Name: purification of fibroblasts and schwann cells from sensory and motor nerves in vitro
Uploaded: 2020-05-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro at JoVE.com

מחקר זה נתמך על ידי תוכנית המחקר ופיתוח המפתח הלאומי של סין (גרנט No. 2017YFA0104703), הקרן הלאומית הטבעית של סין (גרנט No. 31500927).

מחקר זה נעשה בהתאם להנחיות לטיפול בבעלי חיים מוסדיים של אוניברסיטת נאנטונג. כל ההליכים כולל הנבדקים בעלי חיים אושרו מבחינה אתית על ידי ועדת המינהל של בעלי חיים ניסיוניים, מחוז ג'יאנגסו, סין.
1. בידוד ותרבות של מנוע ומעצבי עצבים חושי וה scs
<ol><li>שימוש בן שבעה ימים בג-דאולי (SD) חו?...

<ol>
	<li>Stierli, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+regulation+of+the+homeostasis+and+regeneration+of+peripheral+nerve+is+distinct+from+the+CNS+and+independent+of+a+stem+cell+population.">The regulation of the homeostasis and regeneration of peripheral nerve is distinct from the CNS and independent of a stem cell population.</a> Development (The Company of Biologists). , (2018).</li><li>Schubert, T., Friede, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+endoneurial+fibroblasts+in+myelin+degradation.">The role of endoneurial fibroblasts in myelin degradation.</a> Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 40 (2), 134-154 (1981).</li><li>Dreesmann, L., Mittnacht, U., Lietz, M., Schlosshauer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+fibroblast+impact+on+Schwann+cell+behavior.">Nerve fibroblast impact on Schwann cell behavior.</a> European Journal of Cell Biology. 88 (5), 285-300 (2009).</li><li>Lavdas, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cells+engineered+to+express+the+cell+adhesion+molecule+L1+accelerate+myelination+and+motor+recovery+after+spinal+cord+injury.">Schwann cells engineered to express the cell adhesion molecule L1 accelerate myelination and motor recovery after spinal cord injury.</a> Experimental Neurology. 221 (1), 206-216 (2010).</li><li>Parrinello, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EphB+signaling+directs+peripheral+nerve+regeneration+through+Sox2-dependent+Schwann+cell+sorting.">EphB signaling directs peripheral nerve regeneration through Sox2-dependent Schwann cell sorting.</a> Cell. 143 (1), 145-155 (2010).</li><li>Benito, C., Davis, C. M., Gomez-Sanchez, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=STAT3+Controls+the+Long-Term+Survival+and+Phenotype+of+Repair+Schwann+Cells+during+Nerve+Regeneration.">STAT3 Controls the Long-Term Survival and Phenotype of Repair Schwann Cells during Nerve Regeneration.</a> Journal of Neuroscience Research. 37 (16), 4255-4269 (2017).</li><li>Zhang, Z. J., Jiang, B. C., Gao, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+in+neuron-glial+cell+interaction+and+pathogenesis+of+neuropathic+pain.">Chemokines in neuron-glial cell interaction and pathogenesis of neuropathic pain.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 74 (18), 3275-3291 (2017).</li><li>Hoke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cells+express+motor+and+sensory+phenotypes+that+regulate+axon+regeneration.">Schwann cells express motor and sensory phenotypes that regulate axon regeneration.</a> Journal of Neuroscience. 26 (38), 9646-9655 (2006).</li><li>Brushart, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cell+phenotype+is+regulated+by+axon+modality+and+central-peripheral+location,+and+persists+in+vitro.">Schwann cell phenotype is regulated by axon modality and central-peripheral location, and persists in vitro.</a> Experiment Neurology. 247, 272-281 (2013).</li><li>He, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+Gene+Expression+in+Primary+Cultured+Sensory+and+Motor+Nerve+Fibroblasts.">Differential Gene Expression in Primary Cultured Sensory and Motor Nerve Fibroblasts.</a> Frontiers in Neuroscience. 12, 1016 (2018).</li><li>Weinstein, D. E., Wu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+3,+Unit+17:+Isolation+and+purification+of+primary+Schwann+cells.">Chapter 3, Unit 17: Isolation and purification of primary Schwann cells.</a> Current Protocols in Neuroscience. , (2001).</li><li>Palomo Irigoyen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Purification+of+Primary+Rodent+Schwann+Cells.">Isolation and Purification of Primary Rodent Schwann Cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1791, 81-93 (2018).</li><li>Cheng, L., Khan, M., Mudge, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcitonin+gene-related+peptide+promotes+Schwann+cell+proliferation.">Calcitonin gene-related peptide promotes Schwann cell proliferation.</a> Journal of Cell Biology. 129 (3), 789-796 (1995).</li><li>Pannunzio, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+of+selecting+Schwann+cells+from+adult+mouse+sciatic+nerve.">A new method of selecting Schwann cells from adult mouse sciatic nerve.</a> Journal of Neuroscience Methods. 149 (1), 74-81 (2005).</li><li>Shen, M., Tang, W., Cao, Z., Cao, X., Ding, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+rat+Schwann+cells+based+on+cell+sorting.">Isolation of rat Schwann cells based on cell sorting.</a> Molecular Medicine Reports. 16 (2), 1747-1752 (2017).</li><li>He, Q., Man, L., Ji, Y., Ding, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+in+the+biological+characteristics+between+primary+cultured+sensory+and+motor+Schwann+cells.">Comparison in the biological characteristics between primary cultured sensory and motor Schwann cells.</a> Neuroscience Letters. 521 (1), 57-61 (2012).</li><li>Weiss, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomics+and+transcriptomics+of+peripheral+nerve+tissue+and+cells+unravel+new+aspects+of+the+human+Schwann+cell+repair+phenotype.">Proteomics and transcriptomics of peripheral nerve tissue and cells unravel new aspects of the human Schwann cell repair phenotype.</a> Glia. 64 (12), 2133-2153 (2016).</li></ol>

