Name: purification of fibroblasts and schwann cells from sensory and motor nerves in vitro
Uploaded: 2020-05-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro at JoVE.com

Denna studie stöddes av National Key Research and Development Program of China (Grant No. 2017YFA0104703), National Natural Foundation of China (Grant No. 31500927).

Denna studie genomfördes i enlighet med institutionsvårdsriktlinjerna vid Nantong University. Alla förfaranden inklusive djurämnen godkändes etiskt av administrationskommittén för försöksdjur, Jiangsu-provinsen, Kina.
1. Isolering och kultur av motoriska och sensoriska nervfiber och SCs
<ol><li>Använd sju dagar gamla Sprague-Dawley (SD) råttor (n = 4) som tillhandahålls av Experimental Animal Center i Nantong University of China. Placera råttorna i en tank som innehåller 5% iso...

<ol>
	<li>Stierli, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+regulation+of+the+homeostasis+and+regeneration+of+peripheral+nerve+is+distinct+from+the+CNS+and+independent+of+a+stem+cell+population.">The regulation of the homeostasis and regeneration of peripheral nerve is distinct from the CNS and independent of a stem cell population.</a> Development (The Company of Biologists). , (2018).</li><li>Schubert, T., Friede, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+endoneurial+fibroblasts+in+myelin+degradation.">The role of endoneurial fibroblasts in myelin degradation.</a> Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 40 (2), 134-154 (1981).</li><li>Dreesmann, L., Mittnacht, U., Lietz, M., Schlosshauer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+fibroblast+impact+on+Schwann+cell+behavior.">Nerve fibroblast impact on Schwann cell behavior.</a> European Journal of Cell Biology. 88 (5), 285-300 (2009).</li><li>Lavdas, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cells+engineered+to+express+the+cell+adhesion+molecule+L1+accelerate+myelination+and+motor+recovery+after+spinal+cord+injury.">Schwann cells engineered to express the cell adhesion molecule L1 accelerate myelination and motor recovery after spinal cord injury.</a> Experimental Neurology. 221 (1), 206-216 (2010).</li><li>Parrinello, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EphB+signaling+directs+peripheral+nerve+regeneration+through+Sox2-dependent+Schwann+cell+sorting.">EphB signaling directs peripheral nerve regeneration through Sox2-dependent Schwann cell sorting.</a> Cell. 143 (1), 145-155 (2010).</li><li>Benito, C., Davis, C. M., Gomez-Sanchez, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=STAT3+Controls+the+Long-Term+Survival+and+Phenotype+of+Repair+Schwann+Cells+during+Nerve+Regeneration.">STAT3 Controls the Long-Term Survival and Phenotype of Repair Schwann Cells during Nerve Regeneration.</a> Journal of Neuroscience Research. 37 (16), 4255-4269 (2017).</li><li>Zhang, Z. J., Jiang, B. C., Gao, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+in+neuron-glial+cell+interaction+and+pathogenesis+of+neuropathic+pain.">Chemokines in neuron-glial cell interaction and pathogenesis of neuropathic pain.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 74 (18), 3275-3291 (2017).</li><li>Hoke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cells+express+motor+and+sensory+phenotypes+that+regulate+axon+regeneration.">Schwann cells express motor and sensory phenotypes that regulate axon regeneration.</a> Journal of Neuroscience. 26 (38), 9646-9655 (2006).</li><li>Brushart, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cell+phenotype+is+regulated+by+axon+modality+and+central-peripheral+location,+and+persists+in+vitro.">Schwann cell phenotype is regulated by axon modality and central-peripheral location, and persists in vitro.</a> Experiment Neurology. 247, 272-281 (2013).</li><li>He, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+Gene+Expression+in+Primary+Cultured+Sensory+and+Motor+Nerve+Fibroblasts.">Differential Gene Expression in Primary Cultured Sensory and Motor Nerve Fibroblasts.</a> Frontiers in Neuroscience. 12, 1016 (2018).</li><li>Weinstein, D. E., Wu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+3,+Unit+17:+Isolation+and+purification+of+primary+Schwann+cells.">Chapter 3, Unit 17: Isolation and purification of primary Schwann cells.</a> Current Protocols in Neuroscience. , (2001).</li><li>Palomo Irigoyen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Purification+of+Primary+Rodent+Schwann+Cells.">Isolation and Purification of Primary Rodent Schwann Cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1791, 81-93 (2018).</li><li>Cheng, L., Khan, M., Mudge, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcitonin+gene-related+peptide+promotes+Schwann+cell+proliferation.">Calcitonin gene-related peptide promotes Schwann cell proliferation.</a> Journal of Cell Biology. 129 (3), 789-796 (1995).</li><li>Pannunzio, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+of+selecting+Schwann+cells+from+adult+mouse+sciatic+nerve.">A new method of selecting Schwann cells from adult mouse sciatic nerve.</a> Journal of Neuroscience Methods. 149 (1), 74-81 (2005).</li><li>Shen, M., Tang, W., Cao, Z., Cao, X., Ding, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+rat+Schwann+cells+based+on+cell+sorting.">Isolation of rat Schwann cells based on cell sorting.</a> Molecular Medicine Reports. 16 (2), 1747-1752 (2017).</li><li>He, Q., Man, L., Ji, Y., Ding, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+in+the+biological+characteristics+between+primary+cultured+sensory+and+motor+Schwann+cells.">Comparison in the biological characteristics between primary cultured sensory and motor Schwann cells.</a> Neuroscience Letters. 521 (1), 57-61 (2012).</li><li>Weiss, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomics+and+transcriptomics+of+peripheral+nerve+tissue+and+cells+unravel+new+aspects+of+the+human+Schwann+cell+repair+phenotype.">Proteomics and transcriptomics of peripheral nerve tissue and cells unravel new aspects of the human Schwann cell repair phenotype.</a> Glia. 64 (12), 2133-2153 (2016).</li></ol>

