Name: purification of fibroblasts and schwann cells from sensory and motor nerves in vitro
Uploaded: 2020-05-20T13:00:00
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이 연구는 중국의 국가 주요 연구 개발 프로그램 (그랜트 번호 2017YFA0104703), 중국의 국립 자연 재단 (보조금 번호 31500927)에 의해 지원되었다.

이 연구는 난통 대학의 제도적 동물 관리 지침에 따라 수행되었다. 동물 과목을 포함한 모든 절차는 중국 장쑤성 실험동물 관리위원회의 승인을 받았습니다.
1. 모터 및 감각 신경 섬유아세포 및 SC의 격리 및 문화
<ol><li>중국 난통 대학의 실험 동물 센터에서 제공하는 7일 된 스프라그-Dawley(SD) 쥐(n=4)를 사용하십시오. 쥐를 5% 이소플루란을 함유한 탱크에 2-3분 동안 놓고, 동물?...

<ol>
	<li>Stierli, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+regulation+of+the+homeostasis+and+regeneration+of+peripheral+nerve+is+distinct+from+the+CNS+and+independent+of+a+stem+cell+population.">The regulation of the homeostasis and regeneration of peripheral nerve is distinct from the CNS and independent of a stem cell population.</a> Development (The Company of Biologists). , (2018).</li><li>Schubert, T., Friede, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+endoneurial+fibroblasts+in+myelin+degradation.">The role of endoneurial fibroblasts in myelin degradation.</a> Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 40 (2), 134-154 (1981).</li><li>Dreesmann, L., Mittnacht, U., Lietz, M., Schlosshauer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+fibroblast+impact+on+Schwann+cell+behavior.">Nerve fibroblast impact on Schwann cell behavior.</a> European Journal of Cell Biology. 88 (5), 285-300 (2009).</li><li>Lavdas, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cells+engineered+to+express+the+cell+adhesion+molecule+L1+accelerate+myelination+and+motor+recovery+after+spinal+cord+injury.">Schwann cells engineered to express the cell adhesion molecule L1 accelerate myelination and motor recovery after spinal cord injury.</a> Experimental Neurology. 221 (1), 206-216 (2010).</li><li>Parrinello, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EphB+signaling+directs+peripheral+nerve+regeneration+through+Sox2-dependent+Schwann+cell+sorting.">EphB signaling directs peripheral nerve regeneration through Sox2-dependent Schwann cell sorting.</a> Cell. 143 (1), 145-155 (2010).</li><li>Benito, C., Davis, C. M., Gomez-Sanchez, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=STAT3+Controls+the+Long-Term+Survival+and+Phenotype+of+Repair+Schwann+Cells+during+Nerve+Regeneration.">STAT3 Controls the Long-Term Survival and Phenotype of Repair Schwann Cells during Nerve Regeneration.</a> Journal of Neuroscience Research. 37 (16), 4255-4269 (2017).</li><li>Zhang, Z. J., Jiang, B. C., Gao, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+in+neuron-glial+cell+interaction+and+pathogenesis+of+neuropathic+pain.">Chemokines in neuron-glial cell interaction and pathogenesis of neuropathic pain.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 74 (18), 3275-3291 (2017).</li><li>Hoke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cells+express+motor+and+sensory+phenotypes+that+regulate+axon+regeneration.">Schwann cells express motor and sensory phenotypes that regulate axon regeneration.</a> Journal of Neuroscience. 26 (38), 9646-9655 (2006).</li><li>Brushart, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cell+phenotype+is+regulated+by+axon+modality+and+central-peripheral+location,+and+persists+in+vitro.">Schwann cell phenotype is regulated by axon modality and central-peripheral location, and persists in vitro.</a> Experiment Neurology. 247, 272-281 (2013).</li><li>He, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+Gene+Expression+in+Primary+Cultured+Sensory+and+Motor+Nerve+Fibroblasts.">Differential Gene Expression in Primary Cultured Sensory and Motor Nerve Fibroblasts.</a> Frontiers in Neuroscience. 12, 1016 (2018).</li><li>Weinstein, D. E., Wu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+3,+Unit+17:+Isolation+and+purification+of+primary+Schwann+cells.">Chapter 3, Unit 17: Isolation and purification of primary Schwann cells.</a> Current Protocols in Neuroscience. , (2001).</li><li>Palomo Irigoyen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Purification+of+Primary+Rodent+Schwann+Cells.">Isolation and Purification of Primary Rodent Schwann Cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1791, 81-93 (2018).</li><li>Cheng, L., Khan, M., Mudge, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcitonin+gene-related+peptide+promotes+Schwann+cell+proliferation.">Calcitonin gene-related peptide promotes Schwann cell proliferation.</a> Journal of Cell Biology. 129 (3), 789-796 (1995).</li><li>Pannunzio, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+of+selecting+Schwann+cells+from+adult+mouse+sciatic+nerve.">A new method of selecting Schwann cells from adult mouse sciatic nerve.</a> Journal of Neuroscience Methods. 149 (1), 74-81 (2005).</li><li>Shen, M., Tang, W., Cao, Z., Cao, X., Ding, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+rat+Schwann+cells+based+on+cell+sorting.">Isolation of rat Schwann cells based on cell sorting.</a> Molecular Medicine Reports. 16 (2), 1747-1752 (2017).</li><li>He, Q., Man, L., Ji, Y., Ding, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+in+the+biological+characteristics+between+primary+cultured+sensory+and+motor+Schwann+cells.">Comparison in the biological characteristics between primary cultured sensory and motor Schwann cells.</a> Neuroscience Letters. 521 (1), 57-61 (2012).</li><li>Weiss, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomics+and+transcriptomics+of+peripheral+nerve+tissue+and+cells+unravel+new+aspects+of+the+human+Schwann+cell+repair+phenotype.">Proteomics and transcriptomics of peripheral nerve tissue and cells unravel new aspects of the human Schwann cell repair phenotype.</a> Glia. 64 (12), 2133-2153 (2016).</li></ol>

