Gli autori sono grati a Dale Leitman per la formazione iniziale nell'uso di saggi transitori di trasfezione per determinare l'attività estrogenica degli alimenti vegetali primati. Grazie a Bradford Westrich e C. Eric Johnson per aver contribuito alla creazione di attrezzature di laboratorio e alla formazione degli studenti sui metodi di estrazione. Infine, grazie all'Università dell'Indiana per aver finanziato questa ricerca.

1. Preparazione di materiali vegetali
<ol><li>Congelare gli oggetti vegetali secchi che sono stati raccolti freschi utilizzando un liofilizzatore.<ol>
<li>Per proteggere i campioni dalla luce, coprire le camere con un foglio di alluminio durante il processo di asciugatura.</li>
		<li>Per assicurarsi che i campioni siano completamente asciutti, lyophilize fino a quando le camere non si sentono più fredde al tatto e i materiali vegetali non perdono più massa quando pesati.</li>
		<li>Conservare le piante essiccate in s...

<ol>
	<li>Wasserman, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogenic+plant+consumption+predicts+red+colobus+monkey+(Procolobus+rufomitratus)+hormonal+state+and+behavior.">Estrogenic plant consumption predicts red colobus monkey (Procolobus rufomitratus) hormonal state and behavior.</a> Hormones and Behavior. 62 (5), 553-562 (2012).</li><li>Wasserman, M. D., Milton, K., Chapman, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+roles+of+phytoestrogens+in+primate+ecology+and+evolution.">The roles of phytoestrogens in primate ecology and evolution.</a> International Journal of Primatology. 34 (5), 861-878 (2013).</li><li>DeGabriel, J. L., Moore, B. D., Foley, W. J., Johnson, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+plant+defensive+chemistry+on+nutrient+availability+predict+reproductive+success+in+a+mammal.">The effects of plant defensive chemistry on nutrient availability predict reproductive success in a mammal.</a> Ecology. 90 (3), 711-719 (2009).</li><li>Wasserman, M. D., Steiniche, T., Despr&#233;s-Einspenner, M. -. L., Lambert, J. E., Rothman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Primate Diet &amp; Nutrition. , (2020).</li><li>Benavidez, K. M., Chapman, C. A., Leitman, D. C., Harris, T. R., Wasserman, M. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+estrogenic+effects+of+legume+extracts+containing+phytoestrogens.">Evaluation of the estrogenic effects of legume extracts containing phytoestrogens.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 51 (8), 2193-2199 (2003).</li><li>Klinge, C. 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Environmental pollution and estrogen receptor binding.</a> Science of The Total Environment. 225 (1), 49-57 (1999).</li><li>Felcyn, J. R., Davis, J. C. C., Tran, L. H., Berude, J. C., Latch, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquatic+Photochemistry+of+Isoflavone+Phytoestrogens:+Degradation+Kinetics+and+Pathways.">Aquatic Photochemistry of Isoflavone Phytoestrogens: Degradation Kinetics and Pathways.</a> Environmental Science &amp; Technology. 46 (12), 6698-6704 (2012).</li><li>Jeng, Y. -. J., Kochukov, M. Y., Watson, C. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+Estrogenic+Chemicals+and+Phytoestrogens+with+Estrogen+Receptor+&#946;.">Interaction of Estrogenic Chemicals and Phytoestrogens with Estrogen Receptor &#946;.</a> Endocrinology. 139 (10), 4252-4263 (1998).</li><li>Wasserman, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Feeding on Phytoestrogens: Implications of Estrogenic Plants for Primate Ecology. , (2011).</li><li>Jefferson, W. N., Patisaul, H. B., Williams, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproductive+consequences+of+developmental+phytoestrogen+exposure.">Reproductive consequences of developmental phytoestrogen exposure.</a> Reproduction. 143 (3), 247-260 (2012).</li></ol>

Il saggio ERβ reporter sviluppato per lo screening individuale di agenti farmaceutici è adatto anche per lo screening di alimenti vegetali per fitoestrogeni biologicamente attivi attraverso l'ERβ. Importanti considerazioni nel protocollo includono il trattamento dei campioni vegetali con cura: il materiale vegetale fresco deve essere asciugato rapidamente per prevenire lo stampaggio o altre degradazioni biologiche e deve essere tenuto lontano dalla luce per prevenire la fotolisi dei composti18....

