Name: purification of fibroblasts and schwann cells from sensory and motor nerves in vitro
Uploaded: 2020-05-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro at JoVE.com

Deze studie werd ondersteund door het National Key Research and Development Program of China (Grant No. 2017YFA0104703), de National Natural Foundation of China (Grant No. 31500927).

Deze studie werd uitgevoerd in overeenstemming met de Institutional Animal Care Guidelines van de Nantong University. Alle procedures inclusief de dierlijke proefpersonen werden ethisch goedgekeurd door het Administration Committee of Experimental Animals, de provincie Jiangsu, China.
1. Isolatie en cultuur van motorische en zintuiglijke zenuwfibroblasten en SC's
<ol><li>Gebruik zeven dagen oude Sprague-Dawley (SD) ratten (n=4) geleverd door het Experimental Animal Center van de Nantong Univ...

<ol>
	<li>Stierli, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+regulation+of+the+homeostasis+and+regeneration+of+peripheral+nerve+is+distinct+from+the+CNS+and+independent+of+a+stem+cell+population.">The regulation of the homeostasis and regeneration of peripheral nerve is distinct from the CNS and independent of a stem cell population.</a> Development (The Company of Biologists). , (2018).</li><li>Schubert, T., Friede, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+endoneurial+fibroblasts+in+myelin+degradation.">The role of endoneurial fibroblasts in myelin degradation.</a> Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 40 (2), 134-154 (1981).</li><li>Dreesmann, L., Mittnacht, U., Lietz, M., Schlosshauer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+fibroblast+impact+on+Schwann+cell+behavior.">Nerve fibroblast impact on Schwann cell behavior.</a> European Journal of Cell Biology. 88 (5), 285-300 (2009).</li><li>Lavdas, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cells+engineered+to+express+the+cell+adhesion+molecule+L1+accelerate+myelination+and+motor+recovery+after+spinal+cord+injury.">Schwann cells engineered to express the cell adhesion molecule L1 accelerate myelination and motor recovery after spinal cord injury.</a> Experimental Neurology. 221 (1), 206-216 (2010).</li><li>Parrinello, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EphB+signaling+directs+peripheral+nerve+regeneration+through+Sox2-dependent+Schwann+cell+sorting.">EphB signaling directs peripheral nerve regeneration through Sox2-dependent Schwann cell sorting.</a> Cell. 143 (1), 145-155 (2010).</li><li>Benito, C., Davis, C. M., Gomez-Sanchez, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=STAT3+Controls+the+Long-Term+Survival+and+Phenotype+of+Repair+Schwann+Cells+during+Nerve+Regeneration.">STAT3 Controls the Long-Term Survival and Phenotype of Repair Schwann Cells during Nerve Regeneration.</a> Journal of Neuroscience Research. 37 (16), 4255-4269 (2017).</li><li>Zhang, Z. J., Jiang, B. C., Gao, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+in+neuron-glial+cell+interaction+and+pathogenesis+of+neuropathic+pain.">Chemokines in neuron-glial cell interaction and pathogenesis of neuropathic pain.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 74 (18), 3275-3291 (2017).</li><li>Hoke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cells+express+motor+and+sensory+phenotypes+that+regulate+axon+regeneration.">Schwann cells express motor and sensory phenotypes that regulate axon regeneration.</a> Journal of Neuroscience. 26 (38), 9646-9655 (2006).</li><li>Brushart, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cell+phenotype+is+regulated+by+axon+modality+and+central-peripheral+location,+and+persists+in+vitro.">Schwann cell phenotype is regulated by axon modality and central-peripheral location, and persists in vitro.</a> Experiment Neurology. 247, 272-281 (2013).</li><li>He, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+Gene+Expression+in+Primary+Cultured+Sensory+and+Motor+Nerve+Fibroblasts.">Differential Gene Expression in Primary Cultured Sensory and Motor Nerve Fibroblasts.</a> Frontiers in Neuroscience. 12, 1016 (2018).</li><li>Weinstein, D. E., Wu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+3,+Unit+17:+Isolation+and+purification+of+primary+Schwann+cells.">Chapter 3, Unit 17: Isolation and purification of primary Schwann cells.</a> Current Protocols in Neuroscience. , (2001).</li><li>Palomo Irigoyen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Purification+of+Primary+Rodent+Schwann+Cells.">Isolation and Purification of Primary Rodent Schwann Cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1791, 81-93 (2018).</li><li>Cheng, L., Khan, M., Mudge, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcitonin+gene-related+peptide+promotes+Schwann+cell+proliferation.">Calcitonin gene-related peptide promotes Schwann cell proliferation.</a> Journal of Cell Biology. 129 (3), 789-796 (1995).</li><li>Pannunzio, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+of+selecting+Schwann+cells+from+adult+mouse+sciatic+nerve.">A new method of selecting Schwann cells from adult mouse sciatic nerve.</a> Journal of Neuroscience Methods. 149 (1), 74-81 (2005).</li><li>Shen, M., Tang, W., Cao, Z., Cao, X., Ding, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+rat+Schwann+cells+based+on+cell+sorting.">Isolation of rat Schwann cells based on cell sorting.</a> Molecular Medicine Reports. 16 (2), 1747-1752 (2017).</li><li>He, Q., Man, L., Ji, Y., Ding, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+in+the+biological+characteristics+between+primary+cultured+sensory+and+motor+Schwann+cells.">Comparison in the biological characteristics between primary cultured sensory and motor Schwann cells.</a> Neuroscience Letters. 521 (1), 57-61 (2012).</li><li>Weiss, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomics+and+transcriptomics+of+peripheral+nerve+tissue+and+cells+unravel+new+aspects+of+the+human+Schwann+cell+repair+phenotype.">Proteomics and transcriptomics of peripheral nerve tissue and cells unravel new aspects of the human Schwann cell repair phenotype.</a> Glia. 64 (12), 2133-2153 (2016).</li></ol>