말초 신경의 2개의 중요한 세포 인구는 SCs와 섬유아세포를 포함했습니다. 주로 배양 된 섬유 아세포 및 SC는 말초 신경 발달 및 재생 중에 섬유 아세포 및 SC의 생리학모델링을 정확하게 지원할 수 있습니다. 연구 결과는 P7 쥐 sciatic 신경 세포가 S100 양성 SCs의 대략 85%, OX7 양성 섬유세포의 13% 및 OX42 양성 대식세포의 단지 1.5%를 포함하는 것을 보여주었습니다13. 섬유아세포의 수는 S...

말초 신경계에서, 신경 섬유는 주로 축축산, 슈완 세포 (SC) 및 섬유 아세포로 구성되며, 또한 소량의 대식세포, 미세 혈관 내피 세포 및 면역 세포1을포함합니다. SC는 축축을 1:1 비율로 감싸고 엔도뉴리움이라고 하는 결합 조직 층에 의해 동봉됩니다. 축삭은 매심이라고 불리는 단을 형성하기 위하여 그 때 함께 묶이고, 각 근막은 회음관으로 알려져 있는 결합 조직 층으로 싸여 있습니다. 마지막으로, 전체 신경 섬유는 에피뇌란이라고 불리는 결합 조직의 층으로 싸여 있습니다. 엔도뉴리움에서, 전체 세포 인구는 48% SC로 이루어져 있고, 나머지 세포의 상당 부분은 섬유아세포2를포함한다. 더욱이, 섬유아세포는 에피뇌리움, 회음관 및 엔도뉴리움3을포함한 모든 신경 구획의 중요한 구성 요소입니다. 많은 연구는 SC와 섬유 아세포가 말초 신경 부상후재생 과정에서 중요한 역할을 한다는 것을 지적했다4,5,,6. 말초 신경의 편부 후, 천동맥 섬유아세포는 SC와 섬유아세포 사이의 에클레인-B/EphB2 신호 전달 경로를 통해 세포 분류를 조절하여 상처5를통해 축축재를 더욱 안내한다. 말초 신경 섬유아세포는 테나신-C 단백질을 분비하고 β1-integrin 신호 전달 경로를 통해 신경 재생 중 SC의 이동을향상시킨다 7. 그러나, 위의 연구에서 사용된 SCs및 섬유아세포는 감각과 운동 신경을 모두 포함하는 상골 신경에서 파생되었습니다.
말초 신경계에서 감각 신경(afferent neuros)은 수용체에서 중추 신경계(CNS)까지 감각 신호를 실시하며, 모터 신경(efferent nerves)은 CNS에서 근육으로 신호를 전한다. 이전 연구는 SC가 뚜렷한 모터 및 감각 표현형을 표현하고 말초 신경재생을지원하기 위하여 신경 영양인을 분비한다는 것을8,9를표시했습니다. 최근 연구에 따르면, 섬유아세포는 또한 다른 모터와 감각 표현형을 표현하고 SC10의이동에 영향을 미친다. 따라서, 모터와 감각 신경 섬유아세포/SC 간의 차이의 탐구는 말초 신경 특정 재생의 복잡한 근본적인 분자 메커니즘을 연구할 수 있게 해줍니다.
현재, 항체 매개 세포분석11,,12,순차면역파닝13 및 라미닌 서브스트라툼(14)의 적용을 포함하여 SC 및 섬유아세포를 정화하는 여러 가지 방법이 있다.14 그러나, 위의 모든 방법은 섬유아세포를 제거하고 SC만 보존합니다. 고도로 정제된 SC 및 섬유아세포는 유동 세포측정 선별기술(15)에의해 얻어질 수 있지만, 시간이 많이 소요되고 비용이 많이 드는 기술이다. 따라서, 본 연구에서는, 많은 수의 섬유아세포와 SC를 더 빠르게 얻기 위해 감각과 운동 신경 섬유아세포 및 SC를 정화및 분리하기 위한 간단한 차동 소화 및 차분 준수 방법이 개발되었다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 594 Goat Anti-Mouse IgG(H+L)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A11005</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CoraLite488-conjugated Affinipure Goat Anti-Mouse IgG(H+L)</td>
			<td>Proteintech</td>
			<td>SA00013-1</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>TCS SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Quest software</td>
			<td>Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Hank&#39;s balanced salt solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14170112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZ2-ILST</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10099-141C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forskolin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F6886-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoroshield Mounting Medium</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab104135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixation medium/Permeabilization medium</td>
			<td>Multi Sciences (LIANKE) Biotech, Co., LTD</td>
			<td>GAS005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometry</td>
			<td>Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td>FACS Calibur</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG1 kappa [MOPC-21] (FITC) - Isotype Control</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab106163</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse monoclonal anti-CD90 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab225</td>
			<td>Dilution: 1:1000 for ICC, 0.1 &#181;g for 106 cells for Flow Cyt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-S100 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab212816</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polylysine (PLL)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human NRG1-beta 1/HRG1-beta 1 EGF Domain Protein</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>396-HB-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% (w/v) trypsin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200-072</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

purification of fibroblasts and schwann cells from sensory and motor nerves in vitro

