Name: purification of fibroblasts and schwann cells from sensory and motor nerves in vitro
Uploaded: 2020-05-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro at JoVE.com

Bu çalışma Çin Ulusal Anahtar Araştırma ve Geliştirme Programı (Grant No. 2017YFA0104703), Çin Ulusal Doğal Vakfı (Grant No. 31500927) tarafından desteklenmiştir.

Bu çalışma Nantong Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım Rehberi'ne uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Hayvan denekleri de dahil olmak üzere tüm prosedürler etik Deneysel Hayvanlar, Jiangsu Eyaleti, Çin İdare Komitesi tarafından onaylandı.
1. Motor ve duyusal sinir fibroblastları ve SC'lerin izolasyonu ve kültürü
<ol><li>Çin Nantong Üniversitesi Deneysel Hayvan Merkezi tarafından sağlanan yedi günlük Sprague-Dawley (SD) sıçanlarını (n=4) kullanın. Sıçanları %5 i...

<ol>
	<li>Stierli, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+regulation+of+the+homeostasis+and+regeneration+of+peripheral+nerve+is+distinct+from+the+CNS+and+independent+of+a+stem+cell+population.">The regulation of the homeostasis and regeneration of peripheral nerve is distinct from the CNS and independent of a stem cell population.</a> Development (The Company of Biologists). , (2018).</li><li>Schubert, T., Friede, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+endoneurial+fibroblasts+in+myelin+degradation.">The role of endoneurial fibroblasts in myelin degradation.</a> Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 40 (2), 134-154 (1981).</li><li>Dreesmann, L., Mittnacht, U., Lietz, M., Schlosshauer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+fibroblast+impact+on+Schwann+cell+behavior.">Nerve fibroblast impact on Schwann cell behavior.</a> European Journal of Cell Biology. 88 (5), 285-300 (2009).</li><li>Lavdas, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cells+engineered+to+express+the+cell+adhesion+molecule+L1+accelerate+myelination+and+motor+recovery+after+spinal+cord+injury.">Schwann cells engineered to express the cell adhesion molecule L1 accelerate myelination and motor recovery after spinal cord injury.</a> Experimental Neurology. 221 (1), 206-216 (2010).</li><li>Parrinello, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EphB+signaling+directs+peripheral+nerve+regeneration+through+Sox2-dependent+Schwann+cell+sorting.">EphB signaling directs peripheral nerve regeneration through Sox2-dependent Schwann cell sorting.</a> Cell. 143 (1), 145-155 (2010).</li><li>Benito, C., Davis, C. M., Gomez-Sanchez, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=STAT3+Controls+the+Long-Term+Survival+and+Phenotype+of+Repair+Schwann+Cells+during+Nerve+Regeneration.">STAT3 Controls the Long-Term Survival and Phenotype of Repair Schwann Cells during Nerve Regeneration.</a> Journal of Neuroscience Research. 37 (16), 4255-4269 (2017).</li><li>Zhang, Z. J., Jiang, B. C., Gao, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+in+neuron-glial+cell+interaction+and+pathogenesis+of+neuropathic+pain.">Chemokines in neuron-glial cell interaction and pathogenesis of neuropathic pain.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 74 (18), 3275-3291 (2017).</li><li>Hoke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cells+express+motor+and+sensory+phenotypes+that+regulate+axon+regeneration.">Schwann cells express motor and sensory phenotypes that regulate axon regeneration.</a> Journal of Neuroscience. 26 (38), 9646-9655 (2006).</li><li>Brushart, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cell+phenotype+is+regulated+by+axon+modality+and+central-peripheral+location,+and+persists+in+vitro.">Schwann cell phenotype is regulated by axon modality and central-peripheral location, and persists in vitro.</a> Experiment Neurology. 247, 272-281 (2013).</li><li>He, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+Gene+Expression+in+Primary+Cultured+Sensory+and+Motor+Nerve+Fibroblasts.">Differential Gene Expression in Primary Cultured Sensory and Motor Nerve Fibroblasts.</a> Frontiers in Neuroscience. 12, 1016 (2018).</li><li>Weinstein, D. E., Wu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+3,+Unit+17:+Isolation+and+purification+of+primary+Schwann+cells.">Chapter 3, Unit 17: Isolation and purification of primary Schwann cells.</a> Current Protocols in Neuroscience. , (2001).</li><li>Palomo Irigoyen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Purification+of+Primary+Rodent+Schwann+Cells.">Isolation and Purification of Primary Rodent Schwann Cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1791, 81-93 (2018).</li><li>Cheng, L., Khan, M., Mudge, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcitonin+gene-related+peptide+promotes+Schwann+cell+proliferation.">Calcitonin gene-related peptide promotes Schwann cell proliferation.</a> Journal of Cell Biology. 129 (3), 789-796 (1995).</li><li>Pannunzio, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+of+selecting+Schwann+cells+from+adult+mouse+sciatic+nerve.">A new method of selecting Schwann cells from adult mouse sciatic nerve.</a> Journal of Neuroscience Methods. 149 (1), 74-81 (2005).</li><li>Shen, M., Tang, W., Cao, Z., Cao, X., Ding, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+rat+Schwann+cells+based+on+cell+sorting.">Isolation of rat Schwann cells based on cell sorting.</a> Molecular Medicine Reports. 16 (2), 1747-1752 (2017).</li><li>He, Q., Man, L., Ji, Y., Ding, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+in+the+biological+characteristics+between+primary+cultured+sensory+and+motor+Schwann+cells.">Comparison in the biological characteristics between primary cultured sensory and motor Schwann cells.</a> Neuroscience Letters. 521 (1), 57-61 (2012).</li><li>Weiss, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomics+and+transcriptomics+of+peripheral+nerve+tissue+and+cells+unravel+new+aspects+of+the+human+Schwann+cell+repair+phenotype.">Proteomics and transcriptomics of peripheral nerve tissue and cells unravel new aspects of the human Schwann cell repair phenotype.</a> Glia. 64 (12), 2133-2153 (2016).</li></ol>