De twee belangrijkste celpopulaties van perifere zenuwen opgenomen SCs en fibroblasten. De voornamelijk gekweekte fibroblasten en SCs kunnen nauwkeurig helpen bij het modelleren van de fysiologie van fibroblasten en SCs tijdens perifere zenuwontwikkeling en regeneratie. De studie toonde aan dat P7 rattensciatische zenuwcellen ongeveer 85% van de S100-positieve SC's, 13% van de OX7-positieve fibroblasten en slechts 1,5% van de OX42-positieve macrofagen13bevatten. Hoewel het aantal fibroblasten lage...

In het perifere zenuwstelsel, de zenuwvezels bestaat voornamelijk uit axonen, Schwann cellen (SCs), en fibroblasten, en bevat ook een klein aantal macrofagen, microvasculaire endotheelcellen, en immuuncellen1. SCs wikkel de axonen in een 1:1 verhouding en zijn omsloten door een bindweefsel laag genaamd de endoneurium. De axonen worden vervolgens gebundeld om groepen genaamd fascicles vormen, en elke fascicle is verpakt in een bindweefsel laag bekend als het perineurium. Ten slotte is de hele zenuwvezel verpakt in een laag bindweefsel, dat wordt aangeduid als het epineurium. In het endoneurium bestaat de hele celpopulatie uit 48% SC's, en een aanzienlijk deel van de resterende cellen omvat fibroblasten2. Bovendien zijn fibroblasten belangrijke componenten van alle zenuwcompartimenten, waaronder het epineurium, het perineurium en het endoneurium3. Veel studies hebben aangetoond dat SC's en fibroblasten een cruciale rol spelen in het regeneratieproces na perifere zenuwletsels4,5,6. Na de transsectie van de perifere zenuw regelen de perineuriale fibroblasten celsorde via de ephrin-B/EphB2-signaleringsroute tussen SC's en fibroblasten, waardoor de axonale hergroei door wonden verder wordt geleid5. Perifere zenuwfibroblasten scheiden tenascin-C-eiwit af en verbeteren de migratie van SC's tijdens zenuwregeneratie via β1-integrin signaleringsroute7. Echter, de SCs en fibroblasten gebruikt in de bovenstaande studies werden afgeleid van de heupzenuw, die zowel sensorische en motorische zenuwen omvat.
In het perifere zenuwstelsel voeren de sensorische zenuwen (afferente zenuwen) zintuiglijke signalering uit van de receptoren naar het centrale zenuwstelsel (CNS), terwijl de motorische zenuwen (efferent zenuwen) signalen van het CNS naar de spieren geleiden. Eerdere studies hebben aangetoond dat SCs duidelijke motorische en zintuiglijke fenotypes uitdrukken en neurotrofe factoren afscheiden ter ondersteuning van perifere zenuwregeneratie8,9. Volgens een recente studie, fibroblasten ook uitdrukken verschillende motorische en zintuiglijke fenotypes en invloed op de migratie van SCs10. Zo stelt de verkenning van verschillen tussen motorische en sensorische zenuwfibroblasten/SC's ons in staat om de ingewikkelde onderliggende moleculaire mechanismen van perifere zenuwspecifieke regeneratie te bestuderen.
Op dit moment zijn er vele manieren om SCs en fibroblasten te zuiveren, waaronder de toepassing van antimitotische agentia, antilichaamgemedieerde cytolyse11,12, sequentiële immunopanning13 en laminine substratum14. Echter, alle bovenstaande methoden verwijderen fibroblasten en het behoud van alleen de SCs. Zeer gezuiverde SCs en fibroblasten kunnen worden verkregen door flow cytometrie sorteertechnologie15, maar het is een tijdrovende en kostbare techniek. Vandaar, in deze studie, een eenvoudige differentiële spijsvertering en differentiële therapietrouw methode voor het zuiveren en isoleren van zintuiglijke en motorische zenuwfibroblasten en SCs werd ontwikkeld om een groot aantal fibroblasten en SCs sneller te verkrijgen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 594 Goat Anti-Mouse IgG(H+L)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A11005</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CoraLite488-conjugated Affinipure Goat Anti-Mouse IgG(H+L)</td>
