Name: separation of bioactive small molecules, peptides from natural sources and proteins from microbes by preparative isoelectric focusing (ief) method
Uploaded: 2020-06-14T14:00:00
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私たちは、生物学部門とジョンソンがん研究センターのBRIEFおよびIRA賞の資金源に感謝しています。また、RVに対するK-INBREポスドク賞に感謝します。この研究は、国立衛生研究所の国立総合医学研究所の機関開発賞(IDeA)によって、助成金番号P20 GM103418の下で部分的に支援されました。内容は著者の責任であり、必ずしも国立一般医学研究所または国立衛生研究所の公式見解を表すものではありません。私たちは、彼らの役に立つコメントのために匿名のレビュー担当者に感謝します。

1. 標準液相 IEF ユニットの設定と前実行
<ol><li>取扱説明書に従って、液体相IEF電極(アノードレッドボタンとカソードブラックボタン)をそれぞれの交換膜で組み立てます(資料表を参照)。新しい膜を使用する場合、0.1 M NaOHとイオン交換膜を0.1 M H3PO4で平衡化します。<ol>
<li>膜を電解質(0.1 M NaOHまたは0.1 MH3PO4)で保存し、乾燥させないでください。</l...

<ol>
	<li>Jankowska, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+procedure+of+extraction,+purification+and+proteomic+analysis+of+nuclear+proteins+from+mouse+brain.">Optimized procedure of extraction, purification and proteomic analysis of nuclear proteins from mouse brain.</a> Journal of Neuroscience Methods. 261, 1-9 (2016).</li><li>Pergande, M. R., Cologna, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoelectric+Point+Separations+of+Peptides+and+Proteins.">Isoelectric Point Separations of Peptides and Proteins.</a> Proteomes. 5 (1), (2017).</li><li>Stoyanov, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IEF-based+multidimensional+applications+in+proteomics:+toward+higher+resolution.">IEF-based multidimensional applications in proteomics: toward higher resolution.</a> Electrophoresis. 33 (22), 3281-3290 (2012).</li><li>Vesterberg, O. A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Method of Isoelectric Fractionation. , (1964).</li><li>Vesterberg, O., Svensson, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoelectric+fractionation,+analysis,+and+characterization+of+ampholytes+in+natural+pH+gradients.+IV.+Further+studies+on+the+resolving+power+in+connection+with+separation+of+myoglobins.">Isoelectric fractionation, analysis, and characterization of ampholytes in natural pH gradients. IV. Further studies on the resolving power in connection with separation of myoglobins.</a> Acta Chemica Scandinavica. 20 (3), 820-834 (1966).</li><li>Righetti, P. 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D., Li, C., Mullappally, B., Co, C., Zhang, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Characterization+of+Monoclonal+Antibody+Charge+Variants+by+Free+Flow+Isoelectric+Focusing.">Isolation and Characterization of Monoclonal Antibody Charge Variants by Free Flow Isoelectric Focusing.</a> Analytical Chemistry. 88 (11), 5662-5669 (2016).</li><li>Yu, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Francisella+tularensis+T-cell+antigen+identification+using+humanized+HLA-DR4+transgenic+mice.">Francisella tularensis T-cell antigen identification using humanized HLA-DR4 transgenic mice.</a> Clinical Vaccine Immunology. 17 (2), 215-222 (2010).</li><li>Riyong, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size+and+charge+antigens+of+Dirofilaria+immitis+adult+worm+for+IgG-ELISA+diagnosis+of+bancroftian+filariasis.">Size and charge antigens of Dirofilaria immitis adult worm for IgG-ELISA diagnosis of bancroftian filariasis.</a> Southeast Asian Journal of Tropical Medicine and Public Health. 41 (2), 285-297 (2010).</li><li>Vediyappan, G., Bikandi, J., Braley, R., Chaffin, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+surface+proteins+of+Candida+albicans:+preparation+of+extracts+and+improved+detection+of+proteins.">Cell surface proteins of Candida albicans: preparation of extracts and improved detection of proteins.