Periferik sinirlerin iki büyük hücre popülasyonları SCs ve fibroblastlar dahil. Öncelikle kültürlü fibroblastlar ve SCs doğru periferik sinir gelişimi ve rejenerasyon sırasında fibroblastlar ve SCs fizyolojisi modelleme yardımcı olabilir. Çalışma, P7 sıçan siyatik sinir hücrelerinin S100-pozitif SC'lerin yaklaşık %85'ini, OX7-pozitif fibroblastların %13'ünü ve OX42-pozitif makrofajların sadece %1,5'ini13'üiçerdiğini göstermiştir. Fibroblast ların sayısı SC'lerden...

Periferik sinir sisteminde, sinir lifleri esas olarak akson oluşur, Schwann hücreleri (SCs), ve fibroblastlar, ve aynı zamanda makrofajlar az sayıda içerir, mikrovasküler endotel hücreleri, ve bağışıklık hücreleri1. SC'ler aksonlar1:1 oranında sarılır ve endoneurium adı verilen bağ dokusu tabakası ile çevrilidir. Aksonlar daha sonra fasikül adı verilen gruplar oluşturmak için bir araya toplanır ve her fasikül perineurium olarak bilinen bir bağ dokusu tabakasına sarılır. Son olarak, tüm sinir lifi bağ dokusu bir tabaka sarılır, hangi epineurium olarak denir. Endoneurium'da, tüm hücre popülasyonu %48'lik SC'lerden oluşur ve kalan hücrelerin2önemli bir kısmı fibroblastlar 2'dir. Ayrıca, fibroblastlar epineurium, perineurium ve endoneurium3dahil olmak üzere tüm sinir kompartmanlarının önemli bileşenleridir. Birçok çalışma, SCs ve fibroblastlar periferik sinir yaralanmaları sonra rejenerasyon sürecinde önemli bir rol oynadığını göstermiştir4,5,6. Periferik sinirin ranzeksiyonundan sonra, perineurial fibroblastlar SC'ler ve fibroblastlar arasındaki efrin-B/EphB2 sinyal yolu üzerinden hücre sıralamasını düzenler, yaralar la aksonal yeniden büyümeye rehberlik eder5. Periferik sinir fibroblastları tenascin-C proteini salgılar ve β1-integrin sinyalyolu7 ile sinir rejenerasyonu sırasında SC'lerin göçünü artırır. Ancak, yukarıdaki çalışmalarda kullanılan SCs ve fibroblastlar siyatik sinir türetilmiştir, hangi duyusal ve motor sinirler hem de içerir.
Periferik sinir sisteminde, duyusal sinirler (afferent sinirler) merkezi sinir sistemi (CNS) reseptörlerinden duyusal sinyal yapmak, motor sinirler (efferent sinirler) kaslara CNS sinyalleri ilerlerken. Önceki çalışmalar, SCs farklı motor ve duyusal fenotipler ifade ve periferik sinir rejenerasyon desteklemek için nörotrofik faktörler salgılargöstermiştir 8,9. Yakın tarihli bir araştırmaya göre, fibroblastlar da farklı motor ve duyusal fenotipler ifade ve SCs göç etkiler10. Böylece, motor ve duyusal sinir fibroblastları/SC'leri arasındaki farkların araştırılması, periferik sinir spesifik rejenerasyonunun karmaşık altta yatan moleküler mekanizmalarını incelememizi sağlar.
Şu anda, antimitotik ajanların uygulanması da dahil olmak üzere, SCs ve fibroblastlar arındırmak için birçok yolu vardır, antikor aracılı sitoz11,12, sıralı immünpanning13 ve laminin substratum14. Ancak, yukarıdaki tüm yöntemler fibroblastlar kaldırmak ve sadece SCs korumak. Yüksek saflaştırılmış SCs ve fibroblastlar akış sitometri sıralama teknolojisi15elde edilebilir , ama zaman alıcı ve pahalı bir tekniktir. Bu nedenle, bu çalışmada, duyusal ve motor sinir fibroblastları ve SC'leri daha hızlı bir şekilde elde etmek için basit bir diferansiyel sindirim ve diferansiyel bağlılık yöntemi geliştirilmiştir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 594 Goat Anti-Mouse IgG(H+L)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A11005</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CoraLite488-conjugated Affinipure Goat Anti-Mouse IgG(H+L)</td>
