Name: live-cell imaging of the life cycle of bacterial predator bdellovibrio bacteriovorus using time-lapse fluorescence microscopy
Uploaded: 2020-05-08T14:00:00
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Cette étude a été soutenue par la subvention opus 2018/29/B/NZ6/00539 du Centre national des sciences à J.Z.C.

1. Préparation du lysate de B. bactériovorus pour l’analyse microscopique
<ol><li>Dans une fiole de 250 mL, mettre en place la coculture en combinant 1 ml de 24 h B. bactériovorus culture (par exemple, HD100 DnaN-mNeonGreen/PilZ-mCherry) et 3 ml de culture de proies du jour au lendemain (p. ex., E. coli S17-1 pZMR100) avec 50 mL de tampon Ca-HEPES (25 mM HEPES, 2 mM CaCl2 [pH = 7,6]) complété par des antibiotiques au besoin (ici, 50 μg/mL kanamycine).</li>
	<li>Incuber la c...

<ol>
	<li>Shatzkes, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predatory+Bacteria+Attenuate+Klebsiella+pneumoniae+Burden+in+Rat+Lungs.">Predatory Bacteria Attenuate Klebsiella pneumoniae Burden in Rat Lungs.</a> mBio. 7 (6), (2016).</li><li>Iebba, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bdellovibrio+bacteriovorus+directly+attacks+Pseudomonas+aeruginosa+and+Staphylococcus+aureus+Cystic+fibrosis+isolates.">Bdellovibrio bacteriovorus directly attacks Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus Cystic fibrosis isolates.</a> Frontiers in Microbiology. 5, (2014).</li><li>Willis, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injections+of+Predatory+Bacteria+Work+Alongside+Host+Immune+Cells+to+Treat+Shigella+Infection+in+Zebrafish+Larvae.">Injections of Predatory Bacteria Work Alongside Host Immune Cells to Treat Shigella Infection in Zebrafish Larvae.</a> Current biology: CB. 26 (24), 3343-3351 (2016).</li><li>Lambert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+the+flagellar+filament+and+the+role+of+motility+in+bacterial+prey-penetration+by+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Characterizing the flagellar filament and the role of motility in bacterial prey-penetration by Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Molecular Microbiology. 60 (2), 274-286 (2006).</li><li>Lambert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Predatory+Patchwork:+Membrane+and+Surface+Structures+of+Bdellovibrio+bacteriovorus.">A Predatory Patchwork: Membrane and Surface Structures of Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Advances in Microbial Physiology. 54, 313-361 (2008).</li><li>Makowski, &. #. 3. 2. 1. ;., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initiation+of+Chromosomal+Replication+in+Predatory+Bacterium+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Initiation of Chromosomal Replication in Predatory Bacterium Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Frontiers in Microbiology. 7, 1898 (2016).</li><li>Makowski, &. #. 3. 2. 1. ;., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+Chromosome+Replication+and+Its+Relationship+to+Predatory+Attack+Lifestyles+in+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Dynamics of Chromosome Replication and Its Relationship to Predatory Attack Lifestyles in Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Applied and Environmental Microbiology. 85 (14), (2019).</li><li>Fenton, A. K., Kanna, M., Woods, R. D., Aizawa, S. I., Sockett, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shadowing+the+actions+of+a+predator:+backlit+fluorescent+microscopy+reveals+synchronous+nonbinary+septation+of+predatory+Bdellovibrio+inside+prey+and+exit+through+discrete+bdelloplast+pores.">Shadowing the actions of a predator: backlit fluorescent microscopy reveals synchronous nonbinary septation of predatory Bdellovibrio inside prey and exit through discrete bdelloplast pores.</a> Journal of Bacteriology. 192 (24), 6329-6335 (2010).</li><li>Kuru, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+D-amino-acids+reveal+bi-cellular+cell+wall+modifications+important+for+Bdellovibrio+bacteriovorus+predation.">Fluorescent D-amino-acids reveal bi-cellular cell wall modifications important for Bdellovibrio bacteriovorus predation.</a> Nature Microbiology. 2 (12), 1648-1657 (2017).</li><li>Dashiff, A., Junka, R. A., Libera, M., Kadouri, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predation+of+human+pathogens+by+the+predatory+bacteria+Micavibrio+aeruginosavorus+and+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Predation of human pathogens by the predatory bacteria Micavibrio aeruginosavorus and Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Journal of Applied Microbiology. 110 (2), 431-444 (2011).</li></ol>

En raison de l’intérêt accru pour l’utilisation de B. bactériovorus comme antibiotique vivant, de nouveaux outils pour observer le cycle de vie prédateur, en particulier les interactions prédateur-pathogène, sont nécessaires. Le protocole présenté est utilisé pour suivre l’ensemble du cycle de vie de B. bacteriovorus, en particulier lors de sa croissance à l’intérieur de l’hôte, en temps réel. En outre, l’application d’une souche produisant une pince bêta fluorescente de l?...

