Name: purification of fibroblasts and schwann cells from sensory and motor nerves in vitro
Uploaded: 2020-05-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro at JoVE.com

Este estudio fue apoyado por el Programa Nacional de Investigación y Desarrollo Clave de China (Grant No. 2017YFA0104703), la Fundación Natural Nacional de China (Grant No. 31500927).

Este estudio se llevó a cabo de acuerdo con las Directrices Institucionales de Cuidado animal de la Universidad de Nantong. Todos los procedimientos, incluidos los sujetos animales, fueron aprobados éticamente por el Comité de Administración de Animales Experimentales, provincia de Jiangsu, China.
1. Aislamiento y cultivo de fibroblastos nerviosos motores y sensoriales y SCs
<ol><li>Utilice ratas Sprague-Dawley (SD) de siete días de edad (n-4) proporcionadas por el Centro Animal Experim...

<ol>
	<li>Stierli, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+regulation+of+the+homeostasis+and+regeneration+of+peripheral+nerve+is+distinct+from+the+CNS+and+independent+of+a+stem+cell+population.">The regulation of the homeostasis and regeneration of peripheral nerve is distinct from the CNS and independent of a stem cell population.</a> Development (The Company of Biologists). , (2018).</li><li>Schubert, T., Friede, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+endoneurial+fibroblasts+in+myelin+degradation.">The role of endoneurial fibroblasts in myelin degradation.</a> Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 40 (2), 134-154 (1981).</li><li>Dreesmann, L., Mittnacht, U., Lietz, M., Schlosshauer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+fibroblast+impact+on+Schwann+cell+behavior.">Nerve fibroblast impact on Schwann cell behavior.</a> European Journal of Cell Biology. 88 (5), 285-300 (2009).</li><li>Lavdas, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cells+engineered+to+express+the+cell+adhesion+molecule+L1+accelerate+myelination+and+motor+recovery+after+spinal+cord+injury.">Schwann cells engineered to express the cell adhesion molecule L1 accelerate myelination and motor recovery after spinal cord injury.</a> Experimental Neurology. 221 (1), 206-216 (2010).</li><li>Parrinello, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EphB+signaling+directs+peripheral+nerve+regeneration+through+Sox2-dependent+Schwann+cell+sorting.">EphB signaling directs peripheral nerve regeneration through Sox2-dependent Schwann cell sorting.</a> Cell. 143 (1), 145-155 (2010).</li><li>Benito, C., Davis, C. M., Gomez-Sanchez, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=STAT3+Controls+the+Long-Term+Survival+and+Phenotype+of+Repair+Schwann+Cells+during+Nerve+Regeneration.">STAT3 Controls the Long-Term Survival and Phenotype of Repair Schwann Cells during Nerve Regeneration.</a> Journal of Neuroscience Research. 37 (16), 4255-4269 (2017).</li><li>Zhang, Z. J., Jiang, B. C., Gao, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+in+neuron-glial+cell+interaction+and+pathogenesis+of+neuropathic+pain.">Chemokines in neuron-glial cell interaction and pathogenesis of neuropathic pain.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 74 (18), 3275-3291 (2017).</li><li>Hoke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cells+express+motor+and+sensory+phenotypes+that+regulate+axon+regeneration.">Schwann cells express motor and sensory phenotypes that regulate axon regeneration.</a> Journal of Neuroscience. 26 (38), 9646-9655 (2006).</li><li>Brushart, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cell+phenotype+is+regulated+by+axon+modality+and+central-peripheral+location,+and+persists+in+vitro.">Schwann cell phenotype is regulated by axon modality and central-peripheral location, and persists in vitro.</a> Experiment Neurology. 247, 272-281 (2013).</li><li>He, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+Gene+Expression+in+Primary+Cultured+Sensory+and+Motor+Nerve+Fibroblasts.">Differential Gene Expression in Primary Cultured Sensory and Motor Nerve Fibroblasts.</a> Frontiers in Neuroscience. 12, 1016 (2018).</li><li>Weinstein, D. E., Wu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+3,+Unit+17:+Isolation+and+purification+of+primary+Schwann+cells.">Chapter 3, Unit 17: Isolation and purification of primary Schwann cells.</a> Current Protocols in Neuroscience. , (2001).</li><li>Palomo Irigoyen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Purification+of+Primary+Rodent+Schwann+Cells.">Isolation and Purification of Primary Rodent Schwann Cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1791, 81-93 (2018).</li><li>Cheng, L., Khan, M., Mudge, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcitonin+gene-related+peptide+promotes+Schwann+cell+proliferation.">Calcitonin gene-related peptide promotes Schwann cell proliferation.</a> Journal of Cell Biology. 129 (3), 789-796 (1995).</li><li>Pannunzio, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+of+selecting+Schwann+cells+from+adult+mouse+sciatic+nerve.">A new method of selecting Schwann cells from adult mouse sciatic nerve.</a> Journal of Neuroscience Methods. 149 (1), 74-81 (2005).</li><li>Shen, M., Tang, W., Cao, Z., Cao, X., Ding, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+rat+Schwann+cells+based+on+cell+sorting.">Isolation of rat Schwann cells based on cell sorting.</a> Molecular Medicine Reports. 16 (2), 1747-1752 (2017).</li><li>He, Q., Man, L., Ji, Y., Ding, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+in+the+biological+characteristics+between+primary+cultured+sensory+and+motor+Schwann+cells.">Comparison in the biological characteristics between primary cultured sensory and motor Schwann cells.</a> Neuroscience Letters. 521 (1), 57-61 (2012).</li><li>Weiss, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomics+and+transcriptomics+of+peripheral+nerve+tissue+and+cells+unravel+new+aspects+of+the+human+Schwann+cell+repair+phenotype.">Proteomics and transcriptomics of peripheral nerve tissue and cells unravel new aspects of the human Schwann cell repair phenotype.</a> Glia. 64 (12), 2133-2153 (2016).</li></ol>

