Name: purification of fibroblasts and schwann cells from sensory and motor nerves in vitro
Uploaded: 2020-05-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro at JoVE.com

وقد دعم هذه الدراسة البرنامج الوطني الرئيسي للبحث والتطوير في الصين (منحة رقم 2017YFA0104703)، المؤسسة الوطنية الطبيعية في الصين (منحة رقم 31500927).

وقد أجريت هذه الدراسة وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية لرعاية الحيوانات في جامعة نانتونغ. وقد وافقت لجنة ادارة الحيوانات التجريبية بمقاطعة جيانغسو الصينية اخلاقيا على جميع الاجراءات بما فيها الاجراءات الحيوانية .
1. العزلة والثقافة من الخلايا الليفية العصبية الحركية والحس?...

<ol>
	<li>Stierli, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+regulation+of+the+homeostasis+and+regeneration+of+peripheral+nerve+is+distinct+from+the+CNS+and+independent+of+a+stem+cell+population.">The regulation of the homeostasis and regeneration of peripheral nerve is distinct from the CNS and independent of a stem cell population.</a> Development (The Company of Biologists). , (2018).</li><li>Schubert, T., Friede, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+endoneurial+fibroblasts+in+myelin+degradation.">The role of endoneurial fibroblasts in myelin degradation.</a> Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 40 (2), 134-154 (1981).</li><li>Dreesmann, L., Mittnacht, U., Lietz, M., Schlosshauer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+fibroblast+impact+on+Schwann+cell+behavior.">Nerve fibroblast impact on Schwann cell behavior.</a> European Journal of Cell Biology. 88 (5), 285-300 (2009).</li><li>Lavdas, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cells+engineered+to+express+the+cell+adhesion+molecule+L1+accelerate+myelination+and+motor+recovery+after+spinal+cord+injury.">Schwann cells engineered to express the cell adhesion molecule L1 accelerate myelination and motor recovery after spinal cord injury.</a> Experimental Neurology. 221 (1), 206-216 (2010).</li><li>Parrinello, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EphB+signaling+directs+peripheral+nerve+regeneration+through+Sox2-dependent+Schwann+cell+sorting.">EphB signaling directs peripheral nerve regeneration through Sox2-dependent Schwann cell sorting.</a> Cell. 143 (1), 145-155 (2010).</li><li>Benito, C., Davis, C. M., Gomez-Sanchez, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=STAT3+Controls+the+Long-Term+Survival+and+Phenotype+of+Repair+Schwann+Cells+during+Nerve+Regeneration.">STAT3 Controls the Long-Term Survival and Phenotype of Repair Schwann Cells during Nerve Regeneration.</a> Journal of Neuroscience Research. 37 (16), 4255-4269 (2017).</li><li>Zhang, Z. J., Jiang, B. C., Gao, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+in+neuron-glial+cell+interaction+and+pathogenesis+of+neuropathic+pain.">Chemokines in neuron-glial cell interaction and pathogenesis of neuropathic pain.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 74 (18), 3275-3291 (2017).</li><li>Hoke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cells+express+motor+and+sensory+phenotypes+that+regulate+axon+regeneration.">Schwann cells express motor and sensory phenotypes that regulate axon regeneration.</a> Journal of Neuroscience. 26 (38), 9646-9655 (2006).</li><li>Brushart, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cell+phenotype+is+regulated+by+axon+modality+and+central-peripheral+location,+and+persists+in+vitro.">Schwann cell phenotype is regulated by axon modality and central-peripheral location, and persists in vitro.</a> Experiment Neurology. 247, 272-281 (2013).</li><li>He, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+Gene+Expression+in+Primary+Cultured+Sensory+and+Motor+Nerve+Fibroblasts.">Differential Gene Expression in Primary Cultured Sensory and Motor Nerve Fibroblasts.</a> Frontiers in Neuroscience. 12, 1016 (2018).</li><li>Weinstein, D. E., Wu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+3,+Unit+17:+Isolation+and+purification+of+primary+Schwann+cells.">Chapter 3, Unit 17: Isolation and purification of primary Schwann cells.</a> Current Protocols in Neuroscience. , (2001).</li><li>Palomo Irigoyen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Purification+of+Primary+Rodent+Schwann+Cells.">Isolation and Purification of Primary Rodent Schwann Cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1791, 81-93 (2018).</li><li>Cheng, L., Khan, M., Mudge, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcitonin+gene-related+peptide+promotes+Schwann+cell+proliferation.">Calcitonin gene-related peptide promotes Schwann cell proliferation.</a> Journal of Cell Biology. 129 (3), 789-796 (1995).</li><li>Pannunzio, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+of+selecting+Schwann+cells+from+adult+mouse+sciatic+nerve.">A new method of selecting Schwann cells from adult mouse sciatic nerve.</a> Journal of Neuroscience Methods. 149 (1), 74-81 (2005).</li><li>Shen, M., Tang, W., Cao, Z., Cao, X., Ding, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+rat+Schwann+cells+based+on+cell+sorting.">Isolation of rat Schwann cells based on cell sorting.</a> Molecular Medicine Reports. 16 (2), 1747-1752 (2017).</li><li>He, Q., Man, L., Ji, Y., Ding, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+in+the+biological+characteristics+between+primary+cultured+sensory+and+motor+Schwann+cells.">Comparison in the biological characteristics between primary cultured sensory and motor Schwann cells.</a> Neuroscience Letters. 521 (1), 57-61 (2012).</li><li>Weiss, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomics+and+transcriptomics+of+peripheral+nerve+tissue+and+cells+unravel+new+aspects+of+the+human+Schwann+cell+repair+phenotype.">Proteomics and transcriptomics of peripheral nerve tissue and cells unravel new aspects of the human Schwann cell repair phenotype.</a> Glia. 64 (12), 2133-2153 (2016).</li></ol>

