Name: generation of a human ipsc-based blood-brain barrier chip
Uploaded: 2020-03-02T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of a Human iPSC-Based Blood-Brain Barrier Chip at JoVE.com

אנחנו רוצים להודות לד ר סושנה סזוסן לעריכה קריטית. עבודה זו נתמכה על ידי הקרן המדע הישראלי מענק 1621/18, משרד המדע והטכנולוגיה (רוב), ישראל 3-15647, המכון הקליפורני לרפואה רגנרטיבית המענק DISC1-08800, קרן משפחת שרמן, NIH-NINDS מענק 1יום 3NS105703, ואת האגודה ALS מענק 18-SI-389. AH מומן על ידי קרן ולנברג (גרנט מספר 2015.0178).

1. הדור של התאים הנגזרים מעשה ידי iPSC (iNPCs)
<ol><li>לייצר EZ-ספירות ממושבות ipsc כמתואר להלן, כפי שפורסמו בעבר20,21,22.<ol>
<li>תרבות iPSC מושבות לשטף על מרתף קרום המרתף מצופה 6 היטב צלחות (0.5 mg/צלחת) ב mTESR1 או מדיה מסחרית אחרת (ראה לוח חומרים).</li>
		<li>הס?...

<ol>
	<li>Pardridge, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood-brain+barrier+endogenous+transporters+as+therapeutic+targets:+a+new+model+for+small+molecule+CNS+drug+discovery.">Blood-brain barrier endogenous transporters as therapeutic targets: a new model for small molecule CNS drug discovery.</a> Expert Opinion on Therapeutic Targets. 19 (8), 1059-1072 (2015).</li><li>Gastfriend, B. D., Palecek, S. P., Shusta, E. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+the+blood-brain+barrier:+beyond+the+endothelial+cells.">Modeling the blood-brain barrier: beyond the endothelial cells.</a> Current Opinion in Biomedical Engineering. 5, 6-12 (2018).</li><li>Jamieson, J. J., Linville, R. M., Ding, Y. Y., Gerecht, S., Searson, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+iPSC-derived+pericytes+on+barrier+function+of+iPSC-derived+brain+microvascular+endothelial+cells+in+2D+and+3D.">Role of iPSC-derived pericytes on barrier function of iPSC-derived brain microvascular endothelial cells in 2D and 3D.</a> Fluids and Barriers of the CNS. 16 (1), 15 (2019).</li><li>El-Habashy, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+treatment+strategies+for+brain+tumors+and+metastases.">Novel treatment strategies for brain tumors and metastases.</a> Pharmaceutical Patent Analyst. 3 (3), 279-296 (2014).</li><li>Lim, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Huntington's+disease+iPSC-derived+brain+microvascular+endothelial+cells+reveal+WNT-mediated+angiogenic+and+blood-brain+barrier+deficits.">Huntington's disease iPSC-derived brain microvascular endothelial cells reveal WNT-mediated angiogenic and blood-brain barrier deficits.</a> Cell Reports. 19 (7), 1365-1377 (2017).</li><li>Dumitrescu, A. M., Liao, X. H., Weiss, R. E., Millen, K., Refetoff, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-specific+thyroid+hormone+deprivation+and+excess+in+monocarboxylate+transporter+(mct)+8-deficient+mice.">Tissue-specific thyroid hormone deprivation and excess in monocarboxylate transporter (mct) 8-deficient mice.</a> Endocrinology. 147 (9), 4036-4043 (2006).</li><li>Spencer, J. I., Bell, J. S., DeLuca, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+pathology+in+multiple+sclerosis:+reframing+pathogenesis+around+the+blood-brain+barrier.">Vascular pathology in multiple sclerosis: reframing pathogenesis around the blood-brain barrier.</a> Journal of Neurology and Neurosurgical Psychiatry. 89 (1), 42-52 (2018).</li><li>Yamazaki, Y., Kanekiyo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood-brain+barrier+dysfunction+and+the+pathogenesis+of+Alzheimer's+disease.">Blood-brain barrier dysfunction and the pathogenesis of Alzheimer's disease.</a> International Journal of Molecular Sciences. 18 (9), 1965 (2017).</li><li>Ben-Zvi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mfsd2a+is+critical+for+the+formation+and+function+of+the+blood-brain+barrier.">Mfsd2a is critical for the formation and function of the blood-brain barrier.</a> Nature. 509 (7501), 507 (2014).</li><li>Heng, M. Y., Detloff, P. J., Albin, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+genetic+models+of+Huntington+disease.">Rodent genetic models of Huntington disease.</a> Neurobiology of Disease. 32 (1), 1-9 (2008).</li><li>Ho, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ALS+disrupts+spinal+motor+neuron+maturation+and+aging+pathways+within+gene+co-expression+networks.">ALS disrupts spinal motor neuron maturation and aging pathways within gene co-expression networks.</a> Nature Neuroscience. 19 (9), 1256 (2016).</li><li>Griep, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BBB+on+chip:+microfluidic+platform+to+mechanically+and+biochemically+modulate+blood-brain+barrier+function.">BBB on chip: microfluidic platform to mechanically and biochemically modulate blood-brain barrier function.</a> Biomedical Microdevices. 15 (1), 145-150 (2013).</li><li>Prabhakarpandian, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+tumor+networks+for+screening+drug+delivery+systems.">Synthetic tumor networks for screening drug delivery systems.</a> Journal of controlled release. 201, 49-55 (2015).</li><li>Delsing, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Barrier+properties+and+transcriptome+expression+in+human+iPSC-derived+models+of+the+blood-brain+barrier.">Barrier properties and transcriptome expression in human iPSC-derived models of the blood-brain barrier.</a> Stem Cells. 36 (12), 1816-1827 (2018).</li><li>Park, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia-enhanced+Blood-Brain+Barrier+Chip+recapitulates+human+barrier+function+and+shuttling+of+drugs+and+antibodies.">Hypoxia-enhanced Blood-Brain Barrier Chip recapitulates human barrier function and shuttling of drugs and antibodies.</a> Nature Communications. 10 (1), 2621 (2019).</li><li>Vatine, G. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+iPSC-Derived+Blood-Brain+Barrier+Chips+Enable+Disease+Modeling+and+Personalized+Medicine+Applications.">Human iPSC-Derived Blood-Brain Barrier Chips Enable Disease Modeling and Personalized Medicine Applications.