Name: purification of fibroblasts and schwann cells from sensory and motor nerves in vitro
Uploaded: 2020-05-20T13:00:00
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Cette étude a été soutenue par le National Key Research and Development Program of China (Grant No. 2017YFA0104703), la National Natural Foundation of China (Grant No. 31500927).

Cette étude a été réalisée conformément aux Lignes directrices institutionnelles sur les soins aux animaux de l’Université de Nantong. Toutes les procédures, y compris les sujets animaux, ont été approuvées de manière éthique par le Comité d’administration des animaux expérimentaux, province du Jiangsu, Chine.
1. Isolement et culture des fibroblastes et des SC des nerfs moteurs et sensoriels
<ol><li>Utilisez des rats Sprague-Dawley (SD) vieux de sept jours (n=4) fournis pa...

<ol>
	<li>Stierli, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+regulation+of+the+homeostasis+and+regeneration+of+peripheral+nerve+is+distinct+from+the+CNS+and+independent+of+a+stem+cell+population.">The regulation of the homeostasis and regeneration of peripheral nerve is distinct from the CNS and independent of a stem cell population.</a> Development (The Company of Biologists). , (2018).</li><li>Schubert, T., Friede, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+endoneurial+fibroblasts+in+myelin+degradation.">The role of endoneurial fibroblasts in myelin degradation.</a> Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 40 (2), 134-154 (1981).</li><li>Dreesmann, L., Mittnacht, U., Lietz, M., Schlosshauer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+fibroblast+impact+on+Schwann+cell+behavior.">Nerve fibroblast impact on Schwann cell behavior.</a> European Journal of Cell Biology. 88 (5), 285-300 (2009).</li><li>Lavdas, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cells+engineered+to+express+the+cell+adhesion+molecule+L1+accelerate+myelination+and+motor+recovery+after+spinal+cord+injury.">Schwann cells engineered to express the cell adhesion molecule L1 accelerate myelination and motor recovery after spinal cord injury.</a> Experimental Neurology. 221 (1), 206-216 (2010).</li><li>Parrinello, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EphB+signaling+directs+peripheral+nerve+regeneration+through+Sox2-dependent+Schwann+cell+sorting.">EphB signaling directs peripheral nerve regeneration through Sox2-dependent Schwann cell sorting.</a> Cell. 143 (1), 145-155 (2010).</li><li>Benito, C., Davis, C. M., Gomez-Sanchez, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=STAT3+Controls+the+Long-Term+Survival+and+Phenotype+of+Repair+Schwann+Cells+during+Nerve+Regeneration.">STAT3 Controls the Long-Term Survival and Phenotype of Repair Schwann Cells during Nerve Regeneration.</a> Journal of Neuroscience Research. 37 (16), 4255-4269 (2017).</li><li>Zhang, Z. J., Jiang, B. C., Gao, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+in+neuron-glial+cell+interaction+and+pathogenesis+of+neuropathic+pain.">Chemokines in neuron-glial cell interaction and pathogenesis of neuropathic pain.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 74 (18), 3275-3291 (2017).</li><li>Hoke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cells+express+motor+and+sensory+phenotypes+that+regulate+axon+regeneration.">Schwann cells express motor and sensory phenotypes that regulate axon regeneration.</a> Journal of Neuroscience. 26 (38), 9646-9655 (2006).</li><li>Brushart, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cell+phenotype+is+regulated+by+axon+modality+and+central-peripheral+location,+and+persists+in+vitro.">Schwann cell phenotype is regulated by axon modality and central-peripheral location, and persists in vitro.</a> Experiment Neurology. 247, 272-281 (2013).</li><li>He, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+Gene+Expression+in+Primary+Cultured+Sensory+and+Motor+Nerve+Fibroblasts.">Differential Gene Expression in Primary Cultured Sensory and Motor Nerve Fibroblasts.</a> Frontiers in Neuroscience. 12, 1016 (2018).</li><li>Weinstein, D. E., Wu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+3,+Unit+17:+Isolation+and+purification+of+primary+Schwann+cells.">Chapter 3, Unit 17: Isolation and purification of primary Schwann cells.</a> Current Protocols in Neuroscience. , (2001).</li><li>Palomo Irigoyen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Purification+of+Primary+Rodent+Schwann+Cells.">Isolation and Purification of Primary Rodent Schwann Cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1791, 81-93 (2018).</li><li>Cheng, L., Khan, M., Mudge, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcitonin+gene-related+peptide+promotes+Schwann+cell+proliferation.">Calcitonin gene-related peptide promotes Schwann cell proliferation.</a> Journal of Cell Biology. 129 (3), 789-796 (1995).</li><li>Pannunzio, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+of+selecting+Schwann+cells+from+adult+mouse+sciatic+nerve.">A new method of selecting Schwann cells from adult mouse sciatic nerve.</a> Journal of Neuroscience Methods. 149 (1), 74-81 (2005).</li><li>Shen, M., Tang, W., Cao, Z., Cao, X., Ding, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+rat+Schwann+cells+based+on+cell+sorting.">Isolation of rat Schwann cells based on cell sorting.</a> Molecular Medicine Reports. 16 (2), 1747-1752 (2017).</li><li>He, Q., Man, L., Ji, Y., Ding, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+in+the+biological+characteristics+between+primary+cultured+sensory+and+motor+Schwann+cells.">Comparison in the biological characteristics between primary cultured sensory and motor Schwann cells.</a> Neuroscience Letters. 521 (1), 57-61 (2012).</li><li>Weiss, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomics+and+transcriptomics+of+peripheral+nerve+tissue+and+cells+unravel+new+aspects+of+the+human+Schwann+cell+repair+phenotype.">Proteomics and transcriptomics of peripheral nerve tissue and cells unravel new aspects of the human Schwann cell repair phenotype.</a> Glia. 64 (12), 2133-2153 (2016).</li></ol>