			<td>Proteintech</td>
			<td>SA00013-1</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>TCS SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Quest software</td>
			<td>Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Hank&#39;s balanced salt solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14170112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZ2-ILST</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10099-141C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forskolin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F6886-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoroshield Mounting Medium</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab104135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixation medium/Permeabilization medium</td>
			<td>Multi Sciences (LIANKE) Biotech, Co., LTD</td>
			<td>GAS005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometry</td>
			<td>Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td>FACS Calibur</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG1 kappa [MOPC-21] (FITC) - Isotype Control</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab106163</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse monoclonal anti-CD90 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab225</td>
			<td>Dilution: 1:1000 for ICC, 0.1 &#181;g for 106 cells for Flow Cyt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-S100 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab212816</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polylysine (PLL)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human NRG1-beta 1/HRG1-beta 1 EGF Domain Protein</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>396-HB-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% (w/v) trypsin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200-072</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

purification of fibroblasts and schwann cells from sensory and motor nerves in vitro

De belangrijkste cellen in het perifere zenuwstelsel zijn de Schwann cellen (SCs) en de fibroblasten. Beide cellen duidelijk uitdrukken de sensorische en motorische fenotypes die betrokken zijn bij verschillende patronen van neurotrofe factor genexpressie en andere biologische processen, die zenuwregeneratie. De huidige studie heeft een protocol vastgesteld om zeer gezuiverde rattensensorische en motorische SC's en fibroblasten sneller te verkrijgen. De ventrale wortel (motorische zenuw) en de rugwortel (sensorische zenuw) van neonatale ratten (7 dagen oud) werden gescheiden en de cellen werden gedurende 4-5 dagen gekweekt, gevolgd door isolatie van sensorische en motorische fibroblasten en SCs door differentiële spijsvertering en differentiële therapietrouwmethoden sequentieel te combineren. De resultaten van immunocytochemie en flow cytometrieanalyses toonden aan dat de zuiverheid van de sensorische en motorische SCs en fibroblasten >90% was. Dit protocol kan worden gebruikt om een groot aantal sensorische en motorische fibroblasten / SCs sneller te verkrijgen, wat bijdraagt aan de exploratie van sensorische en motorische zenuwregeneratie.