</a> Electrophoresis. 21 (5), 956-961 (2000).</li><li>Vediyappan, G., Dumontet, V., Pelissier, F., d'Enfert, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gymnemic+acids+inhibit+hyphal+growth+and+virulence+in+Candida+albicans.">Gymnemic acids inhibit hyphal growth and virulence in Candida albicans.</a> PLoS One. 8 (9), 74189 (2013).</li><li>Bradford, M. 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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Commercial+ampholytes+used+for+isoelectric+focusing+may+interfere+with+bioactivity+based+purification+of+antimicrobial+peptides.">Commercial ampholytes used for isoelectric focusing may interfere with bioactivity based purification of antimicrobial peptides.</a> Journal of Microbiological Methods. 71 (1), 87-89 (2007).</li><li>Kamei, K., Takano, R., Miyasaka, A., Imoto, T., Hara, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amino-Acid-Sequence+of+Sweet-Taste-Suppressing+Peptide+(Gurmarin)+from+the+Leaves+of+Gymnema-Sylvestre.">Amino-Acid-Sequence of Sweet-Taste-Suppressing Peptide (Gurmarin) from the Leaves of Gymnema-Sylvestre.</a> Journal of Biochemistry. 111 (1), 109-112 (1992).</li><li>Craik, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemistry.+Seamless+proteins+tie+up+their+loose+ends.">Chemistry. Seamless proteins tie up their loose ends.</a> Science. 311 (5767), 1563-1564 (2006).</li><li>Craik, D. J., Daly, N. L., Bond, T., Waine, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plant+cyclotides:+A+unique+family+of+cyclic+and+knotted+proteins+that+defines+the+cyclic+cystine+knot+structural+motif.">Plant cyclotides: A unique family of cyclic and knotted proteins that defines the cyclic cystine knot structural motif.</a> Journal of Molecular Biology. 294 (5), 1327-1336 (1999).</li><li>Stoecklin, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemistry+and+physiological+properties+of+gymnemic+acid,+the+antisaccharine+principle+of+the+leaves+of+Gymnema+sylvestre.">Chemistry and physiological properties of gymnemic acid, the antisaccharine principle of the leaves of Gymnema sylvestre.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 17 (4), 704-708 (1969).</li><li>Liu, H. M., Kiuchi, F., Tsuda, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+structure+elucidation+of+gymnemic+acids,+antisweet+principles+of+Gymnema+sylvestre.">Isolation and structure elucidation of gymnemic acids, antisweet principles of Gymnema sylvestre.</a> Chemical &amp; Pharmaceutical Bulletin (Tokyo). 40 (6), 1366-1375 (1992).</li><li>Veerapandian, R., Vediyappan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gymnemic+Acids+Inhibit+Adhesive+Nanofibrillar+Mediated+Streptococcus+gordonii-Candida+albicans+Mono-Species+and+Dual-Species+Biofilms.">Gymnemic Acids Inhibit Adhesive Nanofibrillar Mediated Streptococcus gordonii-Candida albicans Mono-Species and Dual-Species Biofilms.</a> Frontiers in Microbiology. 10, 2328 (2019).</li><li>Chaffin, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+albicans+cell+wall+proteins.">Candida albicans cell wall proteins.</a> Microbiology and Molecular Biology Reviews. 72 (3), 495-544 (2008).</li></ol>

天然物源(植物など)からの小分子は、化学構造において非常に多様な複雑な二次代謝産物を含む。彼らは植物の防衛メカニズムに関与していると考えられています。また、ポリペプチドは植物組織22にも存在する。これらの天然物の小分子は、創薬と開発のための試験分子の豊富な供給源です。しかし、その分離と精製に必要な困難で退屈な方法は、治療用途への使用を制限...