			<td>Proteintech</td>
			<td>SA00013-1</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>TCS SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Quest software</td>
			<td>Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Hank&#39;s balanced salt solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14170112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZ2-ILST</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10099-141C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forskolin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F6886-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoroshield Mounting Medium</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab104135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixation medium/Permeabilization medium</td>
			<td>Multi Sciences (LIANKE) Biotech, Co., LTD</td>
			<td>GAS005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometry</td>
			<td>Becton Dickinson Biosciences</td>
			<td>FACS Calibur</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG1 kappa [MOPC-21] (FITC) - Isotype Control</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab106163</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse monoclonal anti-CD90 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab225</td>
			<td>Dilution: 1:1000 for ICC, 0.1 &#181;g for 106 cells for Flow Cyt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-S100 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab212816</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polylysine (PLL)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human NRG1-beta 1/HRG1-beta 1 EGF Domain Protein</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>396-HB-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% (w/v) trypsin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200-072</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

purification of fibroblasts and schwann cells from sensory and motor nerves in vitro

Periferik sinir sistemindeki başlıca hücreler Schwann hücreleri (SCs) ve fibroblastlardır. Her iki hücre de sinir rejenerasyonunu etkileyen nörotrofik faktör gen ekspresyonu ve diğer biyolojik süreçlerin farklı desenlerinde yer alan duyusal ve motor fenotipleri belirgin bir şekilde ifade eder. Bu çalışma, yüksek oranda saflaştırılmış sıçan duyusal ve motor SC'leri ve fibroblastları daha hızlı elde etmek için bir protokol oluşturmuştur. Yenidoğan sıçanlarının ventral kökü (motor sinir) ve dorsal kökü (duyusal sinir) ayrıştırıldı ve hücreler 4-5 gün boyunca kültürlendi, ardından ayırıcı sindirim ve diferansiyel yapışma yöntemlerini sırayla birleştirerek duyusal ve motor fibroblastlar ve SC'lerin izolasyonu yapıldı. İmmünositokimya ve akış sitometrisi analizlerinin sonuçları duyusal ve motor SC'lerin ve fibroblastların saflığının %gt;90 olduğunu gösterdi. Bu protokol duyusal ve motor sinir rejenerasyonu keşfine katkıda, duyusal ve motor fibroblastlar / SCs çok sayıda elde etmek için kullanılabilir.

