Name: purification of fibroblasts and schwann cells from sensory and motor nerves in vitro
Uploaded: 2020-05-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro at JoVE.com

Denne studien ble støttet av National Key Research and Development Program of China (Grant No. 2017YFA0104703), National Natural Foundation of China (Grant No. 31500927).

Denne studien ble utført i samsvar med Institusjonelle Animal Care Guidelines of Nantong University. Alle prosedyrene, inkludert dyrefagene, ble etisk godkjent av administrasjonskomiteen for eksperimentelle dyr, Jiangsu-provinsen i Kina.
1. Isolasjon og kultur av motoriske og sensoriske nervefibroblaster og SCer
<ol><li>Bruk syv-dagers gamle Sprague-Dawley (SD) rotter (n = 4) levert av Experimental Animal Center of Nantong University of China. Plasser rottene i en tank som inneholder 5% iso...

<ol>
	<li>Stierli, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+regulation+of+the+homeostasis+and+regeneration+of+peripheral+nerve+is+distinct+from+the+CNS+and+independent+of+a+stem+cell+population.">The regulation of the homeostasis and regeneration of peripheral nerve is distinct from the CNS and independent of a stem cell population.</a> Development (The Company of Biologists). , (2018).</li><li>Schubert, T., Friede, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+endoneurial+fibroblasts+in+myelin+degradation.">The role of endoneurial fibroblasts in myelin degradation.</a> Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 40 (2), 134-154 (1981).</li><li>Dreesmann, L., Mittnacht, U., Lietz, M., Schlosshauer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+fibroblast+impact+on+Schwann+cell+behavior.">Nerve fibroblast impact on Schwann cell behavior.</a> European Journal of Cell Biology. 88 (5), 285-300 (2009).</li><li>Lavdas, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cells+engineered+to+express+the+cell+adhesion+molecule+L1+accelerate+myelination+and+motor+recovery+after+spinal+cord+injury.">Schwann cells engineered to express the cell adhesion molecule L1 accelerate myelination and motor recovery after spinal cord injury.</a> Experimental Neurology. 221 (1), 206-216 (2010).</li><li>Parrinello, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EphB+signaling+directs+peripheral+nerve+regeneration+through+Sox2-dependent+Schwann+cell+sorting.">EphB signaling directs peripheral nerve regeneration through Sox2-dependent Schwann cell sorting.</a> Cell. 143 (1), 145-155 (2010).</li><li>Benito, C., Davis, C. M., Gomez-Sanchez, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=STAT3+Controls+the+Long-Term+Survival+and+Phenotype+of+Repair+Schwann+Cells+during+Nerve+Regeneration.">STAT3 Controls the Long-Term Survival and Phenotype of Repair Schwann Cells during Nerve Regeneration.</a> Journal of Neuroscience Research. 37 (16), 4255-4269 (2017).</li><li>Zhang, Z. J., Jiang, B. C., Gao, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+in+neuron-glial+cell+interaction+and+pathogenesis+of+neuropathic+pain.">Chemokines in neuron-glial cell interaction and pathogenesis of neuropathic pain.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 74 (18), 3275-3291 (2017).</li><li>Hoke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cells+express+motor+and+sensory+phenotypes+that+regulate+axon+regeneration.">Schwann cells express motor and sensory phenotypes that regulate axon regeneration.</a> Journal of Neuroscience. 26 (38), 9646-9655 (2006).</li><li>Brushart, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cell+phenotype+is+regulated+by+axon+modality+and+central-peripheral+location,+and+persists+in+vitro.">Schwann cell phenotype is regulated by axon modality and central-peripheral location, and persists in vitro.</a> Experiment Neurology. 247, 272-281 (2013).</li><li>He, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+Gene+Expression+in+Primary+Cultured+Sensory+and+Motor+Nerve+Fibroblasts.">Differential Gene Expression in Primary Cultured Sensory and Motor Nerve Fibroblasts.</a> Frontiers in Neuroscience. 12, 1016 (2018).</li><li>Weinstein, D. E., Wu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+3,+Unit+17:+Isolation+and+purification+of+primary+Schwann+cells.">Chapter 3, Unit 17: Isolation and purification of primary Schwann cells.</a> Current Protocols in Neuroscience. , (2001).</li><li>Palomo Irigoyen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Purification+of+Primary+Rodent+Schwann+Cells.">Isolation and Purification of Primary Rodent Schwann Cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1791, 81-93 (2018).</li><li>Cheng, L., Khan, M., Mudge, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcitonin+gene-related+peptide+promotes+Schwann+cell+proliferation.">Calcitonin gene-related peptide promotes Schwann cell proliferation.</a> Journal of Cell Biology. 129 (3), 789-796 (1995).</li><li>Pannunzio, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+of+selecting+Schwann+cells+from+adult+mouse+sciatic+nerve.">A new method of selecting Schwann cells from adult mouse sciatic nerve.</a> Journal of Neuroscience Methods. 149 (1), 74-81 (2005).</li><li>Shen, M., Tang, W., Cao, Z., Cao, X., Ding, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+rat+Schwann+cells+based+on+cell+sorting.">Isolation of rat Schwann cells based on cell sorting.</a> Molecular Medicine Reports. 16 (2), 1747-1752 (2017).</li><li>He, Q., Man, L., Ji, Y., Ding, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+in+the+biological+characteristics+between+primary+cultured+sensory+and+motor+Schwann+cells.">Comparison in the biological characteristics between primary cultured sensory and motor Schwann cells.</a> Neuroscience Letters. 521 (1), 57-61 (2012).</li><li>Weiss, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomics+and+transcriptomics+of+peripheral+nerve+tissue+and+cells+unravel+new+aspects+of+the+human+Schwann+cell+repair+phenotype.">Proteomics and transcriptomics of peripheral nerve tissue and cells unravel new aspects of the human Schwann cell repair phenotype.</a> Glia. 64 (12), 2133-2153 (2016).</li></ol>