Las dos principales poblaciones celulares de los nervios periféricos incluían CC y fibroblastos. Los fibroblastos y SCs cultivados principalmente pueden ayudar con precisión a modelar la fisiología de fibroblastos y CC durante el desarrollo y la regeneración de los nervios periféricos. El estudio mostró que las células nerviosas ciáticas de rata P7 contenían alrededor del 85% de S100-positivas SCs, 13% de fibroblastos OX7 positivos y sólo 1.5% de macrófagos OX42 positivos13. Aunque el ...

En el sistema nervioso periférico, las fibras nerviosas consisten principalmente en axones, células Schwann (SCs) y fibroblastos, y también contiene un pequeño número de macrófagos, células endoteliales microvasculares, y células inmunitarias1. Los SCs envuelven los axones en una proporción de 1:1 y están encerrados por una capa de tejido conectivo llamada endoneurium. Los axones se agrupan para formar grupos llamados fascículos, y cada fascículo se envuelve en una capa de tejido conectivo conocida como perineurium. Finalmente, toda la fibra nerviosa se envuelve en una capa de tejido conectivo, que se denomina epineurio. En el endoneurium, toda la población celular se compone de 48% DE SCs, y una porción sustancial de las células restantes involucra fibroblastos2. Además, los fibroblastos son componentes importantes de todos los compartimentos nerviosos, incluyendo el epineurium, el perineurium y el endoneurium3. Muchos estudios han indicado que los SCs y los fibroblastos desempeñan un papel crucial en el proceso de regeneración después de las lesiones del nervio periférico4,,5,6. Después de la transección del nervio periférico, los fibroblastos perineuriales regulan la clasificación celular a través de la vía de señalización de ephrin-B/EphB2 entre SCs y fibroblastos, guiando aún más el recrecimiento axonal a través de las heridas5. Los fibroblastos nerviosos periféricos secretan la proteína tenascina-C y mejoran la migración de los SCs durante la regeneración nerviosa a través de la vía de señalización de 1-integrina7. Sin embargo, los SCs y fibroblastos utilizados en los estudios anteriores se derivaron del nervio ciático, que incluye los nervios sensoriales y motores.
En el sistema nervioso periférico, los nervios sensoriales (nervios aferentes) llevan a cabo la señalización sensorial desde los receptores al sistema nervioso central (SNC), mientras que los nervios motores (nervios eferentes) conducen señales desde el SNC hasta los músculos. Estudios previos han indicado que los SCs expresan fenotipos motores y sensoriales distintos y secretan factores neurotróficos para apoyar la regeneración de los nervios periféricos8,,9. Según un estudio reciente, los fibroblastos también expresan diferentes fenotipos motores y sensoriales y afectan la migración de SCs10. Así, la exploración de las diferencias entre los fibroblastos/SC motores y nerviosos sensoriales nos permite estudiar los complicados mecanismos moleculares subyacentes de la regeneración específica del nervio periférico.
En la actualidad, existen muchas formas de purificar los CC y los fibroblastos, incluida la aplicación de agentes antimitoticos, citolisis mediada por anticuerpos11,12, inmunopanning secuencial13 y sustrato de laminina14. Sin embargo, todos los métodos anteriores eliminan los fibroblastos y preservan sólo los SCs altamente purificados y los fibroblastos se pueden obtener mediante la tecnología de clasificación de citometría de flujo15,pero es una técnica lenta y costosa. Por lo tanto, en este estudio, se desarrolló un método simple de digestión diferencial y adherencia diferencial para purificar y aislar fibroblastos sensoriales y nerviosos y SCs con el fin de obtener un gran número de fibroblastos y SCs más rápidamente.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 594 Goat Anti-Mouse IgG(H+L)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A11005</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CoraLite488-conjugated Affinipure Goat Anti-Mouse IgG(H+L)</td>
			<td>Proteintech</td>
			<td>SA00013-1</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>TCS SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Quest software</td>
			<td>Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Hank&#39;s balanced salt solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14170112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZ2-ILST</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10099-141C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forskolin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F6886-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoroshield Mounting Medium</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab104135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixation medium/Permeabilization medium</td>
			<td>Multi Sciences (LIANKE) Biotech, Co., LTD</td>
			<td>GAS005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometry</td>
			<td>Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td>FACS Calibur</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG1 kappa [MOPC-21] (FITC) - Isotype Control</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab106163</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse monoclonal anti-CD90 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab225</td>
			<td>Dilution: 1:1000 for ICC, 0.1 &#181;g for 106 cells for Flow Cyt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-S100 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab212816</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polylysine (PLL)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human NRG1-beta 1/HRG1-beta 1 EGF Domain Protein</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>396-HB-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% (w/v) trypsin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200-072</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