وشملت المجموعتين الخلايا الرئيسية للأعصاب الطرفية SCs والخلايا الليفية. يمكن للخلايا الليفية المستزرعة في المقام الأول وSCs أن تساعد بدقة في نمّام فسيولوجيا الخلايا الليفية والـ SCs أثناء تطوير الأعصاب المحيطية وتجديدها. وأظهرت الدراسة أن الخلايا العصبية الوركية الفئران P7 تحتوي على حوالي 85...

في الجهاز العصبي المحيطي ، تتكون الألياف العصبية بشكل رئيسي من محاور عصبية وخلايا Schwann (SCs) ، والخلايا الليفية ، وتحتوي أيضًا على عدد قليل من الضامة والخلايا البطانية الدقيقة الوعائية والخلايا المناعية1. SCs التفاف محاور عصبية في نسبة 1:1 وترفق من قبل طبقة النسيج الضام يسمى endoneurium. ثم يتم تجميع المحاور معًا لتشكيل مجموعات تسمى كراسات، ويتم تغليف كل كراسة في طبقة نسيج الضامة المعروفة باسم perineurium. وأخيرا، يتم لف الألياف العصبية كلها في طبقة من النسيج الضام، والذي يطلق عليه الإبينوريوم. في endoneurium ، وتتألف من مجموع الخلايا كلها 48 ٪ SCs ، وجزء كبير من الخلايا المتبقية ينطوي على الخلايا الليفية2. وعلاوة على ذلك، الخلايا الليفية هي مكونات هامة لجميع مقصورات الأعصاب، بما في ذلك الإبينوريوم، والبيرينوريوم، و endoneurium3. وقد أشارت العديد من الدراسات إلى أن SCs والخلايا الليفية تلعب دورا حاسما في عملية التجديد بعد إصابات الأعصاب الطرفية4,5,6. بعد نقل العصب المحيطي، ينظم الخلايا الليفية المحيطة فرز الخلايا عبر مسار إشارة ephrin-B/EphB2 بين SCs واللوثريات الليفية، وتوجيه المزيد من إعادة نمو محور عصبي من خلال الجروح5. الخلايا الليفية العصبية الطرفية تفرز بروتين tenascin-C وتعزز هجرة SCs أثناء تجديد الأعصاب من خلال β1-integrin signals pathway7. ومع ذلك، استمدت SCs و الليفية المستخدمة في الدراسات المذكورة أعلاه من العصب الوركي، والذي يشمل كلا من الأعصاب الحسية والحركية.
في الجهاز العصبي المحيطي، تقوم الأعصاب الحسية (الأعصاب المُعَدّة) بإجراء إشارات حسية من المستقبلات إلى الجهاز العصبي المركزي (CNS)، بينما تقوم الأعصاب الحركية (الأعصاب المُفَرّضة) بإجراء إشارات من الجهاز المركزي للعضلات. وقد أشارت الدراسات السابقة إلى أن SCs التعبير عن أنواع ظاهرية الحركية والحسية متميزة وإفراز العوامل العصبية لدعم تجديد الأعصاب الطرفية8,9. وفقا لدراسة حديثة، الليفية أيضا التعبير عن مختلف الحركية والأنماط الظاهرية الحسية وتؤثر على هجرة SCs10. وهكذا، فإن استكشاف الاختلافات بين الخلايا الليفية العصبية الحركية والحسية/الخلايا العصبية العصبية يسمح لنا بدراسة الآليات الجزيئية الأساسية المعقدة للتجديد المحددة للأعصاب الطرفية.
في الوقت الحاضر، وهناك العديد من الطرق لتنقية SCs والخلايا الليفية، بما في ذلك تطبيق العوامل المضادة للmitotic، والخلايا التي تعمل بوساطة الأجسام المضادة11،12، مناعة متتابعة13 و لامينين substratum14. ومع ذلك، جميع الأساليب المذكورة أعلاه إزالة الخلايا الليفية والحفاظ على SCs فقط. SCs المنقى للغاية والليفية يمكن الحصول عليها عن طريق تدفق تكنولوجيا فرز الخلايا15، لكنه تقنية تستغرق وقتا طويلا ومكلفة. ومن ثم، في هذه الدراسة، تم تطوير عملية هضم التفاضلية البسيطة وطريقة الالتزام التفاضلي لتنقية وعزل الخلايا الليفية العصبية الحسية والحركية وSCs من أجل الحصول على عدد كبير من الخلايا الليفية والـ SCs بسرعة أكبر.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 594 Goat Anti-Mouse IgG(H+L)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A11005</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CoraLite488-conjugated Affinipure Goat Anti-Mouse IgG(H+L)</td>