De to store cellepopulasjonene av perifere nerver inkluderte SCer og fibroblaster. De primært kultiverte fibroblaster og SCer kan nøyaktig bidra til å modellere fysiologien til fibroblaster og SCer under perifer nerveutvikling og regenerering. Studien viste at P7 rotte isjias nerveceller inneholdt ca 85% av S100-positive SCs, 13% av OX7-positive fibroblaster og bare 1,5% av OX42-positive makrofager13. Selv om antall fibroblaster er mindre enn SCs, den første spredningshastigheten av fibroblast...

I det perifere nervesystemet består nervefibrene hovedsakelig av aksoner, Schwann-celler (SCer) og fibroblaster, og inneholder også et lite antall makrofager, mikrovaskulære endotelceller og immunceller1. SCs bryte aksoner i en 1: 1 ratio og er omsluttet av en bindevev lag kalt endoneurium. Aksonene er deretter samlet sammen for å danne grupper kalt fascicles, og hver fascicle er pakket inn i et bindevev lag kjent som perineurium. Til slutt er hele nervefiberen pakket inn i et lag med bindevev, som kalles epineurium. I endoneurium består hele cellepopulasjonen av 48% SCer, og en betydelig del av de gjenværende cellene innebærer fibroblaster2. Videre er fibroblaster viktige komponenter i alle nerverom, inkludert epineurium, perineurium og endoneurium3. Mange studier har indikert at SCer og fibroblaster spiller en avgjørende rolle i regenereringsprosessen etter perifere nerveskader4,5,6. Etter transeksjon av perifer nerve, perineurial fibroblasts regulere celle sortering via ephrin-B/EphB2 signalveien mellom SCs og fibroblaster, ytterligere guiding den axonal gjenvekst gjennom sår5. Perifer nerve fibroblaster utskiller tenascin-C protein og forbedre migrering av SCs under nerve regenerering gjennom β1-integrin signalvei7. Imidlertid ble SCs og fibroblaster som brukes i de ovennevnte studiene avledet fra isjiasnerven, som inkluderer både sensoriske og motoriske nerver.
I det perifere nervesystemet utfører sensoriske nerver (afferent nerver) sensorisk signalering fra reseptorene til sentralnervesystemet (CNS), mens motornervene (efferent nerver) utfører signaler fra CNS til musklene. Tidligere studier har indikert at SCs uttrykker distinkte motoriske og sensoriske fenotyper og utskiller nevrotrofiske faktorer for å støtte perifer nerveregenerering8,9. Ifølge en nylig studie, fibroblaster også uttrykke ulike motoriske og sensoriske fenotyper og påvirke migrering av SCs10. Dermed gjør utforskning av forskjeller mellom motoriske og sensoriske nervefibroblaster / SCer oss til å studere de kompliserte underliggende molekylære mekanismene for perifer nervespesifikk regenerering.
I dag er det mange måter å rense SCs og fibroblaster, inkludert anvendelse av antimitotiske midler, antistoffmediert cytolyse11,,12,sekvensiell immunopanning13 og laminin substratum14. Men alle de ovennevnte metodene fjerner fibroblaster og bevarer bare SCs. Høyt renset SCs og fibroblaster kan oppnås ved strømningscytometrisorteringsteknologi15, men det er en tidkrevende og kostbar teknikk. Derfor, i denne studien, en enkel differensial fordøyelse og differensial etterlevelse metode for rensing og isolere sensorisk og motor nerve fibroblaster og SCs ble utviklet for å få et stort antall fibroblaster og SCs raskere.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 594 Goat Anti-Mouse IgG(H+L)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A11005</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CoraLite488-conjugated Affinipure Goat Anti-Mouse IgG(H+L)</td>
			<td>Proteintech</td>
			<td>SA00013-1</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>TCS SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Quest software</td>
			<td>Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Hank&#39;s balanced salt solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14170112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZ2-ILST</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10099-141C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forskolin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F6886-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoroshield Mounting Medium</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab104135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixation medium/Permeabilization medium</td>
			<td>Multi Sciences (LIANKE) Biotech, Co., LTD</td>
			<td>GAS005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometry</td>
			<td>Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td>FACS Calibur</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG1 kappa [MOPC-21] (FITC) - Isotype Control</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab106163</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse monoclonal anti-CD90 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab225</td>
			<td>Dilution: 1:1000 for ICC, 0.1 &#181;g for 106 cells for Flow Cyt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-S100 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab212816</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polylysine (PLL)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human NRG1-beta 1/HRG1-beta 1 EGF Domain Protein</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>396-HB-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% (w/v) trypsin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200-072</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

