan algılandırıladığını doğruladıktan sonra, Kappa açısının ölçüm sonuçlarını derece olarak görüntüleyin.Bu temsili analizde, iki gözün limbus sınırları ve el fenerinin kornea yansıması doğru olarak tespit edilmiş, bu da göz hizalama ölçüsünün Görüntü Analizi hatasına tabi olmadığını düşündürmektedir. Bu özel durumda, hasta sol gözde büyük kornea yansıma ofset açık olduğu gibi ekzotropi bırakmıştı. Uygulama, küçük bir şaşılık açısı ve bilinmeyen Kappa açısı durumlarında, sapma göz belirlemek için uygulama için güvenilmez olacağını, ancak, hangi göz sapma olduğunu bildirmedi.Karşılaştırma için, burada şaşılık olmadan bir örnek gösterilir. Bu analizde hatalı limbus tespiti görülebilir. Kornea yansımasının saptanması doğru olsa da, yeşil daire açıkça uzuv sınırına uymaz ve testin tekrarlanması gerektiğini gösterir.14 deneğin analizinde 10 denek ekzotropi, 4 denek ekzotropi ile sunulmuştur. Doğrusal regresyon analizi, şaşılık açılarının göz ölçümlerinin klinik kapak testi ölçümleri ile uyumlu olduğunu ortaya koymuştur. Uygulamayı kullanırken akılda tutulması gereken iki önemli şey vardır.Bir, her belirli test için kapak testini ve fiksasyon modunu doğru şekilde ayarlayın. İki, göz özelliği algılama doğru olup olmadığını kontrol edin. Uygulama sadece şaşılık ölçümü sağlar ve bir tanı vermez.Klinisyenler bir tanı yapmak için diğer görme ölçümleri ile oküler ölçüm birleştirmek gerekir.

using-an-automated-hirschberg-test-app-to-evaluate-ocular-alignment

Research

JoVE Journal

Medicine

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under physiologic conditions the endothelium is impermeable to albumin, so Evans blue bound albumin remains restricted within blood vessels. In pathologic conditions that promote increased vascular permeability endothelial cells partially lose their close contacts and the endothelium becomes permeable to small proteins such as albumin. This condition allows for extravasation of Evans Blue in tissues. A healthy endothelium prevents extravasation of the dye in the neighboring vascularized tissues. Organs with increased permeability will show significantly increased blue coloration compared to organs with intact endothelium. The level of vascular permeability can be assessed by simple visualization or by quantitative measurement of the dye incorporated per milligram of tissue of control versus experimental animal/tissue. Two powerful aspects of this assay are its simplicity and quantitative characteristics. Evans Blue dye can be extracted from tissues by incubating a specific amount of tissue in formamide. Evans Blue absorbance maximum is at 620 nm and absorbance minimum is at 740 nm. By using a standard curve for Evans Blue, optical density measurements can be converted into milligram dye captured per milligram of tissue. Statistical analysis should be used to assess significant differences in vascular permeability.

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

We are presenting an in vivo assay to test blood vessel permeability. This assay is based on intravenous injection of a dye and subsequent visualization of its diffusion into interstitial spaces.

An<em&gt; In vivo</emKan Gemi Geçirgenlik Test&gt; Test

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under ...

Tıp

Using Quantitative Real-time PCR to Determine Donor Cell Engraftment in a Competitive Murine Bone Marrow Transplantation Model

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules that regulate HSCs. In these transplant model systems, the function of HSCs is determined by the ability of these cells to engraft and reconstitute lethally irradiated recipient mice. Commonly, the donor cell contribution/engraftment is measured by antibodies to donor- specific cell surface proteins using flow cytometry. However, this method heavily depends on the specificity and the ability of the cell surface marker to differentiate donor-derived cells from recipient-originated cells, which may not be available for all mouse strains. Considering the various backgrounds of genetically modified mouse strains in the market, this cell surface/ flow cytometry-based method has significant limitations especially in mouse strains that lack well-defined surface markers to separate donor cells from congenic recipient cells. Here, we reported a PCR-based technique to determine donor cell engraftment/contribution in transplant recipient mice. We transplanted male donor bone marrow HSCs to lethally irradiated congenic female mice. Peripheral blood samples were collected at different time points post transplantation. Bone marrow samples were obtained at the end of the experiments. Genomic DNA was isolated and the Y chromosome specific gene, Zfy1, was amplified using quantitative Real time PCR. The engraftment of male donor-derived cells in the female recipient mice was calculated against standard curve with known percentage of male vs. female DNAs. Bcl2 was used as a reference gene to normalize the total DNA amount. Our data suggested that this approach reliably determines donor cell engraftment and provides a useful, yet simple method in measuring hematopoietic cell reconstitution in murine bone marrow transplantation models. Our method can be routinely performed in most laboratories because no costly equipment such as flow cytometry is required.