De två stora cell populationer av perifera nerver ingår SCs och fibroblaster. De främst odlade fibroblaster och SCs kan exakt hjälpa till att modellera fysiologi fibroblaster och SCs under perifera nerv utveckling och regenerering. Studien visade att P7 råtta ischias nervceller innehöll cirka 85% av S100-positiva SCs, 13% av OX7-positiva fibroblaster och endast 1,5% av OX42-positiva makrofager13. Även om antalet fibroblaster är mindre än SCs, är den ursprungliga spridningen av fibroblast...

I det perifera nervsystemet består nervfibrerna huvudsakligen av axoner, Schwannceller (SCs) och fibroblaster, och innehåller också ett litet antal makrofager, mikrovaskulära endotelceller och immunceller1. SCs linda axoner i en 1:1 förhållande och omges av en bindväv lager som kallas endoneurium. Axoner buntas sedan ihop för att bilda grupper som kallas fascicles, och varje fascicle är insvept i ett bindvävsskikt som kallas perineurium. Slutligen är hela nervfiber insvept i ett lager av bindväv, som kallas epineurium. I endoneurium, hela cellpopulationen består av 48% SCs, och en betydande del av de återstående cellerna innebär fibroblaster2. Dessutom är fibroblaster viktiga komponenter i alla nervfack, inklusive epineurium, perineurium och endoneurium3. Många studier har visat att SCs och fibroblaster spelar en avgörande roll i regenereringsprocessen efter perifera nervskador4,,5,6. Efter transection av perifera nerv, perineurial fibroblaster reglera cellsortering via ephrin-B/EphB2 signalering väg mellan SCs och fibroblaster, ytterligare styra axonal återväxt genom sår5. Perifera nervfibraruts utsöndra tenascin-C protein och öka migrationen av SCs under nervregenerering genom β1-integrin signalväg7. Emellertid, SCs och fibroblaster som används i ovanstående studier härrörde från ischiasnerven, som omfattar både sensoriska och motoriska nerver.
I det perifera nervsystemet, de sensoriska nerverna (afferent nerver) genomföra sensoriska signalering från receptorerna till centrala nervsystemet (CNS), medan de motoriska nerverna (efferent nerver) genomföra signaler från CNS till musklerna. Tidigare studier har visat att SCs uttrycka distinkta motoriska och sensoriska fenotyper och utsöndra neurotrofa faktorer för att stödja perifer nervregenerering8,9. Enligt en färsk studie, fibroblaster också uttrycka olika motoriska och sensoriska fenotyper och påverka migrationen av SCs10. Således gör utforskning av skillnader mellan motoriska och sensoriska nerv fibroblaster/SCs oss att studera komplicerade underliggande molekylära mekanismer för perifer nerv specifik regenerering.
För närvarande finns det många sätt att rena SCs och fibroblaster, inklusive tillämpning av antimitotiska medel, antikropp-medierad cytolys11,12, sekventiell immunpanering13 och laminin substratum14. Men alla ovanstående metoder bort fibroblaster och bevara endast SCs. Mycket renade SCs och fibroblaster kan erhållas genom flöde cytometri sortering teknik15, men det är en tidskrävande och kostsam teknik. Därför utvecklades i denna studie, en enkel differentialnedsmältning och differential följsamhet metod för rening och isolera sensoriska och motoriska nerv fibroblaster och SCs för att få ett stort antal fibroblaster och SCs snabbare.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 594 Goat Anti-Mouse IgG(H+L)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A11005</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CoraLite488-conjugated Affinipure Goat Anti-Mouse IgG(H+L)</td>
			<td>Proteintech</td>
			<td>SA00013-1</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>TCS SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Quest software</td>
			<td>Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Hank&#39;s balanced salt solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14170112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZ2-ILST</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10099-141C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forskolin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F6886-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoroshield Mounting Medium</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab104135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixation medium/Permeabilization medium</td>
			<td>Multi Sciences (LIANKE) Biotech, Co., LTD</td>
			<td>GAS005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometry</td>
			<td>Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td>FACS Calibur</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG1 kappa [MOPC-21] (FITC) - Isotype Control</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab106163</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse monoclonal anti-CD90 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab225</td>
			<td>Dilution: 1:1000 for ICC, 0.1 &#181;g for 106 cells for Flow Cyt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-S100 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab212816</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polylysine (PLL)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human NRG1-beta 1/HRG1-beta 1 EGF Domain Protein</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>396-HB-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% (w/v) trypsin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200-072</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