</a> Cell Stem Cell. 24 (6), 995-1005 (2019).</li><li>Henry, O. Y. F., Villenave, R., Cronce, M. J., Leineweber, W. D., Benz, M. A., Ingber, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organs-on-chips+with+integrated+electrodes+for+trans-epithelial+electrical+resistance+(TEER)+measurements+of+human+epithelial+barrier+function.">Organs-on-chips with integrated electrodes for trans-epithelial electrical resistance (TEER) measurements of human epithelial barrier function.</a> Lab on a Chip. 17 (13), 2264-2271 (2017).</li><li>Sances, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+iPSC-derived+endothelial+cells+and+microengineered+organ+chip+enhance+neuronal+development.">Human iPSC-derived endothelial cells and microengineered organ chip enhance neuronal development.</a> Stem Cell Reports. 10 (4), 1222-1236 (2018).</li><li>Workman, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+utilization+of+induced+pluripotent+stem+cell&#8211;derived+human+intestinal+organoids+using+microengineered+chips.">Enhanced utilization of induced pluripotent stem cell&#8211;derived human intestinal organoids using microengineered chips.</a> Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 5 (4), 669-677 (2018).</li><li>Ebert, A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EZ+spheres:+a+stable+and+expandable+culture+system+for+the+generation+of+pre-rosette+multipotent+stem+cells+from+human+ESCs+and+iPSCs.">EZ spheres: a stable and expandable culture system for the generation of pre-rosette multipotent stem cells from human ESCs and iPSCs.</a> Stem Cell Research. 10 (3), 417-427 (2013).</li><li>Shelley, B. C., Gowing, G., Svendsen, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cGMP-applicable+expansion+method+for+aggregates+of+human+neural+stem+and+progenitor+cells+derived+from+pluripotent+stem+cells+or+fetal+brain+tissue.">A cGMP-applicable expansion method for aggregates of human neural stem and progenitor cells derived from pluripotent stem cells or fetal brain tissue.</a> Journal of Visualized Experiments. (88), e51219 (2014).</li><li>Vatine, G. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+psychomotor+retardation+using+iPSCs+from+MCT8-deficient+patients+indicates+a+prominent+role+for+the+blood-brain+barrier.">Modeling psychomotor retardation using iPSCs from MCT8-deficient patients indicates a prominent role for the blood-brain barrier.</a> Cell Stem Cell. 20 (6), 831-843 (2017).</li><li>Svendsen, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+for+the+rapid+and+long+term+growth+of+human+neural+precursor+cells.">A new method for the rapid and long term growth of human neural precursor cells.</a> Journal of Neuroscience Methods. 85 (2), 141-152 (1998).</li><li>Lippmann, E. S., Al-Ahmad, A., Azarin, S. M., Palecek, S. P., Shusta, E. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+retinoic+acid-enhanced,+multicellular+human+blood-brain+barrier+model+derived+from+stem+cell+sources.">A retinoic acid-enhanced, multicellular human blood-brain barrier model derived from stem cell sources.</a> Scientific Reports. 4, 4160 (2014).</li><li>Canfield, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+isogenic+blood-brain+barrier+model+comprising+brain+endothelial+cells,+astrocytes,+and+neurons+derived+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">An isogenic blood-brain barrier model comprising brain endothelial cells, astrocytes, and neurons derived from human induced pluripotent stem cells.</a> Journal of Neurochemistry. 140 (6), 874-888 (2017).</li><li>Jamieson, J. J., Gerecht, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chipping+Away+at+Blood-Brain-Barrier+Modeling.">Chipping Away at Blood-Brain-Barrier Modeling.</a> Cell stem cell. 24 (6), 831-832 (2019).</li><li>Faal, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+Mesoderm+and+Neural+Crest-Derived+Pericytes+from+Human+Pluripotent+Stem+Cells+to+Study+Blood-Brain+Barrier+Interactions.">Induction of Mesoderm and Neural Crest-Derived Pericytes from Human Pluripotent Stem Cells to Study Blood-Brain Barrier Interactions.</a> Stem Cell Reports. 12 (3), 451-460 (2019).</li><li>Lippmann, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+blood-brain+barrier+endothelial+cells+from+human+pluripotent+stem+cells.">Derivation of blood-brain barrier endothelial cells from human pluripotent stem cells.</a> Nature Biotechnology. 30 (8), 783 (2012).</li><li>Qian, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+to+blood-brain+barrier+endothelial+cells.">Directed differentiation of human pluripotent stem cells to blood-brain barrier endothelial cells.</a> Science Advances. 3 (11), 1701679 (2017).</li><li>Neal, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Simplified,+Fully+Defined+Differentiation+Scheme+for+Producing+Blood-Brain+Barrier+Endothelial+Cells+from+Human+iPSCs.">A Simplified, Fully Defined Differentiation Scheme for Producing Blood-Brain Barrier Endothelial Cells from Human iPSCs.</a> Stem Cell Reports. 12 (6), 1380-1388 (2019).</li><li>Wevers, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+perfused+human+blood-brain+barrier+on-a-chip+for+high-throughput+assessment+of+barrier+function+and+antibody+transport.">A perfused human blood-brain barrier on-a-chip for high-throughput assessment of barrier function and antibody transport.</a> Fluids and Barriers of the CNS. 15 (1), 23 (2018).</li><li>Huh, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfabrication+of+human+organs-on-chips.">Microfabrication of human organs-on-chips.</a> Nature Protocols. 8 (11), 2135 (2013).</li><li>Huh, D., Matthews, B. D., Mammoto, A., Montoya-Zavala, M., Hsin, H. Y., Ingber, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstituting+organ-level+lung+functions+on+a+chip.">Reconstituting organ-level lung functions on a chip.</a> Science. 328 (5986), 1662-1668 (2010).</li></ol>

