Name: purification of fibroblasts and schwann cells from sensory and motor nerves in vitro
Uploaded: 2020-05-20T13:00:00
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Diese Studie wurde vom National Key Research and Development Program of China (Grant No. 2017YFA0104703), der National Natural Foundation of China (Grant No. 31500927) unterstützt.

Diese Studie wurde in Übereinstimmung mit den Institutional Animal Care Guidelines der Universität Nantong durchgeführt. Alle Verfahren einschließlich der tierischen Subjekte wurden vom Verwaltungsausschuss für Versuchstiere in der Provinz Jiangsu, China, ethisch genehmigt.
1. Isolation und Kultur von motorischen und sensorischen Nerven-Fibroblasten und SCs
<ol><li>Verwenden Sie sieben Tage alte Sprague-Dawley (SD) Ratten (n=4), die vom Experimental Animal Center der Nantong University ...

<ol>
	<li>Stierli, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+regulation+of+the+homeostasis+and+regeneration+of+peripheral+nerve+is+distinct+from+the+CNS+and+independent+of+a+stem+cell+population.">The regulation of the homeostasis and regeneration of peripheral nerve is distinct from the CNS and independent of a stem cell population.</a> Development (The Company of Biologists). , (2018).</li><li>Schubert, T., Friede, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+endoneurial+fibroblasts+in+myelin+degradation.">The role of endoneurial fibroblasts in myelin degradation.</a> Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 40 (2), 134-154 (1981).</li><li>Dreesmann, L., Mittnacht, U., Lietz, M., Schlosshauer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+fibroblast+impact+on+Schwann+cell+behavior.">Nerve fibroblast impact on Schwann cell behavior.</a> European Journal of Cell Biology. 88 (5), 285-300 (2009).</li><li>Lavdas, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cells+engineered+to+express+the+cell+adhesion+molecule+L1+accelerate+myelination+and+motor+recovery+after+spinal+cord+injury.">Schwann cells engineered to express the cell adhesion molecule L1 accelerate myelination and motor recovery after spinal cord injury.</a> Experimental Neurology. 221 (1), 206-216 (2010).</li><li>Parrinello, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EphB+signaling+directs+peripheral+nerve+regeneration+through+Sox2-dependent+Schwann+cell+sorting.">EphB signaling directs peripheral nerve regeneration through Sox2-dependent Schwann cell sorting.</a> Cell. 143 (1), 145-155 (2010).</li><li>Benito, C., Davis, C. M., Gomez-Sanchez, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=STAT3+Controls+the+Long-Term+Survival+and+Phenotype+of+Repair+Schwann+Cells+during+Nerve+Regeneration.">STAT3 Controls the Long-Term Survival and Phenotype of Repair Schwann Cells during Nerve Regeneration.</a> Journal of Neuroscience Research. 37 (16), 4255-4269 (2017).</li><li>Zhang, Z. J., Jiang, B. C., Gao, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+in+neuron-glial+cell+interaction+and+pathogenesis+of+neuropathic+pain.">Chemokines in neuron-glial cell interaction and pathogenesis of neuropathic pain.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 74 (18), 3275-3291 (2017).</li><li>Hoke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cells+express+motor+and+sensory+phenotypes+that+regulate+axon+regeneration.">Schwann cells express motor and sensory phenotypes that regulate axon regeneration.</a> Journal of Neuroscience. 26 (38), 9646-9655 (2006).</li><li>Brushart, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cell+phenotype+is+regulated+by+axon+modality+and+central-peripheral+location,+and+persists+in+vitro.">Schwann cell phenotype is regulated by axon modality and central-peripheral location, and persists in vitro.</a> Experiment Neurology. 247, 272-281 (2013).</li><li>He, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+Gene+Expression+in+Primary+Cultured+Sensory+and+Motor+Nerve+Fibroblasts.">Differential Gene Expression in Primary Cultured Sensory and Motor Nerve Fibroblasts.</a> Frontiers in Neuroscience. 12, 1016 (2018).</li><li>Weinstein, D. E., Wu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+3,+Unit+17:+Isolation+and+purification+of+primary+Schwann+cells.">Chapter 3, Unit 17: Isolation and purification of primary Schwann cells.</a> Current Protocols in Neuroscience. , (2001).</li><li>Palomo Irigoyen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Purification+of+Primary+Rodent+Schwann+Cells.">Isolation and Purification of Primary Rodent Schwann Cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1791, 81-93 (2018).</li><li>Cheng, L., Khan, M., Mudge, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcitonin+gene-related+peptide+promotes+Schwann+cell+proliferation.">Calcitonin gene-related peptide promotes Schwann cell proliferation.</a> Journal of Cell Biology. 129 (3), 789-796 (1995).</li><li>Pannunzio, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+of+selecting+Schwann+cells+from+adult+mouse+sciatic+nerve.">A new method of selecting Schwann cells from adult mouse sciatic nerve.</a> Journal of Neuroscience Methods. 149 (1), 74-81 (2005).</li><li>Shen, M., Tang, W., Cao, Z., Cao, X., Ding, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+rat+Schwann+cells+based+on+cell+sorting.">Isolation of rat Schwann cells based on cell sorting.</a> Molecular Medicine Reports. 16 (2), 1747-1752 (2017).</li><li>He, Q., Man, L., Ji, Y., Ding, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+in+the+biological+characteristics+between+primary+cultured+sensory+and+motor+Schwann+cells.">Comparison in the biological characteristics between primary cultured sensory and motor Schwann cells.</a> Neuroscience Letters. 521 (1), 57-61 (2012).</li><li>Weiss, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomics+and+transcriptomics+of+peripheral+nerve+tissue+and+cells+unravel+new+aspects+of+the+human+Schwann+cell+repair+phenotype.">Proteomics and transcriptomics of peripheral nerve tissue and cells unravel new aspects of the human Schwann cell repair phenotype.</a> Glia. 64 (12), 2133-2153 (2016).</li></ol>