Determining donor cell engraftment presents a challenge in mouse bone marrow transplant models that lack well-defined phenotypical markers. We described a methodology to quantify male donor cell engraftment in female transplant recipient mice. This method can be used in all mouse strains for the study of HSC functions.

Rekabetçi bir mürin Kemik İliği Transplantasyon Modelinde Donör Hücre Aşı belirleme Kantitatif Gerçek-zamanlı PCR kullanarak

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules ...

Using a Knee Arthrometer to Evaluate Tissue-specific Contributions to Knee Flexion Contracture in the Rat

Normal knee range of motion (ROM) is critical to well-being and allows one to perform basic activities such as walking, climbing stairs and sitting. Lost ROM is called a joint contracture and results in increased morbidity. Due to the difficulty of reversing established knee contractures, early detection is important, and hence, knowing risk factors for their development is essential. The rat represents a good model with which the effect of an intervention can be studied due to the similarity of rat knee anatomy to that of humans, the rat's ability to tolerate long durations of knee immobilization in flexion, and because mechanical data can be correlated with histologic and biochemical analysis of knee tissue.
Using an automated arthrometer, we demonstrate a validated, precise, reproducible, user-independent method of measuring the extension ROM of the rat knee joint at specific torques. This arthrometer can be used to determine the effects of interventions on knee joint ROM in the rat.

The goal of the protocol is to measure the extension range of motion of the rat knee. The effects of various diseases that increase the stiffness of the knee joint and the effectiveness of treatments can be quantified.

Diz Arthrometer diz fleksiyon kontraktürü fare içinde doku özgü katkıları değerlendirmek için kullanma

Normal knee range of motion (ROM) is critical to well-being and allows one to perform basic activities such as walking, climbing stairs and sitting. Lost ...

Sucrose Preference and Novelty-Induced Hypophagia Tests in Rats using an Automated Food Intake Monitoring System

The prevalence and incidence of depressive disorders are rising worldwide, affecting about 322 million individuals, underlining the need for behavioral studies in animal models. In this protocol, to study depression-like and anhedonic behavior in rats, the established sucrose preference and novelty-induced hypophagia tests are combined with an automated food and liquid intake monitoring system. Prior to testing, in the sucrose preference paradigm, male rats are trained for at least 2 days to consume a sucrose solution in addition to tap water. During the test, rats are again exposed to water and sucrose solution. Consumption is registered every second by the automated system. The ratio of sucrose to total water intake (sucrose preference ratio) is a surrogate parameter for anhedonia. In the novelty-induced hypophagia test, male rats undergo a training period in which they are exposed to a palatable snack. During training, rodents show a stable baseline snack intake. On test day, the animals are transferred from home cages into a fresh, empty cage representing a novel unknown environment with access to the known palatable snack. The automated system records the total intake and its underlying microstructure (e.g., latency to approaching the snack), providing insight into anhedonic and anxious behaviors. The combination of these paradigms with an automated measuring system provides more detailed information, along with higher accuracy by reducing measuring errors. However, the tests use surrogate parameters and only depict depression and anhedonia in an indirect manner.

Presented here is a protocol to study depression-like and anhedonic behavior in rats. It combines two well-established behavioral methods, the sucrose preference and novelty-induced hypophagia tests, with an automated food and liquid intake monitoring system, to indirectly investigate rodent behavior using surrogate parameters.

Otomatik Gıda Alımı İzleme Sistemi Kullanan Sıçanlarda Sakaroz Tercihi ve Yenilik Kaynaklı Hipofaji Testleri

The prevalence and incidence of depressive disorders are rising worldwide, affecting about 322 million individuals, underlining the need for behavioral ...

