Name: live-cell imaging of the life cycle of bacterial predator bdellovibrio bacteriovorus using time-lapse fluorescence microscopy
Uploaded: 2020-05-08T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Denne undersøgelse blev støttet af National Science Centre grant Opus 2018/29/B/NZ6/00539 til J.Z.C.

1. Præparat af B. bakterieiovorus lysat til mikroskopisk analyse
<ol><li>I en 250 ml kolbe skal coculture ved at kombinere 1 ml frisk 24 h B. bakterieiovoruskultur (f.eks. E. coli S17-1 pZMR100) med 50 ml Ca-HEPES buffer (25 mM HEPES, 2 mM CaCl2 [pH = 7.6]) suppleret med antibiotika, når det er nødvendigt (her, 50 μg/mL kanamycin).</li>
	<li>Kolbonnende i 24 timer ved 30 °C med omrystning ved 200 omdrejninger.</li>
	<li>Kontroller, at byttecellerne er fuldt lyset af væskemont...

<ol>
	<li>Shatzkes, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predatory+Bacteria+Attenuate+Klebsiella+pneumoniae+Burden+in+Rat+Lungs.">Predatory Bacteria Attenuate Klebsiella pneumoniae Burden in Rat Lungs.</a> mBio. 7 (6), (2016).</li><li>Iebba, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bdellovibrio+bacteriovorus+directly+attacks+Pseudomonas+aeruginosa+and+Staphylococcus+aureus+Cystic+fibrosis+isolates.">Bdellovibrio bacteriovorus directly attacks Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus Cystic fibrosis isolates.</a> Frontiers in Microbiology. 5, (2014).</li><li>Willis, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injections+of+Predatory+Bacteria+Work+Alongside+Host+Immune+Cells+to+Treat+Shigella+Infection+in+Zebrafish+Larvae.">Injections of Predatory Bacteria Work Alongside Host Immune Cells to Treat Shigella Infection in Zebrafish Larvae.</a> Current biology: CB. 26 (24), 3343-3351 (2016).</li><li>Lambert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+the+flagellar+filament+and+the+role+of+motility+in+bacterial+prey-penetration+by+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Characterizing the flagellar filament and the role of motility in bacterial prey-penetration by Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Molecular Microbiology. 60 (2), 274-286 (2006).</li><li>Lambert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Predatory+Patchwork:+Membrane+and+Surface+Structures+of+Bdellovibrio+bacteriovorus.">A Predatory Patchwork: Membrane and Surface Structures of Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Advances in Microbial Physiology. 54, 313-361 (2008).</li><li>Makowski, &. #. 3. 2. 1. ;., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initiation+of+Chromosomal+Replication+in+Predatory+Bacterium+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Initiation of Chromosomal Replication in Predatory Bacterium Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Frontiers in Microbiology. 7, 1898 (2016).</li><li>Makowski, &. #. 3. 2. 1. ;., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+Chromosome+Replication+and+Its+Relationship+to+Predatory+Attack+Lifestyles+in+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Dynamics of Chromosome Replication and Its Relationship to Predatory Attack Lifestyles in Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Applied and Environmental Microbiology. 85 (14), (2019).</li><li>Fenton, A. K., Kanna, M., Woods, R. D., Aizawa, S. I., Sockett, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shadowing+the+actions+of+a+predator:+backlit+fluorescent+microscopy+reveals+synchronous+nonbinary+septation+of+predatory+Bdellovibrio+inside+prey+and+exit+through+discrete+bdelloplast+pores.">Shadowing the actions of a predator: backlit fluorescent microscopy reveals synchronous nonbinary septation of predatory Bdellovibrio inside prey and exit through discrete bdelloplast pores.</a> Journal of Bacteriology. 192 (24), 6329-6335 (2010).</li><li>Kuru, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+D-amino-acids+reveal+bi-cellular+cell+wall+modifications+important+for+Bdellovibrio+bacteriovorus+predation.">Fluorescent D-amino-acids reveal bi-cellular cell wall modifications important for Bdellovibrio bacteriovorus predation.</a> Nature Microbiology. 2 (12), 1648-1657 (2017).</li><li>Dashiff, A., Junka, R. A., Libera, M., Kadouri, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predation+of+human+pathogens+by+the+predatory+bacteria+Micavibrio+aeruginosavorus+and+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Predation of human pathogens by the predatory bacteria Micavibrio aeruginosavorus and Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Journal of Applied Microbiology. 110 (2), 431-444 (2011).</li></ol>