複雑な生体試料からの生体分子の精製は、生物学的実験において不可欠かつしばしば困難なステップである1。等電式焦点(IEF)は、担体アンホリュートが電荷に従って移動し、電場3にpH勾配を確立する複雑な生体分子の高解像度分離に適している。IEFのための最初の商業キャリアアンプホーリテは、1964年にオロフ・ヴェスターベルクによって開発され、特許を取得しました4,5.担体アンプリエステルは、脂肪族オリゴ-アミノオリゴ-カルボン酸分子の様々な長さと分岐6.その後、ベスターバーグらは生体分子,6,7を分離する際の使用拡大のためにキャリアアンプリ6ケートを改良した。
生体分子を分離する方法としては、アガロースおよびポリアクリルアミドゲル電気泳動、二次元ゲル電気泳動(2-DE)、等電集、キャピラリー電気泳動、イソタコフォレシス、その他のクロマトグラフィー技術(例えば、TLC、FPLC、HPLC)2が挙げられる。2「ロトフォー」と呼ばれる器械で行われた液体相IEFは、ミラノ・ビア8によって発明された。彼は、この装置のコンセプトとデザインを開拓し、電気泳動の理論に広く貢献しました。彼のチームはまた、コンピュータシミュレーションのための電気泳動分離プロセスの数学的モデルを開発しました 9.
液相IEF装置は、20の多孔質コンパートメントと循環水冷却セラミックロッドに分割されたナイロンコアからなる水平回転円筒形セルである。多孔質チャンバーは、分子が電極間の水相を通って移動することを可能にし、分画の真空下で精製されたサンプルの収集を可能にする。この精製システムは、特定の分子を<4時間で最大1000倍に精製することができます。この装置の貴重な特徴は、複雑な混合物から精製するための第一歩として、または純度10を達成するための最終ステップとして適用することができるということです。目的の分子がタンパク質である場合、別の利点は、その天然の立体構造が分離中に維持されることである。
液体相IEFの使用は、タンパク質、酵素および抗体,,精製66、10、11、12、13、1410,11について広く報告されている。13,1412ここでは、このアプローチを用いて、小分子とペプチドを薬用植物Gymnema sylvestreから分離および精製する方法について説明します。このプロトコルは、研究者が低コストで下流のアプリケーションのための植物抽出物から活性小分子を濃縮し、精製するのに役立ちます。また、このIEF系系ではカンジダ・アルビカンス菌15から抽出した複雑なタンパク質抽出物からのタンパク質の濃縮が2番目の例として示される。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.45 &#181;m syringe filter</td>
			<td>Fisher scientfic</td>
			<td>09-720-004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M3148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium carbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>207861-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Lyte 3/10 Ampholyte</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>163-1113</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Lyte 5/8 Ampholyte</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>163-1192</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact low temperature thermostat</td>
			<td>Lauda -Brinkmann</td>
			<td>RM 6T</td>
			<td>Set water cooling to 4 oC and it can be run even at 0 oC as when it passes through the Rotofor cooling core, the circulating water temperature will be around 5 or more depending on the voltage.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coomassie Brilliant Blue R</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B7920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis tubing (3,500 MWCO)</td>
			<td>Spectrum Spectra/Por</td>
			<td>132112T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gymnema plant leaf extract powder (&#62;25% Gymnemic acids)</td>
			<td>Suan Farma, NJ USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Lab companion</td>
			<td>SI 300R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DM 6B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini protean electrophoresis</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH meter</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td>S20</td>
			<td>Useful to determine the pH of the Rotofor (liquid-phase IEF) fractions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotofor</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>170-2972</td>
			<td>http://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/M1702950E.pdf (Rotofor Instruction manual for assembling the unit)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640 Medium</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>DH30255.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sealing tape</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>170-2960</td>
			<td>Scotch tape may also be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorvall legend micro 17 centrifuge</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>75002432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TPP tissue culture plate -96 well flat bottom</td>
			<td>TPP</td>
			<td>TP92696</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

separation of bioactive small molecules, peptides from natural sources and proteins from microbes by preparative isoelectric focusing (ief) method