purification of fibroblasts and schwann cells from sensory and motor nerves in vitro

Hovedcellene i det perifere nervesystemet er Schwann-cellene (SCs) og fibroblastene. Begge disse cellene uttrykker tydelig sensoriske og motoriske fenotyper involvert i ulike mønstre av nevrotrofisk faktor genuttrykk og andre biologiske prosesser, som påvirker nerveregenerering. Den nåværende studien har etablert en protokoll for å oppnå svært renset rotte sensorisk og motor SCer og fibroblaster raskere. Den ventrale roten (motornerven) og dorsalroten (sensorisk nerve) av nyfødte rotter (7 dager gamle) ble dissosiert og cellene ble dyrket i 4-5 dager, etterfulgt av isolering av sensoriske og motorfibroblaster og SCer ved å kombinere differensial fordøyelse og differensialtilslutningsmetoder sekvensielt. Resultatene av immunocytokjemi og flow cytometri analyser viste at renheten av sensoriske og motoriske SCer og fibroblaster var > 90%. Denne protokollen kan brukes til å oppnå et stort antall sensoriske og motoriske fibroblaster / SCer raskere, noe som bidrar til utforskning av sensorisk og motornerve regenerering.

Lett mikroskopisk observasjon SCs og fibroblaster er de to viktigste cellepopulasjonene oppnådd i den primære cellekulturen fra nervevev. Etter inokulasjon i 1 h, holdt de fleste cellene seg til bunnen av parabolen, og cellemorfologien endret seg fra rund til oval. Etter å ha kultisert i 24 timer, viste SCs en bipolar eller tripolar morfologi og lengden på disse varierte fra 100 til 200 μm. Etter 48 timer oppstod aggregering og spredning av celler, der mange celle...

Watch this Scientific Journal Video about Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro at JoVE.com

Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro

Her presenterer vi en metode for å rense fibroblaster og Schwann-celler fra sensoriske og motoriske nerver in vitro.

Rensing av fibroblaster og Schwann-celler fra sensoriske og motornerver in Vitro

The principal cells in the peripheral nervous system are the Schwann cells (SCs) and the fibroblasts. Both these cells distinctly express the sensory and ...