Zu den beiden Hauptzellpopulationen peripherer Nerven gehörten SCs und Fibroblasten. Die hauptsächlich kultivierten Fibroblasten und SCs können bei der Modellierung der Physiologie von Fibroblasten und SCs während der peripheren Nervenentwicklung und -regeneration genau helfen. Die Studie zeigte, dass P7-Ratten-Schitik-Nervenzellen etwa 85% der S100-positiven SCs, 13% der OX7-positiven Fibroblasten und nur 1,5% der OX42-positiven Makrophagen13enthielten. Obwohl die Anzahl der Fibroblasten klei...

Im peripheren Nervensystem bestehen die Nervenfasern hauptsächlich aus Axonen, Schwann-Zellen (SCs) und Fibroblasten und enthält auch eine kleine Anzahl von Makrophagen, mikrovaskulären Endothelzellen und Immunzellen1. SCs wickeln die Axone in einem Verhältnis von 1:1 und werden von einer Bindegewebsschicht namens Endoneurium umschlossen. Die Axone werden dann zu Gruppen gebündelt, die Faszikel genannt werden, und jedes Faszikel wird in eine Bindegewebsschicht eingewickelt, die als Perineurium bekannt ist. Schließlich wird die gesamte Nervenfaser in eine Schicht aus Bindegewebe eingewickelt, die als Epineurium bezeichnet wird. Im Endoneurium besteht die gesamte Zellpopulation aus 48% SCs, und ein erheblicher Teil der verbleibenden Zellen umfasst Fibroblasten2. Darüber hinaus sind Fibroblasten wichtige Bestandteile aller Nervenkompartimente, einschließlich des Epineuriums, des Perineuriums und des Endoneuriums3. Viele Studien haben gezeigt, dass SCs und Fibroblasten eine entscheidende Rolle im Regenerationsprozess nach peripheren Nervenverletzungen4,5,6spielen. Nach der Transektion des peripheren Nervs regulieren die perineurialen Fibroblasten die Zellsortierung über den Ephrin-B/EphB2-Signalweg zwischen SCs und Fibroblasten und leiten das axonale Nachwachsen durch Wunden5. Periphere Nervenfibroblasten sezernieren Tenascin-C-Protein und verbessern die Migration von SCs während der Nervenregeneration durch den Signalweg7. Die in den oben genannten Studien verwendeten SCs und Fibroblasten wurden jedoch vom Ischiasnerv abgeleitet, der sowohl sensorische als auch motorische Nerven umfasst.
Im peripheren Nervensystem leiten die Sinnesnerven (afferent nerven) sensorische Signale von den Rezeptoren an das zentralnervousische System (ZNS), während die motorischen Nerven (effeente Nerven) Signale vom ZNS an die Muskeln leiten. Frühere Studien haben gezeigt, dass SCs unterschiedliche motorische und sensorische Phänotypen exprimieren und neurotrophe Faktoren absondern, um die periphere Nervenregeneration zu unterstützen8,9. Laut einer aktuellen Studie exprimieren Fibroblasten auch verschiedene motorische und sensorische Phänotypen und beeinflussen die Migration von SCs10. So ermöglicht uns die Erforschung von Unterschieden zwischen motorischen und sensorischen Nervenfibroblasten/SCs, die komplizierten zugrunde liegenden molekularen Mechanismen der peripheren nervenspezifischen Regeneration zu untersuchen.
Derzeit gibt es viele Möglichkeiten, SCs und Fibroblasten zu reinigen, einschließlich der Anwendung von Antimitatika, Antikörper-vermittelte Zytolyse11,12, sequentielle Immunpanning13 und Laminin substratum14. Alle oben genannten Methoden entfernen jedoch Fibroblasten und bewahren nur die SCs. Hochgereinigte SCs und Fibroblasten können durch Durchflusszytometrie-Sortiertechnologie15erhalten werden, aber es ist eine zeitaufwändige und kostspielige Technik. Daher wurde in dieser Studie eine einfache Differentialverdauungs- und Differentialhaftungsmethode zur Reinigung und Isolierung von sensorischen und motorischen Nervenfibroblasten und SCs entwickelt, um eine große Anzahl von Fibroblasten und SCs schneller zu erhalten.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 594 Goat Anti-Mouse IgG(H+L)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A11005</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CoraLite488-conjugated Affinipure Goat Anti-Mouse IgG(H+L)</td>
