Name: live cell imaging of microtubule cytoskeleton and micromechanical manipulation of the arabidopsis shoot apical meristem
Uploaded: 2020-05-23T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Cell Imaging of Microtubule Cytoskeleton and Micromechanical Manipulation of the Arabidopsis Shoot Apical Meristem at JoVE.com

1. Plantevekst
<ol><li>Så Arabidopsis frø uttrykker mikrotubuli bindende domene smeltet sammen med grønt fluorescerende protein (MBD-GFP)10 på jord og holde i lang dag (16 timer dag / 8 h natt), 20 ° C / 6 ° C forhold i 1 uke for spiring.</li>
	<li>Etter spiring, overføre frøplanter til nye potter med tilstrekkelig vekst plass for å tillate robust vegetativ vekst. Oppbevar planter på kort dag (8 timer dag /16 timer natt), 20 °C/16 °C i 3-5 uker.</li>
	<li>Overfør planter ti...

<ol>
	<li>Cosgrove, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Re-constructing+our+models+of+cellulose+and+primary+cell+wall+assembly.">Re-constructing our models of cellulose and primary cell wall assembly.</a> Current Opinion in Plant Biology. 22, 122-131 (2014).</li><li>McFarlane, H. E., Doring, A., Persson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cell+biology+of+cellulose+synthesis.">The cell biology of cellulose synthesis.</a> Annual Reviews in Plant Biology. 65, 69-94 (2014).</li><li>Burgert, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+the+micromechanical+design+of+plant+cell+walls.">Exploring the micromechanical design of plant cell walls.</a> American Journal of Botany. 93 (10), 1391-1401 (2006).</li><li>Paredez, A. R., Somerville, C. R., Ehrhardt, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+cellulose+synthase+demonstrates+functional+association+with+microtubules.">Visualization of cellulose synthase demonstrates functional association with microtubules.</a> Science. 312 (5779), 1491-1495 (2006).</li><li>Barbier de Reuille, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MorphoGraphX:+A+platform+for+quantifying+morphogenesis+in+4D.">MorphoGraphX: A platform for quantifying morphogenesis in 4D.</a> Elife. 4, 05864 (2015).</li><li>Kierzkowski, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elastic+domains+regulate+growth+and+organogenesis+in+the+plant+shoot+apical+meristem.">Elastic domains regulate growth and organogenesis in the plant shoot apical meristem.</a> Science. 335 (6072), 1096-1099 (2012).</li><li>Heisler, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alignment+between+PIN1+polarity+and+microtubule+orientation+in+the+shoot+apical+meristem+reveals+a+tight+coupling+between+morphogenesis+and+auxin+transport.">Alignment between PIN1 polarity and microtubule orientation in the shoot apical meristem reveals a tight coupling between morphogenesis and auxin transport.</a> PLoS Biology. 8 (10), e1000516 (2010).</li><li>Louveaux, M., Rochette, S., Beauzamy, L., Boudaoud, A., Hamant, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+mechanical+compression+on+cortical+microtubules+in+Arabidopsis:+a+quantitative+pipeline.">The impact of mechanical compression on cortical microtubules in Arabidopsis: a quantitative pipeline.</a> Plant Journal. 88 (2), 328-342 (2016).</li><li>Nakayama, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+regulation+of+auxin-mediated+growth.">Mechanical regulation of auxin-mediated growth.</a> Current Biology. 22 (16), 1468-1476 (2012).</li><li>Marc, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+GFP-MAP4+reporter+gene+for+visualizing+cortical+microtubule+rearrangements+in+living+epidermal+cells.">A GFP-MAP4 reporter gene for visualizing cortical microtubule rearrangements in living epidermal cells.</a> Plant Cell. 10 (11), 1927-1940 (1998).</li><li>Strauss, S., Sapala, A., Kierzkowski, D., Smith, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+Plant+Growth+and+Cell+Proliferation+with+MorphoGraphX.">Quantifying Plant Growth and Cell Proliferation with MorphoGraphX.</a> Methods in Molecular Biology. 1992, 269-290 (2019).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Erguvan, O., Louveaux, M., Hamant, O., Verger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ImageJ+SurfCut:+a+user-friendly+pipeline+for+high-throughput+extraction+of+cell+contours+from+3D+image+stacks.">ImageJ SurfCut: a user-friendly pipeline for high-throughput extraction of cell contours from 3D image stacks.</a> BMC Biology. 17 (1), 38 (2019).</li><li>Boudaoud, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FibrilTool,+an+ImageJ+plug-in+to+quantify+fibrillar+structures+in+raw+microscopy+images.">FibrilTool, an ImageJ plug-in to quantify fibrillar structures in raw microscopy images.</a> Nature Protocols. 9 (2), 457-463 (2014).</li><li>Sampathkumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+wall+cellulose+synthase+regulates+shoot+apical+meristem+mechanics+and+growth.">Primary wall cellulose synthase regulates shoot apical meristem mechanics and growth.</a> Development. 146 (10), (2019).</li><li>Hervieux, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Mechanical+Feedback+Restricts+Sepal+Growth+and+Shape+in+Arabidopsis.">A Mechanical Feedback Restricts Sepal Growth and Shape in Arabidopsis.</a> Current Biology. 6 (8), P1019-P1028 (2016).</li><li>Sampathkumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcellular+and+supracellular+mechanical+stress+prescribes+cytoskeleton+behavior+in+Arabidopsis+cotyledon+pavement+cells.">Subcellular and supracellular mechanical stress prescribes cytoskeleton behavior in Arabidopsis cotyledon pavement cells.</a> Elife. 3, e01967 (2014).</li><li>Sampathkumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+wall+cellulose+synthase+regulates+shoot+apical+meristem+mechanics+and+growth.">Primary wall cellulose synthase regulates shoot apical meristem mechanics and growth.</a> Development. 146 (10), dev179036 (2019).</li><li>Uyttewaal, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+stress+acts+via+katanin+to+amplify+differences+in+growth+rate+between+adjacent+cells+in+Arabidopsis.">Mechanical stress acts via katanin to amplify differences in growth rate between adjacent cells in Arabidopsis.</a> Cell. 149 (2), 439-451 (2012).</li><li>Hamant, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+patterning+by+mechanical+signals+in+Arabidopsis.">Developmental patterning by mechanical signals in Arabidopsis.</a> Science. 322 (5908), 1650-1655 (2008).</li></ol>