Le piante sono una fonte necessaria di cibo per molti animali, fornendo calorie e sostanze nutritive fondamentali per la sopravvivenza, la riproduzione, la crescita, lo sviluppo e ilcomportamento 1. Le piante producono migliaia di sostanze chimiche, molte delle quali adattamenti per la propria crescita, manutenzione stomatica e riproduzione. Altri composti, considerati metaboliti secondari vegetali (PS), hanno funzioni meno chiare, anche se alcuni sono tossici e probabilmente utilizzati come difesa contro l'erbivoro e il parassitismo (ad esempio, alcaloidi, tannini)2,3. Alcune di queste sostanze chimiche hanno la capacità di influenzare i processi fisiologici a lungo termine negli animali, come il funzionamento endocrino, anche se il motivo per cui questi fitochimici attivi dal punto di vista endocrino interagiscono con il sistema endocrino vertebrato non èancora chiaro 2,4.
I fitoestrogeni, i fitochimici endocrino-attivi più studiati, sono le PS polifenoliche che imitano strutturalmente e funzionalmente gli estrogeni, interagendo direttamente con l'asse gonadale ipotalomo-ipofisario del sistema endocrino vertebrato5. L'ingestione di fitoestrogeni nella dieta umana è associata alla protezione contro alcuni tumori, malattie cardiache e sintomi della menopausa, sebbene altri effetti includano problemi di fertilità. Infatti, gli effetti fisiologici di questi composti sono stati scoperti negli anni '40 quando l'infertilità negli ovini è stata attribuita al loro pascolo su trifoglio ricco di fitoestrogeni(Trifolium subterrareum)6. Quando ingeriti, i fitoestrogeni possono passare nelle cellule e imitare gli effetti degli estrogeni. Mentre i fitoestrogeni hanno avuto effetti negativi sulla fertilità delle pecore, la relazione tra fitoestrogeni e fisiologia non è semplice. Come le pecore, i rinoceronti bianchi meridionali mostrano sensibilità ai composti estrogenici nei mangimi derivati da elevate quantità di soia e erba medica. Le figlie di femmine nutrite con questa dieta durante la gravidanza hanno meno probabilità di riprodursi7. Tuttavia, altri studi hanno dimostrato che anche i fitoestrogeni possono avere effetti positivi, tra cui la maturazione dei follicoli ovarico neitopi più anziani 8,la prevenzione di alcuni tumori, l'attività antiossidante e gli effetti antiproliferativi9.
L'ampiezza degli effetti dei fitoestrogeni non è sorprendente dato che gli estrogeni influenzano una vasta gamma di funzioni biologiche, tra cui crescita, sviluppo e regolazione del sistema nervoso riproduttivo e centrale10. Sebbene ci siano molti meccanismi di azione, i fitoestrogeni hanno spesso la capacità di modificare, migliorare o interrompere la segnalazione degli estrogeni attraverso la loro capacità di agire come ligandi per i recettori degli estrogeni intranucleari alfa e beta (ERα ed ERβ). Molti fitoestrogeni hanno una struttura ad anello fenolica simile agli estrogeni che consente loro di legare i recettori degli estrogeni. Quelli con attività estrogenica agonistica funzionano come estrogeni, formando un complesso ER-ligando attivato che può dimerizzare e legarsi a un elemento di risposta estrogenica (ERE) e innescare la trascrizione genica11. Pertanto, estrogeni e fitoestrogeni regolano l'attività cellulare e il sistema funziona attraverso le loro azioni come fattori di trascrizione.
Qui presentiamo il nuovo uso di un saggio a base cellulare per migliorare gli estratti vegetali per la presenza di composti che hanno attività biologica estrogenica. Questo saggio utilizza cellule cho dell'ovaio criceto cinese progettate per esprimere molto ERβ, che sono state trasfette con il gene della lucciola (Photinus pyralis) luciferasi collegato a un promotore ERE12. Quando i composti estrogenici sono presenti, si legano al ER, dimerizzano e si legano all'ERE, portando alla trascrizione del gene della luciferasi. Dopo l'aggiunta di una soluzione di substrato, la luciferasi catalizza una reazione che porta all'emissione di fotoni. Pertanto, i campioni positivi producono campioni leggeri e negativi no.
Questo saggio disponibile in commercio elimina la necessità per i laboratori di trasfetto le cellule di mammifero con il gene reporter e il recettore degli estrogeni13,14, che era instabile e variabile nell'efficacia. Il saggio fornisce una piattaforma di trasfezione stabile che consente di determinare rapidamente e semplicemente se una pianta ha attività estrogenica tramite legame del recettore.
Testiamo l'ipotesi che la soia abbia un'attività estrogenica più elevata rispetto a tutti gli altri alimenti date le loro concentrazioni conosciute di isoflavoni estrogenici15 usando alimenti umani di generi alimentari locali.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:721px;" width="722">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">1000 &#181;L pipette</td>
			<td style="width:80px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:308px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">20 &#181;L pipette</td>
			<td style="width:80px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">200 &#181;L pipette</td>
			<td style="width:80px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">37 &#8451; water bath</td>
			<td style="width:80px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:215px;">37 &#8451;, humidified 5% CO2 incubator</td>
			<td style="width:80px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">70% ethanol</td>
			<td style="width:80px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">analytical balance</td>
			<td style="width:80px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">cell culture-rated laminar flow hood</td>
			<td style="width:80px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">dimethyl sulfoxide</td>
			<td style="width:80px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">disposable media basin, sterile</td>
			<td style="width:80px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">drip filtration system</td>
			<td style="width:80px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Erlenmeyer flasks</td>
			<td style="width:80px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>125 mL and 250 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">HPLC grade methanol</td>
			<td style="width:80px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Human ER&#946; Reporter Assay System, 1 x 96-well format assays</td>
			<td style="width:80px;">Indigo Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">IB00411</td>
			<td>Assay kit - analyzes 24 samples plus standard curve</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">lyophilizer</td>
			<td style="width:80px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">multi-channel pipette</td>
			<td style="width:80px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">orbital shaker</td>
			<td style="width:80px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">plate-reading luminometer</td>
			<td style="width:80px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>ex. Bioteck Synergy HTX</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">rotory evaporator</td>
			<td style="width:80px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">round bottom flasks</td>
			<td style="width:80px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>50 mL and 300 mL</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">sterile microcentrifuge tubes or sterile multi-channel media basins</td>
			<td style="width:80px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">sterile tips</td>
			<td style="width:80px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>200 &#181;L and 1000 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Whatman grade 1 paper</td>
			<td style="width:80px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">whirl-pak bags</td>
			<td style="width:80px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>sterile polyethylene bags</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

