Name: separation of bioactive small molecules, peptides from natural sources and proteins from microbes by preparative isoelectric focusing (ief) method
Uploaded: 2020-06-14T14:00:00
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Wir sind dankbar für die Finanzierungsquellen der Division of Biology und des Johnson Cancer Research Center für BRIEF- und IRA-Auszeichnungen bzw. an GV. Wir danken auch dem K-INBRE Postdoktorandenpreis an RV. Diese Arbeit wurde teilweise durch den Institutional Development Award (IDeA) des National Institute of General Medical Sciences der National Institutes of Health unter der Fördernummer P20 GM103418 unterstützt. Der Inhalt liegt allein in der Verantwortung der Autoren und stellt nicht unbedingt die offizielle Meinung des National Institute of General Medical Sciences oder der National Institutes of Health dar. Wir danken den anonymen Rezensenten für ihre hilfreichen Kommentare.

1. Einrichtung und Vorlauf der Standard-Flüssigphasen-IEF-Einheit
<ol><li>Montieren Sie die flüssigen Phasen-IEF-Elektroden (anodenroter Knopf und Kathoden-Schwarzknopf) mit ihren jeweiligen Austauschmembranen gemäß der Bedienungsanleitung (siehe Materialtabelle). Gleichgewichten Sie die Anionenaustauschmembranen mit 0,1 M NaOH und die Kationenaustauschmembranen mit 0,1 M H3PO4 mindestens für 16 h, wenn neue Membranen verwendet werden.<ol>
<li>Bewahren Sie die Membranen zwisc...

<ol>
	<li>Jankowska, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+procedure+of+extraction,+purification+and+proteomic+analysis+of+nuclear+proteins+from+mouse+brain.">Optimized procedure of extraction, purification and proteomic analysis of nuclear proteins from mouse brain.</a> Journal of Neuroscience Methods. 261, 1-9 (2016).</li><li>Pergande, M. R., Cologna, S. 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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+albicans+cell+wall+proteins.">Candida albicans cell wall proteins.</a> Microbiology and Molecular Biology Reviews. 72 (3), 495-544 (2008).</li></ol>

Kleine Moleküle aus natürlichen Produktquellen (z. B. Pflanzen) umfassen komplexe sekundäre Metaboliten, die in der chemischen Struktur sehr unterschiedlich sind. Es wird angenommen, dass sie an Pflanzenabwehrmechanismen beteiligt sind. Darüber hinaus sind Polypeptide auch in Pflanzengeweben22vorhanden. Diese natürlichen Produkt kleine Moleküle sind reiche Quellen von Testmolekülen für die Entdeckung und Entwicklung von Medikamenten. Die schwierigen und mühsamen Methoden, die für ihre Is...