			<td>Proteintech</td>
			<td>SA00013-1</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>TCS SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Quest software</td>
			<td>Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Hank&#39;s balanced salt solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14170112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZ2-ILST</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10099-141C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forskolin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F6886-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoroshield Mounting Medium</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab104135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixation medium/Permeabilization medium</td>
			<td>Multi Sciences (LIANKE) Biotech, Co., LTD</td>
			<td>GAS005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometry</td>
			<td>Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td>FACS Calibur</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG1 kappa [MOPC-21] (FITC) - Isotype Control</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab106163</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse monoclonal anti-CD90 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab225</td>
			<td>Dilution: 1:1000 for ICC, 0.1 &#181;g for 106 cells for Flow Cyt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-S100 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab212816</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polylysine (PLL)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human NRG1-beta 1/HRG1-beta 1 EGF Domain Protein</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>396-HB-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% (w/v) trypsin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200-072</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

purification of fibroblasts and schwann cells from sensory and motor nerves in vitro

الخلايا الرئيسية في الجهاز العصبي المحيطي هي خلايا Schwann (SCs) والخلايا الليفية. كل من هذه الخلايا تعبر بوضوح عن الأنماط الظاهرية الحسية والحركية المشاركة في أنماط مختلفة من التعبير الجيني عامل العصبية والعمليات البيولوجية الأخرى، مما يؤثر على تجديد الأعصاب. وقد وضعت هذه الدراسة بروتوكولا للحصول على درجة عالية من تنقية الفئران الحسية والمحركات SCs والالخلايا الليفية بسرعة أكبر. تم فصل الجذر البطني (العصب الحركي) والجذر الظهري (العصب الحسي) للفئران الوليدية (7 أيام من العمر) وتم استزراع الخلايا لمدة 4-5 أيام ، تليها عزل الخلايا الليفية الحسية والحركية وSCs من خلال الجمع بين الهضم التفاضلي وأساليب الالتزام التفاضلي بشكل تسلسلي. أظهرت نتائج التحليلات في الكيمياء المناعية والتدفق للخلايا أن نقاء الـ SCs الحسية والحركية والليفية كانت >90٪. يمكن استخدام هذا البروتوكول للحصول على عدد كبير من الخلايا الليفية الحسية والحركية /SCs بسرعة أكبر ، مما يساهم في استكشاف تجديد الأعصاب الحسية والحركية.