screening for phytoestrogens using a cell-based estrogen receptor  &#946; reporter assay

Le piante sono una fonte di cibo per molti animali e possono produrre migliaia di sostanze chimiche. Alcuni di questi composti influenzano i processi fisiologici nei vertebrati che li consumano, come la funzione endocrina. I fitoestrogeni, i fitochimici endocrino-attivi più studiati, interagiscono direttamente con l'asse gonadale ipotalamo-ipofisi del sistema endocrino vertebrato. Qui presentiamo il nuovo uso di un saggio a base cellulare per migliorare gli estratti vegetali per la presenza di composti che hanno attività biologica estrogenica. Questo saggio utilizza cellule di mammifero progettate per esprimere altamente il recettore degli estrogeni beta (ERβ) e che sono state trasfette con un gene luciferasi. L'esposizione a composti con attività estrogenica provoca che le cellule producano luce. Questo test è un modo affidabile e semplice per testare l'attività estrogenica biologica. Ha diversi miglioramenti rispetto ai saggi transitori di trasfezione, in particolare la facilità d'uso, la stabilità delle cellule e la sensibilità del saggio.

Ventidue estratti di frutta e verdura comunemente trovati nelle diete umane sono stati vengono vengono Una varietà di alimenti sono stati saggiati, tra cui legumi, come soia, piselli da neve e piselli, poiché la famiglia dei piselli è una fonte nota di fitoestrogeni16, così come fichi, datteri, mais, carote, mele, banane, fragole, pomodoro, cavolo e cavolo. I composti interferenti endocrini si trovano in sostanze comuni (ad esempio plastica e pesticidi) e alcuni sono biologicamente attivi attr...

