Name: adaptable angled stereotactic approach for versatile neuroscience techniques
Uploaded: 2020-05-07T13:30:00
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Diese Arbeit wurde unterstützt durch die Stipendien des National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases (NIDDK) F31-DK-113673 (C.L.F.), T32-GM-095421 (C.L.F.), DK-089056 (G.J.M.), einen American Diabetes Association Innovative Basic Science Award (#1-19-IBS-192 an G.J.M.) und das NIDDK-finanzierte Nutrition Obesity Research Center (DK-035816), Diabetes Research Center (DK-017047) und Diabetes, Adipositas und Stoffwechsel Training Grant T32 DK0007247 (T.H.M) an der University of Washington.

Alle Verfahren wurden in Übereinstimmung mit den National Institutes of Health, dem Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Tieren, genehmigt und sowohl vom Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) als auch von Environmental Health and Safety an der University of Washington genehmigt.
1. Berechnung von Winkelkoordinaten
<ol><li>Markieren Sie mit einem koronalen Hirnatlas ein rechtwinkliges Dreieck, so dass die Hypotenuse die Zielregion von Interesse passiert. Im repräsentat...

<ol>
	<li>King, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+rise,+fall,+and+resurrection+of+the+ventromedial+hypothalamus+in+the+regulation+of+feeding+behavior+and+body+weight.">The rise, fall, and resurrection of the ventromedial hypothalamus in the regulation of feeding behavior and body weight.</a> Physiology and Behavior. 87, 221-244 (2006).</li><li>Boyden, E. S., Zhang, F., Bamberg, E., Nagel, G., Deisseroth, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Millisecond-timescale,+genetically+targeted+optical+control+of+neural+activity.">Millisecond-timescale, genetically targeted optical control of neural activity.</a> Nature Neuroscience. 8, 1263-1268 (2005).</li><li>Roth, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DREADDs+for+Neuroscientists.">DREADDs for Neuroscientists.</a> Neuron. 89, 683-694 (2016).</li><li>Richevaux, L., Schenberg, L., Beraneck, M., Fricker, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+Intracerebral+Stereotaxic+Injections+for+Optogenetic+Stimulation+of+Long-Range+Inputs+in+Mouse+Brain+Slices.">In Vivo Intracerebral Stereotaxic Injections for Optogenetic Stimulation of Long-Range Inputs in Mouse Brain Slices.</a> Journal of Visualized Experiments. , e59534 (2019).</li><li>Fricano-Kugler, C. J., Williams, M. R., Luikart, B., Salinaro, J. R., Li, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designing,+packaging,+and+delivery+of+high+titer+crispr+retro+and+lentiviruses+via+stereotaxic+injection.">Designing, packaging, and delivery of high titer crispr retro and lentiviruses via stereotaxic injection.</a> Journal of Visualized Experiments. , e53783 (2016).</li><li>McSweeney, C., Mao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applying+Stereotactic+Injection+Technique+to+Study+Genetic+Effects+on+Animal+Behaviors.">Applying Stereotactic Injection Technique to Study Genetic Effects on Animal Behaviors.</a> Journal of Visualized Experiments. (99), e52653 (2015).</li><li>Lowell, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+Neuroscience+of+Homeostasis+and+Drives+for+Food,+Water,+and+Salt.">New Neuroscience of Homeostasis and Drives for Food, Water, and Salt.</a> New England Journal of Medicine. 380, 459-471 (2019).</li><li>Sidor, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+optogenetic+stimulation+of+the+rodent+central+nervous+system.">In vivo optogenetic stimulation of the rodent central nervous system.</a> Journal of Visualized Experiments. , e51483 (2015).</li><li>Faber, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+Neuronal+Projections+from+the+Hypothalamic+Ventromedial+Nucleus+Mediate+Glycemic+and+Behavioral+Effects.">Distinct Neuronal Projections from the Hypothalamic Ventromedial Nucleus Mediate Glycemic and Behavioral Effects.</a> Diabetes. 67, 2518-2529 (2018).</li><li>Berndt, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+foundations+of+optogenetics:+Determinants+of+channelrhodopsin+ion+selectivity.">Structural foundations of optogenetics: Determinants of channelrhodopsin ion selectivity.</a> Proceedings of the National Academy of Scences. 113, 822-829 (2016).</li><li>Faber, C. L., Matsen, M. E., Meek, T. H., Krull, J. E., Morton, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+customizable+procedure+for+angled+stereotaxic+implantation+and+microinjection+in+the+rodent+brain.">A customizable procedure for angled stereotaxic implantation and microinjection in the rodent brain.</a> Kopf Carrier. 96, (2019).</li><li>Correia, P., Matias, S., Mainen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereotaxic+Adeno-associated+Virus+Injection+and+Cannula+Implantation+in+the+Dorsal+Raphe+Nucleus+of+Mice.">Stereotaxic Adeno-associated Virus Injection and Cannula Implantation in the Dorsal Raphe Nucleus of Mice.</a> Bio-Protocol. 7, 2549 (2017).</li><li>Cardozo Pinto, D. F., Lammel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hot+topic+in+optogenetics:+new+implications+of+in+vivo+tissue+heating.">Hot topic in optogenetics: new implications of in vivo tissue heating.</a> Nature Neuroscience. 22, 1039-1041 (2019).</li></ol>