På grund af den øgede interesse i at bruge B. bacteriovorus som et levende antibiotikum, nye værktøjer til at observere aggressiv livscyklus, især rovdyr-patogen interaktioner, er nødvendige. Den præsenterede protokol bruges til at spore hele B. bakteriens livscyklus, især under sin vækst inde i værten, i realtid. Desuden, anvendelse af en stamme, der producerer fluorescerende mærket beta klemme af DNA polymerase III holoenzyme aktiveret overvågning af kromosom replikation progression i hele...

Bdellovibrio bacteriovorus er en lille (0,3-0,5 μm med 0,5-1,4 μm) gram-negativ bakterie, der udnytter andre gram-negative bakterier, herunder skadelige patogener såsom Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, og Shigella flexneri1,2,3. Da B. bacteriovorus dræber patogener, det betragtes som en potentiel levende antibiotikum, der kan anvendes til bekæmpelse af bakterielle infektioner, især dem forårsaget af multiresistente stammer.
B. bacteriovorus udviser en ejendommelig livscyklus bestående af to faser: en fritlevende ikke-replikeret angrebsfase og en intracellulær forplantningsfase (Figur 1). I den fritlevende fase søger denne meget motile bakterie, som bevæger sig med hastigheder på op til 160 μm/s, efter sit bytte. Efter fastgørelse til byttets ydre membran kommer den ind i periplasmen4,5. I den interperiplasmiske forplantningsfase bruger B. bacteriovorus et væld af hydrolytiske enzymer til at nedbryde værtens makromolekyler og genbruge dem til sin egen vækst. Kort efter at invadere periplasma, værtscellen dør og oppustethed i en sfærisk struktur kaldet en bdelloplast, inden for hvilken den aggressiv celle forlænger og replikerer sine kromosomer. Replikeringsprocessen starter ved replikeringsstarten (oriC)6 og fortsætter, indtil flere kopier af kromosomet er blevet fuldstændig syntetiseret7. Interessant, replikation af hvert kromosom er ikke efterfulgt af celledeling. I stedet rovdyrlanger til at danne en lang, multinucleoid og filamentous celle. Ved næringsstofudtynding gennemgår glødetråden synkron septation, og afkomceller frigives fra bdelloplast8.
Før B. bacteriovorus kan bruges som et levende antibiotikum mod bakterielle infektioner, er det afgørende at forstå de store faser af sin livscyklus, især dem, der vedrører dens spredning inde i byttet. Live-celle billeddannelse af B. bacteriovorus har været udfordrende, på grund af de forskellige morfologiske former for rovdyr og dets bytte i den komplekse livscyklus. Hidtil har samspillet mellem B. bacteriovorus og dens værtscelle er hovedsageligt blevet undersøgt ved elektronmikroskopi og snap-shot analyse2,9,10, som begge har begrænsninger, især når de bruges til at overvåge på hinanden følgende stadier af aggressiv livscyklus. Disse metoder giver billeder i høj opløsning af B. bacteriovorus celler og muliggøre observation af et lille rovdyr under angrebet eller vækstfasen. Men, de tillader ikke sporing af enkelt B. bakteriovorus celler i begge livscyklus faser.
Præsenteret her er en omfattende protokol for brug af time-lapse fluorescens mikroskopi (TLFM) til at overvåge hele livscyklus B. bacteriovorus. Et system bestående af en agarosepude anvendes i kombination med en cellebilledskål, hvor de rovfugleceller kan bevæge sig frit under agarosepuden, mens de immobiliserede bytteceller er i stand til at danne bdelloplasts (Figur 2). Denne opsætning er udarbejdet på grundlag af specifikke stammer af både E. coli og B. bacteriovorus, men protokollen kan let ændres, så den passer til en brugers individuelle stammer (f.eks med forskellige udvælgelsesmarkører, proteiner sammensmeltet med forskellige fluorophores osv.).
I dette tilfælde, at visualisere B. bacteriovorus under angrebet fase, en bestemt stamme (HD100 DnaN-mNeonGreen/PilZ-mCherry) blev konstrueret, der udtrykker en fluorescerende mærket version af cytoplasmatisk protein, PilZ (tilgængelig i vores laboratorium efter anmodning)7. Denne stamme desuden producerer DnaN (β-glidende klemme), en underenhed af DNA polymerase III holoenzym, fusioneret med en fluorescerende protein. Dette gør det muligt løbende DNA replikation, der skal overvåges inde i aggressiv celler, som de vokser inden for bdelloplasts.
Selv om den beskrevne protokol og software, der anvendes til billederhvervelse, henviser til et omvendt mikroskop fra en bestemt producent (se Tabelover Materialer), kan denne teknik justeres for ethvert omvendt mikroskop, der er udstyret med et miljøkammer eller en anden ekstern varmeholder, og som kan foretage time-lapse-billeddannelse. Til dataanalyse kan brugerne vælge tilgængelig software, der er kompatibel med de enkelte outputformater.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61105/61105fig01.jpg"> Figur 1: B. bacteriovorus livscyklus i E. coli som værtscelle. Under angrebet fase, en fri-svømning B. bacteriovorus celle søger efter og tillægger en vært E. coli celle. Efter invasionen bliver den rovcelle lokaliseret i byttets periplasme, hvilket ændrer værtscellens form og danner en bdelloplast. Den reproduktive fase starter med bdelloplast dannelse. Den aggressiv celle fordøjer byttecellen og genbruger simple forbindelser til at bygge sine egne strukturer. B. bacteriovorus vokser som en lang enkelt glødetråd inde i værtens periplasm. Når byttecellens ressourcer er opbrugt, b. bakterienus glødetråd synkront septater og danner afkom celler. Efter afkomceller udvikle deres flagella, de lyse bdelloplast. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61105/61105fig01large.jpg" target="_blank">Klik her for at se en større version af dette tal.</a>