שתי אוכלוסיות התאים המרכזיות של עצבי היקפי כללו ה scs ופיברופיצוצים. הפיברותקיעות בעיקר תרבותית ו ה scs יכול במדויק לסייע במידול הפיזיולוגיה של הפיברותקיעות ו ה scs במהלך פיתוח עצבי היקפי והתחדשות. המחקר הראה כי P7 בתאי עצב מבוססי עכברוש הכיל כ 85% של S100-חיוביים ה scs, 13% של OX7-חיוביים הפיברופיצוצים...

במערכת העצבים ההיקפית, סיבי העצב מורכב בעיקר axons, התאים Schwann (ה scs), ופיברופיצוצים, וכן מכיל מספר קטן של מקרופאגים, תאי מיקרוכלי-דם אנדותל, ותאים חיסוניים1. ה scs לעטוף את האקסונים ביחס 1:1 ומוקפים בשכבת רקמת חיבור הנקראת endoneתוריון. לאחר מכן, האקטונים מאוחדים יחד כדי ליצור קבוצות שנקראות פססיקלס, וכל פסלול עטוף בשכבת רקמת חיבור המכונה הנקבים. בסופו של דבר, סיבי העצב עטוף בשכבת רקמת חיבור, אשר נקראת בתור הקולטן. ב-endoneurium כל אוכלוסיית התאים מורכבת מ-48% ה scs, וחלק ניכר מהתאים הנותרים כרוך בפיברותקיעות2. יתר על כן, הפיברובדורים הם מרכיבים חשובים של כל תאי העצב, כולל הפריאנארייון, הנקבים, והאניוניון3. מחקרים רבים ציינו כי ה scs ו פיברותקיעות לשחק תפקיד מכריע בתהליך התחדשות לאחר פציעות4עצביםהיקפית 4,5,6. לאחר רוחבי של עצב היקפי, הperineurial פיברופיצוצים להסדיר מיון התא באמצעות המסלול האפור-B/EphB2 איתות בין ה scs ופיברותקיעות, עוד המנחה את לצמיחה מחודשת סיבי באמצעות פצעים5. עצבי היקפי להפריש החלבון tenascin-C חלבונים ולשפר את הגירה של ה scs במהלך התחדשות העצב באמצעות β1-אינטגרציה איתות מסלול7. עם זאת, הה scs והפיברוטים המשמשים במחקרים שלעיל נגזרו מעצב הירך, הכולל הן חושים ועצבים מוטוריים.
במערכת העצבים ההיקפית, העצבים הסנסוריים (עצבי הגוף) מבצעים איתות חושי מן הקולטנים למערכת העצבים המרכזית (CN), בעוד העצבים המוטוריים (efferent עצבים) מבצעים אותות מתוך ה-CN אל השרירים. מחקרים קודמים הראו כי ה scs express מוטורית ופנוטיפים מוטוריים וחושים ומפרישות neurotrophic גורמים כדי לתמוך התחדשות היקפית עצביים8,9. על פי מחקר שנערך לאחרונה, פיברופיצוצים גם לבטא פנוטיפים מוטוריים וחושים שונים ולהשפיע על הגירה של ה scs10. כך, החקירה של הבדלים בין המנוע העצבי החושי פיברותקיעות/ה scs מאפשר לנו ללמוד את המנגנונים המורכבים הבסיסיים הבסיסית של התחדשות העצב ההיקפית הסגולי.
כיום, ישנן דרכים רבות כדי לטהר ה scs ופיברופיצוצים, כולל היישום של antimitotic סוכנים, נוגדן-תיווך cytolysis11,12, הimmunopanning סדרתי13 ו-למינציה ב-טקטי תשתית14. עם זאת, כל השיטות הנ ל להסיר את הפיברוכדורים ולשמר רק את ה scs. ה scs מאוד מטוהרים ופיברותקיעות ניתן להשיג על ידי הזרמת cy, לנסות מיון טכנולוגיה15, אבל זה זמן רב ויקר טכניקה. מכאן, במחקר זה, העיכול הדיפרנציאלי פשוטה ושיטת הדבקות הדיפרנציאליות לטיהור ובידוד החושים והעצבים המוטוריים והה scs פותחה על מנת להשיג מספר רב של פיברותקיעות וה scs במהירות רבה יותר.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 594 Goat Anti-Mouse IgG(H+L)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A11005</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CoraLite488-conjugated Affinipure Goat Anti-Mouse IgG(H+L)</td>
			<td>Proteintech</td>