Jüngste Fortschritte in den Neurowissenschaften haben fortgeschrittene Einblicke und Verständnis für die Aktivität und Funktion von Gehirnneuroschaltkreisen unterstützt. Dazu gehört die Anwendung optogenetischer und chemogenetischer Technologien zur Aktivierung oder Stille diskreter neuronaler Populationen und ihrer Projektionsstellen in vivo. In jüngerer Zeit wurden gentechnisch kodierte Calciumindikatoren (z. B. GCaMP, RCaMP) und andere fluorometrische Biosensoren (z. B. Dopamin, Noradrenalin) zur in vivo-Aufzei...

Die neuronale Steuerung von Verhalten, Fütterung und Stoffwechsel beinhaltet die Koordination hochkomplexer, integrativer und redundanter Neuroschaltkreise. Ein treibendes Ziel der Neurowissenschaften ist es, die Beziehung zwischen neuronaler Schaltkreisstruktur und -funktion zu analysieren. Obwohl klassische neurowissenschaftliche Werkzeuge (d. H. Läsionierung, lokale pharmakologische Injektionen und elektrische Stimulation) wichtiges Wissen über die Rolle bestimmter Gehirnregionen, die Verhalten und Stoffwechsel steuern, aufgedeckt haben, sind diese Werkzeuge durch ihre mangelnde Spezifität und Reversibilität begrenzt1.
Jüngste Fortschritte im Bereich der Neurowissenschaften haben die Fähigkeit, die Schaltungsfunktion zelltypspezifisch mit hoher raumzeitlicher Auflösung abzufragen und zu manipulieren, erheblich verbessert. Optogenetische2- und chemogenetische3-Ansätze ermöglichen beispielsweise die schnelle und reversible Manipulation der Aktivität in genetisch definierten Zelltypen frei beweglicher Tiere. Optogenetik beinhaltet die Verwendung von lichtempfindlichen Ionenkanälen, sogenannten Channelrhodopsinen, zur Steuerung der neuronalen Aktivität. Der Schlüssel zu dieser Technik ist die Genabgabe von Channelrhodopsin und einer Lichtquelle zur Aktivierung des Opsins. Eine gängige Strategie für die Genabgabe ist eine Kombination aus 1) gentechnisch veränderten Mäusen, die Cre-Recombinase in diskreten Neuronen exprimieren, und 2) Cre-abhängigen viralen Vektoren, die Channelrhodopsin kodieren.
Während die Optogenetik ein elegantes, hochpräzises Mittel zur Kontrolle der neuronalen Aktivität bietet, ist die Methode von einer erfolgreichen stereotaktischen Mikroinjektion des viralen Vektors und der faseroptischen Platzierung in einer definierten Gehirnregion abhängig. Obwohl stereotaktische Verfahren im modernen neurowissenschaftlichen Labor üblich sind (und es gibt mehrere ausgezeichneteProtokolle,die dieses Verfahren beschreiben)4,5,6, stellt die Fähigkeit, diskrete Hirnregionen entlang der Mittellinie (d.h. den mediobasalen Hypothalamus, ein für die Regulation homöostatischer Funktionen kritisches Hirnareal7)konsistent und reproduzierbar anzusprechen, zusätzliche Herausforderungen dar. Zu diesen Herausforderungen gehören die Vermeidung des oberen sagittalen Sinus, des dritten Ventrikels und der angrenzenden hypothalamischen Kerne. Darüber hinaus gibt es erhebliche räumliche Einschränkungen bei der bilateralen Implantation von Hardware, die für Hemmungsstudien erforderlich ist. Mit diesen Herausforderungen im Hinterkopf stellt dieses Protokoll ein modifizierbares Verfahren dar, um diskrete Gehirnregionen über einen abgewinkelten stereotaktischen Ansatz anzusprechen.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Fiberoptic Cannulae</td>
			<td>Doric Lenses</td>
			<td>MFC_200/230-0.57_###_MF1.25_FLT</td>
			<td>Customizable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kopf Model 1900 Stereotaxic Alignment System</td>
			<td>Kopf</td>
			<td>Model 1900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kopf Model 1900-51 Center Height Gauge</td>
			<td>Kopf</td>
			<td>Model 1900-51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kopf Model 1905 Alignment Indicator</td>
			<td>Kopf</td>
			<td>Model 1905</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kopf Model 1911 Stereotaxic Drill</td>
			<td>Kopf</td>
			<td>Model 1911</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kopf Model 1915 Centering Scope</td>
			<td>Kopf</td>
			<td>Model 1915</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kopf Model 1922 60-Degree Non-Rupture Ear Bars</td>
			<td>Kopf</td>
			<td>Model 1922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kopf Model 1923-B Mouse Gas Anesthesia Head Holder</td>
			<td>Kopf</td>
			<td>Model 1923-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kopf Model 1940 Micro Manipulator</td>
			<td>Kopf</td>
			<td>Model 1940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro4 Microinjection System</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>--</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse bone screws</td>
			<td>Plastics One</td>
			<td>00-96 X 1/16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotaxic Cannula Holder, 1.25mm ferrule</td>
			<td>Thor Labs</td>
			<td>XCL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Drill</td>
			<td>Cell Point Scientific</td>
			<td>Ideal Micro Drill</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

