Name: live-cell imaging of the life cycle of bacterial predator bdellovibrio bacteriovorus using time-lapse fluorescence microscopy
Uploaded: 2020-05-08T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Deze studie werd ondersteund door de National Science Centre grant Opus 2018/29/B/NZ6/00539 aan J.Z.C.

1. Bereiding van B. bacteriovorus lysaat voor microscopische analyse
<ol><li>In een kolf van 250 mL zet u de cocultuur op door 1 mL verse 24 uur B. bacteriovoruscultuur (bijv. HD100 DnaN-mNeonGreen/PilZ-mCherry) en 3 mL nachtelijke prooicultuur (bijv. E. coli S17-1 pZMR100) met 50 mL Ca-HEPES buffer (25 mM HEPES, 2 mM CaCl2 [pH = 7.6]) aangevuld met antibiotica indien nodig (hier, 50 μg/mL kanamycine).</li>
	<li>Broed de cocultuur 24 uur bij 30 °C met schudden bij 200 tpm.</li>
	...

<ol>
	<li>Shatzkes, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predatory+Bacteria+Attenuate+Klebsiella+pneumoniae+Burden+in+Rat+Lungs.">Predatory Bacteria Attenuate Klebsiella pneumoniae Burden in Rat Lungs.</a> mBio. 7 (6), (2016).</li><li>Iebba, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bdellovibrio+bacteriovorus+directly+attacks+Pseudomonas+aeruginosa+and+Staphylococcus+aureus+Cystic+fibrosis+isolates.">Bdellovibrio bacteriovorus directly attacks Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus Cystic fibrosis isolates.</a> Frontiers in Microbiology. 5, (2014).</li><li>Willis, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injections+of+Predatory+Bacteria+Work+Alongside+Host+Immune+Cells+to+Treat+Shigella+Infection+in+Zebrafish+Larvae.">Injections of Predatory Bacteria Work Alongside Host Immune Cells to Treat Shigella Infection in Zebrafish Larvae.</a> Current biology: CB. 26 (24), 3343-3351 (2016).</li><li>Lambert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+the+flagellar+filament+and+the+role+of+motility+in+bacterial+prey-penetration+by+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Characterizing the flagellar filament and the role of motility in bacterial prey-penetration by Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Molecular Microbiology. 60 (2), 274-286 (2006).</li><li>Lambert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Predatory+Patchwork:+Membrane+and+Surface+Structures+of+Bdellovibrio+bacteriovorus.">A Predatory Patchwork: Membrane and Surface Structures of Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Advances in Microbial Physiology. 54, 313-361 (2008).</li><li>Makowski, &. #. 3. 2. 1. ;., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initiation+of+Chromosomal+Replication+in+Predatory+Bacterium+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Initiation of Chromosomal Replication in Predatory Bacterium Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Frontiers in Microbiology. 7, 1898 (2016).</li><li>Makowski, &. #. 3. 2. 1. ;., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+Chromosome+Replication+and+Its+Relationship+to+Predatory+Attack+Lifestyles+in+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Dynamics of Chromosome Replication and Its Relationship to Predatory Attack Lifestyles in Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Applied and Environmental Microbiology. 85 (14), (2019).</li><li>Fenton, A. K., Kanna, M., Woods, R. D., Aizawa, S. I., Sockett, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shadowing+the+actions+of+a+predator:+backlit+fluorescent+microscopy+reveals+synchronous+nonbinary+septation+of+predatory+Bdellovibrio+inside+prey+and+exit+through+discrete+bdelloplast+pores.">Shadowing the actions of a predator: backlit fluorescent microscopy reveals synchronous nonbinary septation of predatory Bdellovibrio inside prey and exit through discrete bdelloplast pores.</a> Journal of Bacteriology. 192 (24), 6329-6335 (2010).</li><li>Kuru, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+D-amino-acids+reveal+bi-cellular+cell+wall+modifications+important+for+Bdellovibrio+bacteriovorus+predation.">Fluorescent D-amino-acids reveal bi-cellular cell wall modifications important for Bdellovibrio bacteriovorus predation.</a> Nature Microbiology. 2 (12), 1648-1657 (2017).</li><li>Dashiff, A., Junka, R. A., Libera, M., Kadouri, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predation+of+human+pathogens+by+the+predatory+bacteria+Micavibrio+aeruginosavorus+and+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Predation of human pathogens by the predatory bacteria Micavibrio aeruginosavorus and Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Journal of Applied Microbiology. 110 (2), 431-444 (2011).</li></ol>