말초 신경계의 주요 세포는 슈완 세포 (SCs) 및 섬유 아세포입니다. 이 세포 는 신경 성 위축인 유전자 발현 및 기타 생물학적 과정의 다른 패턴에 관여하는 감각 및 운동 표현형을 뚜렷하게 표현하여 신경 재생에 영향을 미칩니다. 본 연구는 고도로 정제된 쥐 감각및 운동 SCs 및 섬유아세포를 더 빠르게 얻기 위한 프로토콜을 설치했습니다. 신생아 쥐(7일)의 복부 근루(motor nerve)와 등쪽 뿌리(감각신경)는 4-5일 동안 배양되었고, 이어서 감각및 운동 섬유아세포 및 SC의 분리를 순차적으로 결합하였다. 면역 세포화학 및 유동 세포측정 분석 의 결과는 감각및 운동 SCs 및 섬유아세포의 순도가 >90%였다는 것을 보여주었습니다. 이 프로토콜은 많은 수의 감각 및 운동 섬유아세포/SC를 더 빠르게 획득하는 데 사용될 수 있으며, 이는 감각 및 운동 신경 재생의 탐사에 기여합니다.

가벼운 현미경 관찰 SCs와 섬유아세포는 신경 조직에서 1차 세포 배양에서 얻어진 2개의 주요 세포 집단입니다. 1h 접종 후 대부분의 세포가 접시의 바닥에 부착되고 세포 형태가 둥글고 타원형으로 변경되었습니다. 24시간 배양 후, SC는 양극성 또는 삼극성 형태를 나타내었고, 이들의 길이는 100에서 200 μm 사이입니다. 48 h 후, 세포의 집계 및 증식이 발생, 많?...

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Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro

여기서는 체외에서 감각 및 운동 신경에서 섬유아세포와 슈완 세포를 정화하는 방법을 제시합니다.

체외에서 감각 및 모터 신경에서 섬유 아세포와 슈완 세포의 정화

The principal cells in the peripheral nervous system are the Schwann cells (SCs) and the fibroblasts. Both these cells distinctly express the sensory and ...

