Name: purification of fibroblasts and schwann cells from sensory and motor nerves in vitro
Uploaded: 2020-05-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro at JoVE.com

Denne undersøgelse blev støttet af Det Nationale Centrale Forsknings- og Udviklingsprogram i Kina (Grant No. 2017YFA0104703), National Natural Foundation of China (Grant No. 31500927).

Denne undersøgelse blev gennemført i overensstemmelse med De Europæiske Råds retningslinjer for pasning af dyr på Nantong Universitet. Alle procedurer, herunder de dyreemner blev etisk godkendt af Administration Committee of Experimental Animals, Jiangsu-provinsen, Kina.
1. Isolering og kultur af motoriske og sensoriske nerve fibroblaster og SCs
<ol><li>Brug syv dage gamle Sprague-Dawley (SD) rotter (n = 4) fra Experimental Animal Center i Nantong University of China. Placer rotterne i ...

<ol>
	<li>Stierli, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+regulation+of+the+homeostasis+and+regeneration+of+peripheral+nerve+is+distinct+from+the+CNS+and+independent+of+a+stem+cell+population.">The regulation of the homeostasis and regeneration of peripheral nerve is distinct from the CNS and independent of a stem cell population.</a> Development (The Company of Biologists). , (2018).</li><li>Schubert, T., Friede, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+endoneurial+fibroblasts+in+myelin+degradation.">The role of endoneurial fibroblasts in myelin degradation.</a> Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 40 (2), 134-154 (1981).</li><li>Dreesmann, L., Mittnacht, U., Lietz, M., Schlosshauer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+fibroblast+impact+on+Schwann+cell+behavior.">Nerve fibroblast impact on Schwann cell behavior.</a> European Journal of Cell Biology. 88 (5), 285-300 (2009).</li><li>Lavdas, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cells+engineered+to+express+the+cell+adhesion+molecule+L1+accelerate+myelination+and+motor+recovery+after+spinal+cord+injury.">Schwann cells engineered to express the cell adhesion molecule L1 accelerate myelination and motor recovery after spinal cord injury.</a> Experimental Neurology. 221 (1), 206-216 (2010).</li><li>Parrinello, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EphB+signaling+directs+peripheral+nerve+regeneration+through+Sox2-dependent+Schwann+cell+sorting.">EphB signaling directs peripheral nerve regeneration through Sox2-dependent Schwann cell sorting.</a> Cell. 143 (1), 145-155 (2010).</li><li>Benito, C., Davis, C. M., Gomez-Sanchez, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=STAT3+Controls+the+Long-Term+Survival+and+Phenotype+of+Repair+Schwann+Cells+during+Nerve+Regeneration.">STAT3 Controls the Long-Term Survival and Phenotype of Repair Schwann Cells during Nerve Regeneration.</a> Journal of Neuroscience Research. 37 (16), 4255-4269 (2017).</li><li>Zhang, Z. J., Jiang, B. C., Gao, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+in+neuron-glial+cell+interaction+and+pathogenesis+of+neuropathic+pain.">Chemokines in neuron-glial cell interaction and pathogenesis of neuropathic pain.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 74 (18), 3275-3291 (2017).</li><li>Hoke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cells+express+motor+and+sensory+phenotypes+that+regulate+axon+regeneration.">Schwann cells express motor and sensory phenotypes that regulate axon regeneration.</a> Journal of Neuroscience. 26 (38), 9646-9655 (2006).</li><li>Brushart, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cell+phenotype+is+regulated+by+axon+modality+and+central-peripheral+location,+and+persists+in+vitro.">Schwann cell phenotype is regulated by axon modality and central-peripheral location, and persists in vitro.</a> Experiment Neurology. 247, 272-281 (2013).</li><li>He, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+Gene+Expression+in+Primary+Cultured+Sensory+and+Motor+Nerve+Fibroblasts.">Differential Gene Expression in Primary Cultured Sensory and Motor Nerve Fibroblasts.</a> Frontiers in Neuroscience. 12, 1016 (2018).</li><li>Weinstein, D. E., Wu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+3,+Unit+17:+Isolation+and+purification+of+primary+Schwann+cells.">Chapter 3, Unit 17: Isolation and purification of primary Schwann cells.</a> Current Protocols in Neuroscience. , (2001).</li><li>Palomo Irigoyen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Purification+of+Primary+Rodent+Schwann+Cells.">Isolation and Purification of Primary Rodent Schwann Cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1791, 81-93 (2018).</li><li>Cheng, L., Khan, M., Mudge, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcitonin+gene-related+peptide+promotes+Schwann+cell+proliferation.">Calcitonin gene-related peptide promotes Schwann cell proliferation.</a> Journal of Cell Biology. 129 (3), 789-796 (1995).</li><li>Pannunzio, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+of+selecting+Schwann+cells+from+adult+mouse+sciatic+nerve.">A new method of selecting Schwann cells from adult mouse sciatic nerve.</a> Journal of Neuroscience Methods. 149 (1), 74-81 (2005).</li><li>Shen, M., Tang, W., Cao, Z., Cao, X., Ding, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+rat+Schwann+cells+based+on+cell+sorting.">Isolation of rat Schwann cells based on cell sorting.</a> Molecular Medicine Reports. 16 (2), 1747-1752 (2017).</li><li>He, Q., Man, L., Ji, Y., Ding, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+in+the+biological+characteristics+between+primary+cultured+sensory+and+motor+Schwann+cells.">Comparison in the biological characteristics between primary cultured sensory and motor Schwann cells.</a> Neuroscience Letters. 521 (1), 57-61 (2012).</li><li>Weiss, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomics+and+transcriptomics+of+peripheral+nerve+tissue+and+cells+unravel+new+aspects+of+the+human+Schwann+cell+repair+phenotype.">Proteomics and transcriptomics of peripheral nerve tissue and cells unravel new aspects of the human Schwann cell repair phenotype.</a> Glia. 64 (12), 2133-2153 (2016).</li></ol>