Vanwege de toegenomen interesse in het gebruik van B. bacteriovorus als levend antibioticum, zijn nieuwe instrumenten nodig om de roofzuchtige levenscyclus te observeren, met name interacties tussen roofdieren en pathogenen. Het gepresenteerde protocol wordt gebruikt om de gehele B. bacteriovorus levenscyclus te volgen, vooral tijdens de groei in de gastheer, in real-time. Bovendien maakte de toepassing van een stam die fluorescerend getagde bètaklem van DNA polymerase III holoenzym produceert, het mon...

Bdellovibrio bacteriovorus is een kleine (0,3–0,5 μm bij 0,5–1,4 μm) gram-negatieve bacterie die aast op andere gram-negatieve bacteriën, waaronder schadelijke ziekteverwekkers zoals Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, en Shigella flexneri1,2,3. Aangezien B. bacteriovorus ziekteverwekkers doodt, wordt het beschouwd als een potentieel levend antibioticum dat kan worden toegepast om bacteriële infecties te bestrijden, met name die veroorzaakt door multiresistente stammen.
B. bacteriovorus vertoont een eigenaardige levenscyclus bestaande uit twee fasen: een vrijlevende niet-replicanatieve aanvalsfase en een intracellulaire voortplantingsfase (figuur 1). In de vrijlevende fase zoekt deze zeer motile bacterie, die zich beweegt bij snelheden tot 160 μm/s, naar zijn prooi. Na het hechten aan het buitenste membraan van de prooi, komt het in het periplasma4,5. Tijdens de interperiplasmische voortplantingsfase gebruikt B. bacteriovorus een overvloed aan hydrolytische enzymen om de macromoleculen van de gastheer te degraderen en te hergebruiken voor zijn eigen groei. Kort na het binnenvallen van het periplasma sterft de gastheercel en opgeblazen in een bolvormige structuur genaamd een bdelloplast, waarin de roofzuchtige cel de chromosomen elongates en repliceert. Het replicatieproces begint bij de replicatieoorsprong(oriC)6 en gaat door totdat meerdere kopieën van het chromosoom volledig zijn gesynthetiseerd7. Interessant is dat replicatie van elk chromosoom niet wordt gevolgd door celdeling. In plaats daarvan, het roofdier elongates om een lange, multinucleoïde en filamenteuze cel te vormen. Bij uitputting van voedingsstoffen ondergaat de gloeidraad synchrone septatie en worden nakomelingen vrijgegeven uit de bdelloplast8.
Voordat B. bacteriovorus kan worden gebruikt als een levend antibioticum tegen bacteriële infecties, is het van cruciaal belang om de belangrijkste stadia van zijn levenscyclus te begrijpen, met name die in verband met de proliferatie ervan in de prooi. Live-cel beeldvorming van B. bacteriovorus is uitdagend geweest, vanwege de verschillende morfologische vormen van het roofdier en zijn prooi tijdens de complexe levenscyclus. Tot nu toe zijn de interacties tussen B. bacteriovorus en zijn gastheercel voornamelijk bestudeerd door elektronenmicroscopie en snap-shot analyse2,9,10, die beide beperkingen hebben, vooral wanneer ze worden gebruikt om opeenvolgende stadia van de roofzuchtige levenscyclus te controleren. Deze methoden bieden beelden met hoge resolutie van B. bacteriovoruscellen en maken observatie van een klein roofdier tijdens de aanval of groeifase mogelijk. Ze staan echter geen tracking toe van enkele B. bacteriovoruscellen gedurende beide levenscyclusfasen.
Hier gepresenteerd is een uitgebreid protocol voor het gebruik van time-lapse fluorescentie microscopie (TLFM) om de volledige levenscyclus van B. bacteriovoruste controleren. Een systeem bestaande uit een agarose pad wordt gebruikt in combinatie met een cel-imaging schotel, waarin de roofzuchtige cellen vrij kunnen bewegen onder de agarose pad, terwijl de geïmmobiliseerde prooi cellen in staat zijn om bdelloplasten te vormen (Figuur 2). Deze opstelling wordt voorbereid op basis van specifieke stammen van zowel E. coli als B. bacteriovorus,maar het protocol kan gemakkelijk worden aangepast aan de afzonderlijke stammen van een gebruiker (bijvoorbeeld het dragen van verschillende selectiemarkers, eiwitten die zijn versmolten met verschillende fluoroforen, enz.).
In dit geval, om B. bacteriovorus tijdens de aanvalsfase te visualiseren, werd een specifieke stam (HD100 DnaN-mNeonGreen/PilZ-mCherry) gebouwd die een fluorescerende versie van het cytoplasmische eiwit uitdrukt, PilZ (beschikbaar in ons laboratorium op verzoek)7. Deze stam produceert bovendien DnaN (de β-schuifklem), een subunit van DNA polymerase III holo-enzym, versmolten met een fluorescerend eiwit. Hierdoor kan de lopende DNA-replicatie worden gecontroleerd in de roofzuchtige cellen als ze groeien binnen bdelloplasten.
Hoewel het beschreven protocol en de software die voor beeldverwerving worden gebruikt, verwijzen naar een omgekeerde microscoop die door een specifieke fabrikant wordt geleverd (zie tabel van materialen),kan deze techniek worden aangepast voor elke omgekeerde microscoop die is uitgerust met een milieukamer of andere externe verwarmingshouder en die in staat is om time-lapse beeldvorming te maken. Voor gegevensanalyse kunnen gebruikers alle beschikbare software kiezen die compatibel is met de afzonderlijke uitvoerindelingen.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61105/61105fig01.jpg"> Figuur 1: B. bacteriovorus levenscyclus in E. coli als gastheercel. Tijdens de aanvalsfase zoekt en hecht een vrijzwemende B. bacteriovoruscel naar en hecht deze aan een gastheer E. coli-cel. Na de invasie wordt de roofzuchtige cel gelokaliseerd in het periplasma van de prooi, waardoor de vorm van de gastheercel verandert en een bdelloplast wordt gevormd. De voortplantingsfase begint met bdelloplastformatie. De roofzuchtige cel verteert de prooicel en hergebruikt eenvoudige verbindingen om zijn eigen structuren te bouwen. B. bacteriovorus groeit als een lange gloeidraad in het periplasma van de gastheer. Wanneer de middelen van de prooicel uitgeput zijn, vertolft de B. bacteriovorus filament synchroon en vormt ze nakomelingencellen. Nadat de nakomelingen hun flagella hebben ontwikkeld, lyse ze bdelloplast. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61105/61105fig01large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.</a>