Bdellovibrio bactériovorus est une petite bactérie gram-négative (0,3–0,5 μm par 0,5–1,4 μm) qui s’attaque à d’autres bactéries gramnégatives, y compris les pathogènes nocifs tels que Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa et Shigella flexneri1,2,3. Étant donné que B. bactériovorus tue les agents pathogènes, il est considéré comme un antibiotique vivant potentiel qui peut être appliqué pour lutter contre les infections bactériennes, en particulier celles causées par des souches multirésistantes.
B. bactériovorus présente un cycle de vie particulier composé de deux phases : une phase d’attaque non réplicative à vie libre et une phase de reproduction intracellulaire (figure 1). Dans la phase de libre-vie, cette bactérie très motile, qui se déplace à des vitesses allant jusqu’à 160 μm/s, recherche sa proie. Après s’être attaché à la membrane externe de la proie, il pénètre dans le périplasme4,5. Pendant la phase de reproduction interpériplasmique, B. bactériovorus utilise une pléthore d’enzymes hydrolytiques pour dégrader les macromolécules de l’hôte et les réutiliser pour sa propre croissance. Peu de temps après avoir envahi le périplasme, la cellule hôte meurt et gonfle dans une structure sphérique appelée bdelloplaste, à l’intérieur de laquelle la cellule prédatrice s’allonge et reproduit ses chromosomes. Le processus de réplication commence à l’origine de réplication (oriC)6 et procède jusqu’à ce que plusieurs copies du chromosome ont été entièrement synthétisés7. Fait intéressant, la réplication de chaque chromosome n’est pas suivie d’une division cellulaire. Au lieu de cela, le prédateur s’allonge pour former une cellule longue, multinucléoïde et filamenteuse. Lors de l’épuisement des nutriments, le filament subit une septation synchrone et les cellules de descendance sont libérées du bdelloplaste8.
Avant que B. bacteriovorus puisse être utilisé comme antibiotique vivant contre les infections bactériennes, il est crucial de comprendre les principales étapes de son cycle de vie, en particulier celles liées à sa prolifération à l’intérieur de la proie. L’imagerie à cellules vivantes de B. bactériovorus a été difficile, en raison des diverses formes morphologiques du prédateur et de ses proies au cours du cycle de vie complexe. Jusqu’à présent, les interactions entre B. bactériovorus et sa cellule hôte ont été principalement étudiées par microscopie électronique et analyse snap-shot2,9,10, qui ont tous deux des limitations, surtout quand ils sont utilisés pour surveiller les étapes successives du cycle de vie prédateur.9 Ces méthodes fournissent des images à haute résolution des cellules B. bactériovorus et permettent l’observation d’un petit prédateur pendant la phase d’attaque ou de croissance. Cependant, ils ne permettent pas le suivi des cellules B. bactériovorus uniques tout au long des deux phases du cycle de vie.
Présenté ici est un protocole complet pour l’utilisation de la microscopie de fluorescence time-lapse (TLFM) pour surveiller le cycle de vie complet de B. bacteriovorus. Un système composé d’un tampon d’agarose est utilisé en combinaison avec un plat d’imagerie cellulaire, dans lequel les cellules prédatrices peuvent se déplacer librement sous le tampon agarose tandis que les cellules de proies immobilisées sont capables de former des bdelloplastes (Figure 2). Cette configuration est préparée à partir de souches spécifiques de E. coli et de B. bacteriovorus, mais le protocole peut être facilement modifié pour s’adapter aux souches individuelles d’un utilisateur (p. ex., portant différents marqueurs de sélection, protéines fusionnées avec différents fluorophores, etc.).
Dans ce cas, pour visualiser B. bactériovorus pendant la phase d’attaque, une souche spécifique (HD100 DnaN-mNeonGreen/PilZ-mCherry) a été construite qui exprime une version fluorescente de la protéine cytoplasmique, PilZ (disponible dans notre laboratoire sur demande)7. Cette souche produit en outre DnaN (la pince β-coulissante), une sous-unité d’ADN polymérase III holoenzyme, fusionnée avec une protéine fluorescente. Cela permet de surveiller la réplication continue de l’ADN à l’intérieur des cellules prédatrices au fur et à mesure qu’elles se développent dans les bdelloplastes.
Bien que le protocole et le logiciel décrits utilisés pour l’acquisition d’images se réfèrent à un microscope inversé fourni par un fabricant spécifique (voir tableau des matériaux),cette technique peut être ajustée pour tout microscope inversé équipé d’une chambre environnementale ou d’un autre support de chauffage externe et capable d’imagerie en time-lapse. Pour l’analyse des données, les utilisateurs peuvent choisir n’importe quel logiciel disponible compatible avec les formats de sortie individuels.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61105/61105fig01.jpg"> Figure 1 : Cycle de vie B. bactériovorus chez E. coli en tant que cellule hôte. Pendant la phase d’attaque, une cellule B. bactériovorus nage libre recherche et s’attache à une cellule hôte de E. coli. Après l’invasion, la cellule prédatrice devient localisée dans le périplasme de la proie, changeant la forme de la cellule hôte et formant un bdelloplaste. La phase de reproduction commence par la formation de bdelloplaste. La cellule prédatrice digère la cellule proie et réutilise des composés simples pour construire ses propres structures. B. bactériovorus se développe comme un long filament unique à l’intérieur du périplasme de l’hôte. Lorsque les ressources de la cellule proie sont épuisées, le filament de B. bactériovorus se produit de façon synchrone et forme des cellules de descendance. Après que les cellules de descendance développent leur flagelle, elles lysent le bdelloplast. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61105/61105fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.</a>