이 프로토콜은 많은 수의 센서와 모터 섬유아세포 및 슈완 세포를 빠르게 획득하는 데 사용될 수 있다. 이 메시지를 통해 얻은 세포는 신경 재생 및 신경계 질환의 연구에 사용될 수 있다. 우리는 데모가 차동 소화 단계의 시간을 더 잘 제어하고 실험 단계를 이해하기 쉽게 하기 위해 실험을 나타낼 수 있음을 보여줍니다.파열하려면 가위를 사용하여 뒤쪽의 피부에 3 센티미터 절개를합니다. 척추를 제거합니다. 척수를 노출하기 위해 척추 운하를 조심스럽게 엽니다.60mm 페트리 접시에 척수를 레이스, 얼음 차가운 D 행크스의 3 ~ 4 밀리리터와 해부 현미경에서 소금 용액을 균형, 복부 뿌리와 등쪽 뿌리를 소비. 얼음 차가운 D 행크스 균형 소금 용액에 넣어. HBSS를 제거한 후 신경을 가위로 3~5mm 조각으로 자른다.0.25%의 트립신 1밀리리터를 넣고 신경 조각을 5밀리리터 원심분리기 튜브로 옮기습니다. 섭씨 37도에서 18~20분 동안 배양하세요. 다음으로, 소화를 중지하려면 10 %의 태아 소 혈청을 포함하는 DMEM의 3 ~ 4 밀리리터에 추가하십시오.혼합물을 약 10번 위아래로 부드럽게 피펫합니다. 5 분 동안 800 배 G에서 원심 분리기. 원심 분리 후 상체를 폐기합니다.그리고 10%의 FBS로 보충된 DMEM의 2~3밀리리터에서 침전을 다시 중단합니다. 400 메쉬 필터를 통해 셀 서스펜션을 필터링한 다음 서스펜션을 사용하여 60mm 페트리 접시를 접종합니다. 5%의 이산화탄소가 있는 경우, 페트리 요리를 섭씨 37도에서 4~5일 동안 배양합니다.배양이 90%에 도달하면 1XPBS를 사용하여 세포를 한 번 씻으시면 됩니다. 그런 다음 슈완 세포를 소화하려면 60mm 접시당 섭씨 37도에서 0.25 %의 트립신 1 밀리리터를 추가하십시오. 실온에서 8~10초 후에는 10%의 FBS로 보충된 3밀리리터의 DMEM을 추가하여 소화를 중단합니다.슈완 세포를 분리하려면 파이펫으로 셀에 부드럽게 불어주세요. 현미경으로 세포가 분리되는지 확인합니다. 그런 다음 백조 세포를 포함하는 배지를 수집하고 원심분리기를 5분 동안 800배 G로 수집합니다.상체를 버리고 3 밀리리터의 매체로 침전을 다시 중단합니다. 이 서스펜션을 사용하여 코팅되지 않은 60mm 페트리 요리를 접종하고 30~45분 동안 섭씨 37도에서 요리를 배양합니다. 슈완 세포를 폴리 L 리신 코팅 중형 요리에 포함하고, 2 일 동안 섭씨 37도에서 요리를 배양 할 매체에 대한 브랜드.슈완 세포를 함유한 배지를 제거한 후 섬유아세포를 세척하고 1XPBS로 페트리 접시를 준수한다. 섬유아세포를 소화하려면 섭씨 37도에서 0.25%의 트립신 1밀리리터를 추가합니다. 소화를 따라 섭씨 37도에서 2분간 진행한 후, 10%의 FBS로 보충된 DMEM을 추가하여 소화를 종료합니다.섬유아세포를 분리하려면 파이펫을 사용하여 접시 바닥에 날려 버리십시오. 섬유아세포를 포함한 배지를 수집하고 원심분리관으로 옮기는다. 5 분 동안 800 배 G에서 튜브를 원심 분리합니다.