			<td>SA00013-1</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>TCS SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Quest software</td>
			<td>Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Hank&#39;s balanced salt solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14170112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZ2-ILST</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10099-141C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forskolin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F6886-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoroshield Mounting Medium</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab104135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixation medium/Permeabilization medium</td>
			<td>Multi Sciences (LIANKE) Biotech, Co., LTD</td>
			<td>GAS005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometry</td>
			<td>Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td>FACS Calibur</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG1 kappa [MOPC-21] (FITC) - Isotype Control</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab106163</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse monoclonal anti-CD90 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab225</td>
			<td>Dilution: 1:1000 for ICC, 0.1 &#181;g for 106 cells for Flow Cyt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-S100 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab212816</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polylysine (PLL)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human NRG1-beta 1/HRG1-beta 1 EGF Domain Protein</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>396-HB-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% (w/v) trypsin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200-072</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

purification of fibroblasts and schwann cells from sensory and motor nerves in vitro

התאים העיקריים במערכת העצבים ההיקפית הם התאים של Schwann (ה scs) והפיברותקיעות. שני תאים אלה בבירור לבטא את הפנוטיפים חושי ומוטוריים מעורבים דפוסים שונים של ביטוי גנים neurotrophic factor ותהליכים ביולוגיים אחרים, המשפיעים על התחדשות העצב. המחקר הנוכחי הקים פרוטוקול כדי לקבל מאוד מטוהרים חושי החולדה ה scs מנוע ופיברותקיעות במהירות רבה יותר. השורש הגחוני (העצב המוטורי) והשורש הגבי (העצב החושי) של עכברי התרבות הבין-מלאכותית (שבעה ימים) היו מוטטים והתאים היו מתורבתים במשך 4-5 ימים, ואחריו בידוד של מנועי החישה והה scs על-ידי שילוב העיכול הדיפרנציאלי ושיטות הדבקות הדיפרנציאליות התוצאות של מנתח האימונוציטוכימיה והזרימה cyה scs try הראו כי הטוהר של החושים וה מוטוריים ופיברותקיעות היו > 90%. פרוטוקול זה יכול לשמש כדי לקבל מספר רב של החושים מוטוריים פיברותקיעות/ה scs במהירות רבה יותר, לתרום לחקר של התחדשות החושים ומוטורית.