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>MPW MED. INSTRUMENTS</td>
			<td>MPW-260R</td>
			<td>Rotor ref. 12183</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CertifiedMolecular Biology Agarose</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>161-3100</td>
			<td>low fluorescence agarose for agarose pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji</td>
			<td>ImageJ</td>
			<td>https://imagej.net/Fiji</td>
			<td>Open source image processing package</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Bottom Dish 35 mm</td>
			<td>ibidi</td>
			<td>81218-200</td>
			<td>uncoated glass</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>GE</td>
			<td>DeltaVision Elite</td>
			<td>Microtiter Stage, ultimate focus laser module, DV Elite CoolSnap HQ2 Camera, SSI assembly FP DV, kit obj. Oly 100x oil 1.4 NA, prism Nomarski 100x LWD DIC, ENV ctrl IX71 uTiter opaQ 240 V</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minisart Filter 0.45 &#181;m</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>16555----------K</td>
			<td>Cellulose Acetate, Sterile, Luer Lock Outlet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Start SoftWoRx</td>
			<td>GE</td>
			<td></td>
			<td>Manufacturer-supplied imaging software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live-cell imaging of the life cycle of bacterial predator bdellovibrio bacteriovorus using time-lapse fluorescence microscopy

Bdellovibrio bacteriovorus er en lille gram-negativ, forpligte aggressiv bakterie, der dræber andre gram-negative bakterier, herunder skadelige patogener. Derfor er det betragtes som et levende antibiotikum. At anvende B. bacteriovorus som et levende antibiotikum, er det først nødvendigt at forstå de store faser af sin komplekse livscyklus, især dens spredning inde bytte. Hidtil har det været udfordrende at overvåge på hinanden følgende stadier af aggressiv livscyklus i realtid. Præsenteret her er en omfattende protokol for real-time billeddannelse af hele livscyklus B. bacteriovorus, især under sin vækst inde i værten. Til dette formål anvendes et system bestående af en agarosepude i kombination med cellebilleddannelsesretter, hvor de rovfugleceller kan bevæge sig frit under agarosepuden, mens immobiliserede bytteceller er i stand til at danne bdelloplasts. Anvendelsen af en stamme, der frembliker en fluorescerende mærket β-underenhed af DNA polymerase III yderligere gør det muligt kromosom replikation, der skal overvåges i reproduktionsfasen af B. bakteriens livscyklus.

Det beskrevne TLFM-baserede system gør det muligt at spore individuelle celler af B. bakterieædre i tide (Figur 3, Film 1) og giver værdifulde oplysninger om hver fase af den komplekse aggressiv livscyklus. PilZ-mCherry-fusionen gør det muligt at mærke hele den rovcelle i angrebsfasen samt den tidlige fase af vækstfasen (figur 3). Overgangen fra angrebet til replikativ fase blev visualiseret ikke kun af værten bdelloplast dannels...

Watch this Scientific Journal Video about Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Præsenteret her er en protokol, der beskriver overvågning af hele livscyklus aggressiv bakterie Bdellovibrio bakterien ved hjælp af time-lapse fluorescens mikroskopi i kombination med en agarose pad og celle-imaging retter.

Live-Cell Imaging af livscyklus bakteriel Predator Bdellovibrio bacteriovorus ved hjælp af Time-Lapse Fluorescens mikroskopi

Bdellovibrio bacteriovorus is a small gram-negative, obligate predatory bacterium that kills other gram-negative bacteria, including harmful pathogens. ...