植物や微生物由来の天然物は、生物活性分子の豊富な供給源です。使用する前に、複雑な抽出物からの活性分子を下流の適用のために精製しなければならない。この目的のために利用可能な様々なクロマトグラフィー方法がありますが、すべてのラボが高性能の方法を提供できるわけではないし、複雑な生物学的サンプルからの分離は困難な場合があります。ここでは、微分液体相等圧体集光(IEF)が、その等電点(pI)に基づいて、小分子やペプチドを含む分子を複雑な植物抽出物から分離できることを実証する。我々は、複雑な生物学的サンプル分画と特性評価にこの方法を用いた。概念実証として、我々は、小分子とペプチドのテルペノイドサポニンのファミリーを単離し、ジムネマシルヴェストル植物抽出物を分画した。また、カンディダ・アルビカンス菌をモデルとして用いた微生物タンパク質分離の効果も実証した。

ジムネマシルヴェストル植物抽出物からの小分子とペプチドの分離と精製 前処理液相IEF法を用いて、ヒト病原性真菌C.アルビカンスから薬用植物抽出物および細胞表面タンパク質を分画した。これらの分数プロトコルの概略を図 1に示します。
液体相IEFから得られたG.シルヴェストル抽出物の20画分から、暗色の分...

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Separation of Bioactive Small Molecules, Peptides from Natural Sources and Proteins from Microbes by Preparative Isoelectric Focusing IEF Method

目的は、液相等電体集光(IEF)法を用いることによって、生理活性小分子、複雑な植物抽出物からのペプチド、および病原性微生物からのタンパク質を分画し、単離することです。さらに、分離した分子を同定し、その生物活性を確認した。

生物活性小分子、天然源からのペプチド、微生物からのタンパク質の分離(IEF)法による分離

Natural products derived from plants and microbes are a rich source of bioactive molecules. Prior to their use, the active molecules from complex extracts ...