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>MPW MED. INSTRUMENTS</td>
			<td>MPW-260R</td>
			<td>Rotor ref. 12183</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CertifiedMolecular Biology Agarose</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>161-3100</td>
			<td>low fluorescence agarose for agarose pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji</td>
			<td>ImageJ</td>
			<td>https://imagej.net/Fiji</td>
			<td>Open source image processing package</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Bottom Dish 35 mm</td>
			<td>ibidi</td>
			<td>81218-200</td>
			<td>uncoated glass</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>GE</td>
			<td>DeltaVision Elite</td>
			<td>Microtiter Stage, ultimate focus laser module, DV Elite CoolSnap HQ2 Camera, SSI assembly FP DV, kit obj. Oly 100x oil 1.4 NA, prism Nomarski 100x LWD DIC, ENV ctrl IX71 uTiter opaQ 240 V</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minisart Filter 0.45 &#181;m</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>16555----------K</td>
			<td>Cellulose Acetate, Sterile, Luer Lock Outlet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Start SoftWoRx</td>
			<td>GE</td>
			<td></td>
			<td>Manufacturer-supplied imaging software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live-cell imaging of the life cycle of bacterial predator bdellovibrio bacteriovorus using time-lapse fluorescence microscopy

Bdellovibrio bactériovorus est une petite bactérie prédatrice gramme-négative et obligatoire qui tue d’autres bactéries gramnégatives, y compris les pathogènes nocifs. Par conséquent, il est considéré comme un antibiotique vivant. Pour appliquer B. bactériovorus comme antibiotique vivant, il est d’abord nécessaire de comprendre les grandes étapes de son cycle de vie complexe, en particulier sa prolifération à l’intérieur des proies. Jusqu’à présent, il a été difficile de surveiller les étapes successives du cycle de vie prédateur en temps réel. Présenté ici est un protocole complet pour l’imagerie en temps réel du cycle de vie complet de B. bactériovorus, en particulier lors de sa croissance à l’intérieur de l’hôte. À cette fin, un système composé d’un tampon d’agarose est utilisé en combinaison avec des plats d’imagerie cellulaire, dans lequel les cellules prédatrices peuvent se déplacer librement sous le tampon agarose tandis que les cellules de proies immobilisées sont capables de former des bdelloplastes. L’application d’une souche produisant une sous-unité β-marquée fluorescente de la polymérase III permet de surveiller davantage la réplication chromosomique pendant la phase de reproduction du cycle de vie de B. bacteriovorus.

Le système décrit basé sur le TLFM permet de suivre les cellules individuelles de B. bactériovorus dans le temps (Figure 3, Movie 1) et fournit des informations précieuses sur chaque étape du cycle de vie prédateur complexe. La fusion PilZ-mCherry permet d’étiqueter l’ensemble de la cellule prédatrice en phase d’attaque ainsi qu’au début de la phase de croissance (figure 3). La transition de la phase d’attaque à la ...