התבוננות מיקרוסקופית קלה הה scs והפיברופיצוצים הם שתי אוכלוסיות התאים העיקריות המתקבלות בתרבות התא העיקרי מרקמות העצבים. לאחר החיסון במשך 1 שעות, רוב התאים הדבקו בתחתית המנה, והמבנה התאי השתנה מעגול לאליפסה. לאחר culturing עבור 24 שעות, ה scs הציג מורפולוגיה דו-קוטבית ?...

Watch this Scientific Journal Video about Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro at JoVE.com

Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro

כאן, אנו מציגים שיטה כדי לטהר את התאים הסרטניים ואת תאי Schwann מפני חושים ועצבים מוטוריים בתוך מבחנה.

טיהור של פיברותקיעות ותאי Schwann מפני חושים ומוטוריים עצבים בחוץ גופית

The principal cells in the peripheral nervous system are the Schwann cells (SCs) and the fibroblasts. Both these cells distinctly express the sensory and ...

פרוטוקול זה יכול לשמש כדי להשיג מספר רב של חיישן ואת פיברובלסט המנוע ותאי שוואן במהירות. התאים המתקבלים באמצעות הודעה זו יכולים לשמש בחקר התחדשות העצבים ומחלות מערכת העצבים. אנו מראים שהדגמה יכולה לייצג את הניסוי כדי לשלוט טוב יותר בזמן של צעד עיכול דיפרנציאלי ולהפוך את הצעדים הניסיוניים לקלים יותר להבנה.כדי להתפוצץ להשתמש במספריים כדי לבצע חתך של שלושה סנטימטרים, בעור הגב. הסר את עמוד השדרה. פתח בזהירות את תעלת החוליות כדי לחשוף את חוט השדרה.תחרה חוט השדרה בצלחת פטרי 60 מילימטר, עם שלושה עד ארבעה מיליליטר של קר קרח D הנקס פתרון מלח מאוזן תחת מיקרוסקופ ניתוח, בלו שורש הגחון ואת השורש הגבי. מניחים אותם בתווית מלח מאוזנת D קר כקרח. לאחר הסרת HBSS, לחתוך את העצבים לחתיכות שלושה עד חמישה מילימטר, עם מספריים.מוסיפים מיליליטר אחד של 0.25% טריפסין ומעבירים את חתיכות העצבים לחמישה צינורות צנטריפוגה מיליליטר. דגירה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 18 עד 20 דקות. לאחר מכן, כדי לעצור את העיכול, להוסיף ב 3-4 מיליליטר של DMEM המכיל 10% נסיוב חזיר עוברי.פיפטה את התערובת למעלה ולמטה בעדינות על 10 פעמים. צנטריפוגה ב 800 פעמים G במשך חמש דקות. לאחר צנטריפוגה להשליך את העל טבעי.ולהשעות מחדש את המשקעים בשניים עד שלושה מיליליטר של DMEM בתוספת 10%FBS. לסנן את ההשעיה התא באמצעות מסנן רשת 400, ולאחר מכן להשתמש ההשעיה כדי לחסן צלחת פטרי 60 מילימטר. דגירה מנות פטרי במשך ארבעה עד חמישה ימים ב 37 מעלות צלזיוס, בנוכחות 5% פחמן דו חמצני.כאשר התרבות הגיעה 90%confluence, לשטוף את התאים פעם אחת באמצעות 1XPBS. לאחר מכן, כדי לעכל את התאים שוואן, להוסיף מיליליטר אחד של 0.25% טריפסין ב 37 מעלות צלזיוס לכל צלחת 60 מילימטר. לאחר 8 עד 10 שניות בטמפרטורת החדר, לעצור את העיכול, על ידי הוספת שלושה מיליליטר של DMEM בתוספת 10% FBS.כדי לנתק את התאים שוואן, בעדינות לפוצץ על התא עם פיפטה. ודא לפי מיקרוסקופ שהתאים מנותקים. לאחר מכן לאסוף את המדיום, אשר מכיל את תאי הברבור, צנטריפוגה ב 800 פעמים G במשך חמש דקות.השלך את העל-טבעי, והשהה מחדש את המשקעים בשלושה מיליליטר של מדיום. השתמשו בהשעיה זו כדי לחסן מנות פטרי לא צותתות באורך 60 מ"מ, ולהדרגר את הכלים ב-37 מעלות צלזיוס למשך 30 עד 45 דקות. מותגים למדיום, שיכיל את תאי שוואן לצלחת בינונית מצופה פולי L ליסין, וידגירה של המנה ב-37 מעלות צלזיוס למשך יומיים.