Lichte microscopische observatie De SCs en fibroblasten zijn de twee belangrijkste celpopulaties verkregen in de primaire celkweek uit zenuwweefsels. Na inenting voor 1 uur, de meeste van de cellen gehecht aan de onderkant van de schotel, en de celmorfologie veranderd van rond naar ovaal. Na 24 uur kweken vertoonden de SCs een bipolaire of tripolaire morfologie en de lengte daarvan varieerde van 100 tot 200 μm. Na 48 uur traden aggregatie en proliferatie van cellen op...

Watch this Scientific Journal Video about Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro at JoVE.com

Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro

Hier presenteren we een methode om fibroblasten en Schwann cellen te zuiveren van zintuiglijke en motorische zenuwen in vitro.

Zuivering van fibroblasten en Schwann cellen van sensorische en motorische zenuwen in Vitro

The principal cells in the peripheral nervous system are the Schwann cells (SCs) and the fibroblasts. Both these cells distinctly express the sensory and ...

Dit protocol kan worden gebruikt om snel een groot aantal sensor- en motorfibroblast- en Schwanncellen te verkrijgen. De cellen verkregen door middel van deze boodschap kan worden gebruikt in de studie van zenuwregeneratie en ziekten van het zenuwstelsel. We tonen demonstratie kan het experimentele vertegenwoordigen om de tijd van differentiële spijsverteringsstap beter te controleren en de experimentele stappen gemakkelijker te begrijpen maken.Om te barsten gebruik schaar om een drie centimeter incisie te maken, in de huid van de rug. Verwijder de wervelkolom. Open voorzichtig het wervelkanaal om het ruggenmerg bloot te leggen.Kant het ruggenmerg in een 60 millimeter petrischaal, met drie tot vier milliliter ijskoude D Hanks evenwichtige zoutoplossing onder een ontledenmicroscoop, accijns op de ventrale wortel en de rugwortel. Plaats ze in ijskoude D Hanks evenwichtige zoutoplossing. Na het verwijderen van de HBSS, snijd de zenuwen in drie tot vijf millimeter stukken, met een schaar.Voeg een milliliter van 0,25% trypsine en breng de zenuw stukken tot vijf milliliter centrifuge buizen. Incubeer bij 37 graden Celsius gedurende 18 tot 20 minuten. Voeg vervolgens bij de vertering drie tot vier milliliter DMEM toe met 10%foetaal runderserum.Pipette het mengsel op en neer zachtjes ongeveer 10 keer. Centrifuge op 800 keer G gedurende vijf minuten. Na centrifugatie gooi de supernatant.En opnieuw opschorten het neerslag in twee tot drie milliliter van DMEM aangevuld met 10%FBS. Filter de celsuspensie door een 400 mesh filter en gebruik vervolgens de suspensie om een petrischaal van 60 millimeter in te enten. Incubeer de petrischaaltjes vier tot vijf dagen bij 37 graden Celsius, in aanwezigheid van 5%kooldioxide.Wanneer de cultuur 90% samenvloeiing heeft bereikt, was de cellen eenmaal met behulp van 1XPBS. Dan, om de Schwann cellen te verteren, voeg een milliliter van 0,25% trypsine bij 37 graden Celsius per 60 millimeter schotel. Na acht tot 10 seconden bij kamertemperatuur, stop de spijsvertering, door het toevoegen van drie milliliter DMEM aangevuld met 10%FBS.Om de Schwann cellen los te maken, blaas voorzichtig op de cel met een pipet. Controleer per microscoop of de cellen zijn losgemaakt. Verzamel vervolgens het medium, dat de Zwanencellen bevat, en centrifuge vijf minuten lang op 800 keer G.Gooi de supernatant weg en schort het neerslag opnieuw op in drie milliliter medium. Gebruik deze vering om ongecoate 60 millimeter petrischaaltjes in te en uitbroeden en de gerechten 37 graden Celsius gedurende 30 tot 45 minuten uit te broeden. Merken voor het medium, die de Schwann cellen zal bevatten om een Poly L lysine gecoate medium schotel, en broeden de schotel op 37 graden Celsius voor twee dagen.Na het