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Screening for Phytoestrogens using a Cell-based Estrogen Receptor  &#946; Reporter Assay

Abbiamo ottimizzato un recettore degli estrogeni disponibile in commercio β reporter per lo screening di alimenti primati umani e non umani per l'attività estrogenica. Abbiamo convalidato questo saggio mostrando che la soia alimentare umana estrogenica nota si registra in alto, mentre altri alimenti non mostrano alcuna attività.

Screening per fitoestrogeni utilizzando un recettore degli estrogeni a base cellulare β test reporter

Plants are a source of food for many animals, and&#160;they can produce thousands of chemicals. Some of these compounds affect physiological processes in ...

We use this assay to assess whether plant foods contain phytosteriods, which can affect physiological processes in animals, as well as behavior and reproductive success. This assay provides a simple and reliable method for determining whether plants produce estrogenic compounds with biological activity. This method was developed initially to screen drugs with xenoestrogen activity for applications in medicine.For example, inhibiting cell proliferation. We are using it to provide insight into primate ecology and evolution. It is important to have practice working with aseptic technique in a clean environment prior to attempting this assay, as it is very sensitive to contamination.Begin by freeze-drying the fresh plant items with the lyophilizer, then finely grind them using a grinding mill with a 0.85 millimeter mesh screen. Store the ground samples in bags in the dark until extraction. To extract any potential phytosteroids in the plants, add dried sample to an appropriately sized flask, then at HPLC grade methanol.Cover the plant methanol solution with aluminum foil and set it to rotate at 100 RPM for three days on an orbital shaker. After three days, use filter paper to decant the supernate and into a drip filtration system. Dry the plant extract with a rotary evaporator until it is thickened, but pourable in a 300 milliliter round bottom flask.Pour the sample into a 50 milliliter flask and rinse the large flask with a small amount of methanol, then continue to dry the sample in the small flask until the methanol is completely evaporated. When finished, weigh the sample residue with an analytical balance and record the mass. Dissolve the plant extract in DMSO at a concentration of 0.1 gram of extract to two milliliters of DMSO and vortex it until homogenized.DMSO is not toxic on its own, but it is a vehicle that allows other substances to cross membranes. Since we do not know if our plants contain toxic chemicals, all are treated as if they're hazardous. Do not allow the solution to touch skin, replace gloves if contaminated, and wear thick, close-toed shoes and lab coats.Store the sample at four degrees Celsius in amber glass vials until ready to use. Vortex the samples, then add four microliters of each sample to 496 microliters of compound screening medium to yield a 0.8%DMSO solution. Disinfect the outside surface of a pre-warmed cell recovery medium tube with 70%ethanol and transfer 10 milliliters of the medium into a tube of frozen reporter cells to thaw them.Close the tube of reporter cells and place it in a 37 degrees Celsius water bath for five to 10 minutes. After retrieving the cells from the water bath, gently invert the tube several times to break up aggregates of cells and produce a homogenous suspension, then clean the surface of the tube with 70%ethanol. Use a multi-channel pipette to dispense 100 microliters of the reporter cell suspension into each well of a 96 well plate, then dispense 100 microliters of samples in triplicate into the appropriate wells.Incubate the plate at 37 degrees Celsius and 5%carbon dioxide for 22 to 24 hours. Just prior to the end of the plate incubation remove detection substrate and detection buffer from the refrigerator and place them in a low light area until equilibrated to room temperature, then gently invert each tube to mix the solutions. Immediately before the plate incubation is complete, pour the entire contents of the detection buffer into the tube of detection substrate to create luciferase detection reagent.Mix the tube gently so as not to produce foam. Discard the contents of the sample plate into inappropriate waste container and gently tap it on a clean absorbent paper towel to remove the last droplets from the wells. Add 100 microliters of the luciferase detection reagent to each well and allow the assay plate to rest at room temperature for 15 minutes, then quantify the luminescence using a 96 well plate reading luminometer.22 extracts of fruits and vegetables commonly found in human diets were screened for the presence of estrogenic compounds. Estrogenic activity is presented in an ordinal qualitative manner of high, medium, low, or no activity. Organic and non-organic soybeans screened at high levels of activity, while all other fruit and vegetable items registered no activity.Comparing soybean results to the standard curve also shows that they have high estrogenic activity levels at this concentration. Soybean extract, a known potent source of the isoflavones, daidzein and genistein, was further used to determine the dilution yielding a 50%signal to the maximum. This extract requires 422 times more dilution to produce half the signal of our standard dilution protocol.Samples identified with activity could be sent for analysis by mass spectrometry to identify the active chemicals. Using an antagonist method, we could also determine if the plant food contains chemicals that reduce the binding and activity of endogenous estrogens. This technique allows us to further our understanding of how prevalent estrogenic foods are in primate diets, as well as how consumption of phytoestrogens affects physiology and behavior when the assay is combined with fecal hormone analyses and field data.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