Live-Cell Bdellovibrio bacteriovorus imaging har været udfordrende på grund af den komplekse livscyklus af disse aggressiv bakterier. Vores protokol giver mulighed for overvågning af faser af hele livscyklus i realtid. Selv om vores protokol er baseret på en specifik udligne stammer, det kan let tilpasses til en række bakterielle stammer, herunder patogene stammer.For at oprette en B.bacteriovorus kultur, kombinere en milliliter friske 24-timers dyrkede bakterier med tre milliliter natten byttekultur i en 250 milliliter kolbe indeholder 50 milliliter calcium hippier buffer suppleret med antibiotika efter behov. Efter en 24 timers inkubation ved 30 grader Celsius og 200 omdrejninger i minuttet, skal du kontrollere, at byttecellerne er blevet fuldt lyset af væskemonteret ansigtskontrastmikroskopi. Talrige flerangreb faset B.bacteriovorus celler bør være til stede, og ingen E.coli celle eller bdelloplast bør være synlige.Strain B.bacteriovorus kultur gennem en 0,45 mikrometer pore størrelse filter i en 50 milliliter konisk rør og suspendere ned filtratet i en centrifuge. Derefter re-suspendere B.bacteriovorus pellet i tre milliliter calcium hippier buffer til en endelig optisk tæthed på 600 nanometer på ca 0,2 og inkubere bakterier ved 30 grader celsius og 200 omdrejninger i minuttet i 30 minutter. For at forberede værtscellerne skal du vælge en enkelt koloni fra værtsstammen af interesse og nikke bakterierne i 10 milliliter YT-medium suppleret med antibiotika som nødvendigt for en overnight inkubation ved 37 grader Celsius og 180 omdrejninger i minuttet.Den næste morgen overføre to milliliter af natten kultur til en to milliliter reagensglas og pellet cellerne ved centrifugering. Derefter re-suspendere pellet i 200 mikroliter af calcium hippier buffer. Det er meget vigtigt fuldt ud at re-suspendere hele celle pellet efter centrifugering for at sikre, at byttecellen er adskilt på enkelt celleniveau.For at forberede cellerne til time-lapse fluorescens mikroskopi, først, bland 200 milligram lav fluorescerende molekylær kvalitet agarose med 20 milliliter calcium hippier buffer og opløse agarose i en mikrobølgeovn. Hæld tre milliliter af den smeltede agarose i en 35 millimeter glas bund skål og lad agarose til at størkne. Ved hjælp af et laboratorium mikro spatel, forsigtigt fjerne agarose pad fra fadet uden at forstyrre midten pol af puden og placere puden nederste side op på en petriskål dække.Placer fem mikroliter af den koncentrerede værtscellesuspension på spejlvendte pude, og brug en vaccinationssløjfe til at sprede celler i midterstangen. Næste tilføje fem mikroliter af den koncentrerede B.bacteriovorus suspension på værtscellen belagt overflade uden at sprede og hurtigt returnere gelen til 35 milliliter glas bund skål øverste side ned. Derefter dække fadet med et låg.For Time-Lapse Florescence mikroskopi af co-kultur, placere skålen i en petriskål indehaveren sådan, at fadet ikke vil bevæge sig i løbet af forsøget og placere en en dråbe nedsænkning olie på den omvendte mikroskop mål og en dråbe på bunden af skålen. Monter holderen på mikroskopstadiet i det omvendte mikroskopkammer, og i mikroskopsoftwaren indstilles forstørrelsen til 100X og polykromlinsen til GFP og Mcherry. Ved hjælp af en iPS i Brightfield skal du finde brændplanet og åbne den meningsløse manager.Flyt fasen, og brug knappen Mark points til at gemme koordinaterne for mindst 10 interessepositioner. Skift kameravalen fra iPS til skærmen. Indstil brændplanet, og klik på knappen Erstat punkt i den meningsløse til manager for at kalibrere hvert punkt.