verwijderen van het medium met de Schwann cellen was de fibroblasten, vasthouden aan de petrischaaltjes met 1XPBS. Om de fibroblasten te verteren, voeg een milliliter van 0,25% trypsine toe bij 37 graden Celsius. Na het volgen van de spijsvertering om twee minuten door te gaan bij 37 graden Celsius, beëindigt u de spijsvertering door DMEM toe te voegen aangevuld met 10%FBS.Om de fibroblasten los te maken, gebruik een pipet te blazen op de bodem van de schotel. Verzamel het medium, inclusief de fibroblasten, en breng het over naar centrifugebuizen. Centrifugeren de buizen op 800 keer G gedurende vijf minuten.Gooi de supernatant weg en stel het neerslag opnieuw op met twee milliliter DMEM met 10%FBS. Inenting van de cellen in vn-gecodeerde, 60 millimeter, petrischaaltjes, en incubeer op 37 graden Celsius gedurende 30 tot 45 minuten. Isoleer de fibroblasten die zich aan de petrischaaltjes zullen houden, door het groeimedium te verwijderen en weg te gooien.Voeg drie milliliter DMEM toe, aangevuld met 10%FBS. Incubeer op 37 graden Celsius gedurende twee dagen tot de passage een cellen bereiken 90%samenvloeiing. Herhaal de differentiële spijsvertering en hechting.Na het kweken van de passage naar fibroblasten en Schwann cellen voor twee dagen, verteren de cellen, verzamel ze, en tel ze. Inenting PLL gecoate dia's met een concentratie van een keer 10 van deze cellen per put voor ICC-kleuring. Bay's contrastmicroscopie toont de morfologie van gekweekte Schwann cellen en fibroblasten gedurende het isolatieproces.Na langdurige kweektijd werden de Schwann-cellen samengeclusterd tussen de fibroblasten of op het oppervlak van fibroblasten. Na de spijsvertering gedurende 10 seconden, de Schwann cellen, aangegeven door de rode pijlen, waren rond, terwijl de fibroblasten bleef plat en werden bevestigd aan de onderkant van de schotel. Na isolatie door differentiële spijsvertering en differentiële aanhankelijkheid werden de typische celmorfologieën waargenomen voor alle vier celtypes.Motorfibroblasten, zintuiglijke fibroblasten, motorische Schwann cellen en sensorische Schwann cellen. De sensorische en motorfiblasten werden gevisualiseerd met behulp van een kegel brandpuntslaser scanning microscoop. De fibroblasten werden gekleurd met antilichamen tegen CD 90 X33342 kleurstof werd gebruikt om de celkernen label.De samengevoegde beelden van fibroblasten immunostaining en nucleaire kleuring, aangegeven dat 92,51%en 92,64% van cd 90 en hexed co-label cellen, aanwezig waren in de motor en zintuiglijke fibroblasten respectievelijk. De sensorische en motorische Schwann cellen werden gevisualiseerd met behulp van een confocale laser scanning microscoop. De Schwann cellen werden bevlekt met antilichamen tegen S100 X33342 kleurstof werd gebruikt om de celkernen label.De samenvoegbeelden van Swan cell immunostaining en nucleaire kleuring wezen op de aanwezigheid van respectievelijk 91,61% en 93,56% van S100 en hexed co-labeled cellen in motorische en sensorische Schwann cellen. Celzuiverheid werd ook geanalyseerd met behulp van stroomcytometrie. In de fibroblastische culturen, ongeveer 90% van de cellen waren fibroblasten, aangegeven door M2 in de FCA grafieken, terwijl de resterende cellen waren Schwann cellen.In de Celculturen van Schwann, meer dan 92% van cellen waren de cellen Schwann, opnieuw vermeld door M2 in de grafieken FCA, terwijl de resterende cellen fibroblasten waren. Dit protocol is zelden nuttig voor het starten van het mechanisme van sensor en motorische zenuwregeneratie van fibroblasten, en de Schwann cellen transplantatie, om zenuwregeneratie te bevorderen.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Culture of Primary Motor and Sensory Neurons in Defined Media on Electrospun Poly-L-lactide Nanofiber Scaffolds