Vurderingen av mekaniske signaltransduksjonshendelser er avgjørende for å identifisere molekylære regulatorer som er involvert i mekano-persepsjons- og transduksjonsbanene. Protokollen som er beskrevet her gir et kvantitativt syn på slike hendelser ved å bruke den kortikale mikrotubuliresponsen som en avlesning for en slik prosess i Arabidopsis SAMs. Prosedyren beskrevet her brukes rutinemessig i flere studier i ulike vevstyper16,17,<sup ...

Planteceller er omgitt av en ekstracellulær matrise av polysakkarider og glykoproteiner som mekanisk ligner et fiberforsterket komposittmateriale som er i stand til å dynamisk endre sine mekaniskeegenskaper 1. Vekst i planteceller er drevet av opptaket av vann inn i cellen, noe som resulterer i en samtidig oppbygging av strekkkrefter på celleveggen. Som svar på slike krefter tillater endringer i celleveggens fysiske tilstand celleutvidelse. Celler med primærvegger er i stand til å gjennomgå rask vekst sammenlignet med sekundærcellevegg som inneholder celler, hovedsakelig på grunn av forskjeller i polysakkarides kjemiske sammensetning innenfor. Primære veggceller består av cellulose, hemicellulose og pektin i tillegg til glykoproteiner, og mangler lignin, en komponent som er tilstede i den sekundære celleveggen2. Cellulose, en glukosepolymer knyttet β-1,4 bind, er den viktigste komponenten i celleveggene. Det er organisert i fibrillar strukturer som er i stand til å motstå høye strekkkrefter opplevd under cellevekst3. I tillegg til å motstå strekkfasthet, resulterer mekanisk forsterkning langs en fortrinnsrett retning i turgordrevet ekspansjon langs en akse vinkelrett på nettorienteringen til cellulosemikrofibril. Organiseringen av cellulosemikrofibrillene påvirkes av det kortikale mikrotubulicycytskeleton, da de styrer retningsbevegelsen til cellulosesyntetiserende komplekser som ligger ved plasmamembranen4. Derfor, overvåking kortikale mikrotubuli organisasjon ved hjelp av en mikrotubbul-assosiert protein eller tubulin smeltet med et fluorescerende molekyl fungerer som en proxy for observasjon av overlying mønstre av cellulose i planteceller.
Mønsteret av kortikale mikrotubuli cytoskeleton er under kontroll av celle- og vevmorfologi avledet mekaniske krefter. Kortikal mikrotubuli organisasjon har ingen fortrinnsrett organisasjon over tid i celler som ligger på toppen av SAM, mens celler i periferien og grensen mellom SAM og det nye organet har en stabil, svært organisert supracellular utvalg av kortikale mikrotubuli5. Flere tilnærminger er utviklet for å fysisk perturb den mekaniske statusen til cellene. Endringer i osmotisk status, samt behandling med farmakologiske og enzymatiske forbindelser som påvirker stivheten i celleveggen, kan føre til påfølgende endringer i strekkkreftene som oppleves av cellen6,7. Bruken av innretninger som tillater gradvis økning i kompresjonskrefter opplevd av vev er et annet alternativ8. Bruk av sentrifugalkrefter har også vist seg å påvirke de mekaniske kreftene uten fysisk kontakt med cellene9. Imidlertid utnytter de mest brukte måtene å endre retningskrefter i en gruppe celler seg av det faktum at alle epidermale celler er under spenning og fysisk ablasjon av celler, eliminere turgortrykk lokalt, samt forstyrre celle-til-celle-vedheft, og dermed endre strekkkreftene oppleves av de nærliggende cellene. Dette utføres enten ved å målrette en kraftig pulserende ultrafiolett laser eller ved hjelp av en fin nål.
Her utdyper vi prosessen med avbildning og vurdering av kortikal mikrotubuli atferd for mekanisk perturbasjon ved SAM.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>FibrilTool</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Boudaoud, A. et al., Nat Protoc. 2014</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FIJI</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Schindelin, J. et al., Nat Methods. 2012</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glycine</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.04201.1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica SP8 confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DM6000 CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MAP4-GFP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Marc, J. et al., Plant Cell 1998</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>micropore tape</td>