Işık mikroskobik gözlem SC'ler ve fibroblastlar sinir dokularından primer hücre kültüründe elde edilen iki ana hücre popülasyonudur. 1 saat için aşılama sonra, hücrelerin çoğu çanak altına yapışmış ve hücre morfolojisi yuvarlak oval değişti. 24 saat kültürden sonra, SC'ler bipolar veya tripolar morfoloji sergilediler ve bunların uzunluğu 100 ile 200 m arasında değişmektedir. 48 saat sonra, hücrelerin toplanması ve çoğalması meydana ...

Watch this Scientific Journal Video about Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro at JoVE.com

Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro

Burada, fibroblastlar ve Schwann hücrelerini in vitro olarak duyusal ve motor sinirlerden arındırmak için bir yöntem salıyoruz.

Fibroblastların ve Schwann Hücrelerinin İn vitro duyusal ve motor sinirlerden arındırması

The principal cells in the peripheral nervous system are the Schwann cells (SCs) and the fibroblasts. Both these cells distinctly express the sensory and ...

Bu protokol sensör ve motor fibroblast ve Schwann hücrelerinin hızla çok sayıda elde etmek için kullanılabilir. Bu mesaj la elde edilen hücreler sinir rejenerasyonu ve sinir sistemi hastalıkları nın incelenmesinde kullanılabilir. Diferansiyel sindirim adımının zamanını daha iyi kontrol etmek ve deneysel adımların anlaşılmasını kolaylaştırmak için deneyselliği temsil edebileceğimizi gösteriyoruz.Patlamak için arka deride üç santimetrelik bir kesi yapmak için makas kullanın. Omuriliği çıkar. Omuriliği ortaya çıkarmak için vertebrakanalını dikkatlice açın.Bir 60 milimetre Petri çanak içinde omurilik Dantel, buz soğuk D Hanks bir diseksiyon mikroskop altında tuz çözeltisi dengeli üç ila dört mililitre ile, ventral kök ve dorsal kök çıkarmak. Buz soğuk D Hanks dengeli tuz çözeltisi yerleştirin. HBSS çıkardıktan sonra, makas ile, üç ila beş milimetrelik parçalar halinde sinirlerdilim.0.25% tripsin bir mililitre ekleyin ve beş mililitre santrifüj tüpler için sinir parçaları aktarın. 37 derecede 18-20 dakika kuluçkaya yat. Daha sonra, sindirimi durdurmak için, % 10 fetal sığır serumu içeren DMEM üç ila dört mililitre ekleyin.Pipet karışımı yukarı ve aşağı yavaşça yaklaşık 10 kez. 5 dakika boyunca 800 kez G'de santrifüj. Santrifüjden sonra supernatant atın.Ve dmem 2-3 mililitre% 10 FBS ile takviye çökelti yeniden askıya. Hücre süspansiyonuna 400 örgü filtresinden süzün ve ardından 60 milimetrelik Petri kabını aşılamak için süspansiyonu kullanın. Petri tabaklarını %5 karbondioksit varlığında 37 santigrat derecede 4-5 gün kuluçkaya yatırın.Kültür %90 birleştiğinde, hücreleri 1XPBS kullanarak bir kez yıkayın. Sonra, Schwann hücreleri sindirmek için, 60 milimetre çanak başına 37 santigrat derece 0.25% tripsin bir mililitre ekleyin. Oda sıcaklığında sekiz ila 10 saniye sonra, sindirimi durdurmak, DMEM üç mililitre ekleyerek 10% FBS ile takviye.Schwann hücrelerini ayırmak için, yavaşça bir pipet ile hücre üzerinde darbe. Hücrelerin ayrı olduğunu mikroskopla doğrulayın. Sonra Kuğu hücreleri içeren orta toplamak ve beş dakika boyunca 800 kez G santrifüj.Supernatant atın ve orta üç mililitre çökelti yeniden askıya. Kaplamasız 60 milimetre Petri tabaklarını aşılamak için bu süspansiyonu kullanın ve 37 santigrat derecede 30 ila 45 dakika boyunca bulaşıkları kuluçkaya yatırın. Bir Poly L lizin kaplı orta çanak Schwann hücreleri içerecek ve iki gün boyunca 37 derece santigrat de çanak kuluçka orta için markalar.Schwann hücreleri içeren orta çıkardıktan sonra 1XPBS ile Petri yemekleri yapışarak, fibroblastlar yıkayın. Fibroblastları sindirmek için, 37 santigrat derecede bir mililitre 0.25% tripsin ekleyin. 