Die Reinigung von Biomolekülen aus komplexen biologischen Proben ist ein wesentlicher und oft schwieriger Schritt in biologischen Experimenten1. Isoelektrische Fokussierung (IEF) eignet sich gut für die hochauflösende Trennung komplexer Biomoleküle, bei denen Trägerampholyten nach ihrer Ladung reisen und den pH-Gradienten in einem elektrischen Feld3festlegen. Die erste kommerzielle Trägerampholyte für IEF wurde 1964 von Olof Vesterberg entwickelt und4,5patentiert. Trägerampholyte sind aliphatische Oligo-Amino-Oligo-Carbonsäuremoleküle unterschiedlicher Länge und Verzweigung6. Anschließend verbesserten Vesterberg und andere die Trägerampholyten für ihren erweiterten Einsatz bei der Trennung von Biomolekülen6,7.
Zu den Methoden zur Trennung von Biomolekülen gehören Agarose und Polyacrylamid-Gelelektrophorese, zweidimensionale Gelelektrophorese (2-DE), isoelektrische Fokussierung, Kapillarelektrophorese, Isotachophorese und andere chromatographische Techniken (z.B. TLC, FPLC, HPLC)2. Liquid-Phase IEF in einem Instrument namens "Rotofor" durchgeführt wurde von Milan Bier8erfunden. Er war Pionier des Konzepts und der Gestaltung dieses Instruments und trug maßgeblich zur Theorie der elektrophoretischen Migration bei. Sein Team entwickelte auch ein mathematisches Modell des elektrophoretischen Trennverfahrens für Computersimulationen9.
Das Flüssigphasen-IEF-Gerät ist eine horizontal rotierende zylindrische Zelle, die aus einem Nylonkern besteht, der in 20 poröse Fächer und einen zirkulierenden Wasserkühlkeramikstab unterteilt ist. Die porösen Kammern ermöglichen es Molekülen, durch die wässrige Phase zwischen den Elektroden zu wandern und die Sammlung von gereinigten Proben unter Vakuum in Fraktionen zu ermöglichen. Dieses Reinigungssystem kann bis zu 1000-fache Reinigung eines bestimmten Moleküls in <4 Stunden ermöglichen. Ein wertvolles Merkmal dieses Instruments ist, dass es als erster Schritt für die Reinigung aus einer komplexen Mischung oder als letzter Schritt zur Erreichung der Reinheit10angewendet werden kann. Wenn das Molekül von Interesse ein Protein ist, ist ein weiterer Vorteil, dass seine native Konformation während der Trennung erhalten bleibt.
Die Verwendung von Flüssigphase IEF wurde weithin für Proteine, Enzyme und Antikörper-Reinigung6,10,11,12,13,14berichtet. Hier beschreiben wir die Verwendung dieses Ansatzes zur Trennung und Reinigung kleiner Moleküle und Peptide von der Heilpflanze Gymnema sylvestre. Dieses Protokoll wird Forschern helfen, aktive kleine Moleküle aus einem Pflanzenextrakt für nachgelagerte Anwendungen kostengünstig zu konzentrieren und zu reinigen. Darüber hinaus zeigen wir auch, dass die Anreicherung von Proteinen aus einem komplexen Proteinextrakt aus Candida albicans Pilz15 in diesem IEF-basierten System als zweites Beispiel.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.45 &#181;m syringe filter</td>
			<td>Fisher scientfic</td>
			<td>09-720-004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M3148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium carbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>207861-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Lyte 3/10 Ampholyte</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>163-1113</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Lyte 5/8 Ampholyte</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>163-1192</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact low temperature thermostat</td>
			<td>Lauda -Brinkmann</td>
			<td>RM 6T</td>
			<td>Set water cooling to 4 oC and it can be run even at 0 oC as when it passes through the Rotofor cooling core, the circulating water temperature will be around 5 or more depending on the voltage.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coomassie Brilliant Blue R</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B7920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis tubing (3,500 MWCO)</td>
			<td>Spectrum Spectra/Por</td>
			<td>132112T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gymnema plant leaf extract powder (&#62;25% Gymnemic acids)</td>
			<td>Suan Farma, NJ USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Lab companion</td>
			<td>SI 300R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DM 6B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini protean electrophoresis</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH meter</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td>S20</td>
			<td>Useful to determine the pH of the Rotofor (liquid-phase IEF) fractions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotofor</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>170-2972</td>
			<td>http://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/M1702950E.pdf (Rotofor Instruction manual for assembling the unit)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640 Medium</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>DH30255.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sealing tape</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>170-2960</td>
			<td>Scotch tape may also be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorvall legend micro 17 centrifuge</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>75002432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TPP tissue culture plate -96 well flat bottom</td>
			<td>TPP</td>
			<td>TP92696</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

separation of bioactive small molecules, peptides from natural sources and proteins from microbes by preparative isoelectric focusing (ief) method