我々のプロトコルは、植物抽出物からの活性分子の分離と精製に関する新しい知見を記述する。科学者は、これらの方法を使用して、治療薬のユーザーのための天然物源から小分子およびペプチドを分離することができます。計測器コンポーネントとそのアセンブリ方法について理解してください。分離するサンプルは、提案されたガイドラインによって調製されることを確認することが重要です。このメソッドには、計測器の複数のアセンブリプロセスが含まれます。そして、視覚的なデモンストレーションは、ユーザーがフォローし、正常に研究にそれらを適用するのに役立ちます。液相を組み立てた後、取扱説明書に記載したIEFユニットは、0.1モル水酸化ナトリウムと0.1モルリン酸のカチオン交換膜でアニオン交換膜を平衡化する。3つの大きな楕円形の穴がゴムによってブロックされないままになるように、ゴム製のガスケットを整列します。これは、電気泳動中に膜を介して電極とサンプルコンパートメントの間でイオンを交換するのに役立ちます。イオン交換用ガスケット内の3つの楕円形の穴を合わせることで、電極の内側と外側の部分を組み立てます。その後、それぞれの電解質を電極に充填して、膜が乾燥するのを防ぎます。次に、プラスチック製のネジホルダーを締めて、漏れのないアセンブリを確保します。サンプル収集ボードをシーリングテープで覆います。次に、次のシーケンスでセラミック冷却指の上に集電室の部品を組み立てます:アノード電極、ナイロン膜コア、集光室およびカソード電極。50ミリリットルのシリンジを使用して、あらかじめ冷却された蒸留水で焦点チャンバーを満たします。標準的なIEFセルの場合は、60ミリリットルの水を加えます。IEFユニットを摂氏4度で循環冷却水に接続します。電圧が安定するまで、約3〜5分で15ワットと3000ボルトでユニットを操作します。次に、電源をオフにします。分数コレクターを使用して、セルから水を取り除きます。シーリングテープで回収板を再密封します。0.6 ジメナシシルヴェストル植物エキスのグラムを追加します, 蒸留水の60ミリリットルに.ローラーチューブに5分間混合して植物抽出物を溶解します。不溶性粒子を除去するために、この溶液を5分間Gの10,000倍に遠心する。上清を150ミリリットルのガラスビーカーに移し、アンプホーレを加え、体積で約0.6ミリリットルの1%溶液を作り出します。1.5インチ19ゲージの鈍い端の針と50ミリリットルのシリンジを使用して、サンプル採取板を通してIEFセルにこの溶液をロードする。次に、スタンドからセルを取り出し、電極室をタップして、気泡を取り除いて取り除きます。冷却水にユニットを接続します。電源を一定に15ワットで分画を開始します。電圧が一定の値(約3時間)に達するまでIEFユニットを実行します。ボタン上の収穫を押した後、分数のコレクターピンをコレクションボードに合わせます。シーリングテープを通してピンを押して、ジムネマシルヴェストルの分数の収集を開始します。C.albicansと酵母ペピトンデキストローススープの単一コロニーを摂氏30度で一晩揺れで育てる。培養物を遠心分離管に移し、10,000倍Gで5分間遠心分離して酵母細胞を採取する。上清を取り除いた後、酵母細胞を緩衝液に吊り下げ、ローラーチューブで5度で1時間回転させます。酵母細胞を除去するために、懸濁液を10,000倍Gで5分間遠心する。その後、0.45マイクロメートルのフィルターを介してタンパク質抽出物をフィルタリングします。タンパク質抽出物を透析チューブに移し、水に対して水に対して摂氏4度で15時間移動します。タンパク質濃度を推定した後、500ミリグラムの全タンパク質を含むタンパク質抽出物の体積を収集する。500ミリグラムのタンパク質を、1%アンプリルテを含む水の60ミリリットルで希釈します。注射器を使用して、希釈したタンパク質抽出物をIEF細胞にロードし、一定の15ワットで4時間操作します。この装置は高圧電源を使用するため、ユーザーは、ライブ電極との直接接触を避けるために、すべての予防措置を講じる必要があります。分数コレクターは20のプラスチック管、それぞれ12ミリメートルx 75ミリメートルが含まれています。そして、それは真空ポンプに接続されています。ボタンの収穫を押して分数を収集する準備をします。次に、20個のコレクションピンを20個のコレクションボードに合わせて、密閉されたフォーカスセルを使用します。回収ピンをシーリングテープに押し込み、同時に真空ポンプをオンにします。各チューブは約3ミリリットルのタンパク質分画を収集します。タンパク質の分率を減らして沸騰させた後、12.5%SDSページゲルで分析します。クーマシーブルー染料でゲルを汚し、室温でロッカーに置きます。2〜3時間後にゲルをデステインする。次に、ゲルイメージャーを使用してゲル画像を記録します。50ミリモルグルコースを添加したRPMI細胞培養培地中で1:1000比でC.albicansの一晩培養を希釈することにより、酵母細胞懸濁液を調製する。96ウェルプレートの各ウェルにセルサスペンションの90マイクロリットルを追加します。次に、各G.sylvestre分率の10マイクロリットルを別々の井戸に加えます。負のコントロールとして、1%アンプリルテで10マイクロリットルの水を別々の井戸に加えます。96ウェルプレートを摂氏37度で12時間インキュベートした後、顕微鏡でプレートを観察します。糸状成長の欠如は、C.アルビカンス酵母からヒュファへの変換の阻害を示す。G.sylvestre抽出物の20分の一部は、液相IEFによって得られた。暗い色の分子、ジムネミック酸は、ユニットのアノード端に移動し、濃縮された。半透明の淡黄色の画分は、カソード末端で観察された。各G.sylvestre屈折からのアリコートは、SDSページによって減少し、沸騰し、解決された。クマシーブルー染色剤は、約5キロダルトンで異なるポリペプチドバンドを示し、画分16〜19で濃縮した。分数1のジムネミック酸は、タンパク質性がないため、次の数画分は検出されなかった。しかし、これらの分子はTLCによって分離され、UV光下で検出することができる。画10は、これらの小分子の検出可能な量を含み、有機小分子のほとんどが1〜3分の1で富化されたことを示唆した。全20 G.シルヴェストル分画は、C.albicansにおける酵母からヒュファへの変換および催眠増殖の阻害についてアッセイした。最大の阻害は、画分10以上では認められなかった1分の1とほとんどない阻害で観察された。C.albicansの細胞表面タンパク質を液相IEFを用いて分画した。そして、18分の一部からのアリコートをSDSページで分析した。濃縮タンパク質は、いくつかの分数で見えました.始めに、小分子は非歩行性であると考えられているため、等電焦点によって分離することができなかった。我々の研究は、彼らが少なくとも毎週、歩行的であることを示しており、この方法は、他の小分子のためにさらに探求することができます。