Åbn eksperimentdesigneren, og udjænkningskassen til sygdomsstabling. Vælg de relevante lysstofrør og de optimale elimineringsindstillinger, og angiv intervallerne mellem billedopkøbet og eksperimentets samlede tid. Aktivér fokusvedligeholdelse for de valgte placeringer, og vælg den datamappe, som billedfilerne skal gemmes i.Kontroller alle indstillingerne i mikroskopsoftwarekontrollen igen, og start time-lapse-eksperimentet. Efter den første time af eksperimentet skal du kontrollere, at alle scenepositionerne stadig er i fokus. Når time-lapse eksperimentet er færdigt, skal du fjerne petriskålen og kassere 35 millimeter skålen med en agarosepude i henhold til de relevante biosikkerhedsprotokoller.Til behandling af time-lapse-billeddata skal du overføre de eksperimentelle data til en computer fyldt med Fiji-softwaren og åbne et billede i Fiji. I importindstillinger for bioformater skal du vælge visningsstak med hyperstack. Vælg automatisk skalering i sammensat farvetilstand.Ved at rulle gennem billedstakkene vurdere, om cellerne og bdelloplasts forblev fokus i løbet af eksperimentet. Hvorvidt de grønne fluorescerende pletter fra DNA og mNeon grøn er til stede i B.bacteriovorus celler inde i bdelloplasts hele vækstfasen, og om alle faser af aggressiv livscyklus kan visualiseres. Hvis du vil analysere en bestemt B.bacteriovorus celle bdelloplast, skal du bruge et markeringsværktøj til at markere den celle af interesse.Dupliker derefter det valgte område. I det duplikerede billede skal du klikke på processen og udjævne og for hver lysstofrørskanal klikke på billede, farve, kanalværktøjer og vælge den kanal, der er interesseret. Klik derefter på billede, juster og lysstyrkekontrast for at justere billedets lysstyrke og kontrast i hver kanal.Hvis du vil tilføje en skaleringslinje, skal du vælge analyser, værktøjer og skalerbar. Hvis du vil føje et tidsstempel til billederne, skal du klikke på billeder, stakke og tidsstempler. Hvis du vil gemme de ændrede billeder, skal du vælge TIF.Hvis du vil gemme dataene som en billedsekvens, skal AVI oprette en film eller PNG for at gemme et enkelt billede af den aktuelle ramme. Denne Time-Lapse Fluorescens mikroskopi baseret system giver mulighed for real-time sporing af individuelle B.bacteriovorus celler og giver værdifulde oplysninger om hver fase af den komplekse aggressiv livscyklus. Den pillerne mCherry fusion gør det muligt for hele aggressiv celle, der skal mærkes i angrebet fase samt i den tidlige fase af vækstfasen.Overgangen fra angrebet til den repliktive fase kan visualiseres ikke kun af værten bdelloplast formation, men også af udseendet af replisome. Replisom er samlet på den invaderende celle pol og mere end én replisome kan observeres inden for en voksende B.bacteriovorus glødetråd som reproduktion fase skrider frem. Når flere kopier af kromosomet er syntetiseret, afsluttes replikeringen.Endelig gennemgår de flerkernede glødetråder septation, og afkomcellerne frigives fra bdelloplast. B.bacteriovorus celler bør være materiale nok til aktivt at søge efter deres bytte og hele celletætheden bør være høj nok til at tillade aggressiv celle vedhæftet fil. Denne platform kan være nyttig i forsøg med multiresistente patogener og for at lette forbedringer i genteknologien af B.bacteriovorus som levende antibiotikum i human- og veterinærmedicin.