Endothelial Cell Transcytosis Assay as an In Vitro Model to Evaluate Inner Blood-Retinal Barrier Permeability

Dysfunction of the blood-retinal barrier (BRB) contributes to the pathophysiology of several vascular eye diseases, often resulting in retinal edema and subsequent vision loss. The inner blood-retinal barrier (iBRB) is mainly composed of retinal vascular endothelium with low permeability under physiological conditions. This feature of low permeability is tightly regulated and maintained by low rates of paracellular transport between adjacent retinal microvascular endothelial cells, as well as transcellular transport (transcytosis) through them. The assessment of retinal transcellular barrier permeability may provide fundamental insights into iBRB integrity in health and disease. In this study, we describe an endothelial cell (EC) transcytosis assay, as an in vitro model for evaluating iBRB permeability, using human retinal microvascular endothelial cells (HRMECs). This assay assesses the ability of HRMECs to transport transferrin and horseradish peroxidase (HRP) in receptor- and caveolae-mediated transcellular transport processes, respectively. Fully confluent HRMECs cultured on porous membrane were incubated with fluorescent-tagged transferrin (clathrin-dependent transcytosis) or HRP (caveolae-mediated transcytosis) to measure the levels of transferrin or HRP transferred to the bottom chamber, indicative of transcytosis levels across the EC monolayer. Wnt signaling, a known pathway regulating iBRB, was modulated to demonstrate the caveolae-mediated HRP-based transcytosis assay method. The EC transcytosis assay described here may provide a useful tool for investigating the molecular regulators of EC permeability and iBRB integrity in vascular pathologies and for screening drug delivery systems.

Endothelial Cell Transcytosis Assay as an In Vitro Model to Evaluate Inner Blood-Retinal Barrier Permeability

This protocol illustrates an in vitro endothelial cell transcytosis assay as a model to evaluate inner blood-retinal barrier permeability by measuring the ability of human retinal microvascular endothelial cells to transport horseradish peroxidase across cells in caveolae-mediated transcellular transport processes.

İç Kan-Retinal Bariyer Geçirgenliğini Değerlendirmek için In Vitro Model Olarak Endotel Hücre Transsitozu Testi

Dysfunction of the blood-retinal barrier (BRB) contributes to the pathophysiology of several vascular eye diseases, often resulting in retinal edema and ...

Semi-Automated Planimetric Quantification of Dental Plaque Using an Intraoral Fluorescence Camera

Dental plaque accumulation is quantified using clinical indices or, otherwise, the planimetric plaque index (PPI),&#160;which measures the relative area of a tooth that is covered by plaque deposits. Compared to clinical indices, the PPI has a higher discriminatory power, but traditional planimetry is a time-consuming analysis, as the plaque-covered and clean tooth areas have to be determined manually for each image using image-processing software. Here, we present a method for the semi-automated planimetric quantification of dental plaque, which allows for the rapid processing of up to 1,000 images simultaneously. The method exploits the enhanced contrast between disclosed plaque, sound tooth surfaces, and soft tissues in fluorescence images acquired with an intraoral camera. Careful execution of the clinical procedures and accurate image acquisition are crucial steps for the successful semi-automated identification of the plaque-covered areas. The method is suitable for planimetry on sound facial and oral tooth surfaces, on most composite resin restorations, and on teeth with orthodontic brackets, but not on metallic restorations. Compared to traditional PPI recordings, semi-automated planimetry considerably reduces the amount of time spent on the analysis, as well as the subjective human input, thus increasing the reproducibility of planimetric measurements.

This study presents a semi-automated digital image analysis procedure for the planimetric quantification of disclosed dental plaque based on images acquired with an intraoral fluorescence camera. The method allows for the rapid and reliable quantification of dental plaque in the research environment.

Ağız İçi Floresan Kamera Kullanılarak Diş Plakının Yarı Otomatik Planimetrik Ölçümü

Dental plaque accumulation is quantified using clinical indices or, otherwise, the planimetric plaque index (PPI),&#160;which measures the relative area ...