adaptable angled stereotactic approach for versatile neuroscience techniques

Stereotaktische Chirurgie ist ein wesentliches Werkzeug im modernen neurowissenschaftlichen Labor. Die Fähigkeit, schwer erreichbare Hirnregionen präzise und genau anzusprechen, stellt jedoch immer noch eine Herausforderung dar, insbesondere wenn gehirne Strukturen entlang der Mittellinie anvisiert werden. Zu diesen Herausforderungen gehören die Vermeidung des oberen sagittalen Sinus und des dritten Ventrikels sowie die Fähigkeit, selektive und diskrete Gehirnkerne konsequent anzusprechen. Darüber hinaus beruhen fortgeschrittenere neurowissenschaftliche Techniken (z. B. Optogenetik, Faserphotometrie und Zwei-Photonen-Bildgebung) auf der gezielten Implantation signifikanter Hardware in das Gehirn, und räumliche Einschränkungen sind ein häufiges Hindernis. Hier wird ein modifizierbares Protokoll für das stereotaktische Targeting von Nagetier-Gehirnstrukturen mit einem abgewinkelten koronalen Ansatz vorgestellt. Es kann an 1) Maus- oder Rattenmodelle, 2) verschiedene neurowissenschaftliche Techniken und 3) mehrere Gehirnregionen angepasst werden. Als repräsentatives Beispiel umfasst es die Berechnung stereotaktischer Koordinaten für das Targeting des hypothalamischen ventromedialen Kerns der Maus (VMN) für ein optogenetisches Inhibitionsexperiment. Dieses Verfahren beginnt mit der bilateralen Mikroinjektion eines Adeno-assoziierten Virus (AAV), das einen lichtempfindlichen Chloridkanal (SwiChR++) zu einem Cre-abhängigen Mausmodell kodiert, gefolgt von der abgewinkelten bilateralen Implantation von faseroptischen Kanülen. Mit diesem Ansatz zeigen die Ergebnisse, dass die Aktivierung einer Untergruppe von VMN-Neuronen für intakte Glukose-Gegenregelreaktionen auf insulininduzierte Hypoglykämie erforderlich ist.

Dieses Protokoll beschreibt einen chirurgischen Eingriff zur Durchführung optogenetischer Studien, um die Rolle hypothalamischer VMN-Neuronen bei der glykämischen Kontrolle zu untersuchen9. Zuerst wurde ein standardmäßiger (nicht abgewinkelter) stereotaktischer Ansatz für die bilaterale Mikroinjektion eines inhibitorischen Channelrhodopsinvirus in das VMN verwendet. Während auch ein abgewinkelter Ansatz geeignet wäre, wurde der Standardansatz (nicht abgewinkelter Ansatz) gewählt, da er aus...