De to store cellepopulationer af perifere nerver omfattede SCs og fibroblaster. De primært dyrkede fibroblaster og SCs kan præcist hjælpe med modellering af fibroblasternes og SCs's fysiologi under perifer nerveudvikling og regenerering. Undersøgelsen viste, at P7 rotte iskiasnerven celler indeholdt omkring 85% af S100-positive SCs, 13% af OX7-positive fibroblaster og kun 1,5% af OX42-positive makrofager13. Selv om antallet af fibroblaster er mindre end SCs, den oprindelige spredning sats af f...

I det perifere nervesystem består nervefibrene hovedsageligt af axoner, Schwann-celler (SCs) og fibroblaster og indeholder også et lille antal makrofager, mikrovaskulære endotelceller og immunceller1. SCs wrap axoner i en 1:1 forholdet og er omgivet af et bindevæv lag kaldet endoneurium. Axoner er derefter bundtet sammen til at danne grupper kaldet fascicles, og hver fascicle er pakket ind i et bindevæv lag kendt som perineurium. Endelig er hele nervefiberen pakket ind i et lag af bindevæv, der betegnes som epineurium. I endoneurium, hele cellepopulationen består af 48% SCs, og en betydelig del af de resterende celler indebærer fibroblaster2. Desuden er fibroblaster vigtige komponenter i alle nerverum, herunder epineurium, perineurium, og endoneurium3. Mange undersøgelser har vist, at SC og fibroblaster spiller en afgørende rolle i regenereringsprocessen efter perifere nerveskader4,5,6. Efter transection af den perifere nerve, den perineuriale fibroblaster regulere celle sortering via ephrin-B/EphB2 signalering vej mellem SCs og fibroblaster, yderligere vejlede axonal genvækst gennem sår5. Perifere nerve fibroblaster udskiller tenascin-C-protein og forbedrer migrationen af SCs under nerveregenerering gennem β1-integrinsignalvej7. Men, SCs og fibroblaster, der anvendes i ovennævnte undersøgelser blev afledt af iskiasnerven, som omfatter både sensoriske og motoriske nerver.
I det perifere nervesystem, de sensoriske nerver (afferente nerver) foretage sensoriske signalering fra receptorer til centralnervesystemet (CNS), mens de motoriske nerver (efferent nerver) føre signaler fra CNS til musklerne. Tidligere undersøgelser har vist, at SC'er udtrykker forskellige motoriske og sensoriske fænotyper og udskiller neurotrofiske faktorer til støtte for perifer nerveregenerering8,9. Ifølge en nylig undersøgelse, fibroblaster også udtrykke forskellige motoriske og sensoriske fænotyper og påvirke migration af SCs10. Således udforskning af forskelle mellem motoriske og sensoriske nerve fibroblaster / SCs giver os mulighed for at studere de komplicerede underliggende molekylære mekanismer perifere nerve specifik regenerering.
På nuværende tidspunkt er der mange måder at rense SCs og fibroblaster, herunder anvendelse af antimitotiske midler, antistof-medieret cytolyse11,,12,sekventiel immunopanning13 og laminin substrat14. Men alle de ovennævnte metoder fjerne fibroblaster og bevare kun SCs. Højt rensede SCs og fibroblaster kan opnås ved flow cytometri sortering teknologi15,men det er en tidskrævende og dyrt teknik. Derfor, i denne undersøgelse, en simpel differentiale fordøjelse og differentieret overholdelse metode til rensning og isolere sensoriske og motoriske nerve fibroblaster og SCs blev udviklet for at opnå et stort antal fibroblaster og SCs hurtigere.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 594 Goat Anti-Mouse IgG(H+L)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A11005</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CoraLite488-conjugated Affinipure Goat Anti-Mouse IgG(H+L)</td>
			<td>Proteintech</td>
			<td>SA00013-1</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>TCS SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Quest software</td>
			<td>Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Hank&#39;s balanced salt solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14170112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZ2-ILST</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10099-141C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forskolin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F6886-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoroshield Mounting Medium</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab104135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixation medium/Permeabilization medium</td>
			<td>Multi Sciences (LIANKE) Biotech, Co., LTD</td>
			<td>GAS005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometry</td>
			<td>Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td>FACS Calibur</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG1 kappa [MOPC-21] (FITC) - Isotype Control</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab106163</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse monoclonal anti-CD90 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab225</td>
			<td>Dilution: 1:1000 for ICC, 0.1 &#181;g for 106 cells for Flow Cyt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-S100 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab212816</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polylysine (PLL)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human NRG1-beta 1/HRG1-beta 1 EGF Domain Protein</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>396-HB-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% (w/v) trypsin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200-072</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

