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•
11:40 min
April 17th, 2020
DOI :
10.3791/61039-v
Chapters
0:04
Introduction
0:32
Generation of Recombinant Virus
4:00
Plaque Isolation of Recombinant Viruses
7:02
Gel Electrophoresis of Viral dsRNA
9:11
Results: Characteristics of the Recombinant Strains rSA11/wt and rSA11/NSP3-2A-3xFL-UnaG
10:58
Conclusion
Transcript
该协议描述了一个可靠和有效的反向遗传学系统,用于制造重组轮状病毒。它还解释了如何制造表达荧光标记蛋白的重组轮状病毒。这种方法简单,需要最少的质粒,并可以产生重组轮状病毒,表达单独的氟蛋白和病毒蛋白。
首先将BHKT7细胞播种到12孔板上。用 PBS 冲洗新鲜汇合的单层细胞。然后用 trypsin-EDTA 溶液破坏单层,并在五毫升的 GMEM 完整介质中重新发送细胞。
使用 trypan 蓝色和自动细胞计数器确定可行 BHKT7 细胞的浓度。然后在一毫升GEM中将两
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Summary
从质粒DNA生成重组性轮状病毒为研究轮状病毒复制和发病机制以及发展轮状病毒表达载体和疫苗提供了重要工具。在这里,我们描述了一种简化的反向遗传学方法来产生重组性轮状病毒,包括表达荧光报告蛋白的菌株。
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