לאחר הסרת המדיום המכיל את תאי שוואן לשטוף את fibroblasts, דבק צלחות פטרי עם 1XPBS. כדי לעכל את הפיברובלסטים, הוסיפו מיליליטר אחד של 0.25% טריפסין ב-37 מעלות צלזיוס. לאחר העיכול כדי להמשיך במשך שתי דקות ב 37 מעלות צלזיוס, לסיים את העיכול על ידי הוספת DMEM בתוספת 10%FBS.כדי לנתק את fibroblasts, להשתמש פיפטה לפוצץ על החלק התחתון של המנה. לאסוף את המדיום, כולל fibroblasts, ולהעביר אותו צינורות צנטריפוגה. צנטריפוגה הצינורות ב 800 פעמים G במשך חמש דקות.השלך את העל-טבעי ולחץ מחדש על המשקעים עם שני מיליליטר של DMEM המכילים 10%FBS. לחסן את התאים לא מקודד, 60 מילימטר, צלחות פטרי, דגירה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 30 עד 45 דקות. לבודד את fibroblasts אשר ידבק צלחות פטרי, על ידי הסרת והשליכת מדיום הצמיחה.הוסף שלושה מיליליטר של DMEM בתוספת 10%FBS. דגירה ב 37 מעלות צלזיוס במשך יומיים עד המעבר תא אחד להגיע 90% confluence. חזור על העיכול והדבקות דיפרנציאליים.לאחר culturing המעבר fibroblasts ותאי שוואן במשך יומיים, לעכל את התאים, לאסוף אותם, לספור אותם. לחסן שקופיות מצופות PLL בריכוז של אחד פעמים 10 של תאים אלה לגם עבור כתמים ICC. מיקרוסקופי הניגוד של ביי מראה את המורפולוגיה של תאי שוואן מתורבתים ופיברובלסטים לאורך כל תהליך הבידוד.לאחר זמן תרבות ממושך, התאים Schwann היו מקובצים יחד בין fibroblasts או ממוקם על פני השטח של fibroblasts. לאחר עיכול במשך 10 שניות, התאים Schwann, מסומן על ידי החצים האדומים, היו עגולים בעוד fibroblasts נשארו שטוחים היו מחוברים לתחתית המנה. לאחר הבידוד על ידי עיכול דיפרנציאלי והדבקות דיפרנציאלית נצפו מורולוגיות תאים אופייניות לכל ארבעת סוגי התאים.פיברובלסטים מוטוריים, פיברובלסטים חושיים, תאי שוואן מוטוריים ותאי שוואן חושיים. הפיברובלסטים החושיים והמנועיים הודמיו באמצעות מיקרוסקופ סריקת לייזר של מוקד חרוט. הפיברובלסטים היו מוכתמים בנוגדנים נגד צבע CD 90 X33342 ששימש לתיוג גרעיני התא.התמונות הממוזגות של חיסון פיברובלסטים וכתמים גרעיניים, הצביעו על כך ש-92.51% ו-92.64% מהתקליטור 90 ותאים עם תוויות משושה היו קיימים במנוע ובפיברובלסטים חושיים בהתאמה. תאי שוואן החושיים והמנועים הודמיו באמצעות מיקרוסקופ סריקת לייזר קונפוקלי. התאים Schwann היו מוכתמים בנוגדנים נגד S100 X33342 צבע שימש כדי לתייג את גרעיני התא.תמונות המיזוג של כשל חיסוני של תאי ברבור וכתמים גרעיניים הצביעו על נוכחותם של 91.61% ו-93.56% מ-S100 ותאים משועקעים עם תוויות במשותף בתאי שוואן מוטוריים ו החושיים, בהתאמה. טוהר התא נותח גם באמצעות ציטומטריית זרימה. בתרבות פיברובלסט, כ -90% מהתאים היו פיברובלסטים, שצוין על ידי M2 בגרפי FCA בעוד התאים הנותרים היו תאים שוואנים.בתרבויות התאים של שוואן, יותר מ-92% מהתאים היו תאי שוואן, שוב הצביעו על ידי M2 בגרפי FCA, בעוד התאים הנותרים היו פיברובלסטים. פרוטוקול זה שימושי לעתים רחוקות להתחלת המנגנון של התחדשות עצבים חיישנים ומוטוריים של פיברובלסטים, והשתלת תאי שוואן, כדי לקדם התחדשות עצבית.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Culture of Primary Motor and Sensory Neurons in Defined Media on Electrospun Poly-L-lactide Nanofiber Scaffolds