השילוב של הטכנולוגיה לעוגב-על-שבב ותאי iPSC-נגזר ב-NVU מחזיקה הבטחה למידול מדויק של BBB האנושי. כאן, אנו מספקים פרוטוקול מפורט עבור יישום פשוט וחזק של שבב BBB מבוסס לאחרונה שפורסם iPSC16. סקירה ותזמון של פרדיגמת הזריעה מוצגת באיור 3. כדי להשיג ולשמור על פונקציות המכשול המ...

BBB הוא מחסום סלקטיבי מאוד המפריד בין ה-CN לדם ממחזור הדם. הוא מגן על פונקציות המוח קריטי מפני חומרים הפרעה פוטנציאלי, גורמים, ו xenobiotics בעוד מאפשר זרם של חומרים מזינים ומטבוליטים אחרים הדרושים כדי לשמור על הומאוסטזיס המוח1. ה-BBB הוא מדור שינה (NVU), בו הננו-כפות הרגליים והתהליכים העצביים מגעים ישירות עם תאי המוח מיקרוכלי-דם (BMECs). אינטראקציות אלה מאפשרות ל-bmecs ליצור מאפייני מכשול מיוחדים הנתמכים על-ידי צמתים הדוקים ומחסיד2,3. היווצרות של המכשול הזה מגביל את המעבר הפרתאי של מולקולות, אבל הוא מכיל מובילי מקוטב כדי להעביר באופן פעיל מולקולות לתוך ה-CN או בחזרה לדם1. בשל מאפייני המכשול הייחודיים הללו, BBB מהווה מכשול גדול להעברת הביופרמקולוגיה למוח, וההערכה היא שפחות מ -5% ממולקולות קטנות באישור ה-FDA יכולים להגיע ל-CN4.
דגמי בעלי חיים שימשו רבות לחקר החדירה BBB והמנגנונים המולקולריים המעורבים בפיתוח BBB5. בעוד מודלים בעלי חיים מייצגים בנאמנות את מורכבות משולבת בסביבה vivo, הבדלים ביטוי ופעילות של מובילי BBB כמו גם ספציפיות מצע על פני מינים לעתים קרובות למנוע התרוממות מדויקת של נתונים בעלי חיים לבני אדם6. לפיכך, מודלים מבוססי-אדם הם קריטיים כדי ללמוד את BBB האנושי ולשימוש בפיתוח תרופות המיועדות למקד את ה-CN. צורך זה הופך להיות אפילו יותר ברור עם שליטה גוברת של תרופות ביולוגיות, ספציפיות לאדם בתחום הפיתוח הפרמצבטי. צבירת ראיות מרמזת כי bbb פרוצים קשורה למספר הפרעות המוח החמורות, כולל גידולים בראש ומחלות נוירולוגיות7,8,9. המודלים האנושיים בנאמנות משקפים מחלות אלה יש פוטנציאל שני 1) לזהות מסלולים הרומן שיכול להיות ממוקד עבור פיתוח התרופה 2) לחזות החדירה של ה-CN, ובכך הפחתת זמן ומשאבים במחקרים פרה-קליניים ואולי ירידה בשיעור כישלון בניסויים קליניים.
במודלים של חוץ גופית יושמו באופן נרחב כדי ללמוד אינטראקציות בין BMECs לבין תאים אחרים של NVU ומסכי התנהלות עבור תרופות לחדירות BBB פוטנציאליים10. כדי ליצור מחדש היבטים מרכזיים של BBB האנושי, במודלים החוץ-גופית חייבים להציג מאפיינים רלוונטיים מבחינה פיזיולוגית (דהיינו, חדירות הקרנף נמוכות והתנגדות מבחינה פיזיולוגית הקשורה לטראנס-תל-שורש). בנוסף, הפרופיל המולקולרי של מערכת החוץ-גופית חייב לכלול ביטוי למערכות התחבורה הפונקציונלית הייצוגית. בדרך כלל, במודלים של חוץ גופית מורכבים בתאי האנדותל כי הם משותפים על קרום למחצה חדיר עם שילובים של תאים NVU אחרים כדי לשפר את מאפייני BBB11. גישה זו מאפשרת הערכה פשוטה ומהירה יחסית של פונקציונליות המכשול וחדירות המולקולה. מודלים אלה מבוססי תא BBB ניתן להקים עם בעל חיים או מקורות תא אדם, כולל תאים מבודדים excisions כירורגי או קווי BMEC מונצח.
לאחרונה, פרוטוקולים כדי להבדיל בין התאים האנושיים החזקים לתוך bmecs הוצגו כמקור אטרקטיבי עבור מודלים bbb האנושי מתורבת12,13. תא גזע מושרה pluripotent (iPSC)-נגזר מסכת הנגזרת (iBMECs) הם מדרגיים מאוד, להפגין מאפיינים מורפולוגיים ופונקציונליים חיוניים של BBB האדם, ולשאת את הגנטיקה של המטופל. בתרבות, iBMECs ליצור מונאולייר כי מבטא סמנים הצומת הדוקה מציג vivo-כמו מתחמי הצומת הדוקה. תאים אלה גם מבטאים סמנים BBB, כולל משגר הגלוקוז BBB, הגלוקוז המוביל 1 (GLUT1). חשוב מכך, ובניגוד מקורות אחרים תאים חלופיים עבור האדם BMECs, iBMECs לרכוש מאפייני המכשול עם ערכים גבוהים כמו אלה שנמדדו ב vivo14, מקטפולז לאורך הציר בזלת צלעות, ומשאבות לבטא פונקציונלי מהיר. יתר על כן, השימוש iPSCs מתוך נושאים שונים שני 1) מברך את ההזדמנות לבחון היבטים של BBB באופן מותאם אישית התרופה 2) מספק מקור גמיש ליצירת סוגים נוספים של תאים של NVU. יצירת תאים אלה ממקור תא איזוגניים כדי ליצור שבבי BBB אישית תסייע גם הבנה בין הבדלים בין בודדים בתגובות התרופה, שהיא מטרה מרכזית לתגובה התנגדות או פרוצים לטיפול נצפתה במחקרים קליניים.
שימוש ב-iBMECs כמו monolayers בתבשיל או על הוספת מעבר חדיר למחצה מייצגת גישה רבת עוצמה עבור מידול BBB. מערכות אלה נוטות להיות חזקות, מיועלות וחסכוניות. בנוסף, ניתוחים פונקציונליים כגון הפרטיר והחדירות הם פשוטים יחסית לביצוע. עם זאת, דו מימדי (2D) מערכות לא לחזור לסדר את הטבע 3D של רקמת vivo, ואין להם את הכוח הפיזיולוגי להדגיש כוחות שסופקו על ידי במחזור דם ותאי דם. הדבר מגביל את יכולת האנדותל של כלי הדם במודלים אלה כדי לפתח ולתחזק מאפיינים ופונקציות מהותיים של BBB.
מערכות מיקרו הנדסה מרופדת על ידי תאים חיים יושמו למודל האיברים השונים שונים במושג שנקרא עוגב-על-צ'יפס. על-ידי יצירה מיוצרת של אדריכלות מvivo כמו, ממשקי רקמה רקמה, מיקרוקוכימיה פיסיוכימיקלים, ו perfusion כלי דם, אלה פלטפורמות מיקרו מהונדסים ליצור רמות של רקמות ואיברים פונקציונליות לא אפשרי עם מערכות התרבות 2D קונבנציונאלי. הם גם מאפשרים ברזולוציה גבוהה, הדמיה בזמן אמת, ניתוח של פרופילים ביוכימיים, גנטיים, ומטבוליים דומים לתאי החיים בתוך רקמת vivo והקשר עוגב. עם זאת, אתגר מסוים של האיבר על שבב הוא העיצוב, ייצור, ויישום של שבבי מיקרו מהונדסים אלה דורש מומחיות הנדסה מיוחדת כי הוא בדרך כלל חסר במעבדות האקדמיות מונחה ביולוגית.
לאחרונה שילבו ipsc וטכנולוגיות עוגב-על-שבב כדי ליצור מודל מותאם אישית של שבב bbb15,16. על מנת להתגבר על האתגרים הטכנולוגיים שתוארו, השבב הזמין מסחרית משמש יחד עם מודול התרבות, מכשיר שנועד להפוך את התחזוקה של האסימונים בצורה פשוטה ואיתנה (הדמיית Inc.). שבב BBB משחזר את האינטראקציות בין תאים עצביים ואנדותל ומשיגה את ערכי העגלון הרלוונטיים מבחינה פיזיולוגית, הנמדדת על ידי שבבי עוגב מותאמים אישית עם אלקטרודות זהב משולבות17. בנוסף, שבב BBB מציג חדירות הקרנף נמוך, מגיב לרמזים דלקתיים ברמת האיבר, מבטא משאבות מיצוי פעיל, ומציג הובלה חזוי של ביוארים מסיסים וביופרמצבטיקה. בעיקר, שבבי BBB שנוצרו ממספר אנשים לוכדת את ההבדלים הפונקציונליים צפוי בין אנשים בריאים וחולים עם מחלות נוירולוגיות15.