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>MPW MED. INSTRUMENTS</td>
			<td>MPW-260R</td>
			<td>Rotor ref. 12183</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CertifiedMolecular Biology Agarose</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>161-3100</td>
			<td>low fluorescence agarose for agarose pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji</td>
			<td>ImageJ</td>
			<td>https://imagej.net/Fiji</td>
			<td>Open source image processing package</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Bottom Dish 35 mm</td>
			<td>ibidi</td>
			<td>81218-200</td>
			<td>uncoated glass</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>GE</td>
			<td>DeltaVision Elite</td>
			<td>Microtiter Stage, ultimate focus laser module, DV Elite CoolSnap HQ2 Camera, SSI assembly FP DV, kit obj. Oly 100x oil 1.4 NA, prism Nomarski 100x LWD DIC, ENV ctrl IX71 uTiter opaQ 240 V</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minisart Filter 0.45 &#181;m</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>16555----------K</td>
			<td>Cellulose Acetate, Sterile, Luer Lock Outlet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Start SoftWoRx</td>
			<td>GE</td>
			<td></td>
			<td>Manufacturer-supplied imaging software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live-cell imaging of the life cycle of bacterial predator bdellovibrio bacteriovorus using time-lapse fluorescence microscopy

Bdellovibrio bacteriovorus is een kleine gram-negatieve, obligate roofzuchtige bacterie die andere gram-negatieve bacteriën doodt, waaronder schadelijke ziekteverwekkers. Daarom wordt het beschouwd als een levend antibioticum. Om B. bacteriovorus toe te passen als een levend antibioticum, is het eerst noodzakelijk om de belangrijkste stadia van zijn complexe levenscyclus te begrijpen, met name de proliferatie in prooi. Tot nu toe is het een uitdaging geweest om opeenvolgende stadia van de roofzuchtige levenscyclus in real-time te volgen. Hier gepresenteerd is een uitgebreid protocol voor real-time beeldvorming van de volledige levenscyclus van B. bacteriovorus, vooral tijdens de groei in de gastheer. Hiervoor wordt een systeem gebruikt dat bestaat uit een agarosepad in combinatie met celbeeldvormingsschotels, waarin de roofzuchtige cellen zich vrij onder het agarosepad kunnen bewegen terwijl geïmmobiliseerde prooicellen bdelloplasten kunnen vormen. De toepassing van een stam die een fluorescerend gelabelde β-subunit van DNA polymerase III produceert, maakt het verder mogelijk om chromosoomreplicatie te monitoren tijdens de reproductiefase van de B. bacteriovorus levenscyclus.

Het beschreven TLFM-gebaseerde systeem maakt het mogelijk om individuele cellen van B. bacteriovorus op tijd bij te houden (figuur 3, film 1) en biedt waardevolle informatie over elke fase van de complexe roofzuchtige levenscyclus. De PilZ-mCherry fusie maakt het mogelijk de gehele roofcel te labelen in de aanvalsfase en het vroege stadium van de groeifase(figuur 3). De overgang van de aanval naar de replicante fase werd niet alleen gev...

Watch this Scientific Journal Video about Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Hier gepresenteerd is een protocol dat het toezicht op de volledige levenscyclus van roofzuchtige bacterie Bdellovibrio bacteriovorus met behulp van time-lapse fluorescentie microscopie in combinatie met een agarose pad en cell-imaging gerechten beschrijft.

Live-Cell Beeldvorming van de levenscyclus van bacteriële Predator Bdellovibrio bacteriovorus met behulp van Time-Lapse Fluorescentie Microscopie

Bdellovibrio bacteriovorus is a small gram-negative, obligate predatory bacterium that kills other gram-negative bacteria, including harmful pathogens. ...