purification of fibroblasts and schwann cells from sensory and motor nerves in vitro

Las principales células del sistema nervioso periférico son las células Schwann (SCs) y los fibroblastos. Ambas células expresan claramente los fenotipos sensoriales y motores implicados en diferentes patrones de expresión génica del factor neurotrófico y otros procesos biológicos, afectando la regeneración nerviosa. El presente estudio ha establecido un protocolo para obtener SCs y fibroblastos sensoriales y motores altamente purificados más rápidamente. La raíz ventral (nervio motor) y la raíz dorsal (nervio sensorial) de ratas neonatales (7 días de edad) se disociaron y las células se cultivaron durante 4-5 días, seguidos por el aislamiento de fibroblastos sensoriales y motores y CC mediante la combinación secuencial de digestión diferencial y adherencia diferencial. Los resultados de los análisis de inmunocitoquímica y citometría de flujo mostraron que la pureza de los CC y fibroblastos sensoriales y motores eran >90%. Este protocolo se puede utilizar para obtener un gran número de fibroblastos/SCs sensoriales y motores más rápidamente, contribuyendo a la exploración de la regeneración sensorial y nerviosa motora.

Observación microscópica de luz Los SCs y los fibroblastos son las dos poblaciones celulares principales obtenidas en el cultivo celular primario a partir de tejidos nerviosos. Después de la inoculación durante 1 h, la mayoría de las células se adhirieron a la parte inferior del plato, y la morfología celular cambió de redonda a ovalada. Después del cultivo durante 24 h, los SCs exhibieron una morfología bipolar o tripolar y la longitud de estos osciló entre...

Watch this Scientific Journal Video about Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro at JoVE.com

Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro

Aquí, presentamos un método para purificar fibroblastos y células Schwann de nervios sensoriales y motores in vitro.

Purificación de fibroblastos y células Schwann de los nervios sensoriales y motores en Vitro

The principal cells in the peripheral nervous system are the Schwann cells (SCs) and the fibroblasts. Both these cells distinctly express the sensory and ...