상체를 폐기하고 10%의 FBS를 포함하는 DMEM의 2밀리리터로 침전을 다시 중단합니다. 코드되지 않은, 60밀리미터, 페트리 접시에 세포를 접종하고 30~45분 동안 섭씨 37도에서 배양합니다. 성장 매체를 제거하고 폐기하여 페트리 접시를 고수할 섬유아세포를 분리합니다.10%의 FBS로 보충된 DMEM의 밀리리터 3개추가. 통로가 90%에 도달할 때까지 이틀 동안 섭씨 37도에서 배양하십시오. 차동 소화와 준수를 반복합니다.2 일 동안 섬유 아세포와 슈완 세포에 통로를 배양 한 후, 세포를 소화, 그들을 수집, 그들을 계산. ICC 염색을 위해 이러한 세포의 1회 10분의 1의 농도로 PLL 코팅 된 슬라이드를 접종합니다. 베이의 대비 현미경 검사는 격리 과정 전반에 걸쳐 배양 된 슈완 세포와 섬유 아세포의 형태를 보여줍니다.장기간 배양 시간 후에, 슈완 세포는 섬유아세포 사이또는 섬유아세포의 표면에 함께 군집되었다. 10 초 동안 소화 한 후, 붉은 화살표로 표시된 슈완 세포는 섬유 아세포가 평평하게 유지되고 접시의 바닥에 부착된 동안 둥글게 되었습니다. 차동 소화 및 차동 준수에 의한 격리 후 전형적인 세포 형태학은 모든 4개의 세포 유형에 대해 관찰되었다.모터 섬유아세포, 감각 섬유아세포, 모터 슈완 세포 및 감각 슈완 세포. 감각및 운동 섬유아세포는 원뿔 초점 레이저 스캐닝 현미경을 사용하여 시각화되었습니다. 섬유아세포는 CD 90 X33342 염료에 대한 항체로 염색되어 세포 핵을 표지하는 데 사용되었다.섬유아세포 면역염색 및 핵 염색의 병합된 심상은, CD 90및 육각형 공동 표지세포의 92.51%와 92.64%가 각각 모터 및 감각 섬유아세포에 존재한다는 것을 나타냈다. 감각 및 모터 슈완 세포는 공초점 레이저 스캐닝 현미경을 사용하여 시각화되었다. 슈완 세포는 세포 핵을 표지하는 데 사용되었던 S100 X33342 염료에 대한 항체로 염색하였다.스완셀 면역염색 및 핵 염색의 병합 이미지는 각각 모터 및 감각 슈완 세포에서 S100 및 헥스 공동 표지 세포의 91.61%와 93.56%의 존재를 나타냈다. 세포 순도또한 유동 세포측정을 사용하여 분석되었다. 섬유아세포 배양에서는, 세포의 대략 90%는 나머지 세포가 Schwann 세포인 동안 FCA 그래프에 있는 M2에 의해 표시된 섬유아세포이었습니다.슈완 세포 배양에서, 세포의 92% 이상은 슈완 세포였으며, FCA 그래프에서 M2로 다시 나타났으며, 나머지 세포는 섬유아세포였다. 이 프로토콜은 신경 재생을 촉진하기 위해 섬유아세포와 슈완 세포 이식의 센서 및 모터 신경 재생 메커니즘을 시작하는 데 거의 유용하지 않습니다.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Culture of Primary Motor and Sensory Neurons in Defined Media on Electrospun Poly-L-lactide Nanofiber Scaffolds