High-throughput Screening of Carbohydrate-degrading Enzymes Using Novel Insoluble Chromogenic Substrate Assay Kits

High-throughput screening degli enzimi carboidrati di degradazione Utilizzando Novel insolubile Chromogenic Substrate Assay Kit

Carbohydrates active enzymes (CAZymes) have multiple roles in vivo and are widely used for industrial processing in the biofuel, textile, detergent, paper ...

Ricerca

Biochimica

Bacterial Inner-membrane Display for Screening a Library of Antibody Fragments

Display interno-membrana batterica per lo screening di una libreria di frammenti di anticorpi

Antibodies engineered for intracellular function must not only have affinity for their target antigen, but must also be soluble and correctly folded in ...

A Simple Method for High Throughput Chemical Screening in Caenorhabditis Elegans

A Simple Method for High Throughput Chemical Screening in Caenorhabditis Elegans

Un metodo semplice per High Throughput Screening chimico in Caenorhabditis Elegans

Caenorhabditis elegans is a useful organism for testing chemical effects on physiology. Whole organism small molecule screens offer significant advantages ...

Extracellular Protein Microarray Technology for High Throughput Detection of Low Affinity Receptor-Ligand Interactions

Tecnologia di Microarray di proteina extracellulare per il rilevamento di Throughput elevato di interazioni recettore-ligando bassa affinità

Secreted factors, membrane-tethered receptors, and their interacting partners are main regulators of cellular communication and initiation of signaling ...

An In Vivo Estrogen Deficiency Mouse Model for Screening Exogenous Estrogen Treatments of Cardiovascular Dysfunction After Menopause

Un modello di topo a carenza di estrogeni in vivo per lo screening dei trattamenti estrogeni esogeni della disfunzione cardiovascolare dopo la menopausa

Postmenopausal women are at greater risk of developing cardiovascular diseases than premenopausal women. Female mice ovariectomized (OVX) at weaning ...

Kinetic Screening of Nuclease Activity using Nucleic Acid Probes

Screening cinetico dell'attività nucleana utilizzando sonde con acido Nucleic

Nucleases are a class of enzymes that break down nucleic acids by catalyzing the hydrolysis of the phosphodiester bonds that link the ribose sugars. ...

A Semi-High-Throughput Adaptation of the NADH-Coupled ATPase Assay for Screening Small Molecule Inhibitors

Adattamento semi-alto/throughput del saggio ATPase accoppiato NADH per lo screening degli inibitori delle piccole molecole

ATPase enzymes utilize the free energy stored in adenosine triphosphate to catalyze a wide variety of endergonic biochemical processes in vivo that would ...

Visualization of Estrogen Receptors in Colons of Mice with TNBS-Induced Crohn's Disease using Immunofluorescence

Visualizzazione dei recettori degli estrogeni nei coloni dei topi con la malattia di Crohn indotta da TNBS utilizzando l'immunofluorescenza

Crohn&#39;s disease is the most diagnosed type of inflammatory bowel disease. Chronic inflammation developing in the intestine leads to peristalsis ...

Parallel Interrogation of &#946;-Arrestin2 Recruitment for Ligand Screening on a GPCR-Wide Scale using PRESTO-Tango Assay

Interrogatorio parallelo del reclutamento di z-Arrestin2 per lo screening dei ligandi su una scala a livello GPCR utilizzando PRESTO-Tango Assay

As the largest and most versatile gene superfamily and mediators of a gamut of cellular signaling pathways, G-protein-coupled receptors (GPCRs) represent ...

NMR-Based Fragment Screening in a Minimum Sample but Maximum Automation Mode

Screening dei frammenti basato su NMR in un campione minimo ma in modalità di automazione massima

Fragment-based screening (FBS) is a well-validated and accepted concept within the drug discovery process both in academia and industry. The greatest ...