Les deux principales populations cellulaires de nerfs périphériques comprenaient les SC et les fibroblastes. Les fibroblastes et SC principalement cultivés peuvent aider avec précision à modéliser la physiologie des fibroblastes et des SC pendant le développement et la régénération des nerfs périphériques. L’étude a montré que les cellules nerveuses sciatiques de rat P7 contenaient environ 85% des SC S100-positifs, 13% des fibroblastes OX7-positifs et seulement 1,5% des macrophages OX42-positifs<sup class...

Dans le système nerveux périphérique, les fibres nerveuses se composent principalement d’axones, de cellules Schwann (SC) et de fibroblastes, et contient également un petit nombre de macrophages, de cellules endothéliales microvasculaires et de cellules immunitaires1. Les SC enveloppent les axones dans un rapport de 1:1 et sont entourés d’une couche de tissu conjonctif appelée endoneurium. Les axones sont ensuite regroupés pour former des groupes appelés fascicles, et chaque fascicle est enveloppé dans une couche de tissu conjonctif connue sous le nom de périneurium. Enfin, la fibre nerveuse entière est enveloppée dans une couche de tissu conjonctif, qui est appelé l’épineurium. Dans l’endoneurium, la population cellulaire entière est composée de 48% SC, et une partie substantielle des cellules restantes implique des fibroblastes2. En outre, les fibroblastes sont des composants importants de tous les compartiments nerveux, y compris l’épineurium, le périneurium, et l’endoneurium3. De nombreuses études ont indiqué que les SC et les fibroblastes jouent un rôle crucial dans le processus de régénération après les lésions nerveuses périphériques4,5,6. Après la transection du nerf périphérique, les fibroblastes périneuriaux régulent le tri cellulaire par l’intermédiaire de la voie de signalisation ephrin-B/Ephb2 entre les SC et les fibroblastes, guidant davantage la repousse axonale à travers les blessures5. Les fibroblastes périphériques de nerf sécrètent la protéine de tenascine-C et améliorent la migration des SC pendant la régénération de nerf par la voie de signalisation β1-intégrine7. Cependant, les SC et les fibroblastes utilisés dans les études ci-dessus ont été dérivés du nerf sciatique, qui inclut les nerfs sensoriels et moteurs.
Dans le système nerveux périphérique, les nerfs sensoriels (nerfs afférents) conduisent la signalisation sensorielle des récepteurs au système nerveux central (SNC), tandis que les nerfs moteurs (nerfs efferents) conduisent des signaux du SNC aux muscles. Des études antérieures ont indiqué que les SC expriment des phénotypes moteurs et sensoriels distincts et sécrètent des facteurs neurotrophiques pour soutenir la régénération périphérique du nerf8,9. Selon une étude récente, les fibroblastes expriment également différents phénotypes moteurs et sensoriels et affectent la migration des SC10. Ainsi, l’exploration des différences entre les fibroblastes/SC des nerfs moteurs et sensoriels nous permet d’étudier les mécanismes moléculaires sous-jacents complexes de la régénération spécifique du nerf périphérique.
À l’heure actuelle, il existe de nombreuses façons de purifier les SC et les fibroblastes, y compris l’application d’agents antimitotiques, cytolyse à médiation d’anticorps11,12, immunopanning séquentiel13 et laminine substrat14. Cependant, toutes les méthodes ci-dessus éliminent les fibroblastes et ne préservent que les SC. Les SC et les fibroblastes hautement purifiés peuvent être obtenus par la technologie de tri de cytométrie de flux15, mais c’est une technique longue et coûteuse. Ainsi, dans cette étude, une simple méthode de digestion différentielle et d’adhérence différentielle pour purifier et isoler les fibroblastes et les SC des nerfs sensoriels et moteurs a été développée afin d’obtenir un grand nombre de fibroblastes et de SC plus rapidement.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 594 Goat Anti-Mouse IgG(H+L)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A11005</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CoraLite488-conjugated Affinipure Goat Anti-Mouse IgG(H+L)</td>