Natürliche Produkte aus Pflanzen und Mikroben sind eine reiche Quelle bioaktiver Moleküle. Vor ihrer Verwendung müssen die aktiven Moleküle aus komplexen Extrakten für nachgeschaltete Anwendungen gereinigt werden. Es gibt verschiedene chromatographische Methoden für diesen Zweck zur Verfügung, aber nicht alle Labore können sich Hochleistungsmethoden leisten und die Isolierung von komplexen biologischen Proben kann schwierig sein. Hier zeigen wir, dass präparative flüssige Phasen-Isoelektrische Fokussierung (IEF) Moleküle, einschließlich kleiner Moleküle und Peptide, von komplexen Pflanzenextrakten trennen kann, basierend auf ihren isoelektrischen Punkten (pI). Wir haben die Methode zur komplexen biologischen Probenfraktionierung und Charakterisierung eingesetzt. Als Beweis des Konzepts, Wir fraktioniert einen Gymnema sylvestre Pflanzenextrakt, Isolierung einer Familie von Terpenoid Saponin kleine Moleküle und ein Peptid. Wir haben auch eine effektive mikrobielle Proteintrennung mit dem Candida albicans Pilz als Modellsystem demonstriert.

Trennung und Reinigung von kleinen Molekülen und Peptiden aus Gymnema sylvestre Pflanzenextrakt Mit der präparativen Flüssigphase IEF-Methode fraktionierten wir medizinische Pflanzenextrakte und Zelloberflächenproteine aus einem menschlichen pathogenen Pilz, C. albicans. Ein Schaltplan dieser Fraktionierungsprotokolle ist in Abbildung 1dargestellt.
Aus 20 Fraktionen des G. sylvestre-Extrakts aus flüssiger Phase I...

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Separation of Bioactive Small Molecules, Peptides from Natural Sources and Proteins from Microbes by Preparative Isoelectric Focusing IEF Method

Ziel ist es, bioaktive kleine Moleküle, Peptide aus einem komplexen Pflanzenextrakt und Proteine aus pathogenen Mikroben durch die Anwendung der Flüssigphasen-Isotonisierungsmethode (IEF) zu fraktionieren und zu isolieren. Darüber hinaus wurden die getrennten Moleküle identifiziert und ihre Bioaktivität bestätigt.

Trennung von bioaktiven kleinen Molekülen, Peptiden aus natürlichen Quellen und Proteinen aus Mikroben durch Präparative Isoelektrische Fokussierung (IEF) Methode

Natural products derived from plants and microbes are a rich source of bioactive molecules. Prior to their use, the active molecules from complex extracts ...