Live-Cell Bdellovibrio bacteriovorus beeldvorming is uitdagend vanwege de complexe levenscyclus van deze roofzuchtige bacteriën. Ons protocol maakt het mogelijk om de stadia van volledige levenscyclus in realtime te monitoren. Hoewel ons protocol is gebaseerd op een specifieke egaliseren stammen, het kan gemakkelijk worden aangepast aan een verscheidenheid van bacteriële stammen, waaronder pathogene stammen.Om het opzetten van een B.bacteriovorus cultuur, combineren een milliliter verse 24-uurs gekweekte bacteriën met drie milliliter van 's nachts prooi cultuur in een 250 milliliter fles met 50 milliliter calcium hippies buffer aangevuld met antibiotica als dat nodig is. Controleer na een 24-uurs incubatie bij 30 graden Celsius en 200 omwentelingen per minuut of de prooicellen volledig zijn gelyseerd door vloeistofgemonteerde gezichtscontrastmicroscopie. Tal van multi-attack gefaseerde B.bacteriovoruscellen moeten aanwezig zijn en er mag geen E.coli cel of bdelloplast zichtbaar zijn.Zeef de B.bacteriovoruscultuur door een filter van 0,45 micrometer porie in een kegelvormige buis van 50 milliliter en schorst het filtraat in een centrifuge. Stel vervolgens de B.bacteriovoruspellet opnieuw op in drie milliliter calciumhippies buffer tot een uiteindelijke optische dichtheid op 600 nanometer van ongeveer 0,2 en ontcuut de bacteriën bij 30 graden Celsius en 200 omwentelingen per minuut gedurende 30 minuten. Om de gastheercellen voor te bereiden, selecteert u een enkele kolonie uit de gastheerstam van belang en knikt u de bacteriën in 10 milliliter YT-medium aangevuld met antibiotica, indien nodig voor een nachtelijke incubatie bij 37 graden Celsius en 180 omwentelingen per minuut.De volgende ochtend overdracht twee milliliter van de nachtelijke cultuur naar een twee milliliter reageerbuis en pellet de cellen door centrifugatie. Dan opnieuw opschorten de pellet in 200 microliters van calcium hippies buffer. Het is zeer belangrijk om de hele celpellet volledig opnieuw op te schorten na centrifugatie om ervoor te zorgen dat de prooicel op het niveau van één cel wordt gescheiden.Om de cellen voor te bereiden op time-lapse fluorescentie microscopie, ten eerste, meng 200 milligram lage fluorescerende moleculaire graad agarose met 20 milliliter calcium hippies buffer en los de agarose in een magnetron. Giet drie milliliter van de gesmolten agarose in een 35 millimeter glazen bodemschotel en laat de agarose stollen. Verwijder met behulp van een microspatel in het laboratorium voorzichtig het agarosepad uit de schotel zonder de middelste paal van het pad te verstoren en plaats de onderzijde van het pad op een petrischaaldeksel.Plaats vijf microliter van de geconcentreerde gastheercelsuspensie op het omgedraaide pad en gebruik een inentingslus om cellen in de middelste paal te verspreiden. Voeg vervolgens vijf microliter van de geconcentreerde B.bacteriovorus suspensie toe aan het gecoate oppervlak van de gastheercel zonder verspreiding en keer de gel snel terug naar de bovenzijde van de 35 milliliter glazen bodemschaal. Bedek vervolgens de schotel met een deksel.Voor Time-Lapse Florescence microscopie van de co-cultuur, plaats het gerecht in een petrischaal houder zodanig dat het gerecht niet zal bewegen in de loop van het experiment en plaats een druppel onderdompeling olie op de omgekeerde microscoop doelstelling en een druppel op de bodem van de schotel. Monteer de houder op het microscoopstadium in de omgekeerde microscoopkamer en zet in de microscoopsoftware de vergroting op 100X en de polychrome lens op GFP en Mcherry. Met behulp van een iPS in Brightfield, zoek het brandpuntsvlak en open de zinloze manager.Verplaats het werkgebied en gebruik de knop Markeringspunten om de coördinaten van ten minste 10 posities van belang op te slaan. Schakel de camera val van de iPS naar