37 santigrat derece iki dakika devam etmek için sindirim izledikten sonra, DMEM ekleyerek sindirimi sona erdirmek 10% FBS ile takviye.Fibroblastlar ayırmak için, çanak alt darbe için bir pipet kullanın. Fibroblastlar da dahil olmak üzere orta toplamak ve santrifüj tüplere aktarın. Tüpleri 800 kez G'de beş dakika santrifüj edin.Supernatant atın ve% 10 FBS içeren DMEM iki mililitre ile çökelti yeniden askıya. Hücreleri kodlanmamış, 60 milimetre, Petri kapları ve 37 derecede 30 ila 45 dakika kuluçkaya yatırın. Büyüme ortamını çıkararak ve atarak Petri kaplarına yapışacak fibroblastları izole edin.DMEM üç mililitre ekleyin 10% FBS ile tamamlanır. 37 derecede iki gün boyunca bir hücre %90'a ulaşana kadar kuluçkaya yat. Diferansiyel sindirimi ve bağlılığı tekrarlayın.İki gün boyunca fibroblastlar ve Schwann hücrelerine geçiş kültürden sonra, hücreleri sindirmek, onları toplamak ve onları saymak. ICC boyama için iyi başına bu hücrelerin bir kez 10 konsantrasyonda PLL kaplı slaytlar aşılamak. Bay kontrast mikroskopisi izolasyon süreci boyunca kültürlü Schwann hücrelerinin ve fibroblastların morfolojisini gösterir.Uzun bir kültür süresinden sonra Schwann hücreleri fibroblastlar arasında veya fibroblastların yüzeyinde bir araya getirildi. 10 saniye sindirimi nden sonra, kırmızı oklarla gösterilen Schwann hücreleri yuvarlaktı, fibroblastlar düz kalırken ve yemeğin dibine bağlıydı. Diferansiyel sindirim ve diferansiyel bağlılık ile izolasyon sonrası dört hücre tipinde de tipik hücre morfolojileri gözlendi.Motor fibroblastlar, duyusal fibroblastlar, motor Schwann hücreleri ve duyusal Schwann hücreleri. Duyusal ve motor fibroblastlar koni odak lazer tarama mikroskobu kullanılarak görselleştirildi. Fibroblastlar hücre çekirdeğini etiketlemek için CD 90 X33342 boyasına karşı antikorlarla boyandı.Fibroblastların immünboyama ve nükleer boyama ile birleştirilmiş görüntüleri, cd 90 ve hexed ortak etiketli hücrelerin%92.51 ve %92.64'ünün motor ve duyusal fibroblastlarda bulunduğunu göstermiştir. Duyusal ve motor Schwann hücreleri konfokal lazer tarama mikroskobu kullanılarak görselleştirildi. Schwann hücreleri s100 X33342 boya karşı antikorlar ile boyanmış hücre çekirdekleri etiketlemek için kullanılmıştır.Kuğu hücre immünboyama ve nükleer boyama birleştirme görüntüleri sırasıyla, motor ve duyusal Schwann hücrelerinde% 91.61 ve% 93.56 S100 varlığını gösterdi ve hexed co-etiketli hücreler, sırasıyla. Hücre saflığı da akış sitometrisi kullanılarak analiz edildi. Fibroblast kültürlerinde hücrelerin yaklaşık %90'ı fibroblastlar, FCA grafiklerinde M2 ile gösterilirken, geri kalan hücreler Schwann hücreleridir.Schwann hücre kültürlerinde hücrelerin %92'den fazlası Schwann hücreleriydi, fca grafiklerinde m2 ile gösterilirken, geri kalan hücreler fibroblastlardı. Bu protokol nadiren sensör ve fibroblastların motor sinir rejenerasyon mekanizması başlatmak için yararlıdır, ve Schwann hücreleri nakli, sinir rejenerasyonu teşvik etmek.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Culture of Primary Motor and Sensory Neurons in Defined Media on Electrospun Poly-L-lactide Nanofiber Scaffolds