Unser Protokoll beschreibt die neuen Erkenntnisse zur Trennung und Reinigung aktiver Moleküle aus einem Pflanzenextrakt. Wissenschaftler können diese Methoden verwenden, um kleine Moleküle und Peptide aus natürlichen Produktquellen für therapeutische Anwender zu isolieren. Machen Sie sich mit den Instrumentenkomponenten und deren Montagemethoden vertraut.Es ist wichtig, sicher zu sein, dass die zu trennende Probe durch die vorgeschlagenen Leitlinien vorbereitet wird. Diese Methode umfasst mehrere Montageprozesse des Instruments. Und die visuelle Demonstration wird Benutzern helfen, sie zu verfolgen und erfolgreich auf die Forschung anzuwenden.Nach der Montage der flüssigen Phase, IEF-Einheit, wie in der Bedienungsanleitung beschrieben, equilibrate die Anionenaustauschmembranen mit 0,1 Mol Natriumhydroxid und die Kationenaustauschmembranen mit 0,1 Molphosphorsäure. Richten Sie die Gummidichtungen so aus, dass die drei großen längs langen Löcher durch den Gummi entsperrt bleiben. Dies wird dazu beitragen, die Ionen zwischen der Elektrode und den Probenteilen über die Membran während der Elektrophorese auszutauschen.Montieren Sie den inneren und äußeren Teil der Elektrode, indem Sie die drei längs langen Löcher in den Ionenaustauschdichtungen ausrichten. Dann füllen Sie die Elektroden mit ihren jeweiligen Elektrolyten, um zu verhindern, dass ihre Membranen austrocknen. Ziehen Sie als nächstes den Kunststoff-Schraubenhalter fest, um eine leckagefreie Montage zu gewährleisten.Bedecken Sie die Probensammelbretter mit Dichtband. Als nächstes montieren Sie die Teile der Fokussierkammer über den keramischen Kühlfinger in der folgenden Reihenfolge: Anodenelektrode, Nylonmembrankern, Fokussierkammer und Kathodenelektrode. Mit einer 50-Milliliter-Spritze die Fokussierkammer mit vorgekühltem destilliertem Wasser füllen.Für eine Standard-IEF-Zelle 60 Milliliter Wasser hinzufügen. Schließen Sie das IEF-Gerät an zirkulierendes Kühlwasser bei vier Grad Celsius an. Betreiben Sie das Gerät mit 15 Watt und 3000 Volt, bis sich die Spannung stabilisiert, etwa drei bis fünf Minuten.Schalten Sie dann die Stromquelle aus. Entfernen Sie mit dem Fraktionskollektor das Wasser aus der Zelle. Versiegeln Sie die Sammelbretter mit Dichtband.Fügen Sie 0,6 Gramm Gymnema sylvestre Pflanzenextrakt, zu 60 Milliliter destilliertes Wasser. Den Pflanzenextrakt durch Mischen in einem Rollenrohr für fünf Minuten auflösen. Um die unlöslichen Partikel zu entfernen, zentrifugieren Sie diese Lösung fünf Minuten lang bei 10.000 mal G.Übertragen Sie den Überstand auf einen 150 Milliliter Glasbecher und fügen Sie Ampholyt hinzu, um eine 1%-Lösung nach Volumen zu erstellen, etwa 0,6 Milliliter. Mit einer 50-Milliliter-Spritze mit einer 1,5 Zoll 19 Gauge stumpfen Endnadel, laden Sie diese Lösung in die IEF-Zelle durch die Probensammeltafeln. Entfernen Sie dann die Zelle aus dem Ständer und tippen Sie auf die Elektrodenkammer, um blasen zu lösen und zu entfernen.Schließen Sie das Gerät an das Kühlwasser an. Mit der Stromversorgung auf konstante 15 Watt beginnen Fraktionierung. Führen Sie die IEF-Einheit aus, bis die Spannung einen konstanten Wert von etwa drei Stunden erreicht.Nach dem Drücken der Ernte auf Knopf richten Sie die FraktionskollektorStifte mit den Sammelbrettern aus. Drücken Sie die Stifte durch das Dichtband, um mit dem Sammeln der Gymnema sylvestre Fraktionen zu beginnen. Wachsen Sie eine einzige Kolonie von C.albicans und Hefe Pepiton Dextrose Brühe über Nacht bei 30 Grad Celsius mit Schütteln.