Ekstracellulær multienhedsoptagelse fra teleosts olfaktoriske nerve

Dette er den mest robuste og følsomme metode til vurdering af olfaktoriske følsomhed i marine fisk, da det registrerer et rent sensorisk signal forud for enhver behandling af CNS. De største fordele ved denne teknik er dens følsomhed, og at den let kan overføres til en anden art fra et andet miljø uafhængigt af ekstern saltholdighed. For at forberede kontrolvandet skal du indsamle en liter kulfiltreret havvand og bruge en pH-sonde til at kontrollere pH-prisen.

PH skal være omkring 8,2. Hvis det ikke er tilfældet, boble havvandet med atmosfærisk luft, indtil en pH-8,2 er nået. Dernæst skal du bruge en alkalinitet titrator til at måle alkalinitet af vandet, derefter måle vandtemperaturen og saltholdighed.

For at forberede højt kuldioxidvand filtreres en liter havvand gennem partikelinaktiverede kulfiltre, før du bobler med kuldioxid, indtil den ønskede pH-pH er nået. Brug en pH-sonde til at kontrollere pH, som skal være omkring 7,7, derefter bruge en alkalinitet titrator til at måle alkalinitet af vandet og måle vandtemperaturen og saltholdighed. For at bestemme kuldioxidtrykket i både kontrol og højt kuldioxidvand skal du åbne et softwareprogram, der er designet til at beregne kuldioxidparametre i vand og tilsætte vandsaltighed, temperatur, tryk, total alkalinitet og pH-værdier i indgangsvinduet.

Vælg derefter konstanter, skalaer og enheder, og klik på processen for at bestemme kuldioxidtrykket. Efter at have bekræftet et passende niveau af sedation ved manglende reaktion på hale knivspids, placere bedøvet fisk på en pude støtte tilpasset til modellen og placere en passende størrelse silicium rør i fiskens mund. Røret er forbundet til en dykpumpe, og et bedøvelsesreservoir, der indeholder luftet havvand og vand, pumpes over gællerne i ca. 100 milliliter pr. minut pr. kg.

Dernæst indsætte en jordforbindelse pin i flanken muskel og forbinde stiften til hovedet fase af forstærkeren. Dæk fisken med fugtig klud med kun hovedet eksponeret og placer røret med stimulus fremføringssystemet i næseboret. At udsætte olfaktoriske nerver, bruge en boremaskine og en dissekere mikroskop til at fjerne hud og knogler i kraniet mellem øjnene.

Når du bruger en guldbrasen, bruge en rundsav til at fjerne den del af kraniet umiddelbart over øjnene til bare posterior til øjnene og bruge boret til at fjerne knoglen mellem øjnene. Når tilstrækkelig knogle er blevet ryddet, bruge fine kraftforsyn til at fjerne fedt og bindevæv overliggende olfaktoriske nerver uden at beskadige nerver eller fartøjer. Rengør elektroderne før brug ved at forbinde dem til den negative pol af en tre volt DC kilde og placere spidsen i fysiologisk saltvand i 20 til 30 sekunder.

En lind strøm af små bobler skal ses kommer fra spidsen. Tilslut parylen-belagt wolfram elektroder til hovedet fase af en vekselstrøm AC forforstærker. Når olfaktoriske nerver er blevet udsat, skal du bruge mikromanipulatorer til at indsætte elektroderne i den relevante olfaktoriske nerve i en position, der giver en maksimal reaktion på standarden og en minimal reaktion på det tomme.

Forudsat dissektion er gået glat, det kritiske skridt er at få elektroderne i den korrekte position. Dette kan tage tid og indebærer en vis grad af trial and error. For at opnå elektrofysiologiske aflæsninger, bruge en solenoid drives tre-vejs ventil til at oprette en stimulus leveringssystem til at tillade hurtig skift fra ren baggrund vand til stimulus indeholdende vand og forbinde den fælles stikkontakt til røret transporterer vand til olfaktoriske roset.

Placer den ene linje i baggrunden havvand og den anden i testopløsningen. Tilslut ventildriveren til udløseren af en analog digital konverter, og konfigurer softwaren til at starte optagelsen ved udløserhændelsen og fortsætte i en forudbestemt periode. For at kontrollere præparatets stabilitet registreres og måles amplituden af det integrerede respons gentagne gange med den standard, der tillader et minut at gå mellem successive stimuli.

Dernæst registrere olfaktoriske nerve reaktioner på aminosyrer i kontrol havvand, og lad et minut at gå mellem successive stimuli, derefter registrere svaret på en gange 10 til den negative tredje kindtand serin i en kontrol vand blank opløsning. Derefter registrere olfaktoriske nerve reaktioner på aminosyrer i høj kuldioxid havvand. Reaktionen på en høj kuldioxid vand blank opløsning og reaktionen på en gange 10 til den negative tredje kindtand serin i en kontrol vand blank opløsning.

Her vises typiske reaktioner på positive og negative kontrolstimuli, der er registreret fra olfaktoriske nerve af en guldbrasen. Inden for omkring et sekund af stimulus ansøgning, en hurtig stigning i aktiviteten kan observeres efterfulgt af en periode med indkvartering, mens stimulus er stadig til stede, og en tilbagevenden til baseline aktivitet, når stimulus er afsluttet. I modsætning hertil fremkalder en tom stimulus ringe eller ingen reaktion.

I denne typiske koncentrationsresponskurve kan det bemærkes, at stigende koncentrationer af et lugtmiddel kan fremkalde stadig større stigninger i aktiviteten og derfor amplitude af de integrerede reaktioner. Plotning af de normaliserede data og den tilsvarende lineære regression gør det muligt at anslå påvisningstærsklen for koncentrationsresponser for hvert dyr eller en gruppe dyr. Sigmoidal koncentration respons kurver kan afbildes semi-logaritmisk, så beregningen af lugtstof koncentration, der fremkalder på 50% maksimal respons.

Det er vigtigt at holde fiskene så sunde som muligt. Sørg for eksempel for, at gællerne er tilstrækkeligt vandede, og at olfaktoriske epitel holdes vådt under optagelsen. Et af vores mål er at spore de neurale veje i hjernen, hvor de sensoriske oplysninger videresendes.