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Adaptable Angled Stereotactic Approach for Versatile Neuroscience Techniques

Hier wird ein stereotaktisches Verfahren beschrieben, das mit einem abgewinkelten koronalen Ansatz auf herausfordernde und schwer zugängliche Hirnregionen (aufgrund räumlicher Einschränkungen) abzielen kann. Dieses Protokoll ist sowohl an Maus- als auch an Rattenmodelle anpassbar und kann auf verschiedene neurowissenschaftliche Anwendungen angewendet werden, einschließlich Kanülenimplantation und Mikroinjektionen viraler Konstrukte.

Anpassbarer winkelster stereotaktischer Ansatz für vielseitige neurowissenschaftliche Techniken

Stereotactic surgery is an essential tool in the modern neuroscience lab. However, the ability to precisely and accurately target difficult-to-reach brain ...

This protocol is significant as it is an adaptable, stereotactic procedure that can be utilized in both mice and rats, and can be applied to many new neuroscientific techniques. The main advantage of this adaptable stereotactic procedure is it's ability to be used to target challenging and difficult-to-reach regions of the brain. Demonstrating the procedure will be Chelsea Faber, a young, talented post-doctoral research fellow in the laboratory.After confirming that the frame and micromanipulator have been calibrated, place the center height gauge into the socket of the head holder baseplate. Secure the centering scope in the tool holder and sight down the scope. Adjust the position of the micromanipulator until the crosshairs are aligned and focused on the gauge crosshairs, and place the ear bars into the holders such that the indicator lines on both sides are at zero.Use the medial-lateral and anterior-posterior knobs on the head holder to centerline the ear bars in the X and Y planes above the crosshair of the center height gauge. To align the ear bar position in the Z-axis, remove the ear bars from the holder and remove the center height gauge. Then, replace the ear bars and re-center the bars at zero.Then, sight down the scope again, and use the vertical shift and coronal tilt knobs respectively to lower and rotate the ear bars until the scope crosshairs remain centered between the ear bars throughout coronal rotation. To align the central axis of rotation for angled coordinates, secure the centering scope in the tool holder and position the micromanipulator to the calculated coordinate. Note that the right/left coordinate for the angled implantation corresponds to the length of side A.Sighting down the scope, mark this coordinate to represent the point at which the cannula will enter the brain, once the head is rotated.Reposition the micromanipulator over the midline, and use the coronal tilt knob to rotate the head to the calculated angle. If the scope crosshairs do not line up with the reference mark, use the vertical shift knob to adjust the head position in the Z-axis until the crosshairs line up as close as possible to the mark. At this point, the arbitrary point of rotation should be aligned with the center of rotation of the stereotax.Rotate the head back to the zero degree coronal position before proceeding to subsequent drilling and microinjection steps. After performing the microinjection, return the head to the zero degree level position, and use a hand drill to place two holes, anteriorly, and two holes, posteriorly, far enough from the angled coordinate burr holes to accommodate the ferrule portion of the fiberoptic that sits above the skull. When all of the holes have been drilled, use a small flathead screwdriver to insert the bone screws as gently as possible, such that they sit firmly in the skull without penetrating the brain.Clamp a fiberoptic cannula into the cannula holder, and place the cannula holder in the tool holder. Rotate the head to the calculated angle, noting that the coordinates of the micromanipulator do not apply to the new tool. Use the center of the angled burr holes as the implantation target.Lower the fiber optic until it just touches the dura within the center of the burr hole, and zero the micromanipulator in the Z-axis. Slowly lower the fiberoptic to the dorsal ventral angled coordinate, then use cyanoacrylate gel to connect the fiber optic ferrule to the ipsilateral anchor screws. Use a micropipette tip to apply an accelerant.Once the gel has completely hardened, gently loosen and raise the cannula holder until it is clear of the ferrule. Implant the second fiberoptic to the contralateral angled coordinate, then level the head. For extra security, use the cyanoacrylate gel and accelerant to make an additional connection between the two angled fiberoptic cannulas, and apply a small, relatively thin amount of dental cement to the surface of the skull, taking care to thoroughly cover the anchor screws and the base of the fiberoptic cannulas.To interrogate the role of hypothalamus ventromedial nucleus neurons in glycemic control, in this representative analysis, a standard, non-angled, stereotactic approach was utilized for the bilateral microinjection of an inhibitory channel rhodopsin virus to the ventromedial nucleus. Given the proximity of the ventromedial nucleus to the midline, space constraints did not permit a non-angled implantation of bilateral fiberoptics, necessitating the development of a surgical strategy for precisely implanting fiberoptics at an angle. The most important things to remember are to simply be patient and to take your time, as being consistent and accurate with your coordinate assignments is critical to success.This procedure can be adapted and applied to any neuroscientific method requiring microinjection or implantation into the rodent brain, including chemogenetics, optogenetics, and fiber photometry approaches.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