			<td>Proteintech</td>
			<td>SA00013-1</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>TCS SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Quest software</td>
			<td>Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Hank&#39;s balanced salt solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14170112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZ2-ILST</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10099-141C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forskolin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F6886-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoroshield Mounting Medium</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab104135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixation medium/Permeabilization medium</td>
			<td>Multi Sciences (LIANKE) Biotech, Co., LTD</td>
			<td>GAS005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometry</td>
			<td>Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td>FACS Calibur</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG1 kappa [MOPC-21] (FITC) - Isotype Control</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab106163</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse monoclonal anti-CD90 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab225</td>
			<td>Dilution: 1:1000 for ICC, 0.1 &#181;g for 106 cells for Flow Cyt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-S100 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab212816</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polylysine (PLL)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human NRG1-beta 1/HRG1-beta 1 EGF Domain Protein</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>396-HB-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% (w/v) trypsin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200-072</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

purification of fibroblasts and schwann cells from sensory and motor nerves in vitro

Les principales cellules du système nerveux périphérique sont les cellules Schwann (SC) et les fibroblastes. Ces deux cellules expriment distinctement les phénotypes sensoriels et moteurs impliqués dans différents modèles d’expression de gène de facteur neurotrophique et d’autres processus biologiques, affectant la régénération de nerf. La présente étude a établi un protocole pour obtenir des SCs et des fibroblastes hautement purifiés de rat sensoriels et moteurs plus rapidement. La racine ventrale (nerf moteur) et la racine dorsale (nerf sensoriel) des rats néonatals (7 jours) ont été dissociées et les cellules ont été cultivées pendant 4-5 jours, suivies par l’isolement des fibroblastes sensoriels et moteurs et des SC en combinant la digestion différentielle et les méthodes d’adhérence différentiellement. Les résultats des analyses d’immunocytochimie et de cytométrie de flux ont montré que la pureté des SC et des fibroblastes sensoriels et moteurs était de >90%. Ce protocole peut être utilisé pour obtenir un grand nombre de fibroblastes sensoriels et moteurs / SC plus rapidement, contribuant à l’exploration de la régénération sensorielle et motrice des nerfs.