Este protocolo se puede utilizar para obtener un gran número de sensores y las células del fibroblasto motor y Schwann rápidamente. Las células obtenidas a través de este mensaje se pueden utilizar en el estudio de la regeneración nerviosa y enfermedades del sistema nervioso. Mostramos que la demostración puede representar lo experimental para controlar mejor el tiempo del paso digestivo diferencial y hacer que los pasos experimentales sean más fáciles de entender.Para estallar use tijeras para hacer una incisión de tres centímetros, en la piel de la espalda. Retire la columna vertebral. Abra cuidadosamente el canal vertebral para exponer la médula espinal.Encaje la médula espinal en una placa Petri de 60 milímetros, con tres a cuatro mililitros de solución de sal equilibrada D Hanks bajo un microscopio diseccionado, excediendo la raíz ventral y la raíz dorsal. Colóquelos en una solución de sal equilibrada de D Hanks helada. Después de retirar el HBSS, cortar los nervios en tres a cinco piezas milimétricas, con tijeras.Añadir un mililitro de 0,25% de trippsina y transferir las piezas nerviosas a tubos de centrífuga de cinco mililitros. Incubar a 37 grados centígrados durante 18 a 20 minutos. A continuación, para detener la digestión, añadir de tres a cuatro mililitros de DMEM que contiene 10%suero bovino fetal.Pipetear la mezcla hacia arriba y hacia abajo suavemente unas 10 veces. Centrifugar a 800 veces G durante cinco minutos. Después de la centrifugación, deseche el sobrenadante.Y re-suspender el precipitado en dos a tres mililitros de DMEM complementado con 10%FBS. Filtrar la suspensión celular a través de un filtro de malla 400, y luego utilizar la suspensión para inocular una placa Petri de 60 milímetros. Incubar los platos de Petri durante cuatro a cinco días a 37 grados centígrados, en presencia de 5% de dióxido de carbono.Cuando el cultivo haya alcanzado el 90% de confluencia, lave las células una vez usando 1XPBS. Luego, para digerir las células Schwann, agrega un mililitro de 0.25%trypsin a 37 grados Celsius por plato de 60 milímetros. Después de ocho a 10 segundos a temperatura ambiente, detener la digestión, mediante la adición de tres mililitros de DMEM complementado con 10%FBS.Para separar las células Schwann, sople suavemente sobre la celda con una pipeta. Verifique por microscopio que las células están desprendidas. Luego recoge el medio, que contiene las células Swan, y centrifuga a 800 veces G durante cinco minutos.Deseche el sobrenadante y vuelva a suspender el precipitado en tres mililitros de medio. Utilice esta suspensión para inocular platos Petri de 60 milímetros sin revestir e incubar los platos a 37 grados centígrados durante 30 a 45 minutos. Marcas para el medio, que contendrá las células Schwann a un plato mediano recubierto de lisina Poly L, e incubar el plato a 37 grados centígrados durante dos días.Después de retirar el medio que contiene las células Schwann lavar los fibroblastos, adhiriéndose a los platos Petri con 1XPBS. Para digerir los fibroblastos, agregue un mililitro de 0.25%trypsin a 37 grados Celsius. Después de la digestión para proceder durante dos minutos a 37 grados Celsius, terminar la digestión mediante la adición de DMEM complementado con 10%FBS.Para separar los fibroblastos, use una pipeta para soplar en la parte inferior del plato. Recoger el medio, incluidos los fibroblastos, y transferirlo a tubos de centrífuga. Centrifugar los tubos a 800 veces G durante cinco minutos.Deseche el sobrenadante y resuspendir el precipitado con dos mililitros de DMEM que contienen 10%FBS. Inocule las células en platos Petri sin codificar de 60 milímetros e incubar a 37 grados centígrados durante 30 a 45 minutos. Aislar los fibroblastos que se adhieren a los platos Petri, retirando y descartando el medio de crecimiento.Añadir tres mililitros de DMEM complementados con 10%FBS. Incubar a 37 grados centígrados durante dos días hasta que el paso una célula alcance el 90% de confluencia. Repita la digestión diferencial y la adherencia.Después de cultivar el paso a fibroblastos y células Schwann durante dos días, digiere las células, recógelas y contadlas. Inocular PLL deslizas recubiertos a una concentración de una por 10 de estas células por pozo para la tinción ICC. La microscopía de contraste de Bay muestra la morfología de células y fibroblastos Schwann cultivados durante todo el proceso de aislamiento.Después de un tiempo de cultivo prolongado, las células Schwann se agruparon entre los fibroblastos o se localizaron en la superficie de los fibroblastos. Después de la digestión durante 10 segundos, las células Schwann, indicadas por las flechas rojas, eran redondas mientras que los fibroblastos permanecieron planos y estaban unidos a la parte inferior del plato. Después del aislamiento por digestión diferencial y adherencia diferencial se observaron morfologías celulares típicas para los cuatro tipos de células.Fibroblastos motores, fibroblastos sensoriales, células Schwann motoras y células Sensoriales Schwann. Los fibroblastos sensoriales y motores se visualizaron mediante un microscopio de escaneo láser focal de cono. Los fibroblastos se teñiron con anticuerpos contra el tinte CD 90 X3342 para etiquetar los núcleos celulares.Las imágenes combinadas de inmunomanchas de fibroblastos y tinción nuclear indicaban que el 92,51% y el 92,64% de las células con etiqueta de CD 90 y hexadas estaban presentes en los fibroblastos motores y sensoriales respectivamente. Las células Schwann sensoriales y motoras se visualizaron utilizando un microscopio de escaneo láser confocal. Las células Schwann se teñiron con anticuerpos contra el tinte S100 X33342 para etiquetar los núcleos celulares.Las imágenes de fusión de inmunostaining de células Swan y tinción nuclear indicaron la presencia de 91,61% y 93,56% de S100 y células copulares hexagonales en células Schwann motoras y sensoriales, respectivamente. La pureza celular también se analizó utilizando la citometría de flujo. En los cultivos de fibroblastos, aproximadamente el 90% de las células eran fibroblastos, indicados por M2 en los gráficos de FCA, mientras que las células restantes eran células Schwann.En los cultivos celulares de Schwann, más del 92% de las células eran células Schwann, indicadas de nuevo por M2 en los gráficos de FCA, mientras que las células restantes eran fibroblastos. Este protocolo rara vez es útil para iniciar el mecanismo de regeneración del sensor y del nervio motor de los fibroblastos, y el trasplante de células Schwann, para promover la regeneración nerviosa.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Culture of Primary Motor and Sensory Neurons in Defined Media on Electrospun Poly-L-lactide Nanofiber Scaffolds