הפרוטוקול המפורט להלן מתאר שיטה אמינה, יעילה ובעלת שדרוג ליצירת שבבי BBB מבוססי-האדם בתנאי זרימה דינמיים. ההדרכה מסופקת על סוג של מנתח וניתוח נקודות הקצה שניתן לבצע ישירות בשבב BBB או מדגימת קולחים. לפיכך, הפרוטוקול ממחיש את הספקטרום של טכניקות שניתן ליישם להערכת תכונות ביולוגיות ופונקציונליות ותגובות במודל הרלבנטי לאדם.
המלון מספק תיאור קצר של שבב BBB המבוסס על iPSC. האדם iPSCs הם הבדיל בתחילה והופץ בתוך מבחנות התרבות רקמות כמו אגרגטים בחינם צף של ושלתי עצביים, כינה כדורי EZ. הערוץ העליון של השבב-S116,18,19 הוא נזרע עם הנתק EZ-כדורים שיוצרים את "הצד המוח" של השבב, כמו תאים להבדיל מעל 7 ימים לתוך תרבות מעורבת של תאים מחולל קדמון (inpcs), iastrocytes, ו ineurons. האדם iPSCs גם מובחנת לוחיות התרבות רקמות לתוך iBMECs. הערוץ התחתון של השבב הוא הנזרע עם iBMECs כדי ליצור את "הצד הדם" כפי שהם מפתחים כדי ליצור צינורית אנדותל (איור 1). מטריצה נקבובי מגולוון (ecm) מצופה קרום המפריד בין הערוצים העליונים והתחתונים 1) מתיר את היווצרות אינטראקציות תא אל התא בין ערוצים ו 2) מאפשר למשתמש להפעיל חדירות בחני התאים התמונה באחד הערוצים באמצעות מיקרוסקופ אור קונבנציונאלי.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>SCR005</td>
			<td>Dissociation solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12587010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bfgf</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-18B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chip-S1</td>
			<td>Emulate Inc</td>
			<td>Chip-S1</td>
			<td>Organ-Chip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen IV</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C5533</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D3571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran-FITC</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>46944</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM: F12</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>31330038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey serum</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D9663</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Emulate Reagent 1 (ER-1)</td>
			<td>Emulate Inc</td>
			<td>ER-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Emulate Reagent 2 (ER-2)</td>
			<td>Emulate Inc</td>
			<td>ER-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibronectin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F1141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP)</td>
			<td>Dako</td>
			<td>Z0334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GLUT-1</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>MA5-11315</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>35050038</td>
			<td>Glutamine supplement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hBDNF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>450-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KOSR</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10828028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L2020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354234</td>
			<td>Basement membrane matrix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mTeSR1</td>
			<td>StemCell Technologies, Inc.</td>
			<td>85851</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEAA</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>01-340-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nestin</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB353</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NutriStem</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>05-100-1A</td>
			<td>Alternate media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PECAM-1</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platelet-poor plasma-derived bovine serum (PPP)</td>
			<td>Biomedical Technologies</td>
			<td>J64483AB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retinoic acid (RA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R2625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S100&#946;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab6602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steriflip-GP Sterile Centrifuge Tube Top Filter Unit</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SCGP00525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>X100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZO-1 Monoclonal Antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>33-9100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;III-tubulin (Tuj1&#945;)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8660</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-mercaptoethanol</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>31350010</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of a human ipsc-based blood-brain barrier chip