			<td>Leukopor</td>
			<td>02482-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MorphographX</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Strauss, S. et al., Methods Mol Biol. 2019</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>myo-inositol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I5125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N6-benzyladenine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B3408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>nicotinic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>N4126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plastic hinged box</td>
			<td>Electron microscopy sciences</td>
			<td>64312</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PPM (Plant Preservative Mixture)</td>
			<td>Plant Cell Technology</td>
			<td>PPM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium iodide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4864</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pyridoxine hydrochloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P9755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SURFCUT</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Erguvan, O. et al., BMC Biol. 2019</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>thiamine hydrochloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T4625</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live cell imaging of microtubule cytoskeleton and micromechanical manipulation of the arabidopsis shoot apical meristem

Forstå celle og vev nivå regulering av vekst og morfogenese har vært i forkant av biologisk forskning i mange tiår. Fremskritt innen molekylære og bildeteknologier gjorde det mulig for oss å få innsikt i hvordan biokjemiske signaler påvirker morfogenetiske hendelser. Det er imidlertid stadig tydeligere at bortsett fra biokjemiske signaler, påvirker mekaniske signaler også flere aspekter av celle- og vevsvekst. Arabidopsis skyte apical meristem (SAM) er en kuppelformet struktur ansvarlig for generering av alle overjordiske organer. Organiseringen av det kortikale mikrotubulicytskeletonet som formidler apoplastisk cellulosedeponering i planteceller er romlig distinkt. Visualisering og kvantitativ vurdering av mønstre av kortikale mikrotubuli er nødvendig for å forstå cellenes biofysiske natur ved SAM, da cellulose er den kvelende komponenten i plantecelleveggen. Den stereotypiske formen for kortikale mikrotubuli organisasjon er også en konsekvens av vev-wide fysiske krefter som finnes på SAM. Perturbasjon av disse fysiske kreftene og påfølgende overvåking av kortikale mikrotubuli organisasjon gjør det mulig for identifisering av kandidatproteiner involvert i å megle mekano-persepsjon og transduksjon. Her beskriver vi en protokoll som bidrar til å undersøke slike prosesser.

Figur 1 viser typiske projeksjonsbilder hentet fra MBD-GFP-linjer med celler i midten av kuppelen som inneholder uorganiserte kortikale mikrotubuli, og celler i periferien har en omkretsfordeling (figur 1A,B), mens grensedomenecellene inneholder kortikale mikrotubuli justert parallelt med cellens lange akse. Disse observasjonene viser forskjeller i romlig fordeling av kortikale mikrotubuli i de forskjellige domen...

Watch this Scientific Journal Video about Live Cell Imaging of Microtubule Cytoskeleton and Micromechanical Manipulation of the Arabidopsis Shoot Apical Meristem at JoVE.com

Live Cell Imaging of Microtubule Cytoskeleton and Micromechanical Manipulation of the Arabidopsis Shoot Apical Meristem

Her beskriver vi en protokoll for levende celleavbildning av det kortikale mikrotubulicycyskeletonen ved skyteapokaell meristem og overvåking av responsen på endringer i fysiske krefter.