Observation microscopique légère Les SC et les fibroblastes sont les deux principales populations cellulaires obtenues dans la culture cellulaire primaire à partir des tissus nerveux. Après l’inoculation pendant 1 h, la plupart des cellules ont adhéré au fond du plat, et la morphologie cellulaire est passée de ronde à ovale. Après avoir passé 24 h à cultiver, les SC ont présenté une morphologie bipolaire ou tripolaire et la longueur de ceux-ci variait de...

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Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro

Ici, nous présentons une méthode pour purifier les fibroblastes et les cellules de Schwann des nerfs sensoriels et moteurs in vitro.

Purification des fibroblastes et des cellules de Schwann des nerfs sensoriels et moteurs in vitro

The principal cells in the peripheral nervous system are the Schwann cells (SCs) and the fibroblasts. Both these cells distinctly express the sensory and ...

Ce protocole peut être utilisé pour obtenir un grand nombre de capteurs et les cellules du moteur fibroblaste et Schwann rapidement. Les cellules obtenues grâce à ce message peuvent être utilisées dans l’étude de la régénération nerveuse et des maladies du système nerveux. Nous montrons que la démonstration peut représenter l’expérimental pour mieux contrôler le temps de l’étape digestive différentielle et rendre les étapes expérimentales plus faciles à comprendre.Pour éclater utiliser des ciseaux pour faire une incision de trois centimètres, dans la peau du dos. Retirer la colonne vertébrale. Ouvrez soigneusement le canal vertébral pour exposer la moelle épinière.Dentelle de la moelle épinière dans une boîte de Pétri de 60 millimètres, avec trois à quatre millilitres de glace froide D Hanks solution de sel équilibré sous un microscope disséquant, exciser la racine ventrale et la racine dorsale. Placez-les dans la solution de sel équilibré D Hanks glacée. Après avoir enlevé le HBSS, couper les nerfs en morceaux de trois à cinq millimètres, avec des ciseaux.Ajouter un millilitre de trypsine de 0,25 % et transférer les morceaux nerveux dans cinq tubes de centrifugeuse millilitres. Incuber à 37 degrés Celsius pendant 18 à 20 minutes. Ensuite, pour arrêter la digestion, ajouter à trois à quatre millilitres de DMEM contenant 10% de sérum bovin fœtal.Pipette le mélange de haut en bas doucement environ 10 fois. Centrifugeuse à 800 fois G pendant cinq minutes. Après centrifugation jeter le supernatant.Et re-suspendre le précipité en deux à trois millilitres de DMEM complété par 10%FBS. Filtrer la suspension cellulaire à travers un filtre à mailles de 400, puis utiliser la suspension pour inoculer une boîte petri de 60 millimètres. Incuber les boîtes de Pétri pendant quatre à cinq jours à 37 degrés Celsius, en présence de 5% de dioxyde de carbone.Lorsque la culture a atteint 90% de confluence, laver les cellules une fois à l’aide de 1XPBS. Ensuite, pour digérer les cellules de Schwann, ajouter un millilitre de trypsine de 0,25% à 37 degrés Celsius par plat de 60 millimètres. Après huit à 10 secondes à température ambiante, arrêter la digestion, en ajoutant trois millilitres de DMEM complété par 10%FBS.Pour détacher les cellules de Schwann, soufflez doucement sur la cellule avec une pipette. Vérifiez au microscope que les cellules sont détachées. Puis recueillir le milieu, qui contient les cellules Swan, et centrifugeuse à 800 fois G pendant cinq minutes.Jetez le supernatant et suspendez le précipité en trois millilitres de milieu. Utilisez cette suspension pour inoculer des boîtes de Pétri non cirés de 60 millimètres et incuber les plats à 37 degrés Celsius pendant 30 à 45 minutes. Marques pour le milieu, qui contiendra les cellules de Schwann à un plat moyen enduit de poly L lysine, et incuber le plat à 37 degrés Celsius pendant deux jours.Après avoir enlevé le milieu contenant les cellules