purification of fibroblasts and schwann cells from sensory and motor nerves in vitro

De viktigaste cellerna i det perifera nervsystemet är Schwann cellerna (SCs) och fibroblaster. Båda dessa celler uttrycker tydligt sensoriska och motor fenotyper som deltar i olika mönster av neurotrofisk faktor genuttryck och andra biologiska processer, som påverkar nervregenerering. Den aktuella studien har etablerat ett protokoll för att få mycket renad råtta sensoriska och motoriska SCs och fibroblaster snabbare. Ventrala roten (motor nerv) och dorsala roten (sensorisk nerv) av neonatal råttor (7 dagar gamla) var separerade och cellerna odlades i 4-5 dagar, följt av isolering av sensoriska och motoriska fibroblaster och SCs genom att kombinera differentiell matsmältning och differentiell följsamhet metoder sekventiellt. Resultaten av immunocytokemi och flöde cytometri analyser visade att renhet sensoriska och motor SCs och fibroblaster var >90%. Detta protokoll kan användas för att få ett stort antal sensoriska och motoriska fibroblaster /SCs snabbare, vilket bidrar till utforskning av sensorisk och motorisk nerv regenerering.

Lätt mikroskopisk observation SCs och fibroblaster är de två viktigaste cell populationer som erhållits i den primära cellkulturen från nervvävnader. Efter inokulering i 1 h, de flesta av cellerna följde botten av skålen, och cellmorfologin ändras från runda till ovala. Efter odling i 24 timmar ställde SCs ut en bipolär eller tripolar morfologi och längden på dessa varierade från 100 till 200 μm. Efter 48 h, aggregering och spridning av celler inträff...

Watch this Scientific Journal Video about Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro at JoVE.com

Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro

Här presenterar vi en metod för att rena fibroblaster och Schwann celler från sensoriska och motoriska nerver in vitro.

Rening av fibroblaster och schwannceller från sensoriska och motoriska nerver i Vitro

The principal cells in the peripheral nervous system are the Schwann cells (SCs) and the fibroblasts. Both these cells distinctly express the sensory and ...