차 모터 및 Electrospun 폴리 - L - lactide Nanofiber 공사장 공중 발판을에 정의된 미디어 감각 뉴런의 문화

Electrospinning is a technique for producing micro- to nano-scale fibers. Fibers can be electrospun with varying degrees of alignment, from highly aligned ...

연구

신경과학

Live-imaging of PKC Translocation in Sf9 Cells and in Aplysia Sensory Neurons

Sf9 세포에서 Aplysia 감각 뉴런에서 PKC Translocation의 라이브 영상

Protein kinase Cs (PKCs) are serine threonine kinases that play a central role in regulating a wide variety of cellular processes such as cell growth and ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

손상의 감각 오르간 전구체 세포 라이브 셀 이미징 Drosophila Pupae

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Isolation and Culture of Dissociated Sensory Neurons From Chick Embryos

병아리 배아에서 분리 및 해리 감각 뉴런의 문화

Neurons are multifaceted cells that carry information essential for a variety of functions including sensation, motor movement, learning, and memory. ...

Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells

Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells

제거<em&gt; 초파리</em감각 뉴런과 표피 세포의 면역 형광 분석을위한 애벌레 필렛에서&gt; 근육 조직

Drosophila larval dendritic arborization (da) neurons are a popular model for investigating mechanisms of neuronal morphogenesis. Da neurons develop in ...

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog (Rana catesbeiana)

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog Rana catesbeiana

미국 황소 개구리의 Sacculus (헤어 세포의 생리 준비<em&gt; 모이 catesbeiana</em&gt;)

The study of hearing and balance rests upon insights drawn from biophysical studies of model systems. One such model, the sacculus of the American ...

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafish의<em&gt; 시츄</em&gt; 척수 척추 감각과 운동 뉴런 전기 생리 녹음 준비

Zebrafish, first introduced as a developmental model, have gained popularity in many other fields. The ease of rearing large numbers of rapidly developing ...

Analysis of Immune Cells in Single Sciatic Nerves and Dorsal Root Ganglion from a Single Mouse Using Flow Cytometry

단일 좌 골 신경 및 Cytometry 사용 하 여 단일 마우스에서 지 루트 신경 절에 면역 세포의 분석

Nerve-resident immune cells in the peripheral nervous system (PNS) are essential to maintaining neuronal integrity in a healthy nerve. The immune cells of ...

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

눈 기구학 생체 외에서 거북이에 두개골 신경의 자극에 의해 측정

After animals are euthanized, their tissues begin to die. Turtles offer an advantage because of a longer survival time of their tissues, especially when ...

In Vivo Calcium Imaging of Lateral-line Hair Cells in Larval Zebrafish

애벌레 Zebrafish의 측면 라인 세포의 생체 내 칼슘 이미징

Sensory hair cells are mechanoreceptors found in the inner ear that are required for hearing and balance. Hair cells are activated in response to sensory ...