de monitor. Stel het brandpuntsvlak in en klik op de knop Punt vervangen in het punt dat u niet wilt gebruiken om elk punt te kalibreren.Open de doos met het stapelen van de experimentontwerper en de merkziekte. Selecteer de juiste tl-kanalen en de optimale eliminatie-instellingen en stel de intervallen in tussen de beeldverwerving en de totale tijd van het experiment. Schakel focusonderhoud in voor de gekozen posities en selecteer de gegevensmap waarin de afbeeldingsbestanden automatisch moeten worden opgeslagen.Controleer alle instellingen in de microscoopsoftwarebesturing opnieuw en start het time-lapse-experiment. Controleer na het eerste uur van het experiment of alle podiumposities nog steeds scherp zijn. Wanneer het time-lapse-experiment is voltooid, verwijdert u de petrischaal en gooit u de 35 millimeter schotel weg met een agarosepad volgens de juiste bioveiligheidsprotocollen.Voor de verwerking van de time-lapse beeldgegevens, de overdracht van de experimentele gegevens naar een computer geladen met de Fiji-software en open een afbeelding in Fiji. Selecteer in importopties voor bioformaten de weergavestack met hyperstack. Selecteer in de samengestelde kleurmodus automatische schaal.Door te scrollen door de afbeelding stapels beoordelen of de cellen en bdelloplasten bleef focus in de loop van het experiment. Of de groene fluorescerende vlekken van het DNA en mNeon groen aanwezig zijn in de B.bacteriovorus cellen in de bdelloplasten gedurende de groeifase en of alle stadia van de roofzuchtige levenscyclus kan worden gevisualiseerd. Als u een bepaalde B.bacteriovoruscel bdelloplast wilt analyseren, gebruikt u een selectiegereedschap om de cel van belang te markeren.Dupliceer vervolgens de gekozen regio. Klik in de gedupliceerde afbeelding op proces en vloeiend en klik voor elk tl-kanaal op afbeelding, kleur, kanalengereedschappen en selecteer het kanaal van belang. Klik vervolgens op afbeelding, aanpassen en helderheidscontrast om de helderheid en het contrast van de afbeelding in elk kanaal aan te passen.Als u een schaalbalk wilt toevoegen, selecteert u analyseren, gereedschappen en schaalbalk. Als u een tijdstempel aan de afbeeldingen wilt toevoegen, klikt u op afbeeldingen, stapels en tijdstempel. Als u de gewijzigde afbeeldingen wilt opslaan, selecteert u TIF.Als u de gegevens wilt opslaan als een beeldreeks, moet AVI een film of PNG produceren om één afbeelding van het huidige frame op te slaan. Dit Time-Lapse Fluorescentie microscopie gebaseerd systeem maakt het mogelijk om individuele B.bacteriovoruscellen real-time te volgen en biedt waardevolle informatie over elke fase van de complexe roofzuchtige levenscyclus. De pillsy mCherry fusie maakt het mogelijk de hele roofzuchtige cel te worden gelabeld in de aanvalsfase en in het vroege stadium van de groeifase.De overgang van de aanval naar de replicante fase kan niet alleen worden gevisualiseerd door de host bdelloplast formatie, maar ook door het uiterlijk van de replisome. De replisome wordt geassembleerd op de binnenvallende celpool en meer dan een replisome kan worden waargenomen binnen een groeiende B.bacteriovorus filament als de reproductiefase vordert. Nadat meerdere kopieën van het chromosoom zijn gesynthetiseerd, wordt de replicatie beëindigd.Ten slotte wordt de multinucleated filament septatie ondergaan en worden de nakomelingencellen uit de bdelloplast vrijgegeven. De B.bacteriovorus cellen moeten materieel genoeg zijn om actief te zoeken naar hun prooi en de hele celdichtheid moet hoog genoeg zijn om roofzuchtige celbevestiging mogelijk te maken. Dit platform kan nuttig zijn bij experimenten met multiresistente ziekteverwekkers en om verbeteringen in de genetische manipulatie van de B.bacteriovorus als levend antibioticum in de menselijke en veterinaire geneeskunde te vergemakkelijken.