purification of fibroblasts and schwann cells from sensory and motor nerves in vitro

De vigtigste celler i det perifere nervesystem er Schwann celler (SCs) og fibroblaster. Begge disse celler tydeligt udtrykke sensoriske og motoriske fænotyper involveret i forskellige mønstre af neurotrofisk faktor genekspression og andre biologiske processer, der påvirker nerve regenerering. Denne undersøgelse har etableret en protokol for at opnå højt rensede rotte sensoriske og motor SCs og fibroblaster hurtigere. Den ventrale rod (motornerven) og dorsale rod (sensorisk nerve) af neonatal rotter (7-dage gamle) blev dissocieret og cellerne blev dyrket i 4-5 dage, efterfulgt af isolering af sensoriske og motoriske fibroblaster og SCs ved at kombinere differentialfordøjelse og differentieret overholdelse metoder sekventielt. Resultaterne af immunocytokemi- og flowcytometrianalyser viste, at renheden af de sensoriske og motoriske SCs og fibroblaster var >90%. Denne protokol kan bruges til at opnå et stort antal sensoriske og motoriske fibroblaster / SCs hurtigere, bidrager til udforskning af sensoriske og motoriske nerve regenerering.

Lys mikroskopisk observation SCs og fibroblaster er de to vigtigste cellepopulationer opnået i den primære cellekultur fra nervevæv. Efter inokulering i 1 time, de fleste af cellerne klæbet til bunden af skålen, og cellen morfologi ændret fra runde til ovale. Efter dyrkning i 24 timer udviste SC'erne en bipolar eller tripolar morfologi, og længden af disse varierede fra 100 til 200 μm. Efter 48 timer forekom aggregering og spredning af celler, hvor mange celler...

Watch this Scientific Journal Video about Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro at JoVE.com

Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro

Her præsenterer vi en metode til at rense fibroblaster og Schwann celler fra sensoriske og motoriske nerver in vitro.

Rensning af fibroblaster og Schwann celler fra sensoriske og motoriske nerver i Vitro

The principal cells in the peripheral nervous system are the Schwann cells (SCs) and the fibroblasts. Both these cells distinctly express the sensory and ...