Denne protokollen kan brukes til å få et stort antall sensor og motor fibroblast og Schwann celler raskt. Cellene oppnådd gjennom denne meldingen kan brukes i studien av nerveregenerering og nervesystemet sykdommer. Vi viser at demonstrasjon kan representere det eksperimentelle for bedre å kontrollere tiden for differensialfordøyelsestrinn og gjøre de eksperimentelle trinnene lettere å forstå.Å briste bruke saks for å gjøre et tre centimeter snitt, i huden på ryggen. Fjern ryggsøylen. Åpne vertebrale kanalen forsiktig for å eksponere ryggmargen.Snøre ryggmargen i en 60 millimeter petriskål, med tre til fire milliliter iskald D Hanks balansert saltløsning under et dissekerende mikroskop, avgiftsde ventralroten og ryggroten. Legg dem i iskald D Hanks balansert saltløsning. Etter å ha fjernet HBSS, skjær nervene i tre til fem millimeter stykker, med saks.Tilsett en milliliter på 0,25% trypsin og overfør nervebitene til fem milliliter sentrifugerør. Inkuber ved 37 grader Celsius i 18 til 20 minutter. Deretter, for å stoppe fordøyelsen, legg til tre til fire milliliter DMEM som inneholder 10% fosterbovinserum.Pipette blandingen opp og ned forsiktig ca 10 ganger. Sentrifuge ved 800 ganger G i fem minutter. Etter sentrifugering kast supernatanten.Og re-suspendere bunnsvaret i to til tre milliliter dmem supplert med 10% FBS. Filtrer cellefjæringen gjennom et 400 nettingfilter, og bruk deretter fjæringen til å inokulere en 60 millimeter petriskål. Inkuber Petri-rettene i fire til fem dager ved 37 grader Celsius, i nærvær av 5% karbondioksid.Når kulturen har nådd 90% samløpet, vask cellene en gang ved hjelp av 1XPBS. Deretter, for å fordøye Schwann-cellene, legg til en milliliter på 0,25% trypsin ved 37 grader Celsius per 60 millimeter tallerken. Etter åtte til 10 sekunder ved romtemperatur, stopp fordøyelsen, ved å legge til tre milliliter DMEM supplert med 10% FBS.For å løsne Schwann-cellene, blås forsiktig på cellen med en pipette. Kontroller med mikroskop at cellene er løsrevet. Deretter samler mediet, som inneholder svanecellene, og sentrifuge ved 800 ganger G i fem minutter.Kast det overnaturlige, og suspender bunnstinen i tre milliliter medium. Bruk denne suspensjonen til å inokulere ubestrøkede 60 millimeter Petri-retter, og inkubere oppvasken ved 37 grader Celsius i 30 til 45 minutter. Merker for mediet, som vil inneholde Schwann-cellene til en Poly L lysinbelagt medium rett, og inkubere parabolen ved 37 grader Celsius i to dager.Etter å ha fjernet mediet som inneholder Schwann-cellene, vasker fibroblastene, og yter Petri-rettene med 1XPBS. For å fordøye fibroblastene, legg til en milliliter på 0,25% trypsin ved 37 grader Celsius. Etter å ha fulgt fordøyelsen for å fortsette i to minutter ved 37 grader Celsius, avslutt fordøyelsen ved å legge DMEM supplert med 10% FBS.For å løsne fibroblastene, bruk en pipette til å blåse på bunnen av parabolen. Samle mediet, inkludert fibroblaster, og overføre det til sentrifuge rør. Sentrifuger rørene ved 800 ganger G i fem minutter.Kast det overnaturlige, og resuspend bunnsplitten med to milliliter DMEM som inneholder 10% FBS. Inokuler cellene i un-kodet, 60 millimeter, Petri retter, og inkubere ved 37 grader Celsius i 30 til 45 minutter. Isoler fibroblastene som vil følge Petri-rettene, ved å fjerne og kaste vekstmediet.Legg til tre milliliter DMEM supplert med 10% FBS. Inkuber ved 37 grader Celsius i to dager til passasjen en celle når 90% samløpet. Gjenta differensialfordøyelsen og overholdelsen.Etter å ha kultivert passasjen til fibroblaster og Schwann-celler i to dager, fordøye cellene, samle dem og telle dem. Inokuler PLL-belagte lysbilder med en konsentrasjon på en gang 10 av disse cellene per brønn for ICC-farging. Bays kontrastmikroskopi viser morfologien til kultiverte Schwann-celler og fibroblaster gjennom isolasjonsprosessen.Etter langvarig kulturtid ble Schwann-cellene gruppert sammen mellom fibroblastene eller plassert på overflaten av fibroblaster. Etter fordøyelsen i 10 sekunder var Schwann-cellene, indikert av de røde pilene, runde mens fibroblastene forble flate og var festet til bunnen av parabolen. Etter isolasjon av differensial fordøyelse og differensial etterlevelse ble typiske cellemorfologier observert for alle fire celletyper.Motorfibroblaster, sensoriske fibroblaster, motoriske Schwann-celler og sensoriske Schwann-celler. Sensoriske og motorfibroblaster ble visualisert ved hjelp av et kjeglefokal laserskanning mikroskop. Fibroblastene ble farget med antistoffer mot CD 90 X33342 fargestoff ble brukt til å merke cellekjernene.De sammenslåtte bildene av fibroblaster immunstaining og kjernefysisk farging, indikerte at henholdsvis 92,51% og 92,64% av CD 90 og hexed co-merkede celler, var tilstede i henholdsvis motor- og sensoriske fibroblaster. Sensoriske og motoriske Schwann-celler ble visualisert ved hjelp av et konfokal laserskanningsmikroskop. Schwann-cellene ble farget med antistoffer mot S100 X33342 fargestoff ble brukt til å merke cellekjernene.De fusjonerende bildene av Svanecelleimmunostaining og kjernefysisk farging indikerte tilstedeværelsen av henholdsvis 91,61 % og 93,56 % av S100- og hexed co-merkede celler i motor- og sensoriske Schwann-celler. Celle renhet ble også analysert ved hjelp av flyt cytometri. I fibroblastkulturene var ca. 90 % av cellene fibroblaster, indikert av M2 i FCA-grafene mens de resterende cellene var Schwann-celler.I Schwann cellekulturer var mer enn 92% av cellene Schwann-celler, igjen indikert av M2 i FCA-grafene, mens de resterende cellene var fibroblaster. Denne protokollen er sjelden nyttig for å starte mekanismen for sensor og motornerve regenerering av fibroblaster, og Schwann celler transplantasjon, for å fremme nerve regenerering.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Culture of Primary Motor and Sensory Neurons in Defined Media on Electrospun Poly-L-lactide Nanofiber Scaffolds