Übertragen Sie die Kultur auf ein Zentrifugenrohr und sammeln Sie die Hefezellen durch Zentrifugation bei 10.000 mal G für fünf Minuten. Nach dem Entfernen des Überstandes die Hefezellen im Puffer aufhängen und die Suspension in einem Rollenrohr für eine Stunde bei fünf Grad Celsius drehen. Um die Hefezellen zu entfernen, zentrieren Sie die Suspension bei 10.000 mal G für fünf Minuten.Dann filtern Sie den Proteinextrakt durch einen 0,45 Mikrometer Filter. Übertragen Sie den Proteinextrakt auf Dialyseschläuche und Dialyse gegen Wasser für 15 Stunden bei vier Grad Celsius. Nach der Schätzung der Proteinkonzentration, sammeln Sie ein Volumen von Protein-Extrakt mit 500 Milligramm Gesamtprotein.Verdünnen Sie die 500 Milligramm Protein in 60 Milliliter Wasser mit 1%Ampholyt Volumen. Mit einer Spritze den verdünnten Proteinextrakt in die IEF-Zelle laden und vier Stunden lang konstant 15 Watt bedienen. Da dieses Gerät eine Hochspannungsstromversorgung verwendet, muss der Benutzer alle Vorkehrungen treffen, um einen direkten Kontakt mit den Lebendenelektroden zu vermeiden.Der Fraktionssammler enthält 20 Kunststoffrohre mit jeweils 12 Millimetern und 75 Millimetern. Und es ist mit der Vakuumpumpe verbunden. Bereiten Sie sich darauf vor, die Fraktionen zu sammeln, indem Sie die Ernte auf Knopf drücken.Richten Sie dann die 20 Sammelstifte auf dem Fraktionskollektor mit der 20 Sammelplatine aus, sodass die versiegelte Fokussierzelle. Drücken Sie die Sammelstifte durch das Dichtband und schalten Sie gleichzeitig die Vakuumpumpe ein. Jede Röhre sammelt einen Proteinanteil von etwa drei Millilitern.Nach dem Reduzieren und Kochen der Proteinfraktionen, analysieren Sie sie auf einem 12,5%SDS-Seitengel. Färben Sie das Gel mit Coomassie Blue Farbstoff und legen Sie es auf eine Wippe bei Raumtemperatur. Nach zwei bis drei Stunden das Gel destain.Nehmen Sie dann das Gelbild mit einem Gel-Imager auf. Bereiten Sie eine Hefezellsuspension vor, indem Sie eine Nachtkultur von C.albicans im Verhältnis 1:1000 im RPMI-Zellkulturmedium verdünnen, ergänzt mit 50 Millimolar Glukose. Fügen Sie 90 Mikroliter der Zellsuspension zu jedem Brunnen einer 96-Well-Platte hinzu.Als nächstes fügen Sie 10 Mikroliter jeder G.sylvestre Fraktion zu getrennten Brunnen hinzu. Als Negativkontrolle, fügen Sie 10 Mikroliter Wasser mit 1%Ampholyt in separate Brunnen. Nachdem Sie die 96-Wellplatte 12 Stunden lang bei 37 Grad Celsius inkubiert haben, beobachten Sie die Platte unter dem Mikroskop.Der Mangel an fadenförmigem Wachstum deutet auf die Hemmung der C.albicans Hefe-zu-Hyphen-Umwandlung hin. Zwanzig Fraktionen des G.sylvestre-Extraktes wurden durch flüssige Phase IEF gewonnen. Dunkel gefärbte Moleküle, die Gymnemsäuren, wanderten zu und wurden am Anodenende der Einheit angereichert.Am Kathodenende wurden transluzente hellgelbe Fraktionen beobachtet. Aliquots aus jeder G.sylvestre Brechung wurden reduziert, gekocht und durch SDS-Seite aufgelöst. Ein Coomassie Blue Fleck zeigte ein anderes Polypeptidband bei etwa fünf Kilodaltonen, angereichert mit den Fraktionen 16 bis 19.Die Gymnemic Säuren in Fraktion eins, und die nächsten paar Fraktionen wurden nicht nachgewiesen, da sie nicht proteinaceous sind. Diese Moleküle können jedoch durch TLC getrennt und unter UV-Licht detektiert werden. Fraktion 10 enthielt keine nachweisbare Menge dieser kleinen Moleküle, was darauf hindeutet, dass die meisten organischen kleinen Moleküle in Den fraktionen eins bis drei angereichert wurden.Alle 20 G.sylvestre Fraktionen wurden auf Hemmung der Hefe-zu-Hyphen-Umwandlung und Das Hyphenwachstum bei C.albicans geprüft. Die größte Hemmung wurde in Fraktion eins beobachtet und wenig bis gar keine Hemmung wurde in den Fraktionen 10 und höher beobachtet. Zelloberflächenproteine von C.albicans wurden mit der flüssigen Phase IEF fraktioniert.Und Aliquots aus 18 Fraktionen wurden per SDS-Seite analysiert. Angereicherte Proteine waren in mehreren Fraktionen sichtbar. Der Anfang, kleine Moleküle konnten nicht durch isoelektrische Fokussierung getrennt werden, weil sie geglaubt werden, um nicht ambulant zu sein.Unsere Studien zeigen, dass sie ambulant sind, zumindest wöchentlich, und diese Methode kann für andere kleine Moleküle weiter erforscht werden.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Separation of Bioactive Small Molecules, Peptides from Natural Sources and Proteins from Microbes by Preparative Isoelectric Focusing (IEF) Method