מחסום מוח הדם (BBB) נוצר על ידי יחידות נוירוכלי (הבוס) כי מגן על מערכת העצבים המרכזית (CN) מתוך מגוון של גורמים שנמצאו בדם שיכול לשבש את תפקוד המוח העדין. ככזה, BBB הוא מכשול גדול להעברת therapeutics לתוך ה-CN. צבירת ראיות עולה כי BBB משחק תפקיד מפתח בתחילתה והתקדמות של מחלות נוירולוגיות. לפיכך, יש צורך אדיר במודל BBB שיכול לחזות את החדירה של תרופות ממוקדות-CN, כמו גם להבהיר את תפקידה של BBB בבריאות ובמחלות.
יש לנו לאחרונה שילבו איבר על שבב והמושרה תא גזע pluriפוטנטי (iPSC) טכנולוגיות לייצר שבב BBB אישית מלאה לבני אדם. פלטפורמת הרומן מציגה תכונות סלולריות, מולקולריות ופיזיולוגיות המתאימות לחיזוי העברת הסמים והמולקולה ברחבי BBB האנושי. יתר על כן, באמצעות שבבי BBB ספציפי לחולה, יצרנו מודלים של מחלות נוירולוגיות והפגינו פוטנציאל עבור יישומים מותאמים אישית לרפואה חזוי. בתנאי כאן הוא פרוטוקול מפורט הממחיש כיצד לייצר שבבי BBB נגזר, החל בבידול של iPSC-נגזר מיקרוכלי המוח של תאים אנדותל (iBMECs) וכתוצאה מכך תרבויות עצביות מעורבת המכילה ושלתי עצביים, נוירונים הבדיל, ו astrocytes. כמו כן, מתוארת הליך לזריעת תאים לתוך שבב העוגב ולקבלת שבבי BBB תחת זרימה מבוקרת של שכבתית. לבסוף, תיאורים מפורטים של ניתוחי השבבים BBB מסופקים, כולל הפרפרביליות הפרסומליות להערכת תרופות וחדירות מולקולה, כמו גם שיטות אימונוציטוטוקוכימיקלים לקביעת ההרכב של סוגי תאים בתוך השבב.