Detta protokoll kan användas för att få stort antal sensor och motorn fibroblast och Schwann celler snabbt. De celler som erhålls genom detta meddelande kan användas i studien av nervregenerering och nervsystemets sjukdomar. Vi visar demonstration kan representera den experimentella att bättre kontrollera tiden för differentiellt matsmältningssteg och göra de experimentella stegen lättare att förstå.Att brista använda sax för att göra en tre centimeter snitt, i huden på ryggen. Ta bort ryggraden. Öppna försiktigt kotkanalen för att exponera ryggmärgen.Spets ryggmärgen i en 60 millimeter Petri skålen, med tre till fyra milliliter iskall D Hanks balanserad saltlösning under en dissekera mikroskop, punktskatt ventrala roten och ryggroten. Placera dem i iskall D Hanks balanserad saltlösning. Efter att ha tagit bort HBSS, skiva nerverna i tre till fem millimeter bitar, med sax.Tillsätt en milliliter på 0,25%trypsin och överför nervbitarna till fem milliliter centrifugrör. Inkubera vid 37 grader Celsius i 18 till 20 minuter. Nästa, för att stoppa matsmältningen, lägga till vid tre till fyra milliliter dmem som innehåller 10%fetala nötkreatur serum.Pipettera blandningen upp och ner försiktigt ca 10 gånger. Centrifugera vid 800 gånger G i fem minuter. Efter centrifugeringen kassera supernatanten.Och åter avbryta fällningen i två till tre milliliter DMEM kompletteras med 10%FBS. Filtrera cellupphängningen genom ett 400-nätfilter och använd sedan suspensionen för att inokulera en 60 millimeters petriskål. Inkubera petriskålarna i fyra till fem dagar vid 37 grader Celsius, i närvaro av 5%-koldioxid.När kulturen har nått 90%sammanflödet, tvätta cellerna en gång med 1XPBS. Sedan, för att smälta Schwann cellerna, tillsätt en milliliter på 0,25%trypsin vid 37 grader Celsius per 60 millimeter skålen. Efter åtta till 10 sekunder vid rumstemperatur, stoppa matsmältningen, genom att lägga till tre milliliter DMEM kompletteras med 10%FBS.För att ta bort Schwann-cellerna, blås försiktigt på cellen med en pipett. Verifiera med mikroskop att cellerna lösgörs. Samla sedan mediet, som innehåller Svancellerna, och centrifug vid 800 gånger G i fem minuter.Kasta supernatanten och dra upp fällningen på åter fällning i tre milliliter medium. Använd denna suspension för att inokulera 60 millimeter Petri rätter, och ruva disken på 37 grader Celsius i 30 till 45 minuter. Märken för mediet, som kommer att innehålla Schwann cellerna till en Poly L lysinbelagd medium skålen, och inkubera skålen på 37 grader Celsius i två dagar.Efter att ha tagit bort det medium som innehåller Schwann cellerna tvätta fibroblaster, ansluter sig till Petri rätter med 1XPBS. För att smälta fibroblaster, tillsätt en milliliter av 0,25%trypsin vid 37 grader Celsius. Efter att ha följt matsmältningen att fortsätta i två minuter vid 37 grader Celsius, avsluta matsmältningen genom att lägga DMEM kompletteras med 10%FBS.För att lossa fibroblaster, använd en pipett för att blåsa på botten av skålen. Samla mediet, inklusive fibroblaster, och överför det till centrifugrör. Centrifugera rören vid 800 gånger G i fem minuter.Kassera supernatanten och resuspend fällningen med två milliliter DMEM som innehåller 10%FBS. Inokulera cellerna i un-kodade, 60 millimeter, Petri rätter, och inkubera vid 37 grader Celsius i 30 till 45 minuter. Isolera fibroblaster som kommer att följa petri-disken, genom att ta bort och kasta tillväxtmediet.Tillsätt tre milliliter DMEM kompletterat med 10%FBS. Inkubera vid 37 grader Celsius i två dagar tills passagen en celler når 90%sammanflödet. Upprepa differentialsopningen och följsamheten.Efter att ha culturing passagen till fibroblaster och Schwann celler i två dagar, smälta cellerna, samla in dem, och räkna dem. Inokulera PLL belagda diabilder vid en koncentration av en gånger 10 av dessa celler per brunn för ICC färgning. Bays kontrastmikroskopi visar morfologi odlade Schwann celler och fibroblaster under hela isoleringsprocessen.Efter långvarig odling tid, var Schwann cellerna klustrade tillsammans mellan fibroblaster eller ligger på ytan av fibroblaster. Efter matsmältningen i 10 sekunder, schwann cellerna, som anges av de röda pilarna, var runda medan fibroblaster förblev platt och var fäst vid botten av skålen. Efter isolering genom differentiell matsmältning och differential adherence typiska cell morfologies observerades för alla fyra celltyper.Motorfibroblaster, sensoriska fibroblaster, motoriska Schwann-celler och sensoriska Schwann-celler. De sensoriska och motor fibroblaster var visualiseras med hjälp av en kon focal laser scanning mikroskop. Fibroblaster var färgas med antikroppar mot CD 90 X33342 färgämnet användes för att märka cellen atomkärnor.De sammanslagna bilder av fibroblaster immunostaining och nukleära färgning, anges att 92.51%och 92.64%av CD 90 och hexed co-märkt celler, var närvarande i motor och sensoriska fibroblaster respektive. Den sensoriska och motor Schwann cellerna var visualiseras med hjälp av en confocal laser scanning mikroskop. Schwann cellerna var färgas med antikroppar mot S100 X33342 färgämnet användes för att märka cellen kärnor.Sammanfogningsbilderna av Svancellens immunfärgning och nukleära färgning indikerade närvaron av 91,61%och 93,56%av S100 och hexed co-märkt celler i motor och sensoriska Schwann celler, respektive. Cell renhet var också analyseras med hjälp av flödescytometri. I fibroblastkulturerna var ungefär 90%av cellerna fibroblaster, indikerade av M2 i FCA-graferna medan de återstående cellerna var Schwann-celler.I Schwann cellkulturer, mer än 92%av celler var Schwann celler, återigen anges av M2 i FCA grafer, medan de återstående cellerna var fibroblaster. Detta protokoll är sällan användbart för att starta mekanismen för sensor och motor nerv regenerering av fibroblaster, och Schwann cellerna transplantation, att främja nervregenerering.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Culture of Primary Motor and Sensory Neurons in Defined Media on Electrospun Poly-L-lactide Nanofiber Scaffolds