			<td>Proteintech</td>
			<td>SA00013-1</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>TCS SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Quest software</td>
			<td>Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Hank&#39;s balanced salt solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14170112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZ2-ILST</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10099-141C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forskolin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F6886-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoroshield Mounting Medium</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab104135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixation medium/Permeabilization medium</td>
			<td>Multi Sciences (LIANKE) Biotech, Co., LTD</td>
			<td>GAS005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometry</td>
			<td>Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td>FACS Calibur</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG1 kappa [MOPC-21] (FITC) - Isotype Control</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab106163</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse monoclonal anti-CD90 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab225</td>
			<td>Dilution: 1:1000 for ICC, 0.1 &#181;g for 106 cells for Flow Cyt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-S100 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab212816</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polylysine (PLL)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human NRG1-beta 1/HRG1-beta 1 EGF Domain Protein</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>396-HB-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% (w/v) trypsin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200-072</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

purification of fibroblasts and schwann cells from sensory and motor nerves in vitro

Die Hauptzellen im peripheren Nervensystem sind die Schwann-Zellen (SCs) und die Fibroblasten. Beide Zellen drücken deutlich die sensorischen und motorischen Phänotypen aus, die an verschiedenen Mustern der neurotrophen Faktorgenexpression und anderen biologischen Prozessen beteiligt sind, was die Nervenregeneration beeinflusst. Die vorliegende Studie hat ein Protokoll erstellt, um hochgereinigte Ratinsensorische und motorische Cs und Fibroblasten schneller zu erhalten. Die ventrale Wurzel (Motornerv) und die Rückenwurzel (Sensornerv) von neonatalen Ratten (7 Tage alt) wurden dissoziiert und die Zellen wurden für 4-5 Tage kultiviert, gefolgt von isolierungs- und motorischen Fibroblasten und SCs durch die Kombination von Differentialverdauung und Differentialhaftungsmethoden nacheinander. Die Ergebnisse der Immunzytochemie und der Durchflusszytometrie-Analysen zeigten, dass die Reinheit der sensorischen und motorischen SCs und Fibroblasten >90% betrug. Dieses Protokoll kann verwendet werden, um eine große Anzahl von sensorischen und motorischen Fibroblasten/SCs schneller zu erhalten und so zur Erforschung der sensorischen und motorischen Nervenregeneration beizutragen.