איור 6A, B, C מייצג שבב bbb הנזרע עם EZ-כדורים על "צד המוח" בערוץ העליון ו-ibmecs על "הצד הדם" "הערוץ התחתון. iBMECs הופרה הראשון ומותר לצרף לילה, לאחר שנוצרו EZ ספירות. צ'יפס היו מתורבתים בתנאים סטטיים עם החלפת מדיה יומית במשך שבעה ימים. שבב BBB תוקן לאחר מכן באמצעות 4% כלפי מע ב RT עבו?...

Watch this Scientific Journal Video about Generation of a Human iPSC-Based Blood-Brain Barrier Chip at JoVE.com

Generation of a Human iPSC-Based Blood-Brain Barrier Chip

מחסום הדם-מוח (BBB) הוא יחידת נוירונימי-דם הדוקה באופן הדוק הומאוסטזיס מוחי. על ידי שילוב האדם iPSCs והעוגב-על-שבב טכנולוגיות, יצרנו שבב BBB אישי, מתאים למידול מחלות ותחזיות החדירה לתרופות של הפונקציה. פרוטוקול מפורט מתואר לדור ותפעול של שבב BBB.

הדור של המוח האנושי מבוסס על-ידי שבב דם-מחסום

The blood brain barrier (BBB) is formed by neurovascular units (NVUs) that shield the central nervous system (CNS) from a range of factors found in the ...