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Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Présenté ici est un protocole qui décrit la surveillance du cycle de vie complet de la bactérie prédatrice Bdellovibrio bactériovorus en utilisant la microscopie de fluorescence time-lapse en combinaison avec un tampon agarose et des plats d’imagerie cellulaire.

Imagerie à cellules vivantes du cycle de vie du prédateur bactérien Bdellovibrio bactériovore à l’aide de la microscopie par fluorescence time-lapse

Bdellovibrio bacteriovorus is a small gram-negative, obligate predatory bacterium that kills other gram-negative bacteria, including harmful pathogens. ...

Live-Cell Bdellovibrio bacteriovorus imagerie a été difficile en raison du cycle de vie complexe de ces bactéries prédatrices. Notre protocole permet de surveiller les étapes du cycle de vie complet en temps réel. Bien que notre protocole soit basé sur des souches d’égalisation spécifiques, il peut être facilement adapté à une variété de souches bactériennes, y compris les souches pathogènes.Pour mettre en place une culture B.bacteriovorus, combinez un millilitre de bactéries fraîches de culture 24 heures sur 24 avec trois millilitres de culture de proies nocturnes dans un flacon de 250 millilitres contenant 50 millilitres de tampon hippies calcium complété par des antibiotiques au besoin. Après une incubation de 24 heures à 30 degrés Celsius et 200 révolutions par minute, vérifiez que les cellules proies ont été entièrement lysées par microscopie à contraste de visage montée par liquide. De nombreuses cellules B.bacteriovorus à plusieurs attaques progressives devraient être présentes et aucune cellule ou bdelloplaste d’E.coli ne doit être visible.Filtrer la culture B.bacteriovorus à travers un filtre de taille pore de 0,45 micromètre dans un tube conique de 50 millilitres et suspendre le filtrate dans une centrifugeuse. Puis re-suspendre la pastille B.bacteriovorus en trois millilitres de calcium hippies tampon à une densité optique finale à 600 nanomètres d’environ 0,2 et incuber les bactéries à 30 degrés Celsius et 200 révolutions par minute pendant 30 minutes. Pour préparer les cellules hôtes, choisissez une seule colonie de la souche hôte d’intérêt et de noduler les bactéries en 10 millilitres de YT moyen complété par des antibiotiques si nécessaire pour une incubation d’une nuit à 37 degrés Celsius et 180 révolutions par minute.Le lendemain matin transférer deux millilitres de la culture de nuit à un tube à essai de deux millilitres et pelleter les cellules par centrifugation. Puis re-suspendre la pastille dans 200 microlitres de calcium hippies tampon. Il est très important de suspendre complètement la pastille cellulaire entière après centrifugation pour s’assurer que la cellule proie est séparée au niveau d’une seule cellule.Pour préparer les cellules à la microscopie de fluorescence en accéléré, tout d’abord, mélanger 200 milligrammes d’agarose de faible teneur moléculaire fluorescente avec 20 millilitres de calcium hippies tampon et dissoudre l’agarose dans un micro-ondes. Verser trois millilitres de l’agarose fondue dans un plat de fond en verre de 35 millimètres et permettre à l’agarose de se solidifier. À l’aide d’une micro spatule de laboratoire, retirer soigneusement le tampon d’agarose du plat sans déranger le poteau central de la garniture et placer le côté inférieur de garniture vers le haut sur un couvercle de plat de Petri.Placez cinq microlitres de la suspension concentrée de la cellule hôte sur le tampon retourné et utilisez une boucle d’inoculation pour répartir les cellules dans le pôle central. Ajouter ensuite cinq microlitres de la suspension concentrée B.bacteriovorus sur la surface enduite de cellules hôtes sans se propager et retourner rapidement le gel sur le côté inférieur en verre de 35 millilitres vers le bas vers le bas. Couvrir ensuite le plat d’un couvercle.Pour la microscopie Time-Lapse Florescence de la co-culture, placez le plat dans un porte-plat Petri de sorte que le plat ne se déplace pas au cours de l’expérience et placez une goutte d’huile d’immersion sur l’objectif du microscope inversé et une goutte sur le fond du plat. Montez le support sur l’étape du microscope à l’intérieur de la chambre de microscope inversée et dans le logiciel de microscope réglez le grossissement à 100X et la lentille polychrome à GFP et Mcherry. À l’aide d’un iPS à