Kültür İlköğretim Motor ve Electrospun Poli-L-lactide Nanofiber Yapı iskeleleri Tanımlı Medya Duyu Nöronlar

Electrospinning is a technique for producing micro- to nano-scale fibers. Fibers can be electrospun with varying degrees of alignment, from highly aligned ...

Live-imaging of PKC Translocation in Sf9 Cells and in Aplysia Sensory Neurons

Canlı görüntüleme Sf9 Hücreler ve PKC Translokasyon Aplysia Duyu Nöronlar

Protein kinase Cs (PKCs) are serine threonine kinases that play a central role in regulating a wide variety of cellular processes such as cell growth and ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Bozulmamış Duyu Organ Öncü Hücreler Canlı hücre Görüntüleme Drosophila Pupa

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Isolation and Culture of Dissociated Sensory Neurons From Chick Embryos

Civciv Embriyolar itibaren İzolasyon ve Disosiye Duyu Nöronlar Kültür

Neurons are multifaceted cells that carry information essential for a variety of functions including sensation, motor movement, learning, and memory. ...

Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells

Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells

Kaldırılması<em&gt; Drosophila</emDuyu Nöronlar ve Epidermal Hücre İmmünofloresan Analizi Larvaların Fileto dan&gt; Kas Dokusu

Drosophila larval dendritic arborization (da) neurons are a popular model for investigating mechanisms of neuronal morphogenesis. Da neurons develop in ...

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog (Rana catesbeiana)

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog Rana catesbeiana

Amerikan Bullfrog of sacculus (Saç Hücrelerinin fizyolojik hazırlanması<em&gt; Rana catesbeiana</em&gt;)

The study of hearing and balance rests upon insights drawn from biophysical studies of model systems. One such model, the sacculus of the American ...

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebra balığı<em&gt; Situ</em&gt; Omurilik Omurilik duyusal ve motor nöronlar gelen Elektrofizyolojik Recordings Hazırlık

Zebrafish, first introduced as a developmental model, have gained popularity in many other fields. The ease of rearing large numbers of rapidly developing ...

Analysis of Immune Cells in Single Sciatic Nerves and Dorsal Root Ganglion from a Single Mouse Using Flow Cytometry

Bağışıklık hücreleri tek siyatik sinirleri ve Dorsal kök gangliyon üzerinden tek bir fare kullanarak Akış Sitometresi Analizi

Nerve-resident immune cells in the peripheral nervous system (PNS) are essential to maintaining neuronal integrity in a healthy nerve. The immune cells of ...

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Oküler kinematik Vitro uyarılması kaplumbağa kranial sinirler tarafından ölçülen

After animals are euthanized, their tissues begin to die. Turtles offer an advantage because of a longer survival time of their tissues, especially when ...

In Vivo Calcium Imaging of Lateral-line Hair Cells in Larval Zebrafish

Larva zebra balığı sonradan içini kaplamak saç hücrelerinin vivo kalsiyum görüntüleme

Sensory hair cells are mechanoreceptors found in the inner ear that are required for hearing and balance. Hair cells are activated in response to sensory ...