פרוטוקול זה ידגים כיצד ניתן לזרוע תאי גזע פלוריפוטנטיים מובחנים על איבר על שבב כדי ליצור מחסום דם-מוח מיקרופלואידי אנושי לחלוטין, מותאם אישית, שניתן להשתמש בו כדי לחזות חרניות תרופה של מערכת העצבים המרכזית וללמוד הפרעות נוירולוגיות. באמצעות איבר על שבב הזמין מסחרית, אנו נדגים כיצד כל מעבדה מוכוונת ביולוגית יכולה להשתמש בטכנולוגיה זו כדי ליצור מחסום דם-מוח מיקרופלואידי מותאם אישית. הצטברות ראיות עולה כי BBB ממלא תפקיד במחלה נוירולוגית על ידי יצירת שבבי BBB מותאמים אישית הנגזרים iPSCs של אנשים עם מחלה נוירולוגית גנטית.ניתן יהיה ללמוד את תפקידו של BBB בבריאות ומחלות. שיטה זו יכולה גם להיות שימושית עבור חברות פארמה, אשר יכול להשתמש בפלטפורמת BBB אנושית זו כדי לסנן את החדירה של תרופות נוירולוגיות מועמד לתוך המוח האנושי. היישום של טכנולוגיות איברים על שבב דורש בדרך כלל מיומנויות הנדסיות מיוחדות.שימוש בפלטפורמות מסחריות מאפשרות יישום של טכנולוגיה זו בכל מעבדה מוכוונת ביולוגית. כדי להתחיל, להביא את המנה המכילה את השבבים מוכנים לארון biosafety. באמצעות פיפטה P200, בעדינות לשטוף את שני הערוצים על ידי הוספת 200 microliters של מדיום התברואה עצבית לתוך התוך התוך ומשיכת הנוזל מהשקע.הימנעות ממגע עם היציאות, שאף בזהירות טיפות מדיה עודפות מפני השטח של השבב. בעדינות להתסיס את ההשעיה התא כדי להבטיח השעיית תא הומוגני. כדי לזרוע את תאי הצאצא העצביים שמקורם ב- iPSC לתוך הערוץ העליון כדי ליצור את צד המוח, הוסף קצה P200 המכיל 30 עד 100 מיקרוליטרים של השעיית תאים בריכוז של פי 10 עד ששת התאים למיליליטר לתוך עמוד הערוץ העליון, ושחרר בעדינות את הקצה מהפיגט.קח פיפטה P200 ריקה, לדכא את הבוכנה, להכניס לשקע הערוץ העליון, בזהירות למשוך את ההשעיה תא יחיד דרך הקצה. העבר את השבב למיקרוסקופ כדי לבדוק את צפיפות הזריעה ואת ההתפלגות ההומוגנית של תאים בתוך הערוץ העליון. לאחר אישור צפיפות התא בכיסוי של 20%, הנח מיד את השבבים באינקובטור למשך שעתיים ב-37 מעלות צלזיוס.לאחר מכן, לשטוף את התאים כי לא לצרף על ידי הוספת מדיום התברואה עצבית טרי לתוך שקע מושך את הנוזל באמצעות פיפטה מן השקע. שמור על התאים בתנאים סטטיים ב 37 מעלות צלזיוס עם החלפה בינונית התברואה עצבית יומית. לאחר iNPCs מחוברים או ביום שלאחר מכן לאחר הזריעה, להביא את המנה המכילה את השבבים מוכנים לארון biosafety.לשטוף בעדינות את הערוץ התחתון עם 200 microliters של מדיום תא אנדותל. הימנעות ממגע עם היציאות, בזהירות שאפו טיפות של מדיום תא אנדותל עודף מפני השטח של השבב, הקפדה להשאיר בינוני בשני הערוצים. בעדינות להתסיס את ההשעיה התא כדי להבטיח השעיית תא הומוגני.באמצעות פיפטה P200, לצייר עד 30 עד 100 microliters של ה-iPSC נגזר המוח microvascular ההשעיה תא אנדותל בריכוז של 14 עד 20 פעמים 10 לשישה תאים למיליליטר, ולמקם את הקצה לתוך המפרצון הערוץ התחתון. הצעד הקריטי ביותר להשגת תכונות מחסום תפקודי הוא זריעת תאי אנדותל מיקרווסקולריים במוח. זה חיוני לתאי זרעים בצפיפות נאותה כדי למנוע היווצרות בועה כדי לאמת הפצה הומוגנית בתוך שבב האיבר.לדכא את הבוכנה על פיפטה P200 עם קצה ריק, להכניס לשקע הערוץ התחתון, ולאט לאט לשחרר את הבוכנה פיפטה למשוך בזהירות את ההשעיה תא יחיד דרך הערוץ התחתון. שאף את ההשעיה העודפת של התא מפני השטח של השבב. הימנע ממגע ישיר עם יציאות השקע והשקע כדי להבטיח שאף מתלה תא לא ישאף לצאת מהערוצים.מעבירים את השבב למיקרוסקופ כדי לבדוק את צפיפות הזריעה. הערוץ התחתון מלא בתאים ללא פערים ניתנים לצפייה ביניהם. לאחר אישור צפיפות התאים הנכונה, זרע את התאים בשבבים הנותרים.כדי לחבר את התאים אל הממברנה הנקבובית, הממוקמת על גבי התעלה התחתונה, להפוך כל שבב, ולתת להם לנוח בעריסה שבב. מניחים מאגר קטן המכיל DPBS סטרילי בתוך צלחת 150 מילימטר כדי לספק לחות לתאים. דגירה השבבים ב 37 מעלות צלזיוס במשך כשלוש שעות או עד תאים בערוץ התחתון מחוברים.לאחר שתאי ה אנדותל המיקרו-וסקולריים במוח שמקורם ב- iPSC מחוברים, הופכים את השבבים בחזרה למצב זקוף כדי לאפשר חיבור תא לחלק התחתון של הערוץ התחתון. 48 שעות לאחר הזריעה של תאי הדם המיקרו-וסקולריים במוח שמקורם ב- iPSC, לצייד את הטמפרטורה של מדיום התא ה אנדותל על ידי התחממות באמבט מים צלזיוס 37 מעלות במשך שעה אחת. לאחר מכן, degas המדיום על ידי דגירה תחת מערכת סינון מונחה ואקום במשך 15 דקות.לאחר מכן, חטא את החלק החיצוני של האריזה והמגשים הניידים עם 70% אתנול, נגב והעבר אותם לארון ה-biosafety. פתח את החבילה, והצב את המודולים במגש כוון אותם עם המאגרים לכיוון החלק האחורי של המגש. פיפטה שלושה מיליליטר של המדיה החמה והמנויידת מראש לכל מאגר פנימה.הוסף מדיום תרבות תא אנדותל למאגר inlet של הערוץ התחתון ואת מדיום ההתברמות העצבית למאגר הערוצים העליון של הערוץ העליון. לאחר מכן, פיפטה 300 מיקרוליטרים של המדיה החמה והמתואם מראש לכל מאגר שקע, ישירות מעל כל יציאת מוצא. מקם עד שישה מודולים ניידים על כל מגש.הביאו מגשים לאנקובטור, והחליקו לחלוטין לתוך מודול התרבות כשידית המגש פונה כלפי חוץ. בחר והפעל את המחזור הראשי במודול התרבות. סגור את דלת החממה, ואפשר למודול התרבות לחבר את המודולים הניידים במשך כדקה.מחזור ההקדמות יושלם כאשר שורת המצב תהיה מוכנה. מוציאים את המגש ממודודול התרבות ומביאים אותו לארון ה-biosafety. בדוק את החלק התחתון של כל מודול נייד בארון biosafety כדי לוודא כי המודולים הניידים היו בהצלחה primed.חפש את נוכחותן של טיפות קטנות בכל ארבעת הנמלים. אם מודול נייד כלשהו אינו מציג טיפות, לחץ מחדש על המחזור הראשי במודולים אלה. אם מדיה כלשהי טפטף על המגש, המתרחש לעתים קרובות יותר על ידי יציאות היציאה, נקה את המגש עם 70%אתנול.לאחר מכן, שטפו בעדינות את שני הערוצים של כל שבב עם מדיום תרבות חם ושורף לתאים כדי להסיר בועות אפשריות בערוץ, והצב טיפות קטנות של מדיה בחלק העליון של כל יציאה פנימה ושקע. הכנס את השבבים עם מנשאים לתוך המודולים הניידים, והצב עד שישה על כל מגש. הכנס את המגשים למודול התרבות.תכנת את תנאי תרבות שבבי האיברים המתאימים, כגון קצב זרימה ומתיחה, במודול התרבות. ברגע מחזור לווסת הושלמה, אשר לוקח כשעתיים, התנאים מתוכנת להתחיל. לאחר מכן, מודול התרבות מתחיל לזרום בתנאי תרבות שבבי האיברים המוגדרים מראש.אימונוציטוכימיה על שבב מחסום הדם - מוח מבוסס iPSC שבעה ימים לאחר הזריעה מראה את ספירות EZ נבדל לתוך אוכלוסיית תאים עצביים מעורבים בערוץ בצד המוח העליון, כולל S100 אסטרוציטים חיוביים בטא, נסטין חיובי תאי ניוון עצבי, כמו גם אסטרוציטים חיוביים GFAP, ובטא III טובולין חיובי נוירונים. תאי אנדותל מיקרו-וסקולריים במוח שמקורם ב- IPSC שנזרעו בערוץ צד הדם התחתון הביעו GLUT-1 ו- PECAM-1. הערכה של החודרות שבב מחסום הדם - מוח מדגים כי שבב האיבר זרע עם תאי אנדותל microvascular המוח נגזר iPSC ו כדוריות EZ היה מחסום הדוק בהשוואה שבבי איברים זרע עם תאי אנדותל microvascular המוח נגזר iPSC לבד.שבבי איברים עם כדורי EZ בלבד לא הציגו תכונות מחסום כלשהן. מטיפול פני השטח הראשוני של הערוץ למיתוג בינוני בכל יום, הימנע היווצרות בועה בערוץ. לאורך כל השלב בפרוטוקול שבו יש להכניס מדיום להפעלת פני השטח, מטריצה חוץ-תאית או מדיום המכיל תאים דרך הערוצים, חשוב מאוד לוודא בזהירות שלא נמצאה בועה.ניתן לבצע את ההתמדה חדירה כדי להעריך את חדירת המוח האנושי של תרופות מועמדות. גישה זו יכולה לשמש לבדיקת טיפולים פוטנציאליים. היישום של שבב BBB מבוסס iPSC מאפשר ללמוד את התפקיד של BBB במחלות נוירולוגיות שונות.בעתיד, פלטפורמה כזו עשויה להיות שימושית עבור יישומי רפואה חזויים ומותאים אישית.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Generation of Human Adipose Stem Cells through Dedifferentiation of Mature Adipocytes in Ceiling Cultures