Katarakt Ameliyatlarında GİL Rotasyonu ile Arka Kapsül Opaklaşmasının Önlenmesi

Rotating the Intraocular Lens to Prevent Posterior Capsular Opacification in Cataract Surgeries

Posterior capsule opacification (PCO) is a common postoperative complication of extracapsular cataract surgery, which is caused by the proliferation and migration of lens epithelial cells and can affect long-term visual outcomes significantly. The most effective treatment for PCO is neodymium-doped yttrium aluminum garnet (Nd:YAG) laser capsulotomy; however, this treatment is associated with posterior segment complication and can break the stability of capsular bag, affecting the position and function of trifocal or toric intraocular lenses (IOLs). Advances in surgical procedures, IOL design, and pharmacy have reduced the rate of PCO in recent years, concentrating on the inhibition of proliferative lens epithelial cells (LECs). This protocol aimed to clear LECs more thoroughly during phacoemulsification and IOL implantation. The first several steps, including clear corneal incision, continuous circular capsulorhexis, hydrodissection, hydrodelineation, and phacoemulsification, were completed as conventional procedures. After placing the IOL into the capsular bag, rotation of the IOL by at least 360&#176; was performed using an irrigation/aspiration tip or a hook, with slight stress on the posterior capsule. Some residuals occurred in the originally transparent capsular bag after rotation of the IOLs. Then, these materials and the viscoelastic were cleared completely using an irrigation/aspiration system. A clear posterior capsule was observed after the surgery in patients undergoing this method. This method of rotating IOLs is a simple, effective, and safe way to prevent PCO by clearing residual LECs and can be carried out without extra tools or skills.

Yazar Spotlight: Katarakt Cerrahisinde Görsel Sonuçların İyileştirilmesi: GİL Rotasyonu Yoluyla Posterior Kapsüler Opaklaşmayı Önlemek İçin Yeni Bir Teknik 

The present protocol describes removing residual epithelial cells by rotating the intraocular lens in extracapsular cataract surgery without extra tools for preventing posterior capsular opacification.

Katarakt Ameliyatlarında Arka Kapsüler Opaklaşmayı Önlemek İçin Göz İçi Merceğin Döndürülmesi

Posterior capsule opacification (PCO) is a common postoperative complication of extracapsular cataract surgery, which is caused by the proliferation and ...

Klinik Ölçekli CAR-T Hücre Üretimi için Otomatik İşlemci

Chimeric Antigen Receptor T Cell Manufacturing on an Automated Cell Processor

Chimeric antigen receptor (CAR)-T cells represent a promising immunotherapeutic approach for the treatment of various malignant and non-malignant diseases. CAR-T cells are genetically modified T cells that express a chimeric protein that recognizes and binds to a cell surface target, resulting in the killing of the target cell. Traditional CAR-T cell manufacturing methods are labor-intensive, expensive, and may carry the risk of contamination. The CliniMACS Prodigy, an automated cell processor, allows for manufacturing cell therapy products at a clinical scale in a closed system, minimizing the risk of contamination. Processing occurs semi-automatically under the control of a computer and thus&#160;minimizes human involvement in the process, which saves time and reduces variability and errors.
This manuscript and video describes the T cell transduction (TCT) process for manufacturing CAR-T cells using this processor. The TCT process involves CD4+/CD8+ T cell enrichment, activation, transduction with a viral vector, expansion, and harvest. Using the Activity Matrix, a functionality that allows ordering and timing of these steps, the TCT process can be customized extensively. We provide a walk-through of CAR-T cell manufacturing in compliance with current Good Manufacturing Practice&#160;(cGMP) and discuss required release testing and preclinical experiments that will support an Investigational New Drug (IND) application. We demonstrate&#160;the feasibility and discuss the advantages and disadvantages of using a&#160;semi-automatic process for clinical CAR-T cell manufacturing. Finally, we describe an ongoing investigator-initiated clinical trial that targets pediatric B-cell malignancies [NCT05480449] as an example of how this manufacturing process can be applied in a clinical setting.

Yazar Spotlight: CAR-T Hücre Üretimi ve Gen Tedavisi Üretimindeki Gelişmeler 

This article details the manufacturing process for chimeric antigen receptor T cells for clinical use, specifically using an automated cell processor capable of performing viral transduction and cultivation of T cells. We provide recommendations and describe pitfalls that should be considered during the process development and implementation of an early-phase clinical trial.