Separation of Single-stranded DNA, Double-stranded DNA and RNA from an Environmental Viral Community Using Hydroxyapatite Chromatography

Trennung von Einzelstrang-DNA, doppelsträngige DNA und RNA aus ökologischer Viral Gemeinschaft mit Hydroxyapatit-Chromatographie

Viruses, particularly bacteriophages (phages), are the most numerous biological entities on Earth1,2.  Viruses modulate host cell abundance and diversity, ...

Forschung

Immunologie und Infektion

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

Eine Einführung in die parasitischen Wespen<em&gt; Drosophila</em&gt; Und die antiparasitäre Immune Response

Most known parasitoid wasp species attack the larval or pupal stages of Drosophila. While Trichopria drosophilae infect the pupal stages of the host (Fig. ...

Quantitative Imaging of Lineage-specific Toll-like Receptor-mediated Signaling in Monocytes and Dendritic Cells from Small Samples of Human Blood

Quantitative Bildgebung von Lineage-spezifischen Toll-like Rezeptor-vermittelten Signaltransduktion in Monozyten und dendritischen Zellen aus kleinen Proben des menschlichen Blutes

Individual variations in immune status determine responses to infection and contribute to disease severity and outcome.  Aging is associated with an ...

Separation of Plasmodium falciparum Late Stage-infected Erythrocytes by Magnetic Means

Separation of Plasmodium falciparum Late Stage-infected Erythrocytes by Magnetic Means

Trennung<em&gt; Plasmodium falciparum</em&gt; Late Stage-infizierten Erythrozyten durch magnetische Mittel

Unlike other Plasmodium species, P. falciparum can be cultured in the lab, which facilitates its study 1. While the parasitemia achieved can reach the ...

Automated Separation of C. elegans Variably Colonized by a Bacterial Pathogen

Automated Separation of C. elegans Variably Colonized by a Bacterial Pathogen

Automatische Trennung von<em&gt; C. elegans</em&gt; Variabel durch einen bakteriellen Erreger kolonisiert

The wormsorter is an instrument analogous to a FACS machine that is used in studies of Caenorhabditis elegans, typically to sort worms based on expression ...

T Cells Capture Bacteria by Transinfection from Dendritic Cells

T-Zellen erfassen Bakterien durch Transinfection von dendritischen Zellen

Recently, we have shown, contrary to what is described, that CD4+ T cells, the paradigm of adaptive immune cells, capture bacteria from infected dendritic ...

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

Ein optimiertes Verfahren zur Isolierung und Ausbau unveränderlichen natürlichen Killer T-Zellen aus der Milz der Maus

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells ...

Isolation of Infiltrating Leukocytes from Mouse Skin Using Enzymatic Digest and Gradient Separation

Isolation der infiltrierenden Leukozyten aus Mäusehaut unter Verwendung enzymatischer Digest und Gradiententrennung

Dissociating murine skin into a single cell suspension is essential for downstream cellular analysis such as the characterization of infiltrating immune ...

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Einrichtung eines Setup-Hochdurchsatz-Screening für kleine Moleküle, die Modulate c-di-GMP-Signalisierung in<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em

Bacterial resistance to traditional antibiotics has driven research attempts to identify new drug targets in recently discovered regulatory pathways. ...

Phenotypic Characterization of Macrophages from Rat Kidney by Flow Cytometry

Phänotypische Charakterisierung von Makrophagen aus Rattenniere mittels Durchflusszytometrie

There is increasing evidence suggesting the important role of inflammation and, subsequently, macrophages in the development and progression of renal ...