Research

JoVE Journal

Biology

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Monitoring Actin Disassembly with Time-lapse Microscopy

Monitoring Actin Demontage met Time-lapse Microscopie

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection

Time-lapse Imaging van mitose Na siRNA transfectie

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse microscopie van de vroege embryogenese in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Quantitative Live Cell Fluorescence-microscopy Analysis of Fission Yeast

Kwantitatieve Live Cell Fluorescentie-microscopie analyse van Fission Yeast

Several microscopy techniques are available today that can detect a specific protein within the cell. During the last decade live cell imaging using ...

Quantitative Analysis of Random Migration of Cells Using Time-lapse Video Microscopy

Kwantitatieve analyse van Random migratie van cellen met behulp van time-lapse video Microscopie

Cell migration is a dynamic process, which is important for embryonic development, tissue repair, immune system function, and tumor invasion 1, 2. During ...

Acquiring Fluorescence Time-lapse Movies of Budding Yeast and Analyzing Single-cell Dynamics using GRAFTS

Het verwerven Fluorescentie Time-lapse films van Budding gist en analyseren van Single-cell Dynamics behulp enten

Fluorescence time-lapse microscopy has become a powerful tool in the study of many biological processes at the single-cell level. In particular, movies ...

Visualization of Craniofacial Development in the sox10: kaede Transgenic Zebrafish Line Using Time-lapse Confocal Microscopy

Visualisatie van craniofaciale ontwikkeling in de SOX10: kaede transgene zebravis Line Met behulp van Time-lapse confocale microscopie

Vertebrate palatogenesis is a highly choreographed and complex developmental process, which involves migration of cranial neural crest (CNC) cells, ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-dimensionale Tracking van hematopoietische stamcellen en progenitorcellen in volwassen muis calvarial Bone Marrow

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Functional Imaging of Viral Transcription Factories Using 3D Fluorescence Microscopy

Functionele beeldvorming van virale transcriptie fabrieken met behulp van 3D fluorescentie microscopie

It is well known that spatial and temporal regulation of genes is an integral part of governing proper gene expression. Consequently, it is invaluable to ...

A Versatile Method for Mounting Arabidopsis Leaves for Intravital Time-lapse Imaging

A Versatile Method for Mounting Arabidopsis Leaves for Intravital Time-lapse Imaging

Een veelzijdige methode voor de montage van Arabidopsis vertrekt naar Intravital Time-lapse Imaging

The plant immune response associated with a genome-wide transcriptional reprogramming is initiated at the site of infection. Thus, the immune response is ...