De cultuur van primaire motorische en sensorische neuronen in de gedefinieerde media op electrospun Poly-L-lactide Nanovezel Steigers

Electrospinning is a technique for producing micro- to nano-scale fibers. Fibers can be electrospun with varying degrees of alignment, from highly aligned ...

Live-imaging of PKC Translocation in Sf9 Cells and in Aplysia Sensory Neurons

Live-beeldvorming van PKC Translocatie in Sf9 cellen en in Aplysia sensorische neuronen

Protein kinase Cs (PKCs) are serine threonine kinases that play a central role in regulating a wide variety of cellular processes such as cell growth and ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell imaging van zintuig voorloper cellen in Intact Drosophila Poppen

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Isolation and Culture of Dissociated Sensory Neurons From Chick Embryos

Isolatie en Cultuur van Gedissocieerde sensorische neuronen van Chick Embryo

Neurons are multifaceted cells that carry information essential for a variety of functions including sensation, motor movement, learning, and memory. ...

Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells

Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells

Verwijdering van<em&gt; Drosophila</em&gt; Spier Weefsel van Larvale Filets voor Immunofluorescentie Analyse van sensorische neuronen en opperhuidcellen

Drosophila larval dendritic arborization (da) neurons are a popular model for investigating mechanisms of neuronal morphogenesis. Da neurons develop in ...

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog (Rana catesbeiana)

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog Rana catesbeiana

Fysiologische Bereiding van haarcellen van het sacculus van de Amerikaanse brulkikker (<em&gt; Rana catesbeiana</em&gt;)

The study of hearing and balance rests upon insights drawn from biophysical studies of model systems. One such model, the sacculus of the American ...

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

zebravis<em&gt; In Situ</em&gt; Spinal Cord Voorbereiding voor elektrofysiologische registraties van Spinal sensorische en motorische neuronen

Zebrafish, first introduced as a developmental model, have gained popularity in many other fields. The ease of rearing large numbers of rapidly developing ...

Analysis of Immune Cells in Single Sciatic Nerves and Dorsal Root Ganglion from a Single Mouse Using Flow Cytometry

Analyse van immuuncellen in één ischiadicus zenuwen en achterwortelganglia Ganglion uit een enkele muis met behulp van Stroom Cytometry

Nerve-resident immune cells in the peripheral nervous system (PNS) are essential to maintaining neuronal integrity in a healthy nerve. The immune cells of ...

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Oogbeschadigingen en/of Kinematics gemeten door In Vitro stimulatie van de craniale zenuwen in de schildpad

After animals are euthanized, their tissues begin to die. Turtles offer an advantage because of a longer survival time of their tissues, especially when ...

In Vivo Calcium Imaging of Lateral-line Hair Cells in Larval Zebrafish

In Vivo Calcium beeldvorming van dwarslijn haarcellen in larvale zebravis

Sensory hair cells are mechanoreceptors found in the inner ear that are required for hearing and balance. Hair cells are activated in response to sensory ...