الملاحظة المجهرية الخفيفة SCs والخلايا الليفية هما الخلايا الرئيسية التي تم الحصول عليها في ثقافة الخلية الأولية من الأنسجة العصبية. بعد تلقيح 1 ساعة ، انضمت معظم الخلايا إلى الجزء السفلي من الطبق ، وتغيرت مورفولوجيا الخلية من جولة إلى بيضاوية. بعد زراعة لمدة 24 ...

Watch this Scientific Journal Video about Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro at JoVE.com

Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro

هنا، نقدم طريقة لتنقية الخلايا الليفية وخلايا شوان من الأعصاب الحسية والحركية في المختبر.

تنقية الخلايا الليفية وخلايا شوان من الأعصاب الحسية والحركية في المختبر

The principal cells in the peripheral nervous system are the Schwann cells (SCs) and the fibroblasts. Both these cells distinctly express the sensory and ...

ويمكن استخدام هذا البروتوكول للحصول على عدد كبير من أجهزة الاستشعار والخلايا الليفية الحركية والخلايا Schwann بسرعة. يمكن استخدام الخلايا التي تم الحصول عليها من خلال هذه الرسالة في دراسة تجديد الأعصاب وأمراض الجهاز العصبي. نظهر مظاهرة يمكن أن تمثل التجريبية لتحسين السيطرة على الوقت من التفاضلية خطوة الجهاز الهضمي وجعل الخطوات التجريبية أسهل لفهم.لتنفجر استخدام مقص لجعل شق ثلاثة سنتيمترات، في الجلد من الظهر. إزالة العمود الفقري. افتح القناة الفقرية بعناية لفضح الحبل الشوكي.الدانتيل الحبل الشوكي في طبق بيتري 60 ملليمتر، مع ثلاثة إلى أربعة ملليلتر من الجليد الباردة D هانكس حل الملح متوازنة تحت مجهر تشريح، استئصال الجذر البطني والجذر الظهري. وضعها في الجليد الباردة D هانكس متوازن محلول الملح. بعد إزالة HBSS، شريحة الأعصاب إلى ثلاثة إلى خمسة قطع ملليمتر، مع مقص.إضافة ملليلتر واحد من 0.25٪ التربسين ونقل القطع العصبية إلى خمسة أنابيب أجهزة الطرد المركزي ملليلتر. احتضان في 37 درجة مئوية لمدة 18 إلى 20 دقيقة. بعد ذلك ، لوقف الهضم ، أضف في ثلاثة إلى أربعة ملليلتر من DMEM تحتوي على مصل الأبقار الجنينية 10٪.الميوط الخليط صعودا وهبوطا بلطف حوالي 10 مرات. جهاز طرد مركزي في 800 مرة G لمدة خمس دقائق. بعد الطرد المركزي تجاهل المابير.وإعادة تعليق الترسب في 2-3 ملليلتر من DMEM تكملها 10٪ FBS. تصفية تعليق الخلية من خلال مرشح شبكة 400، ومن ثم استخدام التعليق لتطعيم طبق بيتري 60 ملليمتر. احتضان أطباق بيتري لمدة أربعة إلى خمسة أيام في 37 درجة مئوية، في وجود 5٪ ثاني أكسيد الكربون.عندما تصل الثقافة إلى التقاء 90٪، قم بغسل الخلايا مرة واحدة باستخدام 1XPBS. ثم، لهضم الخلايا Schwann، إضافة ملليلتر واحد من 0.25٪ التربسين في 37 درجة مئوية لكل 60 ملليمتر طبق. بعد ثماني إلى 10 ثوان في درجة حرارة الغرفة، ووقف عملية الهضم، عن طريق إضافة ثلاثة ملليلتر من DMEM تكملها 10٪FBS.لفصل خلايا شوان، ضربة بلطف على الخلية مع ماصة. تحقق من أن الخلايا منفصلة عن طريق المجهر. ثم جمع المتوسطة، التي تحتوي على خلايا البجعة، والطرد المركزي في 800 مرة G لمدة خمس دقائق.تجاهل عظمى، وإعادة تعليق الترسب في ثلاثة ملليلتر من المتوسط. استخدم هذا التعليق لتطعيم أطباق بيتري غير المصقولة من 60 ملليمترًا، واحتضان الأطباق على درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 30 إلى 45 دقيقة. العلامات التجارية للوسط، والتي سوف تحتوي على خلايا شوان إلى طبق متوسط بولي L lysine المغلفة، واحتضان الطبق في 37 درجة مئوية لمدة يومين.