Denne protokol kan bruges til at opnå et stort antal sensor og motorfibroblast og Schwann celler hurtigt. De celler, der opnås gennem denne besked kan bruges i studiet af nerve regenerering og nervesystemet sygdomme. Vi viser demonstration kan repræsentere den eksperimentelle til bedre at kontrollere tidspunktet for differentieret fordøjelsestrin og gøre de eksperimentelle trin lettere at forstå.At sprænge bruge en saks til at gøre en tre centimeter snit, i huden på ryggen. Fjern rygsøjlen. Åbn forsigtigt rygmarvskanalen for at afsløre rygmarven.Lace rygmarven i en 60 millimeter petriskål, med tre til fire milliliter iskold D Hanks afbalanceret saltopløsning under en dissekere mikroskop, punktafgifter ventralroden og rygroden. Læg dem i iskold D Hanks afbalanceret saltopløsning. Efter fjernelse af HBSS, skær nerverne i tre til fem millimeter stykker, med en saks.Tilføj en milliliter 0,25% trypsin og overføre nerve stykker til fem milliliter centrifuge rør. Inkubere ved 37 grader Celsius i 18 til 20 minutter. Dernæst for at stoppe fordøjelsen, tilsættes ved tre til fire milliliter DMEM indeholdende 10% føtal kvæg serum.Pipette blandingen op og ned forsigtigt omkring 10 gange. Centrifuge ved 800 gange G i fem minutter. Efter centrifugering kassere supernatant.Og re-suspendere bundfaldet i to til tre milliliter DMEM suppleret med 10% FBS. Cellerepensionen filtreres gennem et 400-maskefilter, og brug derefter suspensionen til at vaccinere en 60 millimeter petriskål. Inkuber petriskålene i fire til fem dage ved 37 grader Celsius, i overværelse af 5% kuldioxid.Når kulturen har nået 90%sammenløb, vaske cellerne én gang ved hjælp af 1XPBS. Derefter, at fordøje Schwann celler, tilsæt en milliliter 0,25% trypsin ved 37 grader Celsius pr 60 millimeter skål. Efter otte til 10 sekunder ved stuetemperatur, stoppe fordøjelsen, ved at tilføje tre milliliter DMEM suppleret med 10% FBS.For at løsne Schwann celler, forsigtigt blæse på cellen med en pipette. Kontroller efter mikroskop, at cellerne er afmonteret. Derefter indsamles mediet, som indeholder Svanecellerne, og centrifugeres ved 800 gange G i fem minutter.Supernatanten kasseres, og bundfaldet skal hænges igen i tre milliliter medium. Brug denne suspension til at vaccinere ubestrøget 60 millimeter petriskåle, og inkuber retterne ved 37 grader Celsius i 30 til 45 minutter. Mærker til mediet, som vil indeholde Schwann celler til en Poly L lysin belagt medium skål, og inkubere skålen ved 37 grader Celsius i to dage.Efter fjernelse af mediet, der indeholder Schwann celler vaske fibroblaster, overholde petriskåle med 1XPBS. At fordøje fibroblaster, tilsæt en milliliter 0,25% trypsin ved 37 grader Celsius. Efter at have fulgt fordøjelsen til at fortsætte i to minutter ved 37 grader Celsius, afslutte fordøjelsen ved at tilføje DMEM suppleret med 10% FBS.For at løsne fibroblaster, bruge en pipette til at blæse på bunden af skålen. Saml mediet, herunder fibroblaster, og overføre det til centrifuge rør. Centrifuge rørene ved 800 gange G i fem minutter.Supernatanten kasseres, og bundfaldet opsvarsles igen med to milliliter DMEM indeholdende 10%FBS. Inokuler cellerne i un-kodet, 60 millimeter, petriskåle, og inkubere ved 37 grader Celsius i 30 til 45 minutter. Isoler fibroblaster, som vil holde sig til petriskåle, ved at fjerne og kassere vækstmediet.Tilføj tre milliliter DMEM suppleret med 10% FBS. Inkubere ved 37 grader Celsius i to dage, indtil passagen en celler nå 90% sammenløb. Gentag differentialfordybelsen og vedhæftning.Efter dyrkning af passagen til fibroblaster og Schwann celler i to dage, fordøje cellerne, indsamle dem, og tælle dem. Inokuler PLL-belagte objektglas i en koncentration på en gang 10 af disse celler pr. brønd til ICC-farvning. Bay's kontrast mikroskopi viser morfologi af dyrkede Schwann celler og fibroblaster i hele isolationsprocessen.Efter længere tid var Schwann-cellerne grupperet sammen mellem fibroblasterne eller placeret på overfladen af fibroblaster. Efter fordøjelsen i 10 sekunder, schwann celler, angivet ved de røde pile, var runde, mens fibroblaster forblev flad og blev fastgjort til bunden af skålen. Efter isolering ved differentialfordybelse og differentialklæbende blev der observeret typiske cellemorfologier for alle fire celletyper.Motorfibroblaster, sensoriske fibroblaster, motor Schwann celler og sensoriske Schwann celler. De sensoriske og motoriske fibroblaster blev visualiseret ved hjælp af en kegle fokal laser scanning mikroskop. Fibroblasterne blev plettet med antistoffer mod CD 90 X33342 farvestof blev brugt til at mærke cellekerner.De fusionerede billeder af fibroblaster immunstaining og nuklear farvning, viste, at 92,51% og 92,64% af CD 90 og hexed co-labeled celler, var til stede i motoren og sensoriske fibroblaster hhv. De sensoriske og motoriske Schwann celler blev visualiseret ved hjælp af en konfokal laser scanning mikroskop. Schwann cellerne blev plettet med antistoffer mod S100 X33342 farvestof blev brugt til at mærke cellekerner.De fusionerende billeder af Svanecelleimmunostaining og nuklear farvning indikerede tilstedeværelsen af henholdsvis 91,61 % og 93,56 % af S100 og hexed co-mærkede celler i henholdsvis motoriske og sensoriske Schwann-celler. Celle renhed blev også analyseret ved hjælp af flow cytometri. I fibroblastkulturerne var ca. 90% af cellerne fibroblaster, angivet med M2 i FCA-graferne, mens de resterende celler var Schwann-celler.I Schwann-cellekulturerne var mere end 92% af cellerne Schwann celler, igen angivet med M2 i FCA grafer, mens de resterende celler var fibroblaster. Denne protokol er sjældent nyttig til at starte mekanismen af sensor og motorisk nerve regenerering af fibroblaster, og Schwann celler transplantation, at fremme nerve regenerering.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Culture of Primary Motor and Sensory Neurons in Defined Media on Electrospun Poly-L-lactide Nanofiber Scaffolds