Leichte mikroskopische Beobachtung Die SCs und Fibroblasten sind die beiden Hauptzellpopulationen, die in der primären Zellkultur aus Nervengeweben gewonnen werden. Nach der Impfung für 1 h, die meisten der Zellen an der Unterseite der Schale haften, und die Zellmorphologie änderte sich von rund zu oval. Nach der Kultivierung für 24 h zeigten die SCs eine bipolare oder tripolare Morphologie, deren Länge zwischen 100 und 200 m lag. Nach 48 h kam es zu Aggregation u...

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Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro

Hier präsentieren wir eine Methode zur Reinigung von Fibroblasten und Schwannzellen von sensorischen und motorischen Nerven in vitro.

Reinigung von Fibroblasten und Schwannzellen von sensorischen und motorischen Nerven in Vitro

The principal cells in the peripheral nervous system are the Schwann cells (SCs) and the fibroblasts. Both these cells distinctly express the sensory and ...

Dieses Protokoll kann verwendet werden, um eine große Anzahl von Sensor- und Motor-Fibroblasten und Schwann-Zellen schnell zu erhalten. Die durch diese Botschaft erhaltenen Zellen können bei der Untersuchung der Nervenregeneration und Erkrankungen des Nervensystems verwendet werden. Wir zeigen, dass Demonstration das Experimentelle darstellen kann, um die Zeit des differenziellen Verdauungsschritts besser zu kontrollieren und die experimentellen Schritte leichter zu verstehen.Zum Bersten verwenden Sie eine Schere, um einen drei Zentimeter großen Schnitt in der Haut des Rückens zu machen. Entfernen Sie die Wirbelsäule. Öffnen Sie den Wirbelkanal vorsichtig, um das Rückenmark freizulegen.Schnüren Sie das Rückenmark in einer 60-Millimeter-Petrischale, mit drei bis vier Millilitere eiskalte D Hanks ausgewogene Salzlösung unter einem Sezieren Mikroskop, Verbrauch der ventralen Wurzel und der rückenden Wurzel. Legen Sie sie in eiskalte D Hanks ausgewogene Salzlösung. Nach dem Entfernen der HBSS die Nerven mit einer Schere in drei bis fünf Millimeter schneiden.Fügen Sie einen Milliliter 0,25%Trypsin hinzu und übertragen Sie die Nervenstücke in fünf Milliliter Zentrifugenröhren. Bei 37 Grad Celsius für 18 bis 20 Minuten inkubieren. Als nächstes, um die Verdauung zu stoppen, fügen Sie bei drei bis vier Milliliter DMEM enthält 10%fetales Rinderserum.Pipette die Mischung auf und ab sanft etwa 10 Mal. Zentrifuge bei 800 mal G für fünf Minuten. Nach der Zentrifugation den Überstand entsorgen.Und den Niederschlag in zwei bis drei Milliliter DMEM, ergänzt mit 10%FBS, wieder aussetzen. Filtern Sie die Zellsuspension durch einen 400-Mesh-Filter, und verwenden Sie dann die Suspension, um eine 60-Millimeter-Petrischale zu impfen. Inkubieren Sie die Petrischalen für vier bis fünf Tage bei 37 Grad Celsius, in Gegenwart von 5% Kohlendioxid.Wenn die Kultur 90% Zusammenfluss erreicht hat, waschen Sie die Zellen einmal mit 1XPBS. Um dann die Schwann-Zellen zu verdauen, fügen Sie einen Milliliter 0,25% Trypsin bei 37 Grad Celsius pro 60-Millimeter-Schale hinzu. Nach acht bis zehn Sekunden bei Raumtemperatur, stoppen Sie die Verdauung, indem Sie drei Milliliter DMEM mit 10%FBS ergänzt.Um die Schwann-Zellen zu lösen, blasen Sie die Zelle vorsichtig mit einer Pipette. Überprüfen Sie mit dem Mikroskop, ob die Zellen getrennt sind. Dann sammeln Sie das Medium, das die Schwanenzellen enthält, und Zentrifuge bei 800 mal G für fünf Minuten.Entsorgen Sie den Überstand, und setzen Sie den Niederschlag in drei Milliliter Medium wieder aus. Verwenden Sie diese Suspension, um unbeschichtete 60-Millimeter-Petri-Gerichte zu impfen und die Gerichte 30 bis 45 Minuten bei 37 Grad Celsius zu bebrüten. Marken für das Medium, das die Schwann-Zellen zu einer Poly L Lysin beschichteten Mittelschale enthalten wird, und bebrüten die Schale bei 37 Grad Celsius für zwei Tage.Nach dem Entfernen des Mediums, das