بعد إزالة المتوسطة التي تحتوي على خلايا Schwann غسل الخلايا الليفية، والتمسك أطباق بيتري مع 1XPBS. لهضم الخلايا الليفية، إضافة ملليلتر واحد من 0.25٪ التربسين في 37 درجة مئوية. بعد اتباع الهضم على المضي قدما لمدة دقيقتين في 37 درجة مئوية، وإنهاء عملية الهضم بإضافة DMEM تكمل مع 10٪FBS.لفصل الخلايا الليفية، استخدم ماصة لتفجير على الجزء السفلي من الطبق. اجمع الوسط، بما في ذلك الخلايا الليفية، ونقلها إلى أنابيب الطرد المركزي. جهاز طرد مركزي الأنابيب في 800 مرة G لمدة خمس دقائق.تجاهل عظمى، و resuspend الترسب مع مليلتر اثنين من DMEM تحتوي على 10٪ FBS. تلقيح الخلايا في غير مشفرة، 60 ملليمتر، أطباق بيتري، واحتضان في 37 درجة مئوية لمدة 30 إلى 45 دقيقة. عزل الخلايا الليفية التي ستلتزم أطباق بيتري، عن طريق إزالة وتجاهل متوسط النمو.إضافة ثلاثة ملليلتر من DMEM تكملها 10٪ FBS. احتضان في 37 درجة مئوية لمدة يومين حتى مرور الخلايا واحدة تصل إلى التقاء 90٪. كرر التفاضلية الهضم والالتزام.بعد زراعة مرور الخلايا الليفية وخلايا Schwann لمدة يومين ، هضم الخلايا ، وجمعها ، والعد عليها. تلقيح PLL المغلفة الشرائح بتركيز واحد من 10 مرات من هذه الخلايا في بئر للطخ ICC. يظهر المجهر التباين في باي مورفولوجيا الخلايا الشوانة المزرعية والأضاء الليفية طوال عملية العزل.بعد وقت طويل الثقافة، كانت تتجمع الخلايا Schwann معا بين الخلايا الليفية أو تقع على سطح الخلايا الليفية. بعد الهضم لمدة 10 ثوان ، كانت خلايا Schwann ، المشار إليها من السهام الحمراء ، مستديرة بينما ظلت الخلايا الليفية مسطحة وتم إرفاقها في الجزء السفلي من الطبق. بعد العزلة عن طريق الهضم التفاضلي والتقيد التفريقي لوحظت الخلايا المهزلة النموذجية لجميع أنواع الخلايا الأربعة.الخلايا الليفية الحركية، الخلايا الليفية الحسية، خلايا شوان موتور وخلايا شوان الحسية. تم تصور الخلايا الليفية الحسية والحركية باستخدام مجهر مسح الليزر البؤري المخروطي. كانت الخلايا الليفية ملطخة بالأجسام المضادة ضد صبغة CD 90 X33342 تم استخدامها لتسمية نواة الخلية.الصور المدمجة من الليفية المناعية وتلطيخ النووية، وأشار إلى أن 92.51٪ و 92.64٪ من CD 90 والخلايا ذات العلامات المشتركة ستي، كانت موجودة في الخلايا الليفية الحركية والحسية على التوالي. تم تصور خلايا شوان الحسية والمحركية باستخدام مجهر مسح الليزر confocal. كانت خلايا شوان ملطخة بالأجسام المضادة ضد صبغة S100 X33342 التي استخدمت لتسمية نواة الخلية.أشارت الصور دمج من البجعة مناعة الخلايا وتلطيخ النووية وجود 91.61٪ و 93.56٪ من S100 والخلايا ذات العلامات المشتركة hexed في الخلايا الحركية والحسية Schwann، على التوالي. كما تم تحليل نقاء الخلية باستخدام عملية استئصال الخلايا المتدفقة. في الثقافات الليفية، كانت الخلايا الليفية حوالي 90٪ من الخلايا، التي تشير إليها M2 في الرسوم البيانية FCA بينما كانت الخلايا المتبقية خلايا Schwann.في ال [سكهون] خلية ثقافات, أكثر من 92٪ كان خلايا [سكهون], ثانية يشير ب [إم2] في ال [كفو] رسوم بيانيّة, بينما ال بقية خلايا كانوا [فيلوستس]. ونادرا ما يكون هذا البروتوكول مفيدا لبدء آلية الاستشعار وتجديد الأعصاب الحركية للخلايا الليفية، وزرع الخلايا الشوان، لتعزيز تجديد الأعصاب.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Culture of Primary Motor and Sensory Neurons in Defined Media on Electrospun Poly-L-lactide Nanofiber Scaffolds