Electrospinning is a technique for producing micro- to nano-scale fibers. Fibers can be electrospun with varying degrees of alignment, from highly aligned ...

Live-imaging of PKC Translocation in Sf9 Cells and in Aplysia Sensory Neurons

Protein kinase Cs (PKCs) are serine threonine kinases that play a central role in regulating a wide variety of cellular processes such as cell growth and ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Isolation and Culture of Dissociated Sensory Neurons From Chick Embryos

Isolasjon og kultur av Spaltet sensoriske nevroner Fra Chick embryo

Neurons are multifaceted cells that carry information essential for a variety of functions including sensation, motor movement, learning, and memory. ...

Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells

Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells

fjerning av<em&gt; Drosophila</em&gt; Muskelvev fra Larve Fileter for Immunofluorescensanalyse av sensoriske nevroner og epidermal cellene

Drosophila larval dendritic arborization (da) neurons are a popular model for investigating mechanisms of neuronal morphogenesis. Da neurons develop in ...

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog (Rana catesbeiana)

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog Rana catesbeiana

Fysiologisk Utarbeidelse av hårceller fra sacculus av den amerikanske Bullfrog (<em&gt; Rana catesbeiana</em&gt;)

The study of hearing and balance rests upon insights drawn from biophysical studies of model systems. One such model, the sacculus of the American ...

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

sebrafisk<em&gt; In Situ</em&gt; Spinal Cord Forberedelse til Elektrofysiologiske Opptak fra Spinal sensoriske og motoriske nevroner

Zebrafish, first introduced as a developmental model, have gained popularity in many other fields. The ease of rearing large numbers of rapidly developing ...

Analysis of Immune Cells in Single Sciatic Nerves and Dorsal Root Ganglion from a Single Mouse Using Flow Cytometry

Analyse av immunceller i enkelt Sciatic nerver og Dorsal Root Ganglion fra en enkelt mus med flowcytometri

Nerve-resident immune cells in the peripheral nervous system (PNS) are essential to maintaining neuronal integrity in a healthy nerve. The immune cells of ...

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Okulære kinematikk målt ved In Vitro stimulering av Hjernenerve i Turtle

After animals are euthanized, their tissues begin to die. Turtles offer an advantage because of a longer survival time of their tissues, especially when ...

In Vivo Calcium Imaging of Lateral-line Hair Cells in Larval Zebrafish

I Vivo kalsium bildebehandling av Lateral linje hårcellene i larver sebrafisk

Sensory hair cells are mechanoreceptors found in the inner ear that are required for hearing and balance. Hair cells are activated in response to sensory ...