Research

JoVE Journal

Biology

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Monitoring Actin Disassembly with Time-lapse Microscopy

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Quantitative Live Cell Fluorescence-microscopy Analysis of Fission Yeast

Kvantitative levende celler fluorescens-mikroskopi Analyse af Fission Yeast

Several microscopy techniques are available today that can detect a specific protein within the cell. During the last decade live cell imaging using ...

Quantitative Analysis of Random Migration of Cells Using Time-lapse Video Microscopy

Kvantitativ analyse af Random migration af celler Brug af Time-lapse Video Microscopy

Cell migration is a dynamic process, which is important for embryonic development, tissue repair, immune system function, and tumor invasion 1, 2. During ...

Acquiring Fluorescence Time-lapse Movies of Budding Yeast and Analyzing Single-cell Dynamics using GRAFTS

Erhvervelse Fluorescens Time-lapse film fra Spirende Gær og analysere encellede Dynamics hjælp poder

Fluorescence time-lapse microscopy has become a powerful tool in the study of many biological processes at the single-cell level. In particular, movies ...

Visualization of Craniofacial Development in the sox10: kaede Transgenic Zebrafish Line Using Time-lapse Confocal Microscopy

Visualisering af kraniofaciale udvikling i sox10: Kaede Transgene zebrafisk linje ved hjælp af Time-lapse konfokal mikroskopi

Vertebrate palatogenesis is a highly choreographed and complex developmental process, which involves migration of cranial neural crest (CNC) cells, ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional sporing af hæmatopoietisk stamcelletransplantation og stamcelle i Voksen Mouse calvarie knoglemarv

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Functional Imaging of Viral Transcription Factories Using 3D Fluorescence Microscopy

Funktionel billeddannelse af Viral transskription fabrikker ved hjælp af 3D Fluorescens mikroskopi

It is well known that spatial and temporal regulation of genes is an integral part of governing proper gene expression. Consequently, it is invaluable to ...

A Versatile Method for Mounting Arabidopsis Leaves for Intravital Time-lapse Imaging

A Versatile Method for Mounting Arabidopsis Leaves for Intravital Time-lapse Imaging

En alsidig metode til montering Arabidopsis blade til Intravital Time-lapse Imaging

The plant immune response associated with a genome-wide transcriptional reprogramming is initiated at the site of infection. Thus, the immune response is ...