ثقافة موتور الابتدائية والخلايا العصبية الحسية في وسائل الإعلام على معرفة السقالات Electrospun Nanofiber بولي - L - lactide

Electrospinning is a technique for producing micro- to nano-scale fibers. Fibers can be electrospun with varying degrees of alignment, from highly aligned ...

Live-imaging of PKC Translocation in Sf9 Cells and in Aplysia Sensory Neurons

تصوير الحية إزفاء PKC في Sf9 خلايا في الخلايا العصبية والحسية Aplysia

Protein kinase Cs (PKCs) are serine threonine kinases that play a central role in regulating a wide variety of cellular processes such as cell growth and ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

تعيش خلية التصوير الحسي للخلايا السليمة في الجهاز السلائف ذبابة الفاكهة شرانق

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Isolation and Culture of Dissociated Sensory Neurons From Chick Embryos

العزلة وثقافة فصل الخلايا العصبية الحسية من الفرخ الأجنة

Neurons are multifaceted cells that carry information essential for a variety of functions including sensation, motor movement, learning, and memory. ...

Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells

Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells

إزالة<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الأنسجة العضلية من اليرقات شرائح التحليل المناعي من العصبونات الحسية وخلايا البشرة

Drosophila larval dendritic arborization (da) neurons are a popular model for investigating mechanisms of neuronal morphogenesis. Da neurons develop in ...

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog (Rana catesbeiana)

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog Rana catesbeiana

إعداد الفسيولوجية للخلايا الشعر من كييس من ضفدع الثور (<em&gt; رنا catesbeiana</em&gt;)

The study of hearing and balance rests upon insights drawn from biophysical studies of model systems. One such model, the sacculus of the American ...

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

الزرد<em&gt; في الموقع</em&gt; الحبل الشوكي التحضير للتسجيلات الكهربية من العمود الفقري الحسية والحركية العصبية

Zebrafish, first introduced as a developmental model, have gained popularity in many other fields. The ease of rearing large numbers of rapidly developing ...

Analysis of Immune Cells in Single Sciatic Nerves and Dorsal Root Ganglion from a Single Mouse Using Flow Cytometry

تحليل للخلايا المناعية في واحد الوركي الأعصاب والعقدة الظهرية الجذرية من ماوس واحدة باستخدام التدفق الخلوي

Nerve-resident immune cells in the peripheral nervous system (PNS) are essential to maintaining neuronal integrity in a healthy nerve. The immune cells of ...

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

الكينماتيكا العين التي تقاس في المختبر حفز الأعصاب في السلحفاة

After animals are euthanized, their tissues begin to die. Turtles offer an advantage because of a longer survival time of their tissues, especially when ...

In Vivo Calcium Imaging of Lateral-line Hair Cells in Larval Zebrafish

في تصوير الكالسيوم فيفو خلايا الشعر الخط الجانبي في الزرد اليرقات

Sensory hair cells are mechanoreceptors found in the inner ear that are required for hearing and balance. Hair cells are activated in response to sensory ...