דור של תאי גזע שומן האדם דרך Dedifferentiation של מבוגרים adipocytes בתרבויות תקרה

Mature adipocytes have been shown to reverse their phenotype into fibroblast-like cells in vitro through a technique called ceiling culture. Mature ...

Generation of Integration-free Human Induced Pluripotent Stem Cells Using Hair-derived Keratinocytes

דור של תאי גזע האינטגרציה נטול האדם המושרה pluripotent שימוש קרטינוציטים נגזר שיער

Recent advances in reprogramming allow us to turn somatic cells into human induced pluripotent stem cells (hiPSCs). Disease modeling using ...

Generation of Genetically Modified Organotypic Skin Cultures Using Devitalized Human Dermis

דור של תרבויות עור Organotypic מהונדסות גנטי שימוש חסר חיוניות עור אדם

Organotypic cultures allow the reconstitution of a 3D environment critical for cell-cell contact and cell-matrix interactions which mimics the function ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Human Melanoma Tumor-infiltrating Lymphocytes

דור של תאי גזע מושרים ממלנומה האדם שחדר-גידול לימפוציטים

Adoptive transfer of ex vivo expanded autologous tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) can mediate durable and complete responses in significant subsets ...

Defined and Scalable Generation of Hepatocyte-like Cells from Human Pluripotent Stem Cells

מוגדרי דור Scalable של תאי Hepatocyte דמוי מתאי גזע פלוריפוטנטיים האנוש

Human pluripotent stem cells (hPSCs) possess great value for biomedical research. hPSCs can be scaled and differentiated to all cell types found in the ...

Generation of iPSC-derived Human Brain Organoids to Model Early Neurodevelopmental Disorders

הדור של Organoids Human Brain iPSC הנגזרות למודל הפרעה נוירו-התפתחותית מוקדמת

The restricted availability of suitable in vitro models that can reliably represent complex human brain development is a significant bottleneck that ...

Generation and Culturing of Primary Human Keratinocytes from Adult Skin

דור, Culturing של ראשי Keratinocytes האדם מן העור למבוגרים

The main function of keratinocytes is to provide the structural integrity of the epidermis, thereby maintaining a mechanical barrier to the outside world. ...

Real-time Measurement of Epithelial Barrier Permeability in Human Intestinal Organoids

בזמן אמת מדידה של מחסום האפיתל חדירות ב Organoids מעיים אנושיים

Advances in 3D culture of intestinal tissues obtained through biopsy or generated from pluripotent stem cells via directed differentiation, have resulted ...

Assay for Blood-brain Barrier Integrity in Drosophila melanogaster

Assay for Blood-brain Barrier Integrity in Drosophila melanogaster

שיטת שלמות המוח בדם בדרוזופילה מלאנוסטר

Proper nervous system development includes the formation of the blood-brain barrier, the diffusion barrier that tightly regulates access to the nervous ...

Generation of Multicellular Human Primary Endometrial Organoids

הדור של אורגנואידים האדם העיקרי של רירית הרחם

The human endometrium is one of the most hormonally responsive tissues in the body and is essential for the establishment of pregnancy. This tissue can ...