Kultur av primära motoriska och sensoriska nervceller i Definieras Media på Electrospun poly-L-laktid nanofiber Ställningar

Electrospinning is a technique for producing micro- to nano-scale fibers. Fibers can be electrospun with varying degrees of alignment, from highly aligned ...

Live-imaging of PKC Translocation in Sf9 Cells and in Aplysia Sensory Neurons

Live-avbildning av PKC translokation hos Sf9 celler och i Aplysia sensoriska neuroner

Protein kinase Cs (PKCs) are serine threonine kinases that play a central role in regulating a wide variety of cellular processes such as cell growth and ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell imaging av sensoriska celler orgel Precursor i intakt Drosophila Puppor

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Isolation and Culture of Dissociated Sensory Neurons From Chick Embryos

Isolering och odling av dissocierade sensoriska neuroner från kycklingembryon

Neurons are multifaceted cells that carry information essential for a variety of functions including sensation, motor movement, learning, and memory. ...

Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells

Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells

Borttagning av<em&gt; Drosophila</em&gt; Muskelvävnad från larver filéer för immunofluorescensanalys av sensoriska neuroner och epidermala celler

Drosophila larval dendritic arborization (da) neurons are a popular model for investigating mechanisms of neuronal morphogenesis. Da neurons develop in ...

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog (Rana catesbeiana)

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog Rana catesbeiana

Fysiologiska Framställning av hårcellerna från säcken av den amerikanska Bullfrog (<em&gt; Ranacatesbeiana</em&gt;)

The study of hearing and balance rests upon insights drawn from biophysical studies of model systems. One such model, the sacculus of the American ...

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

zebrafisk<em&gt; In Situ</em&gt; Spinal Cord Förberedelse för elektrofysiologiska inspelningar från Spinal sensoriska och motoriska nervceller

Zebrafish, first introduced as a developmental model, have gained popularity in many other fields. The ease of rearing large numbers of rapidly developing ...

Analysis of Immune Cells in Single Sciatic Nerves and Dorsal Root Ganglion from a Single Mouse Using Flow Cytometry

Analys av immunceller i enda höftnerver och dorsalrotsganglier Ganglion från ett enda musklick med hjälp av flödescytometri

Nerve-resident immune cells in the peripheral nervous system (PNS) are essential to maintaining neuronal integrity in a healthy nerve. The immune cells of ...

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Okulär kinematik mätt In Vitro stimulering av kranialnerver i sköldpaddan

After animals are euthanized, their tissues begin to die. Turtles offer an advantage because of a longer survival time of their tissues, especially when ...

In Vivo Calcium Imaging of Lateral-line Hair Cells in Larval Zebrafish

I Vivo kalcium avbildning av sidolinje hårcellerna i Larval zebrafiskar

Sensory hair cells are mechanoreceptors found in the inner ear that are required for hearing and balance. Hair cells are activated in response to sensory ...