Live Cell Imaging av Microtubule Cytoskeleton og Mikromekanisk manipulering av Arabidopsis Shoot Apical Meristem

Understanding cell and tissue level regulation of growth and morphogenesis has been at the forefront of biological research for many decades. Advances in ...

Denne protokollen hjelper oss å forstå hvordan Microtubule Cytoskeleton atferd skjer i planter. Samtidig hjelper det oss også å forstå hvordan disse strukturelle komponentene som påvirker celle- og organform, reagerer på endringer i mekaniske krefter. Selv om denne metoden krever lite raffinement, gir den robust, kvantitativ lesing, de mekaniske responsforskjellene mellom forskjellige genotyper og forhold.Begynn med å dyrke arabidopsisfrø som uttrykker mikrotubulibindende domener smeltet sammen med grønt fluorescerende protein i jord, ved 20 og 6 grader Celsius under lange dagsforhold i en uke. Etter spiring, overføre plantene til nye potter med tilstrekkelig vekst plass for å tillate robust vegetativ vekst, og plassere plantene på 20 og 16 grader Celsius under korte dagforhold. Etter tre til fem uker, overføre plantene tilbake til lange dagforhold ved samme temperatur til plantene bolt, slik at blomsterstanden å vokse opp til to til fem centimeter lang.For Shoot Apical Meristem disseksjon, putt blomsterstanden, og bruk skarpe tang for å skrelle blomstene ved foten av peduncles, til det er vanskelig å se peduncles med det blotte øye for å fjerne de eldre blomsterknoppene. Bruk tangen til å lage en spalte i agros i en disseksjonsfat, og plante blomsterstanden inn i den tykke auguren. Plasser parabolen under et dissekerende mikroskop.Starter med den eldste blomsterknoppen, skyv med tang for å fjerne blomsterknoppen fra planten. Skyte apical meristem er vanligvis utsatt når eldre blomster opp til trinn seks til syv er fjernet. Og bruk tangen til å presse hver blomsterknopp ned til skyte apical meristem er synlig.Så snart skyte apical meristem er utsatt, la den ny dissekert prøven i vekstmedium i en etanol-sterilisert rektangulær plast hengslet kultur boks med skyte apical meristem bare utsatt over middels overflate. Tilsett noen dråper sterilt deionisert vann til kantene på kulturboksen og lukk lokket for å opprettholde fuktigheten inne i boksen. Pakk boksen med mikroporetape, og plasser vekstboksen under lange eller kontinuerlige dagforhold ved 22 grader Celsius i 12 til 24 timer.Når anlegget har kommet seg etter disseksjonsprosedyren, dekk prøven med sterilt deionisert vann og se etter luftbobler under disseksjonsmikroskopet. Overfør kulturboksen til et oppreist konfokalt mikroskopstadium, og velg 40 eller 60X vanndyppingslinsen. Senk målet ned i vannet og se etter luftbobler på objektets frontlinse.For å fjerne bobler, senk scenen og tørk forsiktig linsen med et optisk vev. Bruk deretter en Pasteur pipette til å legge til et lite volum vann til forsiden linsen av målet før re-nedsenking linsen i vannet. Deretter bruker du GFP-filteret og epibelysningsmodulen til det konokale mikroskopet til å justere XY-kontrolleren for å finne prøven.Justere plasseringen av okulære, plassere skyte apical meristem direkte under lyskilden, og fokuser langs Z-aksen til toppunktet er plassert. Bruk en laser som er i stand til spennende GFP for å belyse prøven, og juster den optiske zoomen til mikroskopet, slik at hele skyte apical meristem og scenen en floral primordia er i synsfeltet. Juster deretter laserutgangens effekt og forsterkingsinnstillingene for å oppnå et optimalt signal-til-støy-forhold.Etter at prøven har lagt seg i to til fem minutter, kan du skaffe konfokale Z-stabler av prøven ved 0,25 til 0,5 mikrometer Z-skiveintervaller, og legger til omtrent 0,3 mikromålerpikselstørrelsesoppløsning. På slutten av oppkjøpet, umiddelbart fjerne vannet og overføre kulturboksen tilbake til vekstkammeret. For Micromechanical Shoot Apical Meristem Perturbation, få pre-ablation bilde stabler av kortikale mikrotubuli organisasjon som nettopp demonstrert, og decaf vannet fra kulturboksen inn i en kulturrett.Overfør skyte apical meristem under et dissekerende mikroskop, og sakte nærmet skyte apical meristem med en ren 0,4 av 20 millimeter sprøyte nål. Kontakt kort periferien av kuppelen på skyteapikale meristem med nålespissen for å bekrefte at ablasjonen er fullført. Og fyll på kulturretten med sterilt deionisert vann.Deretter legger du til 10 mikrogram per milliliter propidiumjodid til parabolen og umiddelbart skaffe bildestabler som demonstrert annenhver time i seks timer, og returnerer kulturretten til inkubasjonen mellom hvert tidspunkt. For dataanalyse, generere overflateprojeksjoner av bildestabler ved hjelp av en passende bildeanalyse program, og utføre utvinning av kortikale mikrotubular anisotropi ved hjelp av Fibril Tool Macro i Fiji. Her, typiske projeksjon bilder hentet fra mikrotubule bindende domene GFP linjer med celler i midten av kuppelen som inneholder uorganiserte kortikale mikrotubuli, celler i periferien, har en omkretsfordeling og grensedomeneceller som inneholder kortikale mikrotubuli justert parallelt med cellens lange akse kan observeres.Time-lapse imaging, viser kortikale mikrotublin justering endring fra en svært uorden array til en mer organisert array innen seks timer etter ablasjon. Tensors kan legges over de kortikale mikrotubulibildene, og den utpakkede informasjonen kan representeres ved å plotte den gjennomsnittlige anisotropien over tid. Når du justerer laserutgangseffekt og forsterkninger, bør vi sikre at den er klar observasjon av filamentene og prøver å unngå overeksponering, da over mettede signaler kan forutse strekkretningen i senere analyse.Atomkraftmikroskopi kan også utføres for å vurdere hvordan endringene i de mekaniske kreftene faktisk påvirker celleveggens fysiske status.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Cell Imaging of Microtubule Cytoskeleton and Micromechanical Manipulation of the Arabidopsis Shoot Apical Meristem