תרבות מוטור ראשיים עצב סנסורי בתקשורת מוגדר על electrospun פולי-L-lactide nanofiber פיגומים

Electrospinning is a technique for producing micro- to nano-scale fibers. Fibers can be electrospun with varying degrees of alignment, from highly aligned ...

Live-imaging of PKC Translocation in Sf9 Cells and in Aplysia Sensory Neurons

Live-הדמיה של טרנסלוקציה של PKC Sf9 תאים בנוירונים Aplysia חושי

Protein kinase Cs (PKCs) are serine threonine kinases that play a central role in regulating a wide variety of cellular processes such as cell growth and ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-תא הדמיה של תאים מבשר חושי האיברים אינטקט תסיסנית גלמים

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Isolation and Culture of Dissociated Sensory Neurons From Chick Embryos

בידוד והתרבות של ניתק עצב סנסורי מאפרוח עוברים

Neurons are multifaceted cells that carry information essential for a variety of functions including sensation, motor movement, learning, and memory. ...

Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells

Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells

הסרה של<em&gt; תסיסנית</em&gt; רקמת שריר מן הזחל פילה עבור ניתוח Immunofluorescence של עצב סנסורי ותאי עוריות

Drosophila larval dendritic arborization (da) neurons are a popular model for investigating mechanisms of neuronal morphogenesis. Da neurons develop in ...

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog (Rana catesbeiana)

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog Rana catesbeiana

הכנה פיזיולוגית של תאי שיער מן Sacculus של הבוקסר האמריקאי (<em&gt; רנא catesbeiana</em&gt;)

The study of hearing and balance rests upon insights drawn from biophysical studies of model systems. One such model, the sacculus of the American ...

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

זברה<em&gt; באתרו</em&gt; הכנת בחוט השדרה עבור הקלטות אלקטרו מתוך השדרה חושית הנוירונים המוטוריים

Zebrafish, first introduced as a developmental model, have gained popularity in many other fields. The ease of rearing large numbers of rapidly developing ...

Analysis of Immune Cells in Single Sciatic Nerves and Dorsal Root Ganglion from a Single Mouse Using Flow Cytometry

ניתוח של תאים חיסוניים העצבים ממוגלה יחיד, גנגליון העזוב השורש של עכבר אחת באמצעות Cytometry זרימה

Nerve-resident immune cells in the peripheral nervous system (PNS) are essential to maintaining neuronal integrity in a healthy nerve. The immune cells of ...

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

קינמטיקה עינית נמדדת במבחנה גירוי עצבי של הצב

After animals are euthanized, their tissues begin to die. Turtles offer an advantage because of a longer survival time of their tissues, especially when ...

In Vivo Calcium Imaging of Lateral-line Hair Cells in Larval Zebrafish

בתחום ההדמיה סידן Vivo של קו הצד תאים שיער בזחל דג זברה

Sensory hair cells are mechanoreceptors found in the inner ear that are required for hearing and balance. Hair cells are activated in response to sensory ...