Brightfield, localisez le plan focal et ouvrez le gestionnaire inutile.Déplacez la scène et utilisez le bouton points de marque pour stocker les coordonnées d’au moins 10 positions d’intérêt. Passez de l’iPS à l’écran. Réglez le plan focal et cliquez sur le bouton de point de remplacement dans l’inutile de gestionnaire pour calibrer chaque point.Ouvrez la boîte d’empilage de la maladie de concepteur d’expérience et de non-marque. Sélectionnez les canaux fluorescents appropriés et les paramètres d’élimination optimaux et définissez les intervalles entre l’acquisition de l’image et le temps total de l’expérience. Activez la maintenance de mise au point pour les positions choisies et sélectionnez le dossier de données dans lequel les fichiers d’image doivent être enregistrés automatiquement.Revérifiez tous les paramètres du contrôle logiciel microscope et démarrez l’expérience time-lapse. Après la première heure de l’expérience, vérifiez que toutes les positions de la scène sont toujours au point. Lorsque l’expérience time-lapse est terminée, retirez la boîte de Petri et jetez le plat de 35 millimètres avec un tampon d’agarose selon les protocoles de biosécurité appropriés.Pour le traitement des données d’image en accéléré, transférez les données expérimentales à un ordinateur chargé du logiciel Fidji et ouvrez une image aux Fidji. Dans les options d’importation de bio-formats, sélectionnez la pile de vue avec hyperstack. En mode couleur composite, sélectionnez l’échelle automatique.En faisant défiler les piles d’images, évaluez si les cellules et les bdelloplastes sont restées au point au cours de l’expérience. Si les taches fluorescentes vertes de l’ADN et du vert mNeon sont présentes dans les cellules B.bacteriovorus à l’intérieur des bdelloplastes tout au long de la phase de croissance et si toutes les étapes du cycle de vie prédateur peuvent être visualisées. Pour analyser un b.bacteriovorus cell bdelloplast particulier, utilisez un outil de sélection pour marquer la cellule d’intérêt.Ensuite, dupliquez la région choisie. Dans l’image dupliquée, cliquez sur le processus et lisse et pour chaque canal fluorescent, cliquez sur l’image, la couleur, les outils de canaux, et sélectionnez le canal d’intérêt. Cliquez ensuite sur l’image, ajustez et le contraste de luminosité pour ajuster la luminosité et le contraste de l’image dans chaque canal.Pour ajouter une barre d’échelle, sélectionnez analyser, outils et barre d’échelle. Pour ajouter une lampe de temps aux images, cliquez sur les images, les piles et l’horodatage. Pour enregistrer les images modifiées, sélectionnez TIF.Pour enregistrer les données sous forme de séquence d’image, AVI pour produire un film, ou PNG pour enregistrer une seule image du cadre actuel. Ce système à base de microscopie à fluorescence Time-Lapse permet le suivi en temps réel des cellules B.bacteriovorus individuelles et fournit des informations précieuses sur chaque étape du cycle de vie prédateur complexe. La fusion mCherry piluleuse permet à l’ensemble de la cellule prédatrice d’être étiquetée dans la phase d’attaque ainsi qu’au stade précoce de la phase de croissance.La transition de l’attaque à la phase réplictive peut être visualisée non seulement par la formation bdelloplast hôte, mais aussi par l’apparition du réplicateur. Le réplicant est assemblé au pôle cellulaire envahissant et plus d’un réplicant peut être observé dans un filament B.bacteriovorus croissant au fur et à mesure que la phase de reproduction progresse. Après plusieurs copies du chromosome sont synthétisées, la réplication est terminée.Enfin, le filament multinucléated subir une septation et les cellules de descendance sont libérés de la bdelloplast. Les cellules B.bacteriovorus devraient être suffisamment matérielles pour rechercher activement leurs proies et toute la densité cellulaire devrait être suffisamment élevée pour permettre l’attachement des cellules prédatrices. Cette plate-forme peut être utile dans des expériences impliquant des agents pathogènes multirésistants et pour faciliter l’amélioration du génie génétique du B.bacteriovorus en tant qu’antibiotique vivant en médecine humaine et vétérinaire.

Research

JoVE Journal

Biology

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Monitoring Actin Disassembly with Time-lapse Microscopy

Surveillance actine démontage Time-lapse microscopie

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