Electrospinning is a technique for producing micro- to nano-scale fibers. Fibers can be electrospun with varying degrees of alignment, from highly aligned ...

Live-imaging of PKC Translocation in Sf9 Cells and in Aplysia Sensory Neurons

Protein kinase Cs (PKCs) are serine threonine kinases that play a central role in regulating a wide variety of cellular processes such as cell growth and ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Isolation and Culture of Dissociated Sensory Neurons From Chick Embryos

Isolering og dyrkning af dissocierede sensoriske neuroner Fra kyllingeembryoer

Neurons are multifaceted cells that carry information essential for a variety of functions including sensation, motor movement, learning, and memory. ...

Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells

Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells

fjernelse af<em&gt; Drosophila</em&gt; Muskel Væv fra larver Filet for Immunofluorescens analyse af sensoriske neuroner og epidermale celler

Drosophila larval dendritic arborization (da) neurons are a popular model for investigating mechanisms of neuronal morphogenesis. Da neurons develop in ...

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog (Rana catesbeiana)

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog Rana catesbeiana

Fysiologisk Udarbejdelse af hårceller fra sacculus i American Bullfrog (<em&gt; Rana catesbeiana</em&gt;)

The study of hearing and balance rests upon insights drawn from biophysical studies of model systems. One such model, the sacculus of the American ...

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafisk<em&gt; In Situ</em&gt; Spinal Cord Forberedelse til Elektrofysiologiske Optagelser fra Spinal sensoriske og motoriske neuroner

Zebrafish, first introduced as a developmental model, have gained popularity in many other fields. The ease of rearing large numbers of rapidly developing ...

Analysis of Immune Cells in Single Sciatic Nerves and Dorsal Root Ganglion from a Single Mouse Using Flow Cytometry

Analyse af immunceller i enkelt ischiadicus nerver og dorsalrods Ganglion fra et enkelt museklik bruge flowcytometri

Nerve-resident immune cells in the peripheral nervous system (PNS) are essential to maintaining neuronal integrity in a healthy nerve. The immune cells of ...

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Okulær kinematik målt ved In Vitro Stimulation af hjernenerver i skildpadden

After animals are euthanized, their tissues begin to die. Turtles offer an advantage because of a longer survival time of their tissues, especially when ...

In Vivo Calcium Imaging of Lateral-line Hair Cells in Larval Zebrafish

I Vivo Calcium billeddannelse af laterale-line hårcellerne i larve zebrafisk

Sensory hair cells are mechanoreceptors found in the inner ear that are required for hearing and balance. Hair cells are activated in response to sensory ...