de Schwann laver les fibroblastes, adhérant à la vaisselle Petri avec 1XPBS. Pour digérer les fibroblastes, ajouter un millilitre de trypsine de 0,25% à 37 degrés Celsius. Après avoir suivi la digestion pour procéder pendant deux minutes à 37 degrés Celsius, mettre fin à la digestion en ajoutant DMEM complété par 10%FBS.Pour détacher les fibroblastes, utilisez une pipette pour souffler sur le fond du plat. Recueillir le milieu, y compris les fibroblastes, et le transférer dans des tubes de centrifugeuse. Centrifuger les tubes à 800 fois G pendant cinq minutes.Jetez le supernatant, et resuspendez le précipité avec deux millilitres de DMEM contenant 10%FBS. Inoculer les cellules dans des boîtes de Pétri non codées de 60 millimètres et incuber à 37 degrés Celsius pendant 30 à 45 minutes. Isoler les fibroblastes qui adhéreront aux boîtes de Pétri, en enlevant et en jetant le milieu de croissance.Ajouter trois millilitres de DMEM complétés par 10%FBS. Incuber à 37 degrés Celsius pendant deux jours jusqu’à ce que le passage d’une cellule atteigne 90% confluent. Répétez la digestion différentielle et l’adhérence.Après avoir culture le passage aux fibroblastes et aux cellules de Schwann pendant deux jours, digérer les cellules, les recueillir et les compter. Inoculate PLL diapositives enduites à une concentration d’une fois 10 de ces cellules par puits pour la coloration ICC. La microscopie contrastée de Bay montre la morphologie des cellules et des fibroblastes cultivés de Schwann tout au long du processus d’isolement.Après un temps de culture prolongé, les cellules de Schwann ont été regroupées entre les fibroblastes ou situées à la surface des fibroblastes. Après digestion pendant 10 secondes, les cellules de Schwann, indiquées par les flèches rouges, étaient rondes tandis que les fibroblastes restaient à plat et étaient fixées au fond du plat. Après isolement par digestion différentielle et l’adhérence différentielle les morphologies cellulaires typiques ont été observées pour les quatre types de cellules.Fibroblastes moteurs, fibroblastes sensoriels, cellules schwann motrices et cellules sensorielles de Schwann. Les fibroblastes sensoriels et moteurs ont été visualisés à l’aide d’un microscope à balayage laser focal cône. Les fibroblastes ont été tachés d’anticorps contre le colorant CD 90 X33342 a été utilisé pour étiqueter les noyaux cellulaires.Les images fusionnées de l’immunostaining de fibroblastes et de la coloration nucléaire, ont indiqué que 92,51% et 92,64% de CD 90 et de cellules co-étiquetées hexed, étaient présentes dans les fibroblastes moteurs et sensoriels respectivement. Les cellules sensorielles et motrices de Schwann ont été visualisées à l’aide d’un microscope à balayage laser confocal. Les cellules de Schwann ont été tachées d’anticorps contre le colorant S100 X33342 a été utilisé pour étiqueter les noyaux cellulaires.Les images de fusion de l’immunostaining de cellules swan et de la coloration nucléaire ont indiqué la présence de 91,61% et 93,56% de cellules co-étiquetées S100 et hexed dans les cellules motrices et sensorielles de Schwann, respectivement. La pureté cellulaire a également été analysée à l’aide de la cytométrie du débit. Dans les cultures de fibroblaste, approximativement 90% des cellules étaient des fibroblastes, indiqués par M2 dans les graphiques de FCA tandis que les cellules restantes étaient des cellules de Schwann.Dans les cultures cellulaires de Schwann, plus de 92% des cellules étaient des cellules de Schwann, toujours indiquées par M2 dans les graphiques fca, tandis que les cellules restantes étaient des fibroblastes. Ce protocole est rarement utile pour commencer le mécanisme de régénération de neurosensorisation et de nerf moteur des fibroblastes, et la transplantation de cellules de Schwann, pour favoriser la régénération nerveuse.

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