A Novel Approach for Documenting Phosphenes Induced by Transcranial Magnetic Stimulation

Ein neuer Ansatz zur Dokumentation Phosphenes durch TMS induzierte

Stimulation of the human visual cortex produces a transient perception of light, known as a phosphene. Phosphenes are induced by invasive electrical ...

Forschung

Neurowissenschaften

High Density Event-related Potential  Data Acquisition in Cognitive Neuroscience

High Density Event-Related Potential Data Acquisition in Cognitive Neuroscience

Functional magnetic resonance imaging (fMRI) is currently the standard method of evaluating brain function in the field of Cognitive Neuroscience, in part ...

Rodent Stereotaxic Surgery and Animal Welfare Outcome Improvements for Behavioral Neuroscience

Rodent stereotaktischen Chirurgie und Tierschutz Outcome Verbesserungen für Behavioral Neuroscience

Stereotaxic surgery for the implantation of cannulae into specific brain regions has for many decades been a very successful experimental technique to ...

A Fully Automated and Highly Versatile System for Testing Multi-cognitive Functions and Recording Neuronal Activities in Rodents

Ein vollautomatisiertes und vielseitig verwendbares System zum Testen von Multi-kognitiven Funktionen und Aufnahme neuronaler Aktivitäten bei Nagetieren

We have developed a fully automated system for operant behavior testing and neuronal activity recording by which multiple cognitive brain functions can be ...

Investigating the Function of Deep Cortical and Subcortical Structures Using Stereotactic Electroencephalography: Lessons from the Anterior Cingulate Cortex

Die Untersuchung der Funktion von Deep kortikalen und subkortikalen Strukturen Mit Stereotaktische Elektroenzephalographie: Lehren aus der anterioren cingulären Cortex

Stereotactic Electroencephalography (SEEG) is a technique used to localize seizure foci in patients with medically intractable epilepsy. This procedure ...

Limbal Approach-Subretinal Injection of Viral Vectors for Gene Therapy in Mice Retinal Pigment Epithelium

Limbus-Ansatz-Subretinale Injektion von viralen Vektoren für die Gentherapie bei Mäusen Retinapigmentepithel

The eye is a small and enclosed organ which makes it an ideal target for gene therapy. Recently various strategies have been applied to gene therapy in ...

A Simple Alternative to Stereotactic Injection for Brain Specific Knockdown of miRNA

Eine einfache Alternative zur stereotaktische Injektion für Hirnspezifische Knockdown von miRNA

MicroRNAs (miRNAs) are key regulators of gene expression.  In the brain, vital processes like neurodevelopment and neuronal functions depend on the ...

Endoscopic Endonasal Trans-sphenoidal Approach: Minimally Invasive Surgery for Pituitary Adenomas

Endoskopische Endonasal Trans-sphenoidal Ansatz: Minimal-Invasive Chirurgie für Hypophysen Adenome

Endoscopic endonasal trans-sphenoidal surgery has become the gold standard for the surgical treatment of pituitary adenomas and many other pituitary ...

Stereotactic Atlas-Guided Laser Capture Microdissection of Brain Regions Affected by Traumatic Injury

Stereotaktische Atlas-geführte Laser Capture Microdissection Hirnregionen von traumatischen Verletzungen betroffen

The ability to isolate specific brain regions of interest can be impeded in tissue disassociation techniques that do not preserve their spatial ...

A Simple Approach to Induce Experimental Autoimmune Neuritis in C57BL/6 Mice for Functional and Neuropathological Assessments

Ein einfacher Ansatz, experimentelle Autoimmune Neuritis bei C57BL/6 Mäusen für funktionale und neuropathologische Bewertungen zu induzieren

Experimental autoimmune neuritis (EAN) is a well-appreciated experimental model of autoimmune peripheral demyelinating diseases. EAN disease is induced by ...