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

Live-Imaging av medfødte immun og preneoplastiske Cell Interaksjoner Bruke en induserbar Gal4 / UAS Expression System i Larvesebrafisk Skin

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Live-avbildning av<em&gt; Drosophila</em&gt; Pupal Eye

Inherent processes of Drosophila pupal development can shift and distort the eye epithelium in ways that make individual cell behavior difficult to track ...

Live Confocal Imaging of Developing Arabidopsis Flowers

Lev Confocal Imaging av Developing Arabidopsis blomster

The study of plant growth and development has long relied on experimental techniques using dead, fixed tissues and lacking proper cellular resolution. ...

Bioengineering of Humanized Bone Marrow Microenvironments in Mouse and Their Visualization by Live Imaging

Bioengineering av humaniserte benmarg mikromiljøer i mus og deres visualisering av levende bildebehandling

Human hematopoietic stem cells (HSCs) reside in the bone marrow (BM) niche, an intricate, multifactorial network of components producing cytokines, growth ...

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Ovule dyrking for Live-celle Imaging av zygoten polarisering og Embryo mønstre Arabidopsis thaliana

In most flowering plants, the zygote and embryo are hidden deep in the mother tissue, and thus it has long been a mystery of how they develop dynamically; ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

Methods for Imaging Intracellular pH of the Follicle Stem Cell Lineage in Live Drosophila Ovarian Tissue

Methods for Imaging Intracellular pH of the Follicle Stem Cell Lineage in Live Drosophila Ovarian Tissue

Metoder for Imaging intracellulær pH i hårsekken stamcelleforskningen slektslinje i Live Drosophila Ovarian vev

Changes in intracellular pH (pHi) play important roles in the regulation of many cellular functions, including metabolism, proliferation, and ...

Live Cell Imaging of Chromosome Segregation During Mitosis

Levende celle Imaging av kromosom segregering under mitose

Chromosomes must be reliably and uniformly segregated into daughter cells during mitotic cell division. Fidelity of chromosomal segregation is controlled ...

Confocal Live Imaging of Shoot Apical Meristems from Different Plant Species

AC confocal Live bildebehandling av skyte apikal Meristems fra forskjellige plantearter

The shoot apical meristem (SAM) functions as a conserved stem cell reservoir and it generates almost all aboveground tissues during the postembryonic ...

Dissection and Live-Imaging of the Late Embryonic Drosophila Gonad

Dissection and Live-Imaging of the Late Embryonic Drosophila Gonad

Disseksjon og live-imaging av sen embryonal drosophila Gonad

The Drosophila melanogaster male embryonic gonad is an advantageous model to study various aspects of developmental biology including, but not limited to, ...