die Schwann-Zellen enthält, waschen Sie die Fibroblasten und halten sich mit 1XPBS an die Petrischalen. Um die Fibroblasten zu verdauen, fügen Sie einen Milliliter 0,25% Trypsin bei 37 Grad Celsius hinzu. Nach der anschließenden Verdauung für zwei Minuten bei 37 Grad Celsius, beenden Sie die Verdauung durch Zugabe von DMEM ergänzt mit 10%FBS.Um die Fibroblasten zu lösen, verwenden Sie eine Pipette, um auf den Boden der Schale zu blasen. Sammeln Sie das Medium, einschließlich der Fibroblasten, und übertragen Sie es in Zentrifugenrohre. Zentrifugieren Sie die Rohre bei 800 mal G für fünf Minuten.Entsorgen Sie den Überstand, und setzen Sie den Niederschlag mit zwei MilliliterDMEM, die 10%FBS enthalten, wieder auf. Impfen Sie die Zellen in uncodierten, 60 Millimeter, Petrischalen, und brüten Sie bei 37 Grad Celsius für 30 bis 45 Minuten. Isolieren Sie die Fibroblasten, die an den Petrischalen haften, indem Sie das Wachstumsmedium entfernen und entsorgen.Fügen Sie drei Milliliter DMEM hinzu, ergänzt durch 10%FBS. Inkubieren Sie bei 37 Grad Celsius für zwei Tage, bis die Durchgangszellen 90% Zusammenfluss erreichen. Wiederholen Sie die Differentialverdauung und -haftung.Nachdem Sie den Durchgang zu Fibroblasten und Schwann-Zellen für zwei Tage kultiviert haben, verdauen Sie die Zellen, sammeln Sie sie und zählen sie. PLL-beschichtete Dias mit einer Konzentration von einem mal 10 dieser Zellen pro Brunnen für die ICC-Färbung impfen. Bays Kontrastmikroskopie zeigt die Morphologie kultivierter Schwann-Zellen und Fibroblasten während des gesamten Isolationsprozesses.Nach längerer Kulturzeit wurden die Schwann-Zellen zwischen den Fibroblasten zusammengeballt oder auf der Oberfläche von Fibroblasten lokalisiert. Nach der Verdauung für 10 Sekunden waren die Schwann-Zellen, die durch die roten Pfeile angezeigt wurden, rund, während die Fibroblasten flach blieben und an der Unterseite der Schale befestigt waren. Nach der Isolierung durch Differentialverdauung und Differentialhaftung wurden für alle vier Zelltypen typische Zellmorphologien beobachtet.Motorische Fibroblasten, sensorische Fibroblasten, motorische Schwannzellen und sensorische Schwannzellen. Die sensorischen und motorischen Fibroblasten wurden mit einem Kegelfokus-Laserscanmikroskop visualisiert. Die Fibroblasten wurden mit Antikörpern gegen CD 90 X33342 Farbstoff gefärbt wurde verwendet, um die Zellkerne zu beschriften.Die zusammengeführten Bilder von Fibroblasten Immunfärbung und Kernfärbung, zeigten, dass 92,51% und 92,64% der CD 90 und hexed co-labeled Zellen, waren in den motorischen und sensorischen Fibroblasten jeweils vorhanden. Die sensorischen und motorischen Schwann-Zellen wurden mit einem konfokalen Laserscanmikroskop visualisiert. Die Schwann-Zellen wurden mit Antikörpern gegen S100 X33342 Farbstoff gefärbt, um die Zellkerne zu beschriften.Die Verschmelzungsbilder von Schwanenzell-Immunostainierung und nuklearer Färbung deuteten auf 91,61% bzw. 93,56% der S100 und mitbeschrifteten ko-markierten Zellen in motorischen bzw. sensorischen Schwann-Zellen hin. Die Zellreinheit wurde auch mit Hilfe der Durchflusszytometrie analysiert. In den Fibroblastenkulturen waren etwa 90% der Zellen Fibroblasten, die durch M2 in den FCA-Diagrammen angegeben wurden, während die verbleibenden Zellen Schwann-Zellen waren.In den Schwann-Zellkulturen waren mehr als 92% der Zellen Schwann-Zellen, die wiederum durch M2 in den FCA-Diagrammen angegeben wurden, während die verbleibenden Zellen Fibroblasten waren. Dieses Protokoll ist selten nützlich, um den Mechanismus der Sensor- und Motornervenregeneration von Fibroblasten und die Schwann-Zelltransplantation zu starten, um die Nervenregeneration zu fördern.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Culture of Primary Motor and Sensory Neurons in Defined Media on Electrospun Poly-L-lactide Nanofiber Scaffolds