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Separation of Bioactive Small Molecules, Peptides from Natural Sources and Proteins from Microbes by Preparative Isoelectric Focusing (IEF) Method

Separation of Single-stranded DNA, Double-stranded DNA and RNA from an Environmental Viral Community Using Hydroxyapatite Chromatography

ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィーを用いた環境ウイルスのコミュニティから一本鎖DNA、二本鎖DNAとRNAの分離

Viruses, particularly bacteriophages (phages), are the most numerous biological entities on Earth1,2.  Viruses modulate host cell abundance and diversity, ...

免疫・感染学

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

の寄生蜂の紹介<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;と抗寄生虫免疫応答

Most known parasitoid wasp species attack the larval or pupal stages of Drosophila. While Trichopria drosophilae infect the pupal stages of the host (Fig. ...

Quantitative Imaging of Lineage-specific Toll-like Receptor-mediated Signaling in Monocytes and Dendritic Cells from Small Samples of Human Blood

ヒト血液の小さなサンプルから単球および樹状細胞のlineage特異的Toll様受容体を介するシグナル伝達の定量的イメージング

Individual variations in immune status determine responses to infection and contribute to disease severity and outcome.  Aging is associated with an ...

Separation of Plasmodium falciparum Late Stage-infected Erythrocytes by Magnetic Means

Separation of Plasmodium falciparum Late Stage-infected Erythrocytes by Magnetic Means

の分離<em&gt;熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）</em磁気手段によって&gt;後期感染赤血球

Unlike other Plasmodium species, P. falciparum can be cultured in the lab, which facilitates its study 1. While the parasitemia achieved can reach the ...

Automated Separation of C. elegans Variably Colonized by a Bacterial Pathogen

Automated Separation of C. elegans Variably Colonized by a Bacterial Pathogen

の自動分離<em&gt; C.虫</em&gt;可変細菌性病原体の植民地

The wormsorter is an instrument analogous to a FACS machine that is used in studies of Caenorhabditis elegans, typically to sort worms based on expression ...

T Cells Capture Bacteria by Transinfection from Dendritic Cells

T細胞は、樹状細胞からTransinfectionによって細菌をキャプチャ

Recently, we have shown, contrary to what is described, that CD4+ T cells, the paradigm of adaptive immune cells, capture bacteria from infected dendritic ...

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

マウスの脾臓から不変ナチュラルキラーT細胞を単離および拡張するための最適化方法

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells ...

Isolation of Infiltrating Leukocytes from Mouse Skin Using Enzymatic Digest and Gradient Separation

酵素消化および勾配分離を使用したマウス皮膚から浸潤白血球の単離

Dissociating murine skin into a single cell suspension is essential for downstream cellular analysis such as the characterization of infiltrating immune ...

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

調節するc-ジ-GMPシグナリングで、小さな分子をスクリーニングするためのハイスループットセットアップの確立<em&gt;緑膿菌</em

Bacterial resistance to traditional antibiotics has driven research attempts to identify new drug targets in recently discovered regulatory pathways. ...

Phenotypic Characterization of Macrophages from Rat Kidney by Flow Cytometry

フローサイトメトリーによるラットの腎臓からのマクロファージの表現型の特徴

There is increasing evidence suggesting the important role of inflammation and, subsequently, macrophages in the development and progression of renal ...