La cultura de la motora primaria y las neuronas sensoriales en los medios de comunicación definidas en Electrospun poli-L-láctico andamios nanofibras

Electrospinning is a technique for producing micro- to nano-scale fibers. Fibers can be electrospun with varying degrees of alignment, from highly aligned ...

Investigación

Neurociencias

Live-imaging of PKC Translocation in Sf9 Cells and in Aplysia Sensory Neurons

En vivo de imágenes de la translocación de PKC en células Sf9 y en las neuronas sensoriales Aplysia

Protein kinase Cs (PKCs) are serine threonine kinases that play a central role in regulating a wide variety of cellular processes such as cell growth and ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Células vivas imágenes de células de los órganos sensoriales Precursor en Intacto Drosophila Las pupas

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Isolation and Culture of Dissociated Sensory Neurons From Chick Embryos

Aislamiento y cultivo de neuronas sensoriales disociadas De embriones de pollo

Neurons are multifaceted cells that carry information essential for a variety of functions including sensation, motor movement, learning, and memory. ...

Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells

Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells

Eliminación de<em&gt; Drosophila</em&gt; Tejido muscular de larvas Filetes para el análisis de inmunofluorescencia de las neuronas sensoriales y las células epidérmicas

Drosophila larval dendritic arborization (da) neurons are a popular model for investigating mechanisms of neuronal morphogenesis. Da neurons develop in ...

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog (Rana catesbeiana)

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog Rana catesbeiana

Preparación fisiológica de las células ciliadas del sáculo de la rana toro americana (<em&gt; Catesbeiana</em&gt;)

The study of hearing and balance rests upon insights drawn from biophysical studies of model systems. One such model, the sacculus of the American ...

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

El pez cebra<em&gt; In Situ</em&gt; Médula Espinal Preparación para Registros electrofisiológicos de Spinal Sensory y neuronas motoras

Zebrafish, first introduced as a developmental model, have gained popularity in many other fields. The ease of rearing large numbers of rapidly developing ...

Analysis of Immune Cells in Single Sciatic Nerves and Dorsal Root Ganglion from a Single Mouse Using Flow Cytometry

Análisis de las células inmunes en solo de los nervios ciático y de ganglio de raíz Dorsal de un ratón mediante citometría de flujo

Nerve-resident immune cells in the peripheral nervous system (PNS) are essential to maintaining neuronal integrity in a healthy nerve. The immune cells of ...

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Cinemática ocular midiendo In Vitro la estimulación de los nervios craneales en la tortuga

After animals are euthanized, their tissues begin to die. Turtles offer an advantage because of a longer survival time of their tissues, especially when ...

In Vivo Calcium Imaging of Lateral-line Hair Cells in Larval Zebrafish

En proyección de imagen del calcio Vivo de las células de pelo de la línea Lateral en el pez cebra larvas

Sensory hair cells are mechanoreceptors found in the inner ear that are required for hearing and balance. Hair cells are activated in response to sensory ...