The Culture of Primary Motor und sensorischen Neuronen in definierten Medien auf Elektrogesponnene Poly-L-Lactid Nanofiber Gerüste

Electrospinning is a technique for producing micro- to nano-scale fibers. Fibers can be electrospun with varying degrees of alignment, from highly aligned ...

Forschung

Neurowissenschaften

Live-imaging of PKC Translocation in Sf9 Cells and in Aplysia Sensory Neurons

Live-Darstellung von PKC-Translokation in Sf9-Zellen und in Aplysia sensorischen Neuronen

Protein kinase Cs (PKCs) are serine threonine kinases that play a central role in regulating a wide variety of cellular processes such as cell growth and ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-Cell-Imaging von Sinnesorgan Vorläuferzellen im Intact Drosophila Puppen

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Isolation and Culture of Dissociated Sensory Neurons From Chick Embryos

Isolation und Kultur der Dissoziierte sensorischen Neuronen aus Hühnerembryonen

Neurons are multifaceted cells that carry information essential for a variety of functions including sensation, motor movement, learning, and memory. ...

Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells

Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells

Entfernung von<em&gt; Drosophila</em&gt; Muskelgewebe aus Larval Filets für Immunfluoreszenzanalyse von sensorischen Neuronen und epidermalen Zellen

Drosophila larval dendritic arborization (da) neurons are a popular model for investigating mechanisms of neuronal morphogenesis. Da neurons develop in ...

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog (Rana catesbeiana)

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog Rana catesbeiana

Physiologische Herstellung von Haarzellen aus dem Sacculus der American Bullfrog (<em&gt; Rana catesbeiana</em&gt;)

The study of hearing and balance rests upon insights drawn from biophysical studies of model systems. One such model, the sacculus of the American ...

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafisch<em&gt; In Situ</em&gt; Spinal Cord Vorbereitung für elektrophysiologische Aufzeichnungen von Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafish, first introduced as a developmental model, have gained popularity in many other fields. The ease of rearing large numbers of rapidly developing ...

Analysis of Immune Cells in Single Sciatic Nerves and Dorsal Root Ganglion from a Single Mouse Using Flow Cytometry

Analyse von Immunzellen in einzelnen Ischias Nerven und Dorsal Root Ganglion aus einem einzigen Mausklick mit Durchflusszytometrie

Nerve-resident immune cells in the peripheral nervous system (PNS) are essential to maintaining neuronal integrity in a healthy nerve. The immune cells of ...

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Okuläre Kinematik gemessen durch In-vitro- Stimulation der Hirnnerven in die Schildkröte

After animals are euthanized, their tissues begin to die. Turtles offer an advantage because of a longer survival time of their tissues, especially when ...

In Vivo Calcium Imaging of Lateral-line Hair Cells in Larval Zebrafish

In Vivo Calcium Imaging der Seitenlinie Haarzellen im Larvenstadium Zebrafisch

Sensory hair cells are mechanoreceptors found